Способ оздоровления картофеля от вирусов

 

Изобретение относится к биотехнологии и сельскому хозяйству, в частности к технологии ведения семеноводства картофеля на безвирусной основе. Целью изобретения является ускорение и повышение выхода оздоровленных растений. Способ состоит в том, что исходные растения обрабатывают антивирусным препаратом, вычленяют меристемы и культивируют их на питательной среде Ван Гофа в присутствии антивирусных веществ, при этом в качестве антивирусных веществ используют маннан разветвленный или композицию его s сочетании с цианоцианидином и дезоксигидротриазином.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И OTKPblTMRM

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

0,5 (21) 4497325/13 (22) 02.08.88 (46) 07.10.91. Бюл. М 37 (71) Украинский научно-исследовательский институт сельскохозяйственной микробиологии (72) Н.В.Щербина, Ф.Е.Козар, А,Г.Коваленко, Л.М.Латаш, В.В.Неборачко и Н.В.Романенко (53) 578.085.23(088.8) (56) Борисенко С.И. и др. Эффективность оздоровления картофеля методом культуры апексов с помощью ингибиторов вирусов.—

Доклады ВАСХНИЛ, 1985, М 10, с. 10 — 12. (54) СПОСОБ ОЗДОРОВЛЕНИЯ КАРТОФЕЛЯ ОТ ВИРУСОВ

Изобретение относится к биотехнологии и сельскому хозяйству, в частности к технологии ведения семеноводства картофеля на безвирусной основе, Целью изобретения является ускорение и повышение выхода оздоровленных растений, Способ состоит в том, что исходные, зараженные вирусами растения выдерживают в течение 1,5 — 2 сут в растворе с антивирусными веществами(АВ В), выделяют эксплантаты размером 400 — 500 мкм и помещают их на питательную среду Ван Гофа, содержащую АВВ, где в качестве АВВ используют разветвленный маннан (PM) a количестве

0,15 — 0,25 г/л или PM с синтетическими ингибиторами цианогуанидином и диоксогексагидротриазином при следующем соотношении компонентов, г/л;

PM 0,15-0,25

Цианогуанидин 0.5

Диоксогексагидротриазин

„, . Ж „„1682388 А1 (я)з С 12 N 5/04,А 01 Н 4/00 (57) Изобретение относится к биотехнологии и сельскому хозяйству, в частности к технологии ведения семеноводства картофеля на безвирусной основе. Целью изобретения является ускорение и повышение выхода оздоровленных растений. Способ состоит в том, что исходные растения обрабатывают антивирусным препаратом, eb!членяют меристемы и культивируют их на питательной среде Ван Гофа в присутствии антивирусных веществ, при этом в качестве антивирусных веществ используют маннан разветвленный или композицию его в сочетании с цианоцианидином и дезоксигидротриазином, Пример 1. Растения картофеля гибрида 3731, пораженные Х-вирусом картофеля (ХВК), выдерживают в течение 1 сут в растворе PM в концентрации 0,10 г/л, затем выделяют эксплантаты от этих растений размером 200 — 250 мкм (0,20 — 0,25 мм) и помещают на среду Ван Гофа. содержащую

РМ в концентрации 0,10 г/л. Растения контрольного варианта выдерживают в течение суток в дистиллированной воде, затем выделяют эксплантаты размером 200-250 мкм и помещают на среду Ван Гофа, не содержащую РМ, т.е. без добавки антивирусного вещества.

В результате опыта из 10 растений-регенерантов только одно не содержит XBK (10 ). Аналогичный результат получен и в контрольном варианте.

fl р и м е р 2. Растения картофеля гибрида 3731, пораженные ХВК, выдерживают в течение 1 сут в растворе PM в концентрации

0,15 г/л, затем выделяют эксплантаты от

1682388 в) 2 сут, г) 3 cyr.

20 анта содержат МВК

50 этих растений размером 200 — 250 мкм и помещают на среду Ван Гофа. содержащую

РМ в концентрации 0.15 г/л. Растения контрольного варианта, как и в примере 1, не подвергают воздействию антивирусного вещества РМ, В результате опыта из 10 растений-регенерантов два не содержат ХВК (20%) в то время, как в контрольном варианте все растения содержат ХВК.

Пример 3. Растения картофеля сорта

Невский, пораженные M-вирусом картофеля (МВК), выдерживают в течение суток в растворе PM в концентрации 0,20 г/л, затем выделяют эксплантаты от этих растений размером 200 — 250 мкм и помещают на среду Ван Гофа, содержащую РЫ в концентрации 0,20 г/л. Растения контрольного варианта выдерживают в течение суток в дистиллированной воде, затем выделяют эксплантаты размером 200-350 мкм и помещают на среду, не содержащую PM. В результате опыта из 15 растений-регенерантов пять не содержат МВК (33%). Все растения-регенеранты контрольного вариПример 4. Растения картофеля с.

Невский, пораженные МВК, выдерживают в течение 1 сут в растворе РМ в концентрации

0,25 г/л, затем выделяют эксплантаты размером 200 — 250 мкм и помещают на среду

Ван Гафа, содержащую PM в концентрации

0,25 г/л. Растения контрольного варианта, как и в примере 3, не подвергают воздействию антивирусного вещества (PM), В результате опыта из 12 растений-регенерантов четыре не содержат М ВК (33,3 ). Все растения контрольного варианта содержат МВК.

Пример 5. Растения картофеля с, Невский, пораженные МВК, выдерживают в течение 1 сут в растворе PM в концентрации

0,75 г/л, затем выделяют эксплантаты размерам 200 — 250 — 350 мкм и помещают на среду Ван Гофа, содержащую PM в концентрации 0,75 г/л, Растения контрольного варианта, как и в примере 3, не подвергают воздействию антивирусного вещества (PM).

