Препарат бактериофага клебсиелл пневмонии

 

Изобретение относится к биотехнологии, а именно к производству медицинских биологических препаратов и их применению. Целью изобретения является разработка нового препарата бактериофага клебсиелл пневмонии для лечения гнойно-воспалительных заболеваний, вызываемых клебсиеллами пневмонии. Изобретение позволяет получить новый эффективный препарат для лечения клебсиеллезных инфекций. Для этого при терапии гнойно-воспалительных заболеваний, вызванных бактериями клебсиелл, используют препарат, содержащий бактериофаги клебсиелл, активные в отношении 70 - 94% штаммов бактерий клебсиелл пневмонии, содержащий в 1 мл: бактериофаги клебсиелл пневмонии 0,5 - 1,0 · 10⁹ фаговых частиц: желатин 7,0 - 8,0 мг; хлористый натрий 7,2 - 7,4 мг, фосфорнокислый натрий двузамещенный двуводный 1,1 - 1,3 мг; фосфорнокислый калий однозамещенный 0,35 - 0,37 мг, хлористый магний 0,09 - 0,11 мг, вода - остальное. Препарат нетоксичен, эффективен при терапии экспериментальных клебсиеллезных инфекций, защитный эффект при заражении животных дозой бактерий 100 ЛД₅₀ составляет 80 - 100%. Препарат эффективен при лечении больных. 2 табл.

