Способ бактериологической диагностики инфекционной энтеротоксемии животных

 

Использование: ветеринарная микробиология . Сущность изобретения: способ бактериологической диагностики, инфекционной энтеротоксемии животных заключается в посеве исследуемого материала в жидкую питательную среду следующего состава: витаминный препарат экстракта кормовых дрожжей 4,5-5,0 г, глюкоза, 40%-ный раствор 11-13 мл, сульфат натрия 1,0-1,2 г, гемин 0,004-0,005 г, натрий хлористый 4,5- 5,0 г, гентамицин 0,0075-0,008 г, эритромицин 0,00004-0,000045 г, ферментативный гидролизат казеина с содержанием аминного азота 90-100 мг % до 1 л, в инкубировании посевов, в пересеве на плотную питательную среду, содержащую: витаминный препарат экстракта кормовых дрожжей 4,5-5,0 г. глюкоза, 40%-ный раствор 20,0- 25,0 мл, сульфат натрия 1,0-1,2 г, гемин 0,004-0,005 г, натрий хлористый 4,5-5,0 г. трифенилтетразолия хлорид 0,025-0,03 г, агар 13,0-15,0 г, ферментативный гидролизат казеина с содержанием аминного азота 170-190 мг% до 1 л, с последующим инкубированием посевов и учетом результатов по росту микроорганизмов. 6 табл. (Л С

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (s3)s С 12 0 1/04

ГОСУДАРСТВЕН.ЮЕ ПАТЕНТНОЕ

ВЕДОМСТВО СССР (ГОСПАТЕНТ СССР) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

2 (21) 4917536/13 (22) 1.12,90 (46) 15.12.92. Бюл. 1Ф 46 (71) Всесоюзный научно-исследовательский ветеринарный институт (72) P. А. Тазетдинова и О. А. Котылев (56) Методические указания по лабораторной диагностике инфекционной энтеротоксемии животных и анаэробной дизентерии ягнят, утвержденные ГУВ МСХ СССР, 1984 г.

Ветеринарная микробиология./ Под ред. Е. В. Козловского, П. А, Емельяненко, М.; Колос, 1982, с, 228. (54) СПОСОБ БАКТЕРИОЛОГЙЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКИ ИНФЕКЦИОННОЙ 3НТЕРОТОКСЕМИИ ЖИВОТН ЫХ (57) Использование: ветеринарная микробиология. Сущность изобретения: способ бактериологической диагностики инфекционной энтеротоксемии животных заключается в посеве исследуемого материала в жидкую пиИзобретение относится к ветеринарной микробиологии и может быть использовано для повышения эффективности своевременной диагностики инфекционной энтеротоксемии животных и организации противоэпизоотических мероприятий.

Известны методы диагностики инфекционной энтеротоксемии животных с выделением возбудителя инфекции — Кл. перфрингенс.

При этом в качестве питательных сред для культивирования инфекционного агента использовали среды Китт-Тароцци, глюкозно-кровяной МПА и др. Применяемые при!

Ы» 1781300 А1 тательную среду следующего состава: витаминный препарат экстракта кормовых дрожжей 4,5-5,0 г, глюкоза, 40 (-ный раствор 11 — 13 мл, сульфат натрия 1,0 — 1,2 г, гемин 0,004 — 0,005 г, натрий хлористый 4,5—

5,0 г, гентамицин 0,0075-0,008 г, эритромицин 0,00004-0,000045 г, ферментативный гидролизат казеина с содержанием аминного азота 90-100 мг до 1 л, в инкубировании посевов, в пересеве на плотную питательную среду, содержащую: витаминный препарат экстракта кормовых дрожжей

4,5 — 5,0 r. глюкоза, 40 -ный раствор 20,025,0 мл, сульфат натрия 1,0 — 1,2 г, гемин

0,004 — 0,005 r, натрий хлористый 4,5 — 5,0 r, трифенилтетразолия хлорид 0,025 — 0,03 г, агар 13,0-15,0 г, ферментативный гидролизат казеина с содержанием аминного азота

170-190 мг до 1 л, с последующим инкубированием посевов и учетом результатов по росту микроорганизмов. 6 табл. выделении возбудителя питательные среды требуют для изготовления мясных продуктов, крови животных, трудоемки в изготовлении, нестандартны по качественному составу и не предусматривают ингибирования посторонней микрофлоры.

