Способ дифференциальной диагностики ревматизма и пограничных с ревматизмом заболеваний стрептококковой этиологии у детей

 

Изобретение относится к медицине, а именно х педиатрии, ревматологии, и может быть использовано в клинической практике для дифференциальной диагностики ревматизма и пограничных с ревматизмом заболеваний стрептококковой этиологии у детей. Цель - повышение точности способа. Исследуют показатель хемотаксиса нейтрофилоа к стрептолизину-0, вычисляют хемотаксический индекс и при уровне его, равном и выше 200%, диагностируют ревматизм, а при значении меньше 200% диагностируют пограничные с ревматизмом заболевания стрептококковой этиологии. Точность способа возрастает на 31 -50% по сравнению с прототипом. 3 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (Я)6 6 01 N 33/53

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4001004/14 (22) 30.12.85 (46) 15.11.91. Бюл. N. 42 (71) Ленинградский педиатрический медицинский институт (72) В.В.Юрьев, И.С.Подосинников и В.И.Макарова (53) 615,375 (088.8) (56) Иоффе В.И. Иммунология ревматизма.

Л., Медгиз, 1962, с,25 — 26, (54) СПОСОБ ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНОЙ ДИАГНОСТИКИ РЕВМАТИЗМА И ПОГРАНИЧНЫХ С РЕВМАТИЗМОМ ЗАБОЛЕВАНИЙ

СТРЕПТОКОККОВОЙ ЭТИОЛОГИИ У ДЕТЕЙ

Изобретение относится к медицине, а именно к педиатрии, ревматологии, клинической иммунологии, и может быть использовано в клинической практике для дифференциальной диагностики ревматизма и пограничных с ревматизмом заболеваний стрептококковой этиологии у детей.

Цель изобретения — повышение точности диагностики, Способ осуществляют следующим образом.

У больного берут из вены 2 — 3 мл крови в стерильную силиконированную пробирку с гепарином. Добавляют питательную среду (199, Хенкса, Игла) в отношении 1:1. На двойном градиенте фиколлверографин центрифугированием при 1800 об/мин, температуре 4 С в течение 30 — 40 мин выделяют субпопуляцию полиморфноядерных лейкоцитов (ПЯЛ) (нейтрофилов). Лейкоциты трижды отмывают питательной средой с по. Ж 1691745 А1 (57) Изобретение относится к медицине, а именно к педиатрии, ревматологии, и может быть использовано в клинической практике для дифференциальной диагностики ревматизма и пограничных с ревматизмом заболеваний стрептококковой этиологии у детей.

Цель — повышение точности способа. Исследуют показатель хемотаксиса нейтрофилов к стрептолизину-О, вычисляют хемотаксический индекс и при уровне его, равном и выше 200%, диагностируют ревматизм, а при значении меньше 200% диагностируют пограничные с ревматизмом заболевания стрептококковой этиологии.

Точность способа"возрастает на 31 — 50;ь по сравнению с прототипом. 3 табл.

r следующим центрифугированием (1000 .об(мин, в течение 10 — 15 мин). Лейкоциты используют в концентрации 1 — 2х10 в 1 мл

6 взвеси, В качестве хемоаттрактанта используют высушенный лиофильным методом экстракта бульонной культуры гемолитического стрептококка — стрептолизин-О (НИИ вакцин и сывороток, г.Ленинград). Препарат разводят средой Хенкса в объеме 6 мл, при этом 0,3 мл его содержат 1 гемолитическую единицу стрептолизина-О. В реакции хемотаксиса используют стрептолиэин-О с активностью в 0,25 гемолитической единицы.

Реакцию хемотаксиса определяют в камере Бойдена модифированным методом

И.С.Подосинникова с соавт. В качестве контроля используют питательную среду с добавлением 5% эмбриональной телячьей сыворотки, определяя спонтанную подвижность нейтрофилов (хемокинез).

1691745 где ХИ вЂ” хемотаксический индекс, %:

XT — хемотаксис в условных единицах;

ХК вЂ” хемокинез в условных единицах;

СΠ— стрептолизин-О.

