Питательная среда для дифференциации энтеропатогенных эшерихий

 

Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано для бактериологической диагностики эшврихиозов. Цель изобретения - повышение точности дифференциации эшерихий. На 1 л мясопептонного агара добавляют 5-10 г сахарозы, 0,2-0.25 г фенол рота. 0.1-0,15 г анилина синего. Цвет готовой среды красный . Сахарозонегативные колонии энтеропатогенных эшерихий розового цвете, сахарозопозитивные - серовато-розовые, среда элективная, оказывает ингибирую щее действие на рост стафилококка. у Ё

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

ГОсудАРственный кОмитет

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКЧТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4740371/13 (22) 07.09.89 (46) 07,01.92, Бюл. N 1 (71) Ленинградский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Пастера (72) Н.К. Голутва, Н.В. Сафонова, Т.В. Петрова и Г.А. Стовпчатая (53) 576.8.093.1(088.8) (56) 1, Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследования./Под ред. M.Î, Биргера, M.: Медицина, 1982, с. 59.

2. Wright К,С, "А new selective апб

differential agar medium for Е. coll and

coliforrh organisms", J. of Applied

Bacteriology, 1984, ч. 56, р. 381 — 988.

3, Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам- исследования./Под ред. М.О. Биргера, М.: Медицина, 1982, с. 58.

Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано для бактериологической диагностики эшерихиозов.

Известна дифференциальная элективная среда Левина для выделения патогенных кишечных палочек: на 100 мл мясопептонного агара добавляют 2 мл

0,5 -ного водного раствора мителенового синего, 1,5 мл 2 -ногг водного раствора эозина (эозин натрий бактериологический), 2 г лактозы, 0,2 г двухосновного фосфата калия. Среда позволяет отличать по внешнему виду синие или черные колонии лактозопозитивных кишечных палочек от лактозонегативных, прозрачных, бесцветных колоний шигелл, сальмонелл и оранже„„Я3 „„1703695 А1 (5 )s С 12 0 1/04, С 12 N 1/20 (54) ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ДИФФЕР Е Н ЦИАЦИИ Э НТЕ РОПАТОГЕННЫХ

ЭШЕРИХИЙ (57) Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовайо для бактериологической диагностики эшерихиозов. Цель изобретения — повышение точности дифференциации эшерихий. На 1 л мясопептонного агара добавляют 5-10 r сахарозы, 0,2-0,25 г фенол рота. 0,1-0,15 г анилина синего. Цвет готовой среды красный. Сахарозонегативные колонии энтеропатогенных эшерихий розового цвета, са ха розопозити вн ые — серовато-розовые. среда элективная, оказывает ингибирующее действие на рост стафилококка. ей вых колоний протея, обладает способностью задерживать рост грам положительных микробов f1 ).

Другая дифференциальная селективная 0" среда предложена Райтом (2): 30 г лактозы, О

20 r триптозы, 6 г дрожжевого экстракта, 1 г (Л додецила сульфата натрия, 0,2 г фенол рота, 0,1 г анилина синего растворяют в 1 л дистиллированной воды и добавляют 12 г агара (Oxoid М 1). Среда позволяет дифференцировать лактозонегативные колонии от лактозопозитивных, а также является селективной — ее состав стимулирует рост патогенных энтеробактерий и добавляет рост других сопутствующих микробов.

Однако известные дифференциальные среды не дают возможности дифференци1703695 ровать колонии кишечных палочек по сахароэному признаку и морфологической характеристике. Среда Райта трудоемка в приготовлении из-за сложности состава.

Наиболее близкой по достигаемому эфф ry является дифференциальная среда

Ассоль-Либермана: на 1 л мясопептонного агара добавляют 10 r сахарозы и 0,6 г конго рота. Среда обладае- способностью дифференцировать разные виды кишечных палочек, в том числе и энтеропатогенные, по сахарозному признаку и морфологической характеристике, однако не обладает элективностью(31 .

Цель изобретения — повышение точности дифференциации эшерихий, Среду готовят следующим образом.

В растопленный стерильный питательный агар добавляют навески сахарозы, фенол рота и анилина синего. Тщательно перемешивают до растворения ингредиентов. Среду разливают по 25 мл в стерильные чаши Петри и оставляют до застывания. 3атем чашки со средой подсушивают в термостате при 43 С в течение 30 мин, после чего она готдва для использования. Цвет готовой среды красный.