Известен способ, диагностика по данным которого основана на обнаружении токсина Кл, перфрингенс в исследуемом материале от больных и павших животных с помощью биопробы на белых мышах или выделении культуры возбудителя с последующим изучением ее токсигенности. Выполнение этой методики в значительной мере

1781300 ограничено ее трудоемкостью (многократные пересевы) и применением дорогостоящих питательных сред, не обладающих селективными и дифференцирующими свойствами.

Целью изобретения является разработка способа ускоренного выделения культуры возбудителя инфекционной энтеротоксемии с и рименением сконструированных питательных сред, обладающих селективными и дифференцирующими свойствами.

Поставленная цель достигается тем, что выделейие культуры Кл. перфрингенс из ис Следуемого материала (фекалии, содержи- мое кишечника, корма, объекты внешней среды) осуществляют путем высева на жид кую питательную среду накопления на казеиновой основе, содержащую глюкозу, экстракт кормовых дрожжей (ЭКД), гемин, сульфит натрия, ингибиторы роста сопутствующей микрофлоры — гентамицин и зритромйцин при следующем соотношении компонентов, г/л

Витамийный йрепаратЭКД 4,5-5,0

Глюкоза,- - -

40% р-р": "" 11-13мл

Сульфит натрия 1,0-1,2

Гемин —: - --0,004-0,005

Натрий . хлористый 4,5-5,0

Гентамицин: 0,0075-0,008

Эритромицин 000004-0000045

Ферментативный гидролиэат казеина (аминный азот

90 — 100 мг%) До 1 л

В последующем выделение и дифференциацию чистой культуры Кл. перфрин генс проводят путем пересева на плотную диагностическую среду, содержащую ЭКД. глюкозу, сульфит натрия, гемин, натрий хлористый. 2.3,5-трифенилтетразолия хлорид

PTX) in агар при следующем соотношении компонентов, г/л:

Витаминный препарат ЭКД 4,5-5,0

Глюкоза (40 % р-р) 20-25 мл

Сульфит натрия 1-1,2

Гемин . 0.004-0,005

Натрий хлористый 4,5-5,0

ТТХ 0,025-0,030

Агар 13-15

Ферментативный гидролизат казеина (аминный азот

170-190 мг %) До 1л

Способ осуществляют следующим образом.

Основой казеиновых питательных сред для выделения Кл. перфрингенс является ферментативный гидролизат казеина средней степени расщепления (аминный азот

5 450 500 мг %), Для изготовления ферментативного гидролизата казеина используют казеин пищевой (ОСТ 4970-74 и др,). Для ускоренного гидролиза казеин в количестве 1 кг измельчают с помощью ткайевого измельчителя

PT-1 или каким-либо другим способом и заливают 10 л дистиллированной воды. Смесь

Х вЂ” К, А

В где Х вЂ” потребное количество ОГК для приготовления питательной среды (л);

А- требуемое количество амин ного азота в питательной среде (мг%);

 — концентрации аминного азота в ОГК (мг%);

55 подщелачивают 20%-ным раствором едкого натзия (ГОСТ 4320-77) до рН 8.0-8,2, подо15 гревают до 80-85ОС и при постоянном перемешивании, поддерживая температуру и рН в указанных параметрах, доводят казвин до полного растворения. После этого смесь охлаждают до 45 — 47 С и вносят 1 кг дважды

20 измельченного фарша поджелудочной железы крупного рогатого скота или свиней (ГОСТ 11285-73). 20 -ным раствором едкого натра доводят рН смеси до 8,0-8,2 и консервируют хлороформом (ГОСТ 20015-74) в

25 количестве 1,0-1,5% к общему объему. Гидролиз казеина проводят при 37-42 С в течение 16-20 часов до достижения концентрации аминного азота 450-500 мг%. После этого гидролиз прекращают

30 подкислением ледяной уксусной кислотой (ГОСТ 61-75) до рН 4,5-5,0 и последующим кипячением в течение 10 минут. Далее гидролизат оставляют на 2-3 суток при 8-10 С для отстаивания. По истечении этого срока

35 прозрачный гидролизат казеина сливают, подщелачивают 20% ным раствором едкого натрия до рН 7,0-7,2, фильтруют через ватно-марлевый фильтр и стерилизуют при

120 С в течение 30 минут. Стерильный гид40 ролизат казеина хранят при 8-10 С и используют в работе в течение 5-6 месяцев.

