Способ получения растений-регенерантов риса

 

Изобретение относится к биотехнологии и касается получения новых исходных форм для селекции риса методом культивирования изолированных тканей в сочетании с мутогенным воздействием. Целью изобретения является увеличение выхода жизнеспособных регенерантов. Способ состоит в том, что при культивировании тканей перед переносом на регенерационную среду каллусы обрабатывают смесью мутагена (N-нитрозо-N-метилмочевины) и репарогена (п-аминобензойной кислоты в концентрации 0,01 - 0,1%). 1 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4697906/13 (22) 05.04.89 (46) 30.07.91. Бюл. М 28 (71) Всесоюзный научно-исследовательский институт риса (72) Л.А.Кучеренко и Н.А,Долотова (53) 578,083.25 (088.8) (56) Кучеренко Л.A. и др. Использование методов биотехнологии s с еeл еeкKц иMи р и tс:а, — Материалы всесоюзной конференции, М., 1986, с. 95. (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ РАСТЕНИИ-РЕГЕНЕРАНТОВ РИСА

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано в селекции растений для расширения генетической изменчивости форм, в частности риса методом культуры тканей.

Цель изобретения — увеличение выхода жизнеспособных регенерантов.

Способ состоит в том, что при получении из эксплантатов первичного каллуса, субкультивировании его, обработке каллуса мутагеном N-нитрозо-N-метилмочевиной, переносе на регенерационную среду, доращивании на безгормональной среде и последующей пересадке растений в грунт, каллусы перед переносом на регенеративную среду обрабатывают смесью мутагена и репарогена, а именно: и-аминобензойной кислотой (ПАБК) с концентрации 0,005—

0,057, sec.

Пример 1. В качестве эксплантата для индукции каллуса используют зрелые семена. Семена шелушат, стерилизуют сулемой

0,1 10 мин. эамачивают на 16 ч в автоклавированной дистиллированной воде, после чего высаживают на поверхность агаризо,, Ы2„„1665987 А1 (5))5 А 01 Н 4/00, С 12 N 5/04 (57) Изобретение относится к биотехнологии и касается получения новых исходных форм для селекции риса методом культивирования изолированных тканей в сочетании с мутагенным воздействием. Целью изобретения является увеличение выхода жизнеспособных регенерантов. Способ состоит в том, что при культивировании тканей перед переносом на регенерационную среду каллусы обрабатывают смесью мутагена (Nнитроэо-N-метилмочевины) и репарогена (и-аминобензойной кислоты в концентрации 0,01 — 0,1 $). 1 табл. ванной среды на 1 шт в пробирку в 5 мл среды. В качестве индукционной среды используют среду Мурасиге-Скуга (MC) + 4 мг/л 2,4 (Д) (О-пассаж). Полученный каллус пересаживают на субкультивационную среду MC + 2 мг/л 2,4 Д (1 пассаж), продолжительность пассажа 20 сут.

В конце 1 пассажа каллусы обрабатывают раствором HMM 0.1, который готовят О на основе среды MC. Обработку каллусов - (,Ь этим раствором проводят на встряхивателе Q3 (100 об/мин), в течение часа. После обработки мутагеном каллусы промывают жидкой . gy средой MC.

После этого каллусы пересаживают на регенерационную среду MC + 5 мг/л БАП.

Полученные регенеранты доращивают на безгормональной среде МС. Растения, полученные на безгормональной среде, пересаживают в грунт.

Выход нормальных укорененных проростков определяют в расчете на 100 каллусов, пересаженных на регенерационную среду.

Пример 2. Условия проведения опыта аналогичны описанным выше, но перед пе16б5987

Результаты обработки каллусов смесью мутэгенэ и репэрогена перед пересадкой на регенерационную среду реносом каллусов на регенерационную среду их обрабатывают смесью мутагена HMM

0,17, и репарогена — ПАБК 0,001 ..

П р и и е р 3. Условия проведения опыта аналогичны описанным выше, но перед пе- 5 реносом каллусов на регенерационную среду их обрабатывают смесью мутагена НММ

0,1 и репарогена ПАБК 0,005 .

Пример 4. Условия проведения опыта налогичны описанным выше, но перед пе- 10 еносом каллусов на регенерационную среду их обрабатывают смесью мутэгена HMM

0,1 и репарогена ПАБК 0,01 .

Пример 5. Условия проведения опыта аналогичны описанным выше, но перед пе- 15 реносом каллуса на регенерационную среду их обрабатывают смесью мутагена НММ

0,1% и репарогена ПАБК 0,05 .

Пример 6, Условия проведения опыта вналогичны описанным выше, на перед пе- 20 реносом каллуса не регенерационную среду их обрабатывают смесью мутагена НЧЧ

0,1 » репарогена ПАБК 0,1%.

Результаты проведенных исследований и редста влен ы в та бл и це. 25

Как видно из таблицы, обработка каллусов перед пересадкой на регенерационную среду смесью HMM и ПАБК повышает выход растений-регенерантов. Лучшие результаты получены в примерах 3, 4, 5; примеры 2, 6 дают низкие результаты. В сравнении с известным способом выход регенерэнтов увеличивается в 8,4 раза, что ведет к увеличению выхода генетически измененных форм, которые являются новым исходным материалом для селекции.

Формула изобретения

Способ получения растений-регенерантов риса, включающий посадку зксплантатов на модифицированную питательную среду Мураисге-Скуга до образования инициального каллуса, субкультивирование его, обработку каллуса мутагеном-N-нитроза-M-метилмочевиной, перенос на регенерационную среду, доращивание на безгорманальной среде и последующую пересадку растений s гrрpу н тT, о т л и ч à ю щ и йс я тем, что, с целью увеличения выхода жизнеспособных регенерэнтов, перед переносом на регенерационную среду каллус обрабатывают смесью мутагенэ и репарогена, при этом в качестве репарогена используют и-аминобензойную кислоту в концентрации

0.01-0,1%.