Способ диагностики хронической инфекции

 

Изобретение относится к медицине и биологии, а именно к способам иммунодиагностики хронических инфекционных заболеваний . Целью изобретения является упрощение способа за счет выделения антигена из иммунных комплексов, циркулирующих в крови. Для этого к сыворотке крови обследуемого последовательно добавляют боратный буфер рН 8,4 в соотношении 1:25, добавляют полиэтиленгликоль с мол. м. 6000 до конечной концентрации 3,5%, инкубируют на холоде, центрифугируют, полученный преципитат отмывают 3,5 % -ным полиэтиленгликоль-бо.оатным буфером, наносят на стекло, высушивают на воздухе, фиксируют этаном и исследуют в иммунохимической реакции.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО. ИЗОБРЕТЕНИЯМ. И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4196596/63 (22) 19.02,87 (46) 15.11.91, Бюл. ¹ 42 (71) Научно-исследовател ьс кий институт эпидемиологии и микробиологии им; почетного акад. Н, Ф. Гамалеи АМН СССР и 1-й

Московский медицинский институт им.

И. M.Ñå÷åíoâà . (72) Л. Г. Горина, fO. В. Вуаьфович, Г, А.

Гаврилова и С. А. Гончарова (53) 615.373(088.8) (56) Авторское свидетельство СССР

¹ 1123128, кл. А 61 К 39/00, 1982. (54) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ХРОНИЧЕСКОЙ ИНФЕКЦИИ

Изобретение относится к медицине и биологии, а именно к способам иммунодиагностики хронических инфекционных заболеваний, и может быть использовано для диагностики заболеваний бактериальной этиологии.

Цель изобретения -упрощение способа диагностики хронических инфекций за счет ,выделения антигена из иммунных комплексов, циркулирующих в сыворотке крови.

Способ диагностики хронической инфекции, основанный на антигенной характеристике. циркулирующих иммунных комплексов, иллюстрируется следующими примерами., Пример 1. Больная П,поступила с диагнозом эритематозно-геморрагическая рожа левой голени, рецидивирующая. Сыворотку крови обследуемой в объеме 200 мкл смешали с боратным буфером рН 8,4 в соотношении 1:25, добавили полиэтиленгликоль

„„Я „„1690691 А1 (ч)5 А 61 В 10/00, G 01 33/53 (57) Изобретение относится к медицине и биологии, а именно к способам иммунодиагностики хронических инфекционных заболеваний. Целью изобретения является упрощение способа за счет выделения антигена из иммунных комплексов, циркулирующих в крови. Для этого к сыворотке крови обследуемого последовательно добавляют боратный буфер рН 8,4 в соотношении 1:25, добавляют полиэтиленгликоль с мол, м.

6000до конечной концентрации 3,5;4, инкубируют на холоде, центрифугируют, полученный преципитат отмывают 3,5 $ -ным полиэтиленгликоль-бооатным буфером, наносят на стекло, высушивают на воздухе, фиксируют этаном и исследуют в иммунохимической реакции. мол. м. 6000 до конечной концентрации

3,5 ь, инкубировали в течение 18 ч при 4 С, центрифугировали в течение 20 мин при

20000 д, Полученный преципитат отмыли

3,5 g -íûì пплизтиленгликоль-боратным буфером при тех же условиях, поместили на предметное стекло и высушили при комнатной, температуре на воздухе, фиксировали

960 этанолом и исследовали в реакции иммунофлуоресценции. При исследовании установили наличие антигена L-форм стрептококка группы А, который не выявлял.ся в РПГА и РАГА, и диагностировали хроническое инфицирование L-формами стрептококка.

Пример 2, Больная 3, поступила с диагнозом эритематозно-булезная рожа правой голени, рецидивирующая. В первый день болезни жалобы на слабость, головную боль, ломоту в теле, тошноту, красноту и отек на коже правой голени. Болезнь проте1690691

10

15 кала остро; озноб, температура до 39,5 С, слабость, тошнота, боли распирающего характера в области правой голени, через 2-3 ч появились краснота, отек, боли в правой голени, на 2-й день на конце голени появились пузырьки с сероэным содержанием, Исследования антигенов проведены так же, как в примере 1 на 2,10,15 дни-болезни, через 1,3 месяца после выписки из стационара. Во всех случаях выявлены антигены

L-форм стрептококка, Диагностировано

° хроническое инфицирование L-формами стрептококка. Через 6 мес. после выписки у больной развился рецидив заболевания.

Пример 3. Больная Л., 39 лет(история болезни 1739), страдающая часто рецидиви, рующей рожей правой нижней конечности в течение 7 лет, поступила в отделение с ди-. агнозом: эритематозная рожа правой нижней конечности, часто рецидивирующая.

Получала бензилпенициллин по 500 000 ЕД.

6 раз в сутки в/мышечно в течение 8 дней.

Общее состояние стало удовлетворительйым: на 3-й день болезни, лихорадка длилась

3 дня, эритема исчезала на 4-й день болезни, отек на 8-й день болезни, Региональный лимфоаденит сохранялся до 6-ro дня болезни, На третий день болезни титры антигенов в РАГА составили: антиген бактериальной формы стрептококка 1:16, антиген L-форм (свободный) 1;16, антиген в составе LINK1:96, На 29-й день болезни титры составили

1.0, 1:0 и 1:64 соотцетственно. Исследование преципитатов, полученых ПЭГ, на присутствие антигена L-форм стрептококка в составе ЦИК в укаэанные сроки показало положительный результат (на +2)..Ранний рецидив эритематозной рожи правой нижней конечности развился на 10-й день болезни.