Показатели гидрблизата казеина: аминный азот 450-500 мг%, пептон 2-3%, триптофан 180-200 мг%, 45 Изготовление казеиновой среды накопления.

Для изготовления питательной среды накопления основной гидролизат казеина (ОГК) разводят дистиллированной водой до

50 концентрации амийного азота 90-100 мг%.

Необходимое количество ОГК определяют по формуле: 1781300 6

К вЂ” количество питательной среды..которое необходимо приготовить (л), г -.-:Разведенный до амин ного азота 90-100 мг гидролизат казеина нагревают до кипения, добавляют сухой экстракт кормовых дрожжей из расчета 5 г/л среды, сульфит натрия (ГОСТ 195-77) — 1 г/л, гемин (ТУ609-10-504-7} — 0,005 г/л и хлористый натрий (ГОСТ 4233-77) — 5 г/л.

Раствор гемина в воде готовят отдельно, для чего навеску препарата в 10 мг предварительно растворяют в колбе емкостью

50-100 мл в 1 мл стерильного 1-нормального раствора едкого натрия и добавляют 19 мл стерильной дистиллированной воды. В питательную среду раствор гемина вносят из расчета 10 мл/л. Простерилизованный доведением до кипения раствор гемина пригоден для хранения и последующего использования.

После растворения всех компонентов

20 -ным раствором едкого натрия устанавливают рН среды 7,6 — 7,8, кипятят в течение

10 минут, фильтруют через ватно-марлевый фильтр, разливают в колбы по 0,250 или 0,5 л и стерилизуют при 120 С в течение 30 минут.

Питательная среда прозрачна, имеет красноватый оттенок и рН 7,4-7,6, концейтрация аминного азота 100 — 110 мг, Среда при хранении в условиях 4 — 8 С пригодна для использования в работе в течение 3-4 . месяцев.

Перед употреблением в питательную среду для ускорения роста Кл,перфрингенс добавляют. глюкозу (ГОСТ 975-75) в виде

40 -ного стерильного раствора из расчета

12,5 мл (0,5 в пересчете на сухое вещество) и для ингибирования посторонней микрофлоры — антибиотики гентамицин из расчета 0,008 г/л (8 мг) и эритромицин—

0,000045 г/л (45 мкг), после чего среду разливают в стерильные пробирки по 10 мл и наслаивают стерильное вазелиновое масло.

Готовую среду хранят при 4-8 С и используют в течение 2 месяцев.

Расчет необходимого количества гентамицина из потребности 0,008 г/л производится следующим образом.

Гентамицин в ампулах в виде 47ь-ного раствора:

1 мл препарата содержит 0,04 i активного вещества

Х мл — 0,008 г, 0,008 1

Х 0,04 .0,2 мл.

Следовательно, на 1 л питательной среды необходимо взять 0,2 мл препарата, Гентамицин в порошке во флаконах, где содержится по 0,08 г (80 мг) активного вещества: содержимое флакона растворяют в 2 мл

5 стерильной дистиллированной воды. Следовательно, в 1 мл раствора содержится также

0,04 r активного вещества. В дальнейшем расчет производится так, как это описано выше. Водный раствор гентамицина можно

10 испольэовать в работе в течение 14 дней.

Эритромицин удобно и целесообразно использовать в виде дисков, содержащих по

0,000015 г(15 мкг) активного вещества, Расчет необходимого количества эритромици15 на при потребности 0,000045 г/л (45 мкг):

1 эритромициновый диск содержит

0,000015 г вещества

Х 0,000045 r

Х 0,000045 1

20 0,000015

Таким образом, на 1 л питательной среды нужно взять элюат 3 дисков или непосредственно внести стерильно 3 диска.

