Среда для гипотермического хранения изолированных гепатоцитов

 

Использование: биотехнология. Сущность изобретения: для повышения морфофункциональной сохранности гепатоцитов используют среду, которая содержит следующие компоненты, г/л, трис-НС -буфера, рН 7,4: хлористый калий 0,300-0,400; хлористый магний 0,100-0,200; хлористый кальций 0,100-0,200; фосфорнокислый калий 0,050-0,200; фосфорнокислый натрий 0,050-0,100; сахароза 70,00-100,0; альбумин 5,000-10,00. 3 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (и)5 С 12 N 5/00

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

1 (21) 4684421/13 (22) 20.02.89 (46) 23,08.92, Бюл. Ь 31 (71) Институт проблем криобиологии и криомедицицы AH УССР (72) Л.П. Кравченко, A.Н. Андриенко, О,А. Семенченко и А.M. Белоус (56) Авторское свидетельство СССР

М 1053803, кл. А 01 1/02, 1983.

Укр. биохимический журн, 61.1, с. 89-91, Изобретение относится к биотехнологии, в частности к способам длительного хранения изолированных гепатоцитов в условиях гипотермии.

Известно использование среды 199 для гипотермического хранения гепатоцитОв, Однако эта среда не обеспечивает высокой морфофункциональной сохранности гепатоцитов.

Наиболее близкой к изобретению является среда для гипотермического хранения гепатоцитов, включающая на 1 л трис-HCIбуфера: сахароза 0,125 М; хлористый натрий 0,075 М; хлористый кальций 1,2 M.

Однако известная среда не обеспечивает высокой морфофункциональной сохранности гепатоцитов, что обусловлено наличием в ней

ИаС1„неблагоприятно влияющего на клетки.

Целью изобретения является повышение морфофункцианальной сохранности гепатоцитов.

П р и и е р. Выделение гепатоцитов проводили неферментативным методом с использованием ЭДТА и щадящей дезагре! Ы, 1756351 А1

2 (54) СР ДА ДЛЯ ГИПотЕ МИЧЕСКОГО

XPAHE Н ИЯ ИЗОЛ И РОВАН Н ЫХ ГЕПАТОЦИТОВ (57) Использование: биотехнология. Сущность изобретения: для повышения морфофункциональной сохранности гепатоцитов используют среду, которая содержит следующие компоненты, г/л, трис-HCl-буфера, рН 7,4: хлористый калий 0,300-0,400; хлористый магний 0,100-0,200; хлористый кальций 0,100-0,200; фосфорнокислый калий 0,050-0,200; фосфорнокислый натрий .0,050-0, 100; сахароза 70,00-100,0; аль бумин 5,000-10,00. 3 табл, Ъ (Л гации печени пластинчатым пестиКом при возвратно-поступальном движении его со скоростью оборота sana 3000 об/мин. Я

Свежевыделенные клетки оценивали по степени интактности плазматической мембраны и метаболической активности по следующим тестам, окрашивание клеток

0,6%-ным раствором трипанового синего в (Л условиях 10-15-минутной инкубации при О комнатной температуре, скорость эндпгенного дыхания, содержание АТФ, степень связанности ЛДГ, После этого клеткй переводили в стерильные растворы среды, разлитой в бакпечатки 5-10 мл и содержащей следующие компоненты; мес.ч . клористый калий 0,300-0,400; хлористый магний 0,100- а

0,200; хлористый кальций 0,100-0,200; фосфорнокислый калий 0,050-0,100; фосфорнокислый натрий 0,050-0,100; сахароза 70,0-100,0; альбумин 5,0-10.0; трисHCI-буфер — до 1000 мл.

Концечтрация клеток составляла (5-10) 10 кл/мл. Бакпечатки хранили в течение 3 сут s битовом холодильнике. Тем1756361

Формула изобретения

Таблиц8

Метаболические параметры изолированных гепатоцитов до и после 3 сут гипотермического хранения (n=6) Метаболическое состояние консервированных клеток после нормотермической инкубации (n=6) После инк ба ии о инк ба ии

Параметры

Предлагаемаяс е а

Известная с е а

Предлагаемаис е а

Известная с е а

Жизнеспособность, Скорость зндогенного дыхания, HM0z/ìëí клеток

Содержание АТФ, нМ/млн клеток

Степень связанности ЛДГ, мкг/млн.

1мг белка, 89 3

12,2 + 2,8

16 " 2,6

8,3 й2,О

10 2

16,6 =" 3,5

33 + 3.1

4,3 + 0,3

3,2 й2

З,О + 0,3

4,9 + 0,5

Составитель A.Pîìéí÷åíêî

Техред М.Моргентал Корректор С.Патрушева

Редактор .Н.Рогулич

Заказ 3062 Тираж Подписное

ВЯИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКЯТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб.. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул. Гагарина, 101 пература раствора 4-5 С. Стерилизацию среды проводили с использованием микропористых капроновых мембран.

Результаты представлены в табл.1, Из табл.1 следует, что предлагаемая среда обеспечивает более высокую морфофункциональную сохранность гепатоцитов, чем известная. Это подтверждается тем, что изолированные гепатоциты в заявляемой среде хорошо- переносят нормотермическую инкубацию (табл.2).

Получейные результаты свидетельствуle о том, что предлагаемая среда позволяет сохранять структурно-метаболический статус гепатоцитов в процессе хранения их при

4 С в течение 3 сут, которые являются максимальны сроком этой системы клеток.

Среда для гипотермического хранения изолированных гепатоцитов включающая

5 хлористый натрий, хлористый кальций и сахарозу, отличающаяся тем, что, с целью повышения морфофункциональной сохранности, она дополнительно содержит хлористый калий, хлористый магний, 10 фосфорнокислый калий, фосфарнокислый натрий, альбумин при следующих соотношениях, мас.Я: хлористый калий 0,3000,400; хлористый магний 0,100-0,200; хлористый кальций 0,100-0,200; фосфорно15 кислый калий 0,050-0,100; фодфорнокислый натрий 0,050 — 0,100; сахароза 70,0- t 00.0; альбумин 5,00-1ОЯ; вода — до 1000 мл.