При значении ХИ к СО, равном и выше

200, диагностируют ревматизм, а при значении его меньше 200% диагностируют пограничные с ревматизмом заболеваний стрептококковой этиологии, Способ подтверждается следующими примерами, Пример 1. Больная Ш., 8 лет (К 7673) поступила в кардиоревматологическое отделение с жалобами на повышение темпе ратуры до 37,8 С, слабость, В анамнезе частые ОРВИ, ангина. За 2 недели до настоящего заболевания перенесла ангину, после которой появились выше описанные симптомы. При поступлении состояние удовлетворительное. Температура нормальная, кожные покровы бледные, Пульс

88 в минуту, АД 110 мм рт.ст. Фиэикальные методы исследования выявляют неубедительное смещение левой границы сердца на

0,5 см к наружи, ослабление 1 тона, у sepхушки выслушивается систолический шум неопределенного характера. Больная была обследована по заявляемому способу. Из вены брали 3 мл крови в стерильную силиконированную пробирку с гепарином, Добавляли питательную среду 199 в отношении 1:1. На двойном градиенте фиколл- верографин центрифугированием при

1300 об/мин в течение 40 мин выделяли субпопуляцию ПЛЛ (нейтрофилов), ПЙЛ трижды отмывали питательной средой 199 с последующим центрифугированием в течение 15 мин при 1000 об/мин. Брали взвесь

ПЯЛ в концентрации 1 — 2х10 в 1 мл. В качестве хемоаттрактанта брали СО, разведенный средой Хенкса, в дозе 0,25 гемолитической единицы. Реакцию хемотаксиса 5 ставили в камере Бойдена, используя в качестве контроля среду 199 с эмбриональной телячьей сывороткой. Подсчитывали хемотаксис в 5 полях зрения с последующим расчетом хемотаксического индекса по форХемокинез и хемотаксис к стрептолиэину-0 определяют путем подсчета лейкоцитов под микроскопом в пяти полях зрения в выведения отношения между количеством клеток, находящихся на "старте" и прошедших через фильтр. Показатели выражают в условных единицах.

Хемотаксический индекс определяют по формуле

ХИ-Х" СО Х100%, . ХК

5 I0

50 муле. Значение ХИ к СО составляло I 99,7% .

Это позволило поставить предварительный диагноз ревматизма.

Для сравнения больная была обследована по способу-прототипу. Сыворотка от 3 мл крови в разных разведениях смешивалась со трептолизином-0, инкубировалась

25 мин, затем к ней добавлялись эритроциты барана, которые разрушались несвязанным СО. Разведения сравнивали со стандартом, умножали соответствующее разведение на 0,5, Полученное значение титра АСЛ-0=625 АЕ достоверно отличается от нормального (250 АЕ) и может с равной вероятностью свидетельствовать о ревматизме и любом другом стрептококковом заболевании.

Обследование в динамике через 4 недели выявило значение ХИ к CO=259.9 и титра АСЛ-0=-250 АЕ, Данные, полученные при использовании заявляемого способа, позволили достоверно диагностировать ревматизм, тогда как данные, полученные по способу — прототипу, свидетельствуют об отсутствии и ревматизма, и другой стрептококковой инфекции.

Контрольное комплексное клинико-инструментальное обследование (семиотика, лабораторные данные, данные ЭКГ, ФКГ и рентгенографии) и наблюдение в динамике подтвердило наличие у больной активного ревматизма с поражением сердца. Данные контрольного обследования таким образом подтвердили диагноз, поставленный заявляемым способом, Пример 2. Больная К„14 лет (1Ф 9788) поступила в кардиоревматологическае отделение с жалобами на недомогание, слабость. Анамнез без ссобенностей. 2 недели назад перенесла фолликулярную ангину, Настоящее заболевание -арактеризовалось повышением температуры до 38 С и появлением указанных выше жалоб, Перкуторно границы сердца не изменены, тон у верхушки ослаблен, выслушивается дополнительный III тон, Здесь же выслушивается систолический шум, достаточно интенсивный, тембр которого меняется в зависимости от перемены положения тела, Определение ХИ к СО проводили аналогич- но примеру 1. Значение ХИ составило 75ф,, Это позволило поставить диагноз реконвалесцент ангины. Опоеделение титра антител проводили аналогично примеру 1.