25 Если эритромицин (эритромицина аскорбинат или эритромицина фосфат) в порошке во флаконах, где по 0,05 г препарата, то расчет при той же потребности производится следующим образом.

30 Содержимое флакона растворяют в 5 мл стерильной дистиллированной воды, Берут

0,1 мл этого раствора (0,001 г) и переносят в пробирку с 4,9 мл стерильной дистиллированной воды. Таким образом, в 1 мл рас35 твора в пробирке содержится 0,0002 r вещества.

В 1 мл содержится 0,0002 г в Х мл — " — 0,000045 г

40 Х вЂ” 0,000045 . 1 — 0 225

0,0002

Следовательно, на 1 л среды нужно добавить из пробирки 0,23 мл раствора эрит45 ромицина. (Водный раствор эритромицина для хранения непригоден).

Конечная структура среды накопления, г/л:

Витаминный препарат ЭКД 4,5-5,0

50 Глюкоза, 40 -ный раствор 11-13 мл

Гемин 0,004-0,005

Сульфит натрия 1-1,2

Натрий хлористый 4,5-5,0

55 Гентамицин 0,0075-0,008

Эритромицин 0,000040 000045

Ферментативный гидролизат казеина (аминный азот

90-100 мг7) До1л

1781300

4-5 мл 13-15

Изготовление плотной диагностической среды, Для изготовления плотной диагностической среды основной гидролизат казеина разводят водой до -концентрации аминного азота 170-190 мг по формуле, приведенной ранее. Разведенный гидролиэат нагревают до кипения, последовательно из расчета на 1 л среды вносят агара (ГОСТ

16280-70) — 15 г, сульфита натрия — 1 г, раствор гемина — 10 мл (о приготовлении раствора гемина см. выше), хлориСтого натрия — 5 г. После растворения всех компонентов и доведения рН среды 20 -ным раствором едкого натрия до 7,6-7,8 кипятят в течение 10 минут, фильтруют через ватномарлевый фильтр и стерилиэуют при 120 С в течение 30 мин.

Среда имеет красноватый оттенок, рН

7,4-7,6, концентрация аминного азота 190—

210 мг; .

Перед разливом в чашки Петри в расплавленный и охлажденный до 50-60 С питательный агар добавляют стерильно глюкозу иэ 40 -ного раствора в количестве

25 мл/л (1 в пересчете на сухое вещество) и раствор трифенилтетразолия хлорида (ТТХ) из расчета 5 мл/л (0,025 г/л в пересчете на сухое вещество).

Раствор ТТХ готовят отдельно, для чего навеску препарата в 0,05 r растворяют в 10 мл стерильной дистиллированной воды (или

0.02 г в 4 мл в зависимости от потребности), доводят до кипения. Раствор ТТХ пригоден для использования в течение 7-10 дней.

Конечный состав плотной диагностической среды представляется в следующем виде, г/л:

Витаминный препарат

ЭКД 4,5-5,0

Глюкоза, 40 -ный раствор 20 — 25 мл

Гемин 0,004-0,005

Сульфит натрия 1-1,2

Натрий хлористый 4,5-5,0

ТГХ, 0,57-ный раствор

Агар

Ферментативный гидролизат казеина

-(аминный азот

170 — 190 мг (,) До 1 л

Пример 1. Оценка эффективности различных вариантов конструкций на казеиновой основе для роста Кл.перфрингенс.

Посевная культура Кл.перфрингенс представляла суспензию агаровой 18-20часовой культуры в концентрации 1 млрд. м.к./мл, которую вносили в. пробирки со средами из расчета 1 мл/10 мл. Посевы культивировали при 37 С. Рост культуры

Кл.перфрингенс оценивали в единицах оптической плотности с помощью ФЭК-М.

В результате максимальные показатели

5 роста Кл.перфрингенс были установлены в среде, содержащей глюкозу, ЭКД, гемин и сульфит натрия (табл. 1).

Пример 2. Скорость и характер роста микробных клеток Кл.перфрингенс..