В результате опыта все эксплантаты размером 200-250 мкм погибают, Из трех растений-регенерантов, полученных из эксплантатов размером 350 мкм, в одном

MBK не обнаружен. Результаты опыта показывают, что при высокой концентрации PM проявляется фитотоксичность.

Пример 6, Растения картофеля с.

Невский, пораженные МВК, выдерживают в растворе PM в концентрации 0,20 г/л (оптимальный вариант} в течение: а) 1 сут, б) 1,5 сут, Затем выделяют эксплантаты размером

300-450 мкм и помещают на среду Ван Гофа, содержащую PM в концентрации 0,2 г/л, Растения контрольных вариантов выдерживают в течение 1; 1,5; 2 и 3 сут. в дистиллированной воде, выделяют из них эксплантаты размером 300-450 мкм и помещают на среду Ван Гофа, не содержащую

РМ (без антивирусного вещества). Отмечено угнетающее действие PM на эксплантаты, выделенные из растений, выдержанных в растворе с PM в течение 3 сут: вялость и слабая приживаемость выделенных эксплантатов.

В результате опыта; а) из 15 растений-регенерантов, полученных от растений, выдержанных в растворе с PM в течение суток, пять не содержит МВ К (33,3%); б) из 21 растения-регенеранта, полученных от растений, выдержанных в растворе с

PM в течение 1 5 сут, 17 не содержат MBK (81 0%) в) из 12 растений-регенерантов, полученных от растений, выдержанных в растворе с РМ в течение 2 сут, 10 свободны от

MBK (83,3 ).

Полученные результаты показывают, что предварительное выдерживание растений в растворе с РМ должно быть в течение

1,5 — 2 сут (оптимальный вариант).

В контрольных вариантах все растениярегенеранты (39 шт.) содержат МВК.

Пример 7. Растения картофеля с.

Невский, пораженные МВК, выдерживают в течение 2 сут в растворе PM (концентрация 0,2 г/л) с комплексом известных синтетических ингибиторов цианогуанидина (ЦГ) и диоксогексагидротриазина (ДГТ) в концентрации по 0.04 r/л каждого. Затем выделяют эксплантаты от этих растений размером 400-600 мкм и помещают на среду Ван Гофа, содержащую PM (0,2 г/л) в комплексе с ЦГ и ДГТ по О 04 г/л, В результате опыта из 7 растений-регенерантов получено четыре здоровых (57 %).

Пример 8. Растения картофеля с.

Невский, пораженные МВК, выдерживают в течение 2 сут в растворе PM (концентрация

0,2 г/л) с комплексом ЦГ и ДГТ в концентрации по 0,10 г/л каждого. Затем выделяют эксплантаты от этих растений размером

400 — 600 мкм и помещают на среду Ван Гофа, содержащую PM (0,2 г/л) в комплексе с

ЦГ и ДГТ по 0,100 г/л. В результате опыта из 5 растений-регенерантов получено три здоровых (60 ).

1682388

Составитель H.Ùåðáèíà

Техред М.Моргентал - Корректор М.Максимишинец

Редактор Н.Рогулич

Заказ 3383 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", r. Ужгород, ул.Гагааина, 101

Пример 9, Растения картофеля с.Пригожий-2, пораженные комплексом вирусов:

Х-вирус картофеля (ХВК) + M - вирускартофеля (МВК) + S-вирус картофеля (SBK) + вирус скручивания листьев картофеля (ВСЛК или L-вирус), выдерживают в течение 2 сут в растворе PM (концентрация 0,2 г/л) с комплексом ЦГ и ДГТ в концентрациях по.0,05 г/л каждого. Затем выделяют эксплантаты от этих растений размером 300-450 мкм и помещают на среду Ван Гофа, содержащую

РМ (0,2 г/л) в комплексе с ЦГ и ДГТ по 0,05

r/л.

В результате опыта из 10 растений-регенерантов 9 являются свободными от вирусов (90 $), Растения контрольного варианта содержат комплекс вирусов (X + S + М + L).

Как указано в примере 9, оздоровлены сорта: Ласунок, Добро, Изора, Невская горка, Вирусологический анализ опытных растений проведен методами: серологии. электронной микроскопии и иммуноферментного анализа.

Таким образом, оптимальным является предварительное выдерживание пораженных вирусами растений в растворе с маннаном разветвленным в концентрации

0,15 — 0,25 г/л в течение 1.5 — 2 сут с последующим выделением эксплантатов размером

400-500 мкм и посадкой их на среду Ван

Гофа. содержащую маннан разветвленный в той же концентрации. Эффективность ис5 пользования маннана разветвленного повышается при применении его в комплексе с цианогуанидином и диоксогексагидротриазином в концентрации по 0.05 г/л.

Формула изобретения

10 Способ оздоровления картофеля от вирусов. включающий вычленение меристем с последующим культивированием их на питательной среде в присутствии антивирусных веществ, отличающийся ТВМ, ÷òo, 15 с целью ускорения и повышения выхода оздоровленных растений, перед вычленением меристем исходные растения обрабатывают в течение 1,5-2 сут раствором, содержащим антивирусные вещества, вы20 членяют меристемы размером 400 — 500 мкм и культивируют их на питательной среде

Ван Гофа, при этом в качестве антивирусных веществ в составе среды используют разветвленный маннан в количестве 0.15—

25 0,25 г/л или в сочетании с цианогуанидином в количестве 0,05 г/л и дезоксигидротриазином в количестве 0.05 г/л.