Способ выделения иерсиний

 

Использование: медицинская микробиология , способы бактериологической диагностики артриров, в частности иерсиниозной этиологии. Сущность изобретения: материал из сустава забирают герметически закрытым шприцом. Разводят его дистилл ированной водой (рН 6,8-7,0) в соотношении 1:5. Инкубируют в атмосфере 2,5-4,0% углекислого газа, 15-17% кислорода, относительной влажности 94-100% при 38-40°С в течение 24-48 ч. Выросшие колонии пересевают на плотную питательную среду. Выращивают в этих же условиях и идентифицируют по биохимическим тестам. Способ позволяет выделить иерсиний из синовиальной жидкости. Положительный ответ получают на 5-6-й отрицательный - на 2-й день обследования. 3 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (s»s С 12 Q 1/02

ГОСУДАРСТВЕHHblй КОМИТЕТ

IlG ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4760523/13 (22) 12.09.89 (46) 07.06.92, Бюл, N 21. (71) Центральный -научно-исследовательский институт эпидемиологии (72) Г. В. Ющенко, С, М. Сидельникова, Е. Ю. Новоселова и Ю. Б. Елкина (53) . 576,8.095.1(088.8) (56 Этиология, эпидемиология, клиника и лабораторная диагностика иерсиниоза человека. Методические рекомендации для эпидемиологов, микробиологов и инфекционистов. — M., 1982, (54) СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ ИЕРСЕНИЙ (57) Использование: медицинская микробиология, способы бактериологической диагИзобретение относится к медицине, а именно к бактериологической диагностике артритов.

Известен способ выделения иерсиний с использованием "холодового обогащения", состоящий из взятия материала, накопле-. ния материала в буферном 0,85%-ном растворе хлорида натрия, помещении в холодильный шкаф при 6-12 С на 15 — 21-й день и высеве каждые 3-5 дней на плотные питательные среды с общепринятой идентификацией.

По известному способу выделить иерсинии при посеве синовиальной жидкости не; удается, Цель изобретения —. повышение высеваемости иерсиний.

Пример 1. Синовиальную жидкость забирают в стерильный шприц путем прокола кожи и фасций суставной сумки. Если в шприц попал воздух, его обязательно удаля„, Ж,, 1738857 А1 ностики артриров, в частности иерсиниозной этиологии. Сущность изобретения: материал из сустава забирают герметически закрытым шприцам, Разводят его дистиллированной водой (рН 6,8-7,0) в соотношении

1:5. Инкубируют в атмосфере 2,5-4,0% угле. кислого газа, 15 — 17%:кйслорода, относительной влажности 94 — 100% при 38 — 40 С в течение 24 — 48 ч, Выросшие колонии пересевают на плотную йитательную среду. Выращивают в этих же:условиях и ндентифицируют по биохимическим тестам.

Способ позволяет. выделить иерсинии из синовиальной жидкости. Положительный ответ получают на 5 — 6-й отрицательный — на

2-й день обследования. 3 табл. ют. Со шприца, не вынимая поршня, снимают иглу и носик его опускают в расплавленный парафин для полной герметизации. При поступлении шприца в лабораторию его содержимое после снятия парафина выдавливают поршнем в пробирку с дистиллированной водой (рН 6,8), предвари-. тельной прокипяченной и охлажденной. Соотношение материала и среды 1:5.

Пробирку с посевом закрывают рыхлой ватной пробкой и помещают в эксикатор, на дно которого кладут ватный тампон, обильно смоченный водой, и зажигают белую (парафиновую или стеариновую) свечу.

Закрывают крышку эксикатора, Для большей герметизации край крышки смазывают вазелиновым маслом. До угасания свечи следят за сосудом, так как разогретый воздух может приподнять и сдвинуть крышку.

После угасания свечи эксикатор с газовой смесью 2,5%, С02, 15% Ор и относительной

1738857 влажностью 94% помещают в термастат при 38 С. После 24 ч инкубации извлекают пробирку с посевом, не встряхивая ее, берут пипеткой 0,2 мл содержимого из верхней трети и переносят на чашки Петри со слабощелочным агаром. Обе чашки помещают в эксикатор и в том же режиме культивируют

18 ч, затем их извлекают иэ эксикатора и просматривают.