Значение АСЛ-0 ссставило 625 Ае, Это свидетельствует либо о ревматизме, либо о рецидивирующей острой стрептококковой инфекции. При повторном обследовании через 3 недели ХИ к СО составлял 127%, титр

АСЛ-0 — 625 АЕ. Достоверных данных за

1691745 ревматизм нет. Комплексное контрольное обследование с использованием биохимических показателей, ЭКГ, ФКГ и данных рентгенографии позволило поставить диагноз: реконвалесцент ангины, вегетососудистая дистония пубертатного периода, пролапс митрального клапана. Таким образом, контрольное обследование подтвердило поставленный диагноз заявляемым способом.

П р им е р 3, Больной Д., 13 лет(%174).

3 года назад перенес атаку ревматизма. На момент обследования жалуется на летучие боли в суставах. Состояние удовлетворительное, Суставы не изменены. Границы сердца в пределах возрастной нормы. I тон ослаблен, на верхушке выслушивается мягкий систолический шум. Со стороны других органов изменений не выявлено, Определение ХИ к СО проводили аналогично примеру 1. Значение ХИ составило 459,8 . Это позволило поставить диагноз активного ревматизма с поражением сердца и суставов, Определение титра антител к СО проводили аналогично примеру 1. Титр АСЛ-0 составил

250 АЕ, значение этого показателя не позволяет поставить диагноз не только ревматизма, но и доказать наличие в организме стрептококковой инфекции. Ребенок был госпитализирован в стационар, где проведенное комплексное клинико-лабораторно-инструментальное обследование подтвердило диагноз активного ревматизма с поражением сердца и суставов.

Таким образом, клинические примеры достаточно убедительно демонстрируют преимущества предлагаемого способа в дифференциальной диагностике ревматизма и пограничных с ревматизмом заболеваний стрептококковой этиологии, Доказательства достижения положительного эффекта, Для доказательства специфичности предлагаемого способа дифференциальной диагностики ревматизма и пограничных с ревматизмом заболеваний стрептококковой этиологии были проведены дополнительные экспериментальные исследования больных детей с достоверными диагнозами.

Были обследованы следующие группы больных детей.

1 группа: больные дети с достоверным диагнозом ревматизма (диагноз установлен на основании комплексного клиниколабораторного, функционального и инструментального исследования, а также наблюдения в катамнезе и динамике) — 77 человек.

35 ходного значения за пределы доверительного интервала), 40 представлена в табл.1

II группа: больные с пограничными заболеваниями стрептококковой этиологии, например, узловая эритема, реактивный артрит, стрептококковый миокардит и другие (диагноз установлен на основании комплексного исследования) — 30 человек, III группа: больные с хроническим тонзиллитом (диагноз установлен на основании комплексного обследования, включая осмотр специалистов) — 13 человек.

IY группа: больные, имеющие изменения в сердечно-сосудистой системе невоспалительного характера (функциональные кардиопатии).

Диагноз установлен на основании комплексного исследования, включая определение исходного вегетативного статуса, электрокардиографию с функциональными пробами. осмотр специалистов, — 26 человек.

Y группа: (контрольная) — здоровые дети — 18 человек.

Все больные были обследованы с использованием предлагаемого способа, способа — прототипа, основанного на определении титра антител к стрептолизину-0 и способа, основанного на определении хемотаксического индекса к казеинату натрия.

Диагностическим критерием предлагаемого способа являлось значение хемотаксического индекса к стрептолизину-0 (ХИ

СО) больше 200, способа-прототипа — значение титра антител к антистрептолизину-0 (АСЛ-О) выше способа-аналога — ХИ каз.нат,= 218,2 + 19,1 (превышение исСравнительная оценка диагностических возможностей различных способов обследования больных с достоверным диагнозом

Из данных табл.1 видно, что только предлагаемый способ обеспечивает специфическую диагностику ревматизма с высокой точностью (99 ) и позволяет отдифференцировать ревматизм от других заболеваний стрептокковой этиологии.

Предлагаемый способ не позволил поставить диагноз ревматизма только у очень небольшой части больных(1 ), как правило, это больные с нейроревматизмом. Способпрототип не обеспечивает специфичности диагностики ревматизма и не обеспечивает возможность дифференциальной диагностики, так как является показателем ответной реакции организма на любую стрептококковую инфекцию, Титр антител выше диагностического уровня, как правило, наблюдался при заболеваниях острой стрептококковой инфекцией (II группа больных). У больных с латентным и непрерывно

1691745

50 рецидивирующим течением ревматизма титр антител, как правило, оставался ниже диагностического (у 51%) и не позволил использовать его в качестве диагностического критерия ревматизма.