Изобретение относится к биотехнологии, к производству медицинских биологических препаратов и их применению. Препараты бактериофагов используют для лечения гнойно-воспалительных заболеваний, вызванных бактериями шигелл, сальмонелл, протея, стафилококка, синегнойной и кишечной палочки. Бактериофаги клебсиелл используются в настоящее время только для типирования штаммов клебсиелл. Они относятся к группе умеренных и не способны лизировать бактерии клебсиелл без образования фагоустойчивых мутантов, вследствие чего неэффективны при использовании их для лечения клебсиеллезных инфекций. Бактериофаги клебсиелл пневмонии в настоящее время не используются для лечения клебсиеллезных инфекций, лечебных препаратов бактериофагов клебсиелл не существует (аналогов нет). Целью изобретения является разработка нового препарата бактериофага клебсиелл пневмонии для лечения гнойно-воспалительных заболеваний, вызванных клебсиеллами пневмонии. Поставленная цель достигается тем, что для лечения используют препарат бактериофага клебсиелл пневмонии, включающий бактериофаги KP 1, KP 2, KP 3, KP 4, KP 5, KP 6, KP 7, KP 8, KP 9, KP 10, KP 11, KP 12, KP 13, KP 14, KP 15, активные в отношении 70,0-72,7% штаммов бактерий клебсиелл пневмонии, содержащий, мг/мл: Бактериофаги клебсиелл пнев- монии (0,5-1,0)˙10⁹ фаговых час- тиц Желатин 7,0-8,0 Хлористый натрий 7,2-7,4 Фосфорнокислый натрий двузаме-
щенный двуводный 1,1-1,3
Фосфорнокислый
калий однозаме-
щенный 0,35-0,37
Хлористый магний 0,09-0,11
Вода Остальное. Впервые изучены биологические свойства бактериофагов клебсиелл пневмонии, разработана технология получения препарата, схема и способ его применения. Существенным признаком описываемого препарата является наличие в нем стабилизирующей среды следующего состава, мг/мл: желатин 7,0-8,0, хлористый натрий 7,2-7,4; фосфорнокислый натрий двузамещенный двуводный 1,1-1,3; фосфорнокислый калий однозамещенный 0,35-0,37; хлористый магний 0,09-0,11; вода остальное. Приведенный состав препарата стабилизирующей среды обеспечивает изотоничность среды, оптимальный для биологических объектов pH среды в пределах 7,1-7,2, а также стабильность специфической антибактериальной активности препарата, при хранении препятствуя агрегации и инактивации фаговых частиц. В литературе перечисленные существенные признаки не описаны. Предлагаемый препарат является принципиально новым средством для лечения инфекций, вызванных клебсиеллами пневмонии. П р и м е р 1. Биологические свойства бактериофагов клебсиелл пневмонии. Источником выделения бактериофагов служили сточные воды. В качестве тест-штаммов для выделения бактериофагов и последующего изучения биологических свойств бактериофагов используют клинические штаммы бактерий клебсиелл пневмонии. Бактериофаги клебсиелл пневмонии, вошедшие в состав препарата (15 штаммов бактериофагов) при размножении их на тест-штаммах гомологичного вида клебсиелл, характеризовались латентным периодом размножения продолжительностью 15-22 мин, урожайностью в пределах 20-80 фаговых частиц из 1 инфицированной бактериальной клетки константами скорости адсорбции (K) в пределах (0,7-5,4)˙10^-7 мл/мин. При рассеве в плотных питательных средах двухслойным методом (Грациа) они образовывали негативные колонии диаметром 0,5-2,0, 3,0-5,0 и 8,0-0,12 мм. Данные представлены в табл. 1. Бактериофаги клебсиелл пневмонии в количестве 15 штаммов, вошедшие в состав препарата, были активны и обеспечивали стабильный литический эффект в отношении 70-72,2% из 278 клинических штаммов гомологичного вида клебсиелл при определении методом Аппельмана, активность 10^-4 и выше. Были активны в отношении антибиотикорезистентных штаммов гомологичных видов и не обладали способностью к трансдукции детерминант антибиотикорезистентности чувствительным штаммам бактерий клебсиелл пневмонии. П р и м е р 2. Способ получения препарата, его биологические свойства и терапевтическая активность. Для культивирования бактериофагов клебсиелл пневмонии используют бактериофаги и тест-системы гомологичного вида клебсиелл, перечисленные в примере 1. Для каждого штамма бактериофага используют свой тест-штамм (см. табл. 1). После лизиса бактериальной популяции фаголизат очищают от бактериальных клеток и балластных веществ культуральной среды. Препарат бактериофага, полученный таким образом, содержит в 1 мл (0,5-1,0)˙10⁹ фаговых частиц бактериофагов клебсиелл пневмонии, 7,3 мг хлористого натрия; 1,2 мг фосфорнокислого натрия двузамещенного двуводного, 0,36 мг фосфорнокислого калия однозамещенного; 0,1 мг хлористого магния; 7,2 мг желатина, остальное вода. Для определения специфической антибактериальной активности препарата используют метод Аппельмана и клинические, выделенные от больных штаммы клебсиелл. Препарат бактериофага клебсиелл, полученный способом, описанным в примере 2, обладает активностью в отношении 70-72,2% штаммов клебсиелл пневмонии. Степень активности по Аппельману 10^-4 и выше (см. табл. 2). Препарат бактериофага клебсиелл пневмонии нетоксичен при введении однократно белым мышам и морским свинкам в дозе, превышающей максимальную разовую для человека в расчете на единицу массы соответственно в 3500 и 1000 раз (острая токсичность). Препарат бактериофага также был нетоксичен при введении в объеме разовой человеческой дозы в пересчете на единицу массы в течение 20 дней белым мышам. Гибели животных, падения массы тела, патологических изменений внутренних органов как при изучении острой токсичности, так и хронической токсичности не отмечено. Для определения терапевтической активности препарата используют модель клебсиеллезного сепсиса у белых мышей, вызванного внутрибрюшинным заражением бактериями клебсиелл в дозе 10-100 ЛД₅₀. Через 24 ч после заражения бактериями клебсиелл на фоне дессиминации возбудителей проводится терапия ежедневным внутрибрюшинным введением препарата в объеме 0,2 мл при дозе (2,5-5)˙10⁹ фазовых частиц на 1 кг массы тела. Как видно из табл. 2, ежедневное применение препарата в течение 20 дней позволило получить 80-100%-ный защитный эффект при заражении дозой 100 ЛД₅₀ в сравнении с контрольной группой нелеченых животных. При изучении специфической активности и реактогенности препарата клебсиелл пневмонии установлено, что ни у одного из 10 больных, леченных предлагаемым преператом клебсиеллезного бактриофага не отмечено патологических реакций на его введение. Препарат эффективен при лечении абсцессов бедра, абсцессов брюшной полости, нагноений брюшной полости, мочеполовых органов, пролежней, вызванных бактериями клебсиелл пневмонии. Применение препарата приводило к улучшению общего состояния больного, санации патологического очага, элиминации возбудителей из гнойного очага, подтвержденной бактериологическими анализами.

Формула изобретения

ПРЕПАРАТ БАКТЕРИОФАГА КЛЕБСИЕЛЛ ПНЕВМОНИИ, включающий бактериофаги KP 1, KP 2, KP 3, KP 4, KP 5, KP 6, KP 7, KP 8, KP 9, KP 10, KP 11, KP 12, KP 13, KP 14, KP 15, активные в отношении 70,0 72,2 штаммов бактерий клебсиелл пневмонии, содержащий, мг/мл:
Бактериофаги клебсиелл пневмонии (0,5 1,0) · 10⁹ фаговых частиц
Желатин 7,0 8,0
Хлористый натрий 7,2 7,4
Фосфорнокислый натрий двузамещенный 1,1 1,3
Калий фосфорнокислый однозамещенный 0,35 0,37
Хлористый магний 0,09 0,11
Вода Остальное

РИСУНКИ

Рисунок 1, Рисунок 2, Рисунок 3

PD4A - Изменение наименования обладателя патента Российской Федерации на изобретение

(73) Новое наименование патентообладателя:
Федеральное государственное унитарное предприятие “Научно-производственное объединение по медицинским иммунобиологическим препаратам “Микроген”

(73) Новое наименование патентообладателя:
Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф.Гамалеи РАМН

Извещение опубликовано: 10.08.2004        БИ: 22/2004

---