Изолированные колонии (6-8 шт.) пересевают на слабощелочной агар и инкубируют при обычных условиях 20-24 ч (как в известном способе). Выросшую культуру идентифицируют с сыворотками против иерсиний разных видов и по биохимическим местам.

При исследовании синовиальной жидкости 34 больных иерсиниозом, что подтверждается или выделением культур (I группа) или положительными серологическими тестами (II группа), выделены культуры иерсиний и других микроорганизмов (табл. I).

Пример 2. Синовиальную жидкость берут, как в примере 1. Содержимое шприца засевают в пробирку с дистиллированной водой (рН 6,9) в соотношении 1:5, помещают в анаэростат, наполненный 3,5%

С02, 16,0% 02 при относительной влажности 96;,, и ставят в термастат при температуре 39 С на 36 ч (далее по примеру 1).

Пример 3. Синовиальную жидкость из сустава получают, как в примере 1, Содержимое шприца засевают в пробирку с дистиллированной водой (pH 7,0) в соотношении 1 .5 и помещают в анаэростат с газовой смесью, состоящей из 4,0%; из COz.

17,0% Oz с относительной. влажностью

100%. Посев инкубируют 48 ч при 40 С (далее по примеру 1).

При обследовании 83 больных артритами предлагаемым способом было выявлено

44 культуры разных видов микроорганизмов, 17 из которых идентифицированы после первого высева, остальные — после второго (табл. 2).

Десять культур нвидентифицированы вообще. Выделенные иерсинии были определены как энтероколитика и псевдотуберкулезис (табл. 3).

5 Таким образом, от 34 больных артритами, у которых в разные сроки бактериологически из испражнений, мочи или крови были выделены иерсинии и (или) серологически выявлены специфические антитела, из сино10 виальной жидкости было выделено 20 культур иерсиний (58,8%). В том числе, в 5 случаях они были выделены в сочетании с ацинетобактером (табл. 1). У больных артри15 тами с отрицательными результатами бактериологических и серологических исследований на иерсиниоз иэ синовиальной жидкости иерсинии не были выделены ни у одного больного.

20 Таким образом, способ, позволяет в короткие сроки (положительный ответ на 4 — 5й день, отрицательный — на 2-й день) выделить иерсинии из синовиальной жидкости больных артритами с положительной ге25 мо-,копро- или уринокультурной или серологическим подтверждением иерсиниоза в 58,8% случаев.

Кроме того, способ прост в исполнении и доступен для бактериологических лабора30 торий СЭС и больниц.

Формула изобретения

Способ выделения иерсиний путем забора синовиальной жидкости, разведения.

35 ее, инкубирования с последующими пересевами и культивированием на плотной питательной . среде и идентификацией выделенной культуры, отличающийся тем, что, с целью повышения высеваемости

40 иерсиний, синовиальную жидкость разводят дистиллированной водой при рН 6,8-7,0 в соотношении 1:5, инкубацию осуществляют в атмосфере 2,5 — 4,0% углекислого газа, 15-17% кислорода, относительной влажно45 сти 94-100% при температуре 38-40 С в течение 24-48 ч и культивирование проводят в тех же условиях.

Таблица 1

1738857

Таблица 2

Иерсинии

Всего ных абс.ч.

21 25,2

11 13,2

2 24 10 120 44 532

Таблица 3

Y. entегоcolltlca

09

06

10

Редактор В. Петраш

Заказ 1978 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб.. 4/5

Производственно-издательский комбинат ."Патент", r. Ужгород, ул.Гагарина. 101

Число больВид и серовар иерсний

Число выделенных штам мое

Ацинетобакте- Псевдомонады Неидентифициы ованные абс.ч. $ . абс.ч. абс.ч. абс.ч.

seudotuberculosls

Составитель И. Назаренко

Техред М.Моргентал Корректор А. Осауленко