Способ выделения фитофторовых грибов из почвы

 

Изобретение относится к фитопатологии и может быть использовано в сельском хозяйстве для оценки зараженности почвы фитофторовыми грибами. Цель изобретения - упрощение способа. Отбирают пробу почвы, помешают ее в чашку Петри или другой сосуд, заливают водой так, чтобы она полностью покрывала почву тонким слоем, помещают на поверхность воды несколько свежих лепестков земляники, закрывают чашку и выдерживают при комнатной температуре, а затем микроскопируют. Способ прост и позволяет сократить время на выделение фитофторовых грибов.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4473178/13 (22) 10.08.88 (46) 15.07.91, Бюл. N 26 (71) Научно-исследовательский зональный институт садоводства нечерноземной полосы (72) С,А.Острейко, Э.M.Äðîçäîâñêèé и

Г.А.Барбатунова (53) 63-576,8 (088.8) (56) Авторское свидетельство СССР

N 1565018, кл. С 12 N 1/00, 1988, (54) СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ ФИТОФТОРОBbIX ГРИБОВ ИЗ ПОЧВЫ

Изобретение относится к фитопатологии и может быть использовано в сельском хозяйстве для оценки зараженности почвы фитофторовыми грибами — опасными патогенами многих сельскохозяйственных культур, Цель изобретения — упрощение способа.

Способ заключается в следующем. Небольшое количество почвы помещают в чашку Петри или в другой аналогичный сосуд, заливают водой так, чтобы она полностью покрывала почву тонким слоем, помещают на поверхность воды несколько свежих лепестков земляники, закрывают чашку и выдерживают при комнатной температуре. При наличии фитофторы в исследуемом образце почвы лепестки уже через

2-3 сут полностью или частично буреют, а при помещении их на предметном стекле

„„. Ж„„1663025 А1 (51)5 С 12 0 1/02, С 12 N 1/00 (57) Изобретение относится к фитопатологии и может быть использовано в сельском хозяйстве для оценки зараженности почвы фитофторовыми грибами. Цель изобретения — упрощение способа. Отбирают пробу почвы, помещают ее в чашку Петри или другой сосуд, заливают водой так, чтобы она полностью покрывала почву тонким слоем, помещают на поверхность воды несколько свежих лепестков земляники, закрывают чашку и выдерживают при комнатной температуре, а затем микроскопируют. Способ прост и позволяет сократить время на выделение фитофторовых грибов. под микроскопом по краям лепестков хорошо видны зооспорангии гриба. По количеству побуревших лепестков, зооспорангиев и их морфологическим особенностям можно судить не только о наличии фитофторы в почве, и о виде гриба но и об интенсивности ее заселения патогеном. При отсутствии в почве фитофторы лепестки остаются свежими или на них развиваются другие виды грибов (Alternaria FusarIum).

Лепестки земляники чувствительны к фитофторовым и питиевым грибам. Уже через 1 — 2 дня на краях лепестков формируются зооспорангии, хламидоспоры грибов, Грибы других родов на лепестках развиваются довольно слабо, лишь после продолжительного пребывания лепестков в почвенной суспензии (4-7 дн) и не мешают выявления фитофторовых грибов.

1663025

20

35

50

Пример, Проведен параллельный анализ трех образцов почвы: 1) почва из сада, естественно зараженная Phytophtho ra

cactorum u Ph. citricola; 2) стерильная почвенная смесь из теплицы; 3) стерильная почвенная смесь, искусственно зараженная чистой культурой Ph. cactorum (смыв с одной чашки

Петри на 100 см почвы). Каждый образец

3 разделен на 3 части и проанализирован тремя способами, описанными ниже.

Исследуемую почву заливают водой в соотношении 1 объем воды на 2 объема почвы с таким расчетом, чтобы слитая с почвы отстоявшаяся вода образовала в сосуде диаметром 10 см слой толщиной 1-2 см. В эту 1 воду помещают зеленые ягоды земляники

"концом, противоположным плодоножка", и выдерживают. В случае наличия в почве спорангиев, при условиях, наиболее благоприятных, ягода может за 48 ч покрыться очень характерным войлоком белого мицелия.