10 При сравнительном изучении скорости и характера роста м.к. эталонных штаммов

Кл.перфрингенс испольэовали 17-18- часовые агаровые культуры, которые вначале разводили до 10 ед. по оптическому стан15 дарту мутности, далее из них готовили разведение 10 с последующим пересевом из расчета 0,5 мл/10 мл в опытную и контрольную среды накопления.

Среды оценивали по времени появле20 ния визуально заметного роста и типичности проявления его (табл. 2). В казеиновой среде визуально заметный рост установлен через 3 часа, в контрольной среде — на 1 час позднее, Через 5,5 ч после посева в экспе25 риментальной среде регистрировали интенсивный рост (сильное помутнение с бурным газообразованием), в контрольной— признаки роста были менее выраженными (слабое помутнение и отсутствие гаэообразования) 30

Пример 3. Чувствительность жидкой казеиновой среды для микробных клеток

Кл. перфрин генс.

Была использована 17-18-часовая агаровая эталонного штамма культура Кл.пер35 фрингенс типа С 392, которую вначале разводили до 10 ед, по оптическому стандарту мутности, затем готовили ее десятикратные последовательные разведения от

40 10 до 10 . Из каждого разведения был сделан посев в пробирки со средами из расчета 1 мл/10 мл. Посевы инкубировали при ..

37 С в микроанаэростатах в течение 20 ч.

Эффективность сред оценивали по появле45 нию роста при соответствующем разведении (табл. 3).

На казеиновой среде регистрировали рост Кл.перфрингенс при посеве иэ разведения 10, в контрольной рост выявлялся

50 при посеве из разведения 10 .

Пример 4. Чувствительность плотных . сред для Кл.перфрингенс.

При этом использовали как 16-18-часо вые агаровые, так и 6-часовые бульонные

55 культуры Кл.перфрингенс С 392, из оаэведений которых 10, 10, 10 и 10 делали посев по 0.05 мл на чашках Петри с экспериментальной плотной диагностической средой и средой- прототипом(агар Цейсслера).

Чашки инкубировали в микроанаэростатах

1781300

10 при 37 С в течение 17-18 ч, Среды оценивали по количеству и размерам колоний (табл.

4).

Опытная плотная диагностическая среда, не уступая среде — прототипу но чувствительности, превосходила ее по размерам колоний.

Пример 5. Эффективность схемы выделения Кл.перфрингенс из материала.

При выделении культуры Кл.перфрингенс исходным материалом служили фекалии и содержимое тонкого отдела кишечника животных. Навеску фекалий в

0,8 — 1 r суспендировали в 10 мл физиологического раствора хлористого натрия, содержащего 0,05 j(тиогликолята натрия. Взвеси тщательно перемешивали и выдерживали

30 — 35 минут в условиях комнатной температуры для оседания грубых частиц, после чего производили обильный посев в экспериментальную казеиновую среду и среду — прототип. Посевы инкубировали в течение 16 — 17 часов при 37 С. Затем культуры микроскопировали и производили обильный пересев на плотный диагностический казеиновый агар и агар Цейсслера (прототип) в чашках

Петри. Посевы термостатировали в микроаназростатах в течение 16 — 17 ч при 37 С.

Оценку роста и дифференцирующих свойств сред производили визуально и с использованием микроскопа МБС вЂ” 9 при 12кратном увеличении.

При посеве 22 проб материала в казеиновую среду накопления было выделено 19 культур Кл.перфрингенс, а в среду Китта — Тароцци — 9 (табл.6).

Пример 6. Оценка роста и дифференцирующих свойств плотных сред (табл, 5).

При пересеве культур из казеиновой среды накопления как на плотную казеиновую диагностическую, так и на среду — прототип установлен обильный рост однородных колоний, соответствующих по своей характеристике Кл,перфрингенс. При пересеве из среды Китта-Тароцци в 2 случаях из 3 отмечено незначительное количество колоний Кл.перфрингенс на фоне обильного роста колоний сопутствующей кишечной микрофлоре. Колонии Кл.перфрингенс на опытной плотной диагностической среде резко отличались от колоний других представителей кишечной микрофлоры благодаря присущим им на этой среде признакам (форма, размер, цвет, .характер поверхности и края, рельеф, структура, консистенция, включения).

Выделение культуры Кл.перфрингенс.

