Способ получения белковой основы микробиологических питательных сред

 

Изобретение относится к микробиологии и касается способа получения белковой основы микробиологических питательных сред, в частности флавобактерий, биомасса которых может быть использована в качестве корма для инфузорий, которые используются для кормления личинок рыб на ранних стадиях развития. Цель изобретения -упрощение процесса и удешевление продукта В качестве исходного сырья используют обварочный бульон мясокомбинатов, полученный из субпродуктов второй категории (легких, хвостов, рубцов, желудков, сычуга, трахеи, ушей, губ, мелкой мясной обрези и др). Обварочный бульон охлаждают до 5°С, освобождают его от твердых частиц жира, затем подщелачивают до рН 12,0-13,0, кипятят в течение 15-120 мин, охлаждают предпочтительно до 40-60°С, вводят сульфат алюминия предпочтительно в количестве 2,5-8,5 г/л, отделяют осадок, а бульон нейтрализуют . 2 з.п. ф-лы, 1 табл. (Л С

СО1ОЭ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4705735/13 (22) 19,06.89 (46) 15,07,92. Бюл. N 26 (71) Днепропетровский химико-технологический институт им.Ф.Э.Дзержинского (72) В.П.Мельник и Р,Л.Медведовская (53) 663.18 (088.8) (56) Лабинская А,С. Микробиология с техникой микробиологических исследований, 1978, с,348-352.

Авторское свидетельство СССР

N878789,,кл,,С 12 N 1/20, 1980. (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ БЕЛКОВОЙ ОСНОВЫ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИХ ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕД (57) Изобретение относится к микробиологии и касается способа получения белковой основы микробиологических питательных

Изобретение относится к микробиологии и касается способа получения белковой основы. Питательных сред для культивирования бактерий, в частности флавобактерий, биомасса которых может быть. использована в качестве корма для инфузорий, которые используются для кормления личинок рыб на ранних стадиях развития.

Известны микробиологические питательные среды на мясной основе: мясная вода, мясопептонный бульон, триптический перевар Хоттингера и другие, Для приготовления мясной воды парную говядину или конину освобождают от костей, жира, сухожилий, пропускают через мясорубку, полученный мясной фарш заливают водой и кипятят, После кипячения мясную воду остуживают для застывания жира, фильтруют до полной прозрачности, разлиÄÄ5LI ÄÄ 1747480 А1

2,5-8,5 г/л, отделяют осадок, а бульон нейтрализуют. 2 з.п. ф-лы, 1 табл. вают в бутылки, и стерилизируют. На основе мясной воды готовят. мясопептонный бульон, добавляя к 1 л мясной воды 17, сухого р пептона и 0.5 хлорида натрия, устанавливают необходимую реакцию, кипятят, фильтруют, устанавливают гидрокарбонатом или гидроксидом натрия требуемую реакцию и О© стерилизуют. Ю

Для приготовления триптического перевода Хоттингера так же, как и при приготовлении мясной воды, используют высококачественное говяжье мясо. Для этого его освобождают от костей, жира и сухожилий, нарезают мелкими кусочками, получают мясной фарш. Отдельно получают мясной бульон, который смешивают с фаршем. Смесь сливают в бутыль, доводят до рН

7,8-8,0, прибавляют обработанную на мясорубке поджелудочную железу в количестве

1747480

10, тщательно перемешивают, добавляют хлороформ из расчета 10-30 мл на каждый литр и ставят в термастат при 37 С на 7-10 сут. По истечении этого времени перевар фильтруют, стерилизуют. 5

Недостатками таких сред является их высокая стоимость, поскольку белковой основой для их приготовления является остродефицитный пищевой продукт — мясо сельскохозяйственных животных, 10

Наиболее близким к предлагаемому является способ получения белковой основы микробиологических питательных сред путем автолиза внутренних органов домашних птиц при рН 8,6-9,0, в котором после 15 очистки целевого продукта устанавливают рН 6,8-7,2. Для осуществления способа к внутренним органам домашних птиц, измельченным на мясорубке. добавляют воду. раствор гидроксида натрия, хлороформ, 20.

Баллоны с содержимым устанавливают в термостатированной комнате, периодически перемешивают, коррегируют рН 8,6-9,0.