Пример 1, На 1 л мясопептонного агара добавляют 5 г сахароэы, 0,2 г фенол рота, 0.1 г анилина синего. Тщательно размешивают, разливают в чашки Петри. Затем чашки со средой подсушивают в термостате. Среда готова для использования. Сахарозонегативные колонии энтеропатогенных эшерихий отличаются от сахарозопоэитивных интенсивностью окраски: сахарозонегативные — розовые, сахарозопозитивные— серовато-розовые. Элективность среды сохраняется.

Пример 2. Готовят среду аналогично примеру 1, но в 1 л мясопептонного агара внс . ят 10 г сахарозы, 0,25 г фенол рота, 0.15 г анилина синего. Интенсивность окраски колоний более яркая: сахарозонегативные— розовые с красным центром, сахарозопозитивные бледно-розовые с чертым центром, Отмечаются морфологические различия при росте колоний лактозонегативных, слабос,заживающих сахарозу, Элективность среды сохраняется.

Пример 3. На 1 л мясопентонного агара добавляют 7,5 г сахарозы, 0,225 г фенол рота и 0,125 г анилина синего. Среда красного цвета. Интенсивность окраски колоний, выросших на этой среде, более яркая, чем в примере 1: сахарозонегативные— роэовыв с красноватым центром, сахарозопозитивные — бледно-розовые с серым или черным цен.ром. Элективность среды сохраняется.

Приготовленные по примерам варианты среды позволяют дифференцировать выросшие колонии эшерихий по "сахарозному" признаку и, отчасти, по их морфологической характеристике, а также обеспечивают элективность среды — происходит задержка роста грамположительных микробов.

Среду используют следующим образом.

Готовят суточные агаровые культуры лактозоотрицательных штаммов (шигелл, сальмонелл, стафилококка, протея), лактозо-сахарозоположительных штаммов (ЭПКП 018 ас, 0142) лактозоположительных, но сахарозонегати вных (Э П КП 044 ° 04), штаммов, слабо сбраживающих сахарозу (ЭПКП 0111, 026). С помощью оптического стандарта мутности готовят взвеси монокультур их высевают по 0,1 мл из разведения 10, 10 на чашки с предлагаемыми и известными средами (Левина, Райта, ЯсельЛибермана). Высекают также различные варианты смесей этих культур, Учет результатов проводят через 18-20 ч инкубации посевов при 37 С.

Чувствительность, стабильность исходных биологических свойств, скорость роста испытуемых штаммов на опытной и известных средах одного порядка.

Дифференцирующие свойства: при посеве смеси ЭПКП 018 ас (сахарозо-лактозопозитивные), ЭПКП 044 (сахарозонегативные, лактозопозитивные), шигелл (лактозо-сахарозонегативные) и ЭПКП 0111 (лактозопоэитивные, но слабо сбраживающие сахарозу) на опытной среде отмечается четкая дифференциация всех четырех видов энтеробактерий.

Колонии имеют разнообразное окрашивание: розовато-серые с темным центром, розовые С красным центром, оранжево-розовые и красные. На известных средах-аналогах (Левина и Райта) отмечаются только два вида колоний на основе лактозного признака. Среда

Асель-Либермана обладает такими же дифференцирующими свойствами, как и предлагаемая, но не обладает элективностью.

При количественном посеве миллиард. ной взвеси суточных агаровых культур эшерихий, протея и сальмонелл на предлагаемую среду и среды Левина и

Ясель-Либермана количество колониеобразующих единиц для каждого отдельно взятого штамма было высоким и практически одинаковым — 1,4х10, 4,6x10 . 2,2х10 соответственно. Среда Райта, хотя и была чувствительна к эшерихиям и сальмонеллам (1,2х10 колониеобразующих единиц), но

& оказывает ингибирующее действие на рост протея и стафилококка — 1,2х10 и 1,4х10 соответственно.

1703695

Составитель Н.Голутва

Техред М.Моргентал

Редактор Л.Волкова

Корректор Т.Палий»

Заказ 41 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб.. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101

Предлагаемая среда и среда Левина оказывают ингибирующее действие только на рост стафилококка — 2,3х10, 8

Среда Асель-Либермана не обладает элективностыю.

Формула изобретения

Питательная среда для дифференциации энтеропатогенных эшерихий, содержащая мясопептонный агар, краситель и сахароэу. отличающаяся тем, что, с целью повышения точности дифференциации эшерихий, она в качестве красителя содержит фенол рот и анилин синий при

15 следующем соотношении компонентов, г/л:

Сахароза 5,0 — 10,0

Фенол рот 0,2-0.25

Анилин синий 0,1-0,15

Мясопептонный агар 1л