При использовании способа-аналога, основанного на определении хемотаксического индекса к казеинату Na. достоверное повышение ХИ казеината Na выше диагностического наблюдалось только в группе больных с острой стрептококковой инфекцией (20%) и у 2-х больных с хроническим тонэилитом (15%). Поэтому указанный способ не может быть использован для дифференциальной диагностики ревматизма и других стрептококковых заболеваний.

Высокие диагностические возможности заявляемого способа и его специфичность можно объяснить тем, что предлагаемый способ основан на определении эффекторного звена клеточного ответа иммунной системы в отличие от способа-прототипа, который позволяет фиксировать гуморальную неспецифическую реакцию иммунного ответа организма. Поэтому, именно использование заявленного информативного параметра (хемотаксический индекс к стрептолизину-О) приводит к появлению нового свойства — возможности выявления генетически детерминированного клеточного дефекта, специфического для ревматизма, что позволяет повысить точность дифференциальной диагностики ревматизма и других стрептококковых заболеваний по сравнению со способом-прототипом, В табл.2 представлены доказательства уникальности хемотаксиса нейтрофилов к стрептолизину-0 при ревматизме, Были обследованы больные дети с достоверными диагнозами, распределенные на пять групп. Достоверность результатов определяли по критерию Стьюдента (Т).

Из данных табл.2 видно, что значения

ХИ СО достоверно отличается от порогового уровня контрольной группы только у больных ревматизмом, что свидетельствует о наличии гиперрективности ПЯЛ к СО при ревматизме и наличии хемотаксической деактивации ПЯЛ к СО при пограничных с ревматизмом заболеваниях стрептококковой этиологии.

Значения хемотаксического индекса полиморфноядерных лейкоцитов (ПЯЛ) и стрептолизину-0 при различных нозологических формах заболевания даны,в табл.2.

Для доказательства уникальности выявленного свойства — гиперреактивности ПЯЛ (нейтрофилов) при ревматизме были рассмотрены изменения других иммунологиче5

45 ских показателей, характеризующих иммунный ответ организма на клеточном уровне при ревматизме и пограничных с ревматизмом заболеваний стрептококковой этиологии. Были обследованы следующие группы больных детей. группа — больные дети с достоверным диагнозом ревматизм, 15 чел;

35 группа — больные дети с пограничными с ревматизмом заболеваниями стрептококковой этиологии(наличие стрептококковой инфекции подтверждено определением титра антител к СО), 13 чел; !И группа — контрольная группа (здоровые дети), 18 чел.

Наряду с определением ХИ к СО (заявляемый способ) исследовали реакцию бласттрансформации лимфоцитов (РБТЛ) в присутствии СО и реакцию розеткообразования лимфоцитов, Из табл.3 видно, что в значениях показателей РБТЛ и розеткообразования при ревматизме и пограничных состояниях стрептококковой этиологии отсутствуют достоверные различия, тогда как

ХИ к СО значимо выше в группе больных ревматизмом по сравнению с группой больных пограничным ревматизмом заболеваниями стрептококковой этиологии.

Это подтверждает уникальность выявленного специфического свойства нейтрофилов при ревматизме, положенного в основу дифференциальной диагностики.

Сравнительная характеристика изменения иммунологических показателей, характеризующих иммунный ответ организма на клеточном уровне, при ревматизме и пограничных с ним заболеваниях стрептококковой этиологии представлена в табл.3, Таким образом, использование предлагаемого способа позволяет повысить точность дифференциальной диагностики на

30 — 51% по сравнению со способом-прототипом за счет возможности выявления генетически детерминированного клеточного дефекта, специфического для ревматизма, Формула изобретения

Способ дифференциальной диагностики ревматизма и пограничных с ревматизмом заболеваний стрептококковой этиологии у детей путем исследования иммунологического показателя, о т л и ч а юшийся тем, что, с целью повышения точности диагностики, в качестве иммунологического показателя используют хемотаксический индекс нейтрофилов к стрептолизину-О, и при значении индекса, равном или выше 200%, диагностируют ревматизм, при значении его меньше 200% диагностируют пограничные с ревматизмом заболевания стрептококковой этиологии.

1691745

Таблица 1

Таблица 2

Таблица 3

" р < 0,001 по сравнению с контрольной группой;

** р < 0,02 по сравнению с контрольной группой.