После семидневного выстаивания надосадочную жидкость декантируют, кипятят, до- 25 бавляют раствор сульфата .алюминия, суспензию гидроксида кальция, фильтруют и устанавливают рН 6,8-7,2, Недостатком данного способа является сложность процесса, так как предусматри- 30 вается многоступенчатое проведение автолиза сырья, требуется соблюдение асептических условий с применением токсического вещества — хлороформа, включе. ние многих последовательных операций 35 (декантации, кипячения, фильтрования, подогрева, нейтрализации ионов кальция), а также высокая стоимость целевого продукта.

Цель изобретения — упрощение процес- 40 са и удешевление продукта, Поставленная цель достигается тем, что в способе получения белковой основы питательных сред, включающем подщелачивание белкового бульона, его кипячение с 45 последующим охлаждением, добавление сульфата алюминия, отделение осадка и нейтрализацию бульона, в качестве белкового бульона используют обварочный бульон мясокомбинатов, полученный из 50 субпродуктов второй категории, который перед подщелачиванием охлаждают до 5 С и освобождают от твердых частиц жира, подщелачивание проводят до рН 12,0-13,0, а кипячение — в течение 15-120 мин, 55

В качестве субпродуктов второй катего. рии используют легкие, рубец, хвосты, сычуг, трахеи, уши, губы, желудки свиней и др, Состав полученных бульонов зависит от сортамента закладываемых субпродуктов, В них содержится: белка от 2,0 до 6,54 г/л; жира до 150 г/л; содержание сухого остатка до 30 г/л.

Обварочные бульоны мясокомбинатов (EM) представляют собой мутную жидкость с коэффициентом светопропускания, определенном по нефелометру, составляющим

1,6-2,0; цвета от молочно-белого до интенсивно желтого с характерным мясным запахом, Выдерживание в бытовом холодильнике (при 5 С в течение 18-20 ч) вызывает затвердевание основного количества .киров (до 98%), содержащихся в таких бульонах, который всплывает на поверхность бульонов. Фильтрование охлажденного 6М приводит к извлечению до 980/ жиров, но существенно не уменьшает их мутности.

Микроскопические исследования указывают на наличие в БМ стойкой фазоводисперсной коллоидной системы, образованной мельчайшими капельками эмульгированных жиров вместе с компонентами, входившими в состав животных тканей субпродуктов и перешедших в коллоидное состояние при их варке и после охлаждения.

Подщелачивание до рН 12,0-13,0 с последующим кипячением в течение 15-120 мин разрушает коллоидную систему, так как при этом происходит омыление жиров с образованием нерастворимых в воде натриевых и кальциевых солей жирных кислот.

Более полное осветление бульона имеет место при обработке сульфатом алюминия, при этом последний предпочтительно вводить в бульон, охлажденный до 40-60 С. Количество сульфата алюминия в бульоне должно составлять 2,5-8,5 г/л.

Пример 1, 500 мл бульона, полученного в процессе варки субпродуктов второй категории (хвосты, легкие, мясная обрезь), с содержанием белка по Лаури 1 г/л и мутностью 1,16 (по нефелометру) охлаждают до

5 С, удаляют избыток жира декантацией жидкой фазы (содержание остаточных жиров 0,3g, по бутирометру), добавляют сухой гидроксид натрия до рН 12,0 и кипятят при перемешивании 15 мин. Полученный раствор охлаждают до 40 С, прибавляют раствор сульфата алюминия до конечной концентрации 2,5 г/л. Смесь фильтруют через бумажный фильтр "красная лента", не допуская охлаждения, устанавливают рН

6,8 (при выпадении осадка его удаляют фильтрованием), разливают в емкости и стерилизуют при 1,0 ати в течение 30 мин. В дальнейшем используют в качестве белковой основы для приготовления жидких и плотных питательных сред. Белковая осно5 1747 4 8 0" ва представляет собой прбзрачную жидкость светло-желтого цвета следующего состава:

Аминный азот, мг% 508

Остаточные пептиды, % 0,40 5

Сухие вещества, 4,00

Фосфаты, мг% 0,30

Цветность 0,10

Прозрачность 0,04

Индол Не обнаружен

Пример 2, Способ осуществляют

10 аналогично примеру 1, но щелочную обработку бульона (содержание белка по Лоури

3 г/л, остаточных жиров 0,4%, мутность

1,18) проводят при добавлении сухого гидроксида натрия до рН 12,5, кипятят при перемешивании 60 мин, охлаждают до 50 С, прибавляют раствор сульфата алюминия до

