Способ определения дегрануляции тучных клеток

 

Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторным гистохимическим методам. Целью является повышение точности способа. Цель достигается тем, что исследование проводят на брыжейке. Фотоколориметрически определяют угол пропускания брыжейки, а дегрануляцию рассчитывают по углу отклонения зависимости коэффициента пропускания от среднего числа тучных клеток на препарате. И при угле отклонения менее 40° определяют активную дегрануляцию клеток, а при угле 40° - ее отсутствие. Способ позволяет определять дегрануляционную способность химических агентов при изыскании фармакологически активных веществ.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

1774219 А1 (19) (! 1) (ч)5 G 01 N 1/28

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ.

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

4 фь. (3

О (21) 4806701! 14 (22) 28.03.90 (46) 07,11.92. Бюл. ¹ 41 (71) 2-й Московский государственный медицинский институт им. Н,И,Пирогова (72) Г.В.Порядин, Л,И.Зеличенко и Л.М.Хитин (56) Гущин И.С. и др. — Иммунология, 1980, 6, с. 77-80, (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ДЕГРАНУЛЯЦИИ ТУЧНЬИ КЛЕТОК (57) Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторным гистохимическимИзобретение относится к биологии и медицине, в частности к лабораторным методам количественного определения величины секреторной активности тучных клеток.

Цель изобретения — повышение точности измерения секреторной активности тучных клеток.

Способ осуществляют следующим образом. На изолированные участки брыжейки крысы воздействуют факторами, либерирующими гистами из тучных клеток (температурный фактор, 1 7-ный раствор декстрана), затем их окрашивают спиртовым раствором нейтрального красного и фотоэлектроколориметрически при длине волны il =490 нм определяют коэффициент пропускания лучей данной длины волны (А) брыжейкой.

Одновременно подсчитывают среднее число тучных клеток в поле зрения и по величне козффиента регнессии КР (тангенсу угла наклона прямой t =f(n) к отрицательной оси и определяют величину секреторной активности тучных клеток брыжейки. Выбор длиметодам. Целью является повышение точности способа. Цель достигается тем, что исследование проводят на брыжейке, Фотоколориметрически определяют угол пропускания брыжейки, а дегрануляцию рассчитывают по углу отклонения зависимости коэффициента пропускания от среднего числа тучных клеток на препарате. И при угле отклонения менее 40 определяют активную дегрануляцию клеток, а при угле 40 — ее отсутствие. Способ позволяет определять дегрануляционную способность химических агентов при изыскании фармаколагически активных веществ. ны волны А=490 нм объясняется следук1щим образом. Красный цвет обладает способностью максимально пропускать (или отражать, если предмет непрозрачный) лучи красной части спектра. а поглощать — лучи

-синей части спектра. При пропускании лучей синей части спектра создается наибольшая зависимость поглощения синих лучей от интенсивности окраски предмета в красный цвет. Экспериментально установленная авторами длина волны таких лучей

1=490 нь . Лучи с 1,=490 нм наиболее сильно поглощаются использованным нами красителем (нейтральным красным).

Пример . Выделяют бессосудистые участки брыжейки. Затем их фиксируют между двумя пластмассовыми кольцами, внутренний диаметр (просвет), которых на

1-2 мм больше диаметра луча прибора ФЭК, а внешний соответствовал размеру каретки для кюветы прибора ФЭК. Края брыжейки вместе с петлями кишечника обрезают ножницами. По мере приготовления препарагы

1774219

Избыток жидкости удаляют с препарата встряхиванием. Затем препарат помещают в прибор ФЭК марки КФК-2МП и э течение

10-15 с,определяют средний коэффициент пропускания при длине волны Л =-490 нм относительно воздуха. Микроскопию и подсчет тучных клеток проводят в 4-5 полях зрения, среднее содержание клеток в одном поле зрения определяют, используя окуляр

7 и объектив 20.

Резул ьтаты, Фоновая секреторная активность тучных клеток, \ и 15 16 +17 ) 18 19+ 19 2 т 52 57 54 47 53 50 5

8 43

40,5, дегрануляция тучных клеток имеет место.

Пример 2. Брыжейку термостатировали при 37 С в растворе Хенкса 5 и 10 мин.

Метод исследования аналогичен методу, описанному в примере 1.

Результаты.

Секреторная активность тучных клеток при воздействии на них t=37 С 5-минутное термостатирование (37 С) в растворе Хенкса 1 и 17 19 19 20 21

КР= 0,495: а=. — 26,3

К К= — 0,793 l3

КР=О,435„ lc = — 23,5 . ,КК=-О,894 б) и 10 13 17 18 19 22 24 25 26 26 29 30

45 48 41 43 43 45 38 43 39 36 40 35 помещают в раствор Хенкса на феноловом красном с рН=7,2-7,4.

Исследуют фоновую секреторную активность тучных клеток при комнатной температуре, которая возможна в течение первых 5-10 мин после выделения брыжейкии из б рюш ной полости (фоновая секреция).

Через 5-10 мин препараты окрашивают 1 ным спиртовым раствором нейтрального красного в течение 1 мин. Далее препараты промывают 5-10 с дистиллированной водой до прозрачной промывной воды.

KP= — 0,854; а = — 40,5, К К== — 0,770.

Вывод. Результаты опытов поопределению фоновой секреторной активности тучных клеток брыжейки свидетельствуют о том, что угол наклона графика r =-f(n) для интактных тучных клеток соответствовал

КР=--G,479; l а =- -25.6 .

К К=--0,770.

Вывод, Термостатирование препаратов брыжейки при 37 С приводит к спонтанной секреции тучных клеток, о чем свидетельствует уменьшение угла наклона графика

15-минутное термостатирование (37 С) в растворе Хенкса а) т =Цп) по сравнению с углом наклона, соответствующим фоновой дегрануляции. Увеличение времени термостатирования с 5 до

15 мин не влияет на величину секреции, Полученные результаты свидетельствуют о том, что предлагаемый метод количест1774219

Составитель Л.Стебаева

Техред M,Ìîðãåíòàë Корректор H,Ñnoáoäÿíèê

Редактор

Заказ 3922 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул,Гагарина, t01 венной оценки секреторной активности тучных клеток повышает точность этой оценки, поскольку частично секреция гистамина тучными клетками происходит без морфологических изменений в клетках, определяемых визуально. Секреция гистамина может повлечь за собой лишь частичное обеднение клеток гранулярным материалом, что ведет к уменьшению содержания в них красителя. Предложенный авторами метод определения угла наклона графика

r =f(n) позволяет оценить как визуальные, так и невизуальные изменения..

Формула изобретения

Способ определения дегрануляции тучных клеток, путем воздействия на них веществ, вызывающих дегрануляцию, окрашивание клеток нейтральным красным с. последующим подсчетом среднего числа тучных клеток в поле зрения, о т л и ч а ю— шийся тем, что, с целью повышения точности способа, исследования проводят на брыжейке, при этом дополнительно фотоколориметрически определяют коэффициент пропускания, а дегранупяцию рассчитывают по углу отклонения зависимости коэффициента пропускания от среднего числа. тучных клеток, и при угле отклонения менее 40 определяют дегрануляцию клеток, а при угле отклонения 40 — ее отсутствие.