Выделение культуры Кл.перфрингенс иэ фекалий и содержимого тонкого отдела кишечника.

Структура

Консистенция

Навеску фекалий 0,8-1 г помещают в физиологический раствор хлористого натрия с 0,05 (0,5 г/л) тиогликолята натрия (ТУ 6 — 09-08 — 837-74) с соблюдением соотно5 шения 1:10. Взвесь тщательно перемешивают и выдерживают при комнатной температуре в течение 30-35 минут для осаждения грубых частиц. После этого из верхнего слоя жидкости делают обильный

10 посев(не менее 0,5 мл) в пробирку со средой накопления. Посевы инкубируют при 36—

37 С в течение 16-17 часов, микроскопируют и при обнаружении крупных полиморфных грамположительных палочек

15 с закругленными концами делают дробный посев на казеиновый диагностический агар в чашках Петри. Чашки с посевами инкубируют в микроанаэростатах при 36 — 37 С в течение 16-17 часов. Осмотр и отбор коло20 ний Кл,перфрингенс производят под микроскопом МБС вЂ” 9 (или аналогичным) при

12-кратном увеличении, Морфологическая характеристика колоний Кл.перфрингенс:

25 Величина 1 — 2 мм

Форма чаще овальная или неправильная

Края ровные или волнистые

Поверхность гладкая с незначитель30 ным блеском

Рельеф выпуклый, часто до конусовидности непрозрачная пастообразная, коло-! ния легко снимается петлей

Цвет равномерно коричневый или красноватокоричневый

40 Включения в виде кристаллов крас ного цвета по всей поверхности колонии, на пер иферии их может быть меньше

45 Выделение Кл.перфрингенс из органов тканей животных.

Кусочки паренхиматоэных органов (печень, почки, селезенка) весом 1 — 1,5 г растирают в условиях стерильности в

50 фарфоровых ступках, добавляют физиологический раствор хлористого натрия в соотношении 1:10. Взвесь тщательно перемешивают; отстаивают в течение. 20-30 минут и из верхнего слоя производят обиль55 ный посев (не менее 0,5 мл) в пробирку со средой накопления. Последовательность дальнейшей работы описана выше.

Выделение Кл.перфрингенс из перитонеальной жидкости.

1781300

11- t3

1,0-1,2

0,004-0,005

4,5-5,0

0,0075-0,008

0,00004-0,0цКИ5

4,5 — 5,0

0,025-0,03

13,0-15,0

Табл ица 1

Перитонеальную жидкость, взятую стерильно, в обьеме не менее 0,5 мл вносят в пробирку со средой накопления. Последовательность дальнейшей работы приведена выше.

Выделение Кл.перфрингенс из кормов.

Навеску кормов в 4-5 r в колбах емкостью 0,250 или 0,5 л заливают 50 мл физиологического раствора хлористого натрия с

0,05 тиогликолята натрия, тщательно встряхивают, выдерживают при комнатной температуре 20-30 минут и из верхнего слоя жидкости производят обильный посев в пробирку со средой накопления. Дальнейшая работа производится так, как это описано выше. Вместо тиогликолята натрия можно использовать солянокислый цистеин в количестве 0,1 г/л.

Таким образом, предлагаемый способ ускоренной бактериологической диагностики инфекционной энтеротоксемии у животных по сравнению с прототипом имеет следующие преимущества: сконструированные питательные среды обладают устойчивыми селективными и дифференцирующими свойствами, не требуют для изготовления дорогостоящих мясных продуктов, стандартны по качеству, предусматривают использование ингибиторов для посторонней микрофлоры, исключают многократные пересевы при выделении и тем самым повышают производительность труда ветспециалистов.

Технико-экономическая эффективность изобретения заключается в повышении эффективности,.достоверности и доступности способа диагностики инфекционной энтеротоксемии животных.