Аминокислотный состав бульона из субпродуктов второй категории до и после его кипячения при рН 12,0-13,0 и температуре

100О.С в течение 15-120 мин и добавлением сульфата алюминия 2,5-8;5 г/л приведен в таблице, Испытание ростовых свойств бульона в сравнении с контролем (мясопептонный бульон — МПБ) проводят на бактериях

Staphylococcus aureus 209 и Flavobacterium

aquatlle ДХТИ-84 путем посева по 0,1 мл

55 конечной концентрации 5,0 г/л и устанавливают рН 7,0, осадок удаляют фильтровани- 20 ем, Получают белковую основу питательных сред следующего состава:

Аминный азот, мг% 700

Остаточные пептиды, 0,45

Сухие вещества, 450 25

Фосфаты, мг 0,32

Цветность 0,15

Прозрачность 0,08

Индол Не обнаружен

Пример 3. Способ осуществляют 30 аналогично примеру 1, но щелочную обработку бульона (содержание белка по Лоури

6 г/л, остаточных липидов 0,5%, мутность

1,20) проводят при добавлении сухого гидроксида натрия до рН 13;О, кипятят при пе- 35 ремешивании в течение 120 мин, охлаждают до 60 С, прибавляют раствор сульфата алюминия до конечной концентрации 8,5 г/л и устанавливают рН 7,2, осадок удаляют фильтрованием. Получают белко- 40 вую основу питательных сред следующего состава:

Аминный азот, мг 820

Остаточные пептиды, % 0,50, Сухие вещества, % 5,00 45

Фосфаты, мг% 0,35

Цветность 0,17

Прозрачность 0,10

Индол Не обнаружен исходной суспенэии бактерий с содержанием последних 10 клеток/мл (по стандарту б мутности с проверкой по методу Коха) в 9,9 мл контрольных и опытных сред. Для испытания роста Flavobacterium aquatile ДХТИ84 в контрольные и опытные среды вводят

2 глюкозы, Инкубацию проводят в термостате в течение трех суток при 37 С для стафилококков и при 24 С для флавобактерий. По истечении врем ени инкубации проводят количественный учет жизнеспособных бактерий по методу Коха, Рост культур стафилококков и флавобактерий на испытуемом бульоне составляет соответственно: для стафилококков

1,0-1,4 10 кл/мл; для флавобактерий 4,0-4,5

10 кл/мл; на контрольной среде: для стафилококков 1,0-1,1; для флавобактеg рий 4,2-4,6 ° 10 кл/мл.

Таким образом, результаты испытаний бульона показывают, что он может служить белковой основой для приготовления питательных сред для бактерий.

Осуществление предлагаемого способа в укаэанном режиме за небольшой промежуток времени (15-120 мин) позволяет получить бульон, удовлетворяющий потребность культивируемых бактерий в источнике аминного азота. Выход за нижний предел укаэанных параметров (15-120 мин, рН 12,0-13,0) приводит к уменьшению содержания аминного азота в бульоне. Верхний предел указанных параметров диктуется необходимостью за короткий промежуток времени получить полноценную по амин ному азоту питательную среду, Формула изобретения

1, Способ получения белковой основы микробиологических питательных сред, включающий подщелачивание белкового бульона, его кипячение с последующим.охлаждением, добавление сульфата алюминия, отделение осадка и нейтрализацию бульона, отличающийся тем, что, с целью упрощения процесса и удешевления продукта, в качестве белкового бульона используют обварочный бульон мясокомбинатов, полученный из субпродуктов второй категории, перед подщелачиванием его охлаждают до 5 С и освобождают от твердых частиц жира, подщелачивание проводят до рН 12,0-13,0, а кипячение — в-течение 15-120 мин, 2. Способ по и 1, отличающийся тем, что сульфат алюминия вводят в бульон с температурой 40-60о Ñ.

3, Способ по пп.1 и 2, о т л и ч а ю щ и йс я тем, что сульфат алюминия вводят в бульон в количестве 2,5-8,5 г/л.

1747480

Аминокислотный состав бульена до и после обработки

Составитель Г.Голева

Техред М.Моргентал Корректор M,Äåì÷èê

Редактор Е.Копча

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул;Гагарина, 101

Заказ 2473 Тираж, Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва. Ж-35, Раушская наб„4/5