Способ определения уровня клеточного деления

 

Изобретение относится к биологии, в частности цитологии, и предназначено для определения уровня клеточных делений. Целью изобретения является повышение точности способа и его унификация. Изобретение предусматривает определение уровня клеточного деления по формуле Р% (Do - Dn).,5D0, где Р%п - уровень клеточного делении; D0 - средний размер неделящихся клеток в анализируемой ткани; Dn - средний размер клеток в заданный момент времени

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

COLIMAAMCTM×EÑÊÈÕ

РЕСПУБЛИК (s>)5 С 12 N 5/04

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

0 (й е

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4725011/13 (22) 26,07.89 (46) 15.10,91. Бюл, М38 (71) Институт молекулярной биологии и генетики АН УССР (72) А.И.Свидченко (53) 578.085.23 (088.8) (56) Mlnot С.S.: The problems of age, grosoth

and death, — Putman s Sons, 1908. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ-УРОВНЯ

КЛ ЕТОЧ НОГО ДЕЛ ЕНИЯ

Изобретение относится к биологии, в частности цитологии. и предназначено для определения уровня клеточных делений.

Способ рекомендуется использовать во всех случаях, допускающих микроскопирование фиксированной клеточной ткани, например, при изучении действия мутагенов, биологически активных веществ и других агентов на растущие клетки, при изучении онкогенеза и в иных целях.

Целью изобретения является повышение точности способа и его унификация.

Способ состоит в измерении размера клеток в любой заданный. момент на протяжении времени роста ткани и вычислении количества клеток (в процентах). находящихся в состоянии собственно деления и последующего роста по формуле Do — л 1 . 100, 0,5 Оо где Р " — уровень клеточного деления клеток e, Do — средний размер клеток в данной ткани при отсутствии делений, . Ы „„1684337 А1 (57) Изобретение относится к биологии, в частности цитологии, и предназначено для определения уровня клеточных делений.

Целью изобретения является повышение точности способа и его унификация. Изобретение предусматривает определение уровня клеточного деления по формуле Р "

= ((00 Оп),100 ):0,5Do, где Р " — уровень клеточного деления; D0 — средний размер неделящихся клеток в анализируемой ткани; Е4 — средний размер клеток в заданный момент времени, D — средний размер клеток в анализи- З руемой ткани в данный момент.

Способ допускает использование любых методик приготовления цитологических препаратов, на которых можно исследовать необходимое количество клеток, в частности, возможно использование следующей методики: ° елкой

Фиксация материала в растворе Карнуа О (6:3:1) — 2 сут.

Хранение в 96 спирте неограниченно.

Пропитка материала в смеси 96 этанола с концентрированной соляной кислотой (3:1) — 45 мин при комнатной температуре. 64

Мацерация в этой же смеси при 60 — 20 3 мин.

Дололнителнноефиксироеаниеклетокс одновременным устранением иэ ткани остатков соляной кислоты — несколько смен на протяжении дня в спирт-уксусной смеси (3:1).

Окраска в ацеторсеине до 3 сут.

Дифференциация окрашивания в 45 ной уксусной кислоте каждого образца ткани индивидуально.

1684337

Удаление включений путем нагревания в 45%-ной уксусной кислоте (вплоть до закипания) или в более разбавленных ее растворах, Приготовление временных препаратов.

Пример 1, У одной из линий клеточной культуры золотого корня Rhodiola rosea, в конце пассажа (на 50-й день), когда.клеточные деления отсутствуют, а средний размер клеток в связи с этим в данном пассаже является максимальным, он составляет

100,4 мкм. Пир этом уровень клеточных делений принимают за О, Требуется определить в процентах какой уровень клеточных делений будет в этой ткани на 1, 5, 14 и 30-й дни роста, Для этого в эти дни определяют средние размеры клеток, которые составляют соответственно 91,8; 67,6; 84,5 и 92,8 мкм.

Далее для каждого из этих дней проводят расчет уровня клеточных делений по приведенной формуле (100,4 — 91,8 100оо для 1-ro дня Р1

=17,13 (100,4 — 67,6 100 для 5-го дня Р1 и,.э

=66,34%

100,4-84,5 100 о для 14-ro дня Р1

1) „.)

=31,67 зо (100,4-98,2 100

p/lA 31-ro дня P$ о

=4,38%

6о (1(Ю,4-100,4 100 для 50-го дня Р1

=0,00%

Пример 2. На материале одной из линий клеточной культуры раувольфии змеиной /Rauwolfia serpentina Вец1п/ штамма

К-27 средний размер клеток в микронах, вычисленный на О, ", 14 " и 21 дни ее роста, т.е. 0н, равен соответственно 65,643,8 — 29,8-50,7. 3а 0 принят средний размер клеток культуры на 30-й день ее роста, равный 58,0 мкм, когда деления в ткани отсутствуют, а значит составляют 0,00%,.а размер клеток является максимально возможным, являясь характерным именно для данной культуры, но при данных конкретных условиях, Относительно него уровень пролиферации во все остальные выбранные дни определяется по приведенной формуле

На 0 день;

Р о,0 — 55,6 100 о 8,3о (58,0 — 43,8 100

На 7-й день: Р = - — -у)I 1

=49,0%

На 14-й ден ь. Р >

=97,2

На 21-й день: Р%

21

=25,2%

На 30-й день; Р О—

Для 7-го дня: Р1

=3,60%

Для 17-го дня: Р

1т

=55,53%

Для 26-го

Р 26 дня: — 0,00

=0,00%

Пример 3. При культивировании клеток руты душистой (Ruta graveoler1s) требуется узнать, как отразится на пролиферации, а значит и росте культуры, изменение срока пересадки, если ее производить не на

26-й день, как обычно, а, например, на 20-й.

С этой целью после пересадки вычисляют средний размер клеток в О-й день, 7-й, 17-й и 26-й, На 26-й день, как и всегда на этот день, делений клеток не наблюдают, а средний размер их при этом достигает максимального для неделящихся клеток этого вида культуры, и эту величину, составляющую 116,7 мкм, используют как D . В другие дни, соответственно. средние размеры клеток, т,е. DH, являются 97,4 — 114,6 — 84,3 мкм.

В соответствии с формулой уровни пролиферации составляют, Для О-го дня Р = 116,7 97,4 100 Р

1 \

=33,08%

Как видно из вычислений, на 7-й день роста культуры, когда обычно, т.е. при пересадке в оптимальный срок, уровень пролиферации относительно высок, в данном случае при пересадке культуры на 20-й день он падает крайне низко, что отрицательно отразится и на продуктивности культуры, Настоящий способ является более точным, Кроме того, этот способ настолько универсален, что может быть применен для определения уровня клеточных делений в любой культуре клеток без каких-либо его изменений. Использование этого способа позволит повысить эффективность исследовательских работ, связанных с необходимостью определения уровня клеточных делений, Формула изобретения

Способ определения уровня клеточного деления, включающий приготовление цито1684337 6

Составитель В.Демкин

Техред M. Моргентал Корректор О.йипле

Редактор В.Трубченко

Заказ 3485 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб.. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101 логических препаратов из анализируемой растительной ткани и микроскопическое определение цитогенетических показателей, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа и его унификации, в анализируемой ткани предварительно определяют средний размер неделящихся клеток, а затем средний размер клеток в заданный момент времени и. уровень клеточного деления вычисляют по формуле р О() Dp 1 00

0,5 Оо

5 где Р1 " — уровень клеточного деления;

Π— средний размер неделящихся клеток в анализируемой ткани;

D> — средний размер клеток в заданный момент времени.