Формула изобретения

Способ бактериологической диагностики инфекционной энтеротоксемии животных, включающий посев исследуемого материала в жидкую питательную среду, инкубирование посевов с последующим пересевом на плотную питательную среду, содержащую источник азота, хлористый натрий, глюкозу. агар, и инкубирование, с последующим учетом результатов по росту микроорганизмов, отличающийся тем, что, с целью повышения точности и ускоре5 ния способа, исследуемый материал засева: ют в жидкую среду следующего состава, г/л:

Витаминный препарат экстракта кормовых дрожжей 4,5-5,0

10 Глюкоза, 407ь-ный раствор, мл

Сульфит натрия

Гемин

Натрий хлористый

15 Гентамицин

Зритромицин

Ферментативный гидролизат казеина с содержанием амин20 ного азота

90 — 100 мг До 1 л а пересев проводят на плотную среду. дополнительно содержащую витаминный экстракт кормовых дрожжей, сульфит натрия, 25 гемин, трифенилтетразолия хлорид, а в качестве источника азота — ферментативный гидролизат казвина с содержанием аминного азота 170 — 190 мг7 при следующем соотношении компонентов, г/л:

30 Витаминный препарат экстракта кормовых дрожжей

Глюкоза, 40 -ный раствор, мл 20,0-25,0

35 Сульфит натрия 1,0-1,2

Гемин 0,004-0,005

Натрий хлористый 4,5-5,0

Трифенилтетразолия хлорид

40 Агар

Ферментативный гидролизат казеина с содержанием

- аминного

45 азота 170-190 мг До 1 л

1781300

Прототип

hhhh образцов

Материал

Д= 0,5-1 мм

Посев из казеиновой накопительной среды

Опытная плотная диагностическая с е а

Казеиновый ага

Обильный рост однотипных колоний, соответствующих по морфологической характеристике Кл, и е рфрингенс

Д=1-2 мм

Таблица 2

Таблица 3

Таблица 4

Таблица 5

Ага ейссле а

Обильный рост однотипных округлых, выпуклых колоний, с ровными краями с зоной гемолиза

1781300

Продолжение табл. 5

Материал

Опытная плотная диагностическая с е а

Мгв образцов

Прототип

Каэеиновый ага

Ага ейссле а

Посев из среды прототи- па

Колоний Кл.перфрингенс нет.

В значительном количестве колонии посторонних микроорганизмов

32 колонии Кл.перфрингенс, а также значительное количество посторонних колоний

Колонии Êë.перфрингенс отсутствуют. Отмечено большое количество посторонних колоний

Табли ца6

Опыт

Выделено к-p .

Кл.перфрингенс

Среда накопления

Выросло анаэрабных культур

Кол"ео обраецоа натер.

Натериал

Отсутст, и,к.>ха" рант.для

Кл.перф.

К-ра однород. ° н.к.характ.для

Кл.перф.

Всего

Наличие н,к.характ.для

Кл.перф.

К-ра однород., но и.к. не харны для

Кл,перф, К-ра разно обра а ная

Эксперинентальная среда накопления

1 Фекалии кр рогатого скота

3 3 0

О 3

О О

О О 3 2 1 2

Среда-про- 3 тотип

2 Фекалии кр. 10 Зкспер.сре- 10 9 1 0 О О 9 рогатого да накопскота ления среда-про- 10 О. О 10 3 7 3 тотип

3 Фекалии: сеинонаток и содери.тонкого отдела киееч.подоя.

6 Экспер.сре- 6 да накопления

2 2

2 О

О О

Среда-про- 6 тотип

О О

4 Содеря.тонкого отдела кишеч, ягнят

3 Экспер.сре- 3 да накоплеления

Прототип 3 О О 3 2 1 2

22 17/О 1/О 4/32 2/9 2/! 3 19/9

Всего

Составитель Л, Кольцова

Техред М.Моргентал Корректор О. Юрковецкая

Редактор

Заказ 4256 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж 35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", r. Ужгород, ул.Гагарина, 101

П р и и е ч а н и е. В ислителе - покааатели экспериментальной среды.

В анаиенателе -"- среда-прототип.

10-12 колоний округлых, выпуклых с ровными краями и зоной гемолиэа, в значительном количестве колонии посторонних микроорганизмов

38 колоний округлых, выпуклых с ровными краями и зоной гемолиза и значительное количество колоний кишечных микроорганизмов

Округлых, выпуклых с ровными краями и зоной гемолиэа нет, В большом количестве колонии других микроорганизмов