Анализируемую почву заливают в чашках Петри водой слоем 5 — 10 мм и на поверхность воды помещают в каждую чашку по три отдельных доли листа растений земляники, полученных в культуре тканей, и выдерживают. Листья берут примерно через 5 недель после высадки этих растений в грунт. В случае наличия в почве фитофторы, через 3 — 5 дней на листьях должны появиться некротизированные участки, которые анализируют под микроскопом на наличие гриба, Анализируемую почву заливают в чашках Петри водой слоем 1 — 2 мм над уровнем почвы и на поверхность воды помещают несколько лепестков цветков земляники (с растений, выращенных в стерилизованной почве и содержащихся в лаборатории и теплице) и выдерживают при комнатной температуре. В том случае, если почва заражена фитофторой, лепестки через 2 — 3 дня, а при наиболее благоприятных условиях и через сутки, заселяются грибом и буреют, Побуревшие лепестки просматривают под микроскопом для определения гриба.

При просмотре образцов обнаружено следующее. Через 3 дня лепестки земляники в обоих вариантах с зараженной почвой полностью побурели, тогда как на листьях и ягодах признаки поражения отсутствуют.

Опыт повторен для уточнения времени реакции приманки. Обнаружено, что на следующий день в вариантах с зараженной почвой часть лепестков побурела, а еще через сутки побурели все лепестки. Под микроскопом на них обнаружены зооспорангии соответствующих видов Phytophthora (в варианте с садовой почвой на часть лепестков выделилась Ph. cactorum, на часть — Ph.

citricola, в некоторых случаях на одном и том же лепестке обнаруживались оба вида). Такая быстрая реакция лепестков объясняется, видимо, высокой температурой в лаборатории (24-25 С), обусловленной очень жаркой погодой и благоприятной для развития обоих исследовавшихся видов фитофторы.

На листьях земляники первые побуревшие участки отмечены в варианте с искусственно зараженной почвой только на 4-й, в варианте с садовой почвой — на 5-й день, Побурение ягод отмечено на 3 — 5-й день, однако характерный белый мицелий не развился, В вариантах с незараженной почвой лепестки, листья и ягоды оставались здоровыми в течение 10 дн, пока опыт не был прекращен. Затем осуществляют идентификацию видов Phytophthora, развивающихся на лепестках. Для этого лепесток (или несколько лепестков) помещают в каплю воды на предметное стекло, накрывают покровным и просматривают под микроскопом, На побуревших лепестках развиваются органы спороношения и мицелий, характерные для каждого вида. Виды идентифицируются по форме зооспорангиев (лимоновидные. грушевидные, овальные и др.), по наличию и форме сосочка из зооспорангии (присутствует, отсутствует, резко выражен, представлен шиповидным выростом, представлен утолщением оболочки на вершине зооспорангия), по наличию или отсутствию хламидоспор, вздутий на мицелии, особенностям прорастания спорангиев и т,д.

На листьях идентификацию грибов до вида производят таким же образом, но,отделяя пораженный участок или делая с него соскоб. При этом всегда есть опасность оторвать и зооспорангии. К тому же участок листа гораздо -руднее просматривать из-зэ его большей толщины и непрозрачности, При использовании в качестве приманки ягод необходимо после образования мицелиального налета с органами спороношения изготовить из него препарат для микроскопирования и идентифицировать гриб по тем же признакам, что и нэ других приманках. При отсутствии налета можно обнаружить в побуревших тканях зооспоры гриба, но по ним невозможно идентифицировать вид.

Таким образом, способ проще известных, так как не требует дополнительных операций по приготовлению препаратов для микроскопирования и сокращена Ilpoдолжительность определения фитофторовых грибов.

1663025

Формула изобретения

Составитель Т,Полянская

Редактор М.Недолуженко Техред M,Ìîðãåíòàë Корректор М.Шароши

Заказ 2237 Тираж 370 Подписное

8НИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб.. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г, Ужгород, ул.Гагарина, 101

Способ выделения фитофторовых грибов из почвы, предусматривающий нанесение на поверхность исследуемого почвенного образца воды и помещение на нее растительной ткани земляники, о т л ич а ю шийся тем, что, с целью упрощения способа, из растительной ткани земляни5 ки используют лепестки цветков.