Пример 4. Больной В., 39 лет (история болезни N 3858), страдающий часто рецидивирующей рожей левой голени в течение

3 лет, поступил в стационар с диагнозом;. эритематозная рожа левой голени, часто рецидивирующая. Получал бензилпенициллин в дозе 500 000 ЕД 6 раз в сутки в течение 9 дней в/мышечно. Исследования сыворотки крови проводили на 2,9 и 15-й дни болезни.

В первые два срока был обнаружен свободный антиген L-форм стрептококка, на 15-й лень — в составе ЦИК (методом преципитации ПЭГ), Результаты диссоциации ЦИК подтвердили положительный результат, свидетельствующий о наличии специфических ЦИК, антиген -форм в составе ЦИК обнаружен в титрах в РАГА 1:60. Присутствие специфических ЦИК при отсутствии свободного анти гена указывало на возможность развития рецидива. После ле20

55 чения линкомицином, действующим на 1формы стрептококка, в дозе 0,5 r каждые 6 ч в течение.7 дней антигенов L-форм как в свободном состоянии, так и,в составе ЦИК обнаружено не было, На протяжении 2,5 лет наблюдения у больного не было зарегистрировано рецидива рожи, Пример 5, Больная 3„3 лет (история болезни 154) поступила в больницу на 10-й день болезни с диагнозом: двусторонняя пневмония. Был назначен пенициллин в течение 7 дней, затем ампициллин в течение 6 дней, состояние — медленная динамика. На

26-й день было проведено исследование на микоплазменную инфекцию. Был выявлен антиген М. pneumonIae в составе ЦИК методом преципитации иммунных комплексов

3,5 / ПЭГ (крупные комплексы, +3) и проведено лечение эритромицином в течение 6 дней, Через 7 дней повторное обследование показало наличие специфических ЦИ К в сыворотке крови больного (на 2+, более мелкие), Повторное лечение эритромицином дало положительные результаты: состояние больного нормализовалось, антиген М, pnqumonlae отсутствовал как в составе ЦИК, так и в свободном состоянии.

Пример 6. Больной Ш., 11 месяцев (история болезни 337), поступил с диагнозом: бронхит на 8-й день болезни, Получал оксициллин, полимиксин, эффекта не наблюдалось. На 12-й день болезни было проведено обследование с целью выявления микоплазменной инфекции. В РАГА были выявлены следовые количества антигена M.

pneumonIae, что не давало возможности четко поставить диагноз: респираторный .микоплазмоз. Исследование на присутствие специфических ЦИК методом осаждения их

ПЭГ и исследованием преципитата в РИФ показало наличие большого числа комплексов (2+), содержащих антиген М.

pneumonIae. Была проведена специфическая последовательная терапия: рифампицин и эритромицин в дозах 10 и 30 мг/кг соответственно в течение 6 и 7 дней, На 14 день отмечено значительное улучшение, специфических ЦИК не обнаружено. На 28-й день ребенок выписан в удовлетворительном состоянии, в течение последующих 6 месяцев обострения не наблюдалось.

Пример 7. Больная Анита Ш., поступила в отделение с диагнозом: ревматоидный артрит (хроническая форма), Было проведено противовоспалительное и гормо-. нальное лечение с использованием бруфена и гидрокортизона по общепринятой схеме в течение 1,5 месяцев. Улучшение состояния на фоне проведенной терапии не наблюдалось, Перед изменением курса лечения бы1690691

Составитель Ю. Кононенко

Техред М.Моргентал Корректор О.Кундрик

Редактор А.Дол и н ич

Заказ 3872 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина. 101 ло проведено обследование на микоплазменную инфекцию. В РАГА антигены микоплазмь< не обнаружены, микробиологический результат отрицательный. Выделение ЦИК3,5 Д ПЭГ и исследование преципитата в

РИФ показало наличие в иммунных комплексах антигена М, fermentaus. Параллельно было проведено диссоциирование ЦИК, в диссоциированных образцах в РАГА обнаружен антиген M. fermentaus в титре 1;104.

Рекомендовано лечение препаратами тетрациклина в течение 2 нед. Через 15 дн отмечено улучшение состояния больной и снижение клиниколабораторных показателей патологического процесса. С цельюпредупреждения рецидивов больной рекомендовано периодическое обследование на присутствие специфических ЦИК и поддерживающая терапия, Способ обеспечивает большую информативность за счет выявления общих иммунных комплексов и специфических антигенов, прост и доступен, позволяет своевременно диагностировать наличие хрони-, ческой инфекции, назначать соответствующее лечение и снизить число случаев рецидивов заболевания.

5 Формула изобретения

Способ диагностики хронической инфекции, включающий смешивание сыворотки крови с буфером, выделение антигена с

10 последующей его идентификацией в имму- - нохимической реакции и вынесение суждения,отл ича ющийся тем, что,с целью упрощения способа, в качестве буфера используют боратный буфер рН 8,4 в сооТМо15 шении 1;25, а для выделения антигена добавляют раствор полиэтиленгликоля с мол. м. 6000 до конечной концентрации

3,5, инкубируют на холоду, центрифугируют, преципитат отмывают 3,5 -ным поли20 этиленгликоль-боратным буфером, помещают на стекло, высушивают при комнатной.температуре на воздухе и фиксируют этанолом.