Способ отбора высокобелковых форм люпина узколистного

 

Использование: сельское хозяйство, растениеводство, луговодство, селекция, биохимическая генетика. Сущность изобретения: высокобелковые формы люпина узколистного отбирают и идентифицируют по наличию в их белковом спектре ярко выраженных компонентов с ОЭП 0,4, при этом отработана специфическая методика электрофоретического разделения белков, 1 табл., 1 фиг.

COIO3 СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (й)5 А 01 Н 1/04

НОЕ ПАТЕНТНОЕ

ССР

ССР) эй/ "ПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ:, ь м - п.нрди. -:: .:

:,-.1:тб 1<37Е...

ПАТЕНТУ!

К (21 (22 (46 (71 им (72 ко, (73 им (56

На ра

5006109/ 13

01,07,91

30.08,93, Бюл. N. 32

Институт экспериментальной ботаники

В.Ф. Купревича

В,И. Домаш, О.В, Буснюк, С.А, ЗабрейН.С. Купцов и Т.П, Миронова

Институт экспериментальной ботаники

В.Ф, Купревича

Мироненко А.B. Биохимия люпина. М.; ка и техника, 1975, с. 23-28.

Плешков Б.П. Практикум по биохимии тений. М.: Колос, 1976, с. 3-7.

Изобретение относится к области сельск го хозяйства, в частности K биохимическ м анализам белков растений, и может бы ь использовано в селекции при отборе вы окобелковых форм люпина узколистного.

Цель изобретения — повышение эффекти ности отбора за счет возможности целена равленного выделения форм люпина уз олистного с генетически обусловленным бо ее высоким содержанием белка.

Предлагаемый способ отбора высокобе ковых форм люпина узколистного имеет пр знаки, сходные с признаками, присутстeyI щими у прототипа, заключающиеся в изме ьчении семян и определении у них со ержания белка.

У заявляемого решения появляются Новы, отличные 07 известного решения призн ки, заключающиеся в том, что из муки се ян экстрагируют белки, осаждают их, а ос1аешеися е надосадочнои жидкости части

6eяnoo проаодят апектрофореа а 1от поли„„5U „„1837751 АЗ (54) СПОСОБ ОТБОРА ВЫСОКОБЕЛКОВЫХ

ФОРМ Л1ОПИНА УЗКОЛИСТНОГО (57) Использование: сельское хозяйство, растениеводство, луговодство, селекция, биохимическая генетика. Сущность изобретения: высокобелковые формы люпина уэкоllPIcTIIoI o отбирают и идентифицируют l1o наличию в их белковом спектре ярко выраженных компонентов с ОЭП 0,4, при этом отработана специфическая методика электрофоретического разделения белков, 1 табл., 1 фиг, акриламидном геле и отбирают образцы, имеющие ярко выраженную зону при ОЭП

0;4, Благодаря укаэанным новым признакам у заявляемого решения появляются новые свойства, не совпадающие со свойством известного решения, в результате чего возможно достижение более высокой эффективности отбора за сче1 возможности целенаправленного выделения форм люпина узколистного с генетически обусловленным более высоким содержанием белка.

Способ осуществляется следующим образом.

Семена лапина измельчают, навеску муки экстрагируют 0,2 M NaCI в соотношении 1:20, центрифугируют при 11 — 12000 g в течение 20 мин. В надосадочной жидкости осаждают белки при рН 3,8 — 4,0. Более высокие значения рН не дают полного осаждения балластных белков. Более низкие значения рН нежелательны из-за сильного закисления раствора, мешающего проведе1837751

ОЭП я зоны

Содержание белка (¹ x 625

Сортообразец. N.

35,3

35,8

30,6

30,5

31,6

35,0

33,5

34,4

92 нию электрофореза, Надосадочную >кидкость снова центрифугируют и используют для электрофореза в 15%-лом полиакриламидном геле. Используют 0,05 M трис-глициновый буфер, рН 8,3, Злектрофорез проводят в плоском геле при силе тока 2030 мА на пластинку и напряжения 250 В.

Электрофорез проводят 1.5 ч. Затем гель фиксируют 20% TXY в течение часа и промывают водой. Окраску проводят кумасси G—

250%, 0 2% раствором в смеси этанол: уксусная кислота; вода в соотношении 1:1:2 в течение 1,5 ч. Краску отмывают 10%-ной уксусной vèñëoтой, Анализируют электрофореграммы и отбирают образцы, которые имеют ярко выраженную зону при ОЗП 0,4 (см.чертеж), Пример. В опыте использовали семена 14 сортообразцов люпина узколистного, различа ощихся по содержани1о белка, кото- 20 рое определяли известным способом (N х

6,25).

Берут навеску муки семян люпина узколистного и экстрагируют белки 0,2 M NBCI в соотношении мука: 0,2 M NaCI 1;20 в тече- 25 ние 3 ч при 4"С, Затем экстракт центрифугируют при 11 — 12000 g в течение 20 мин. В надосадочной жидкости осаждают основную массу запасных белков при рН 3,8-4,0.

После 1 5-2 ч образования осадка его цент- 30 рифугируют, а оставшиеся и надосадочной жидкости бел .и используют для злектрофореза. Злектрофорез проводят в пластинках

15% ПААГ. В ячейку геля наносят вытяжку в количестве 0.04 мл, Используьт трис-глици= 35 новый буфер рН 8,3. Электрофорез проводят при силе тока 20 — 30 мА на пластинку и напряжении 250 В, Проводят электрофорез

1,5 ч. Затем гель фиксируют 20% ТХУ в течение часа и проMûâýþò дистиллирîванной водой, Окраску проводят кумасси 6-250, 0,2%-ным раствором в смеси этанол; уксусная кислота; вода в соотношении 1;1;2 в течение 1,5 ч. После скрашивания гель промывают водой и отмывают краситель 10%ной уксусной кислотой. При анализе электрофореграмм выделя|от образцы, которые имеют ярко выраженную зону при

ОЭП 0,4, взаимосвязанную с более высоким содержанием белка, В таблице представлены результаты определения содержания белка и анализ электрофореграмм различных сортообразцов люпина.

Использование предложенного способа о-бора высокобелковых форм люпина узколистного обеспечивает ускорение процесса за счет целенаправленного выделения форм люпина с генетически обусловленным более высоким содер>канием белка.

Этим способом одному человеку можно проанализировать свыше 20 образцов в течение рабочего дня. Кроме того. данный способ дает возможность использовать для анализа семена с одного растения, что очень важно для селекционеров, à Ite семена с разных растений для образования сред)IeA пробы, как это требуется в известном способе, Формула изобретения

Способ отбора высокобелковых форм люпина узкалистного, включающий измельчение семян, определение содержания белка и отбор высокобелковых образцов. о тл и ч а ю шийся тем, что определение содер>кания белка проводят путем зкстракции измельченных семян солевым раствором, центрифугирования надосадочной жицкости, осаждения балластных запа ных белков при рН 3,8 — 4,0 и электрофореза полученной вытяжки с последующим анализом полученных белковых спек-:ров и отбор ведут по наличию в спектрах ярко выраженных компонентов с ОЭП 0,4. езл г

Продолжение таблицы

0,2

0,4

0,6

0,8

ЙГ7 3. А 1-1I Â9 У8;. 4 сортообразцы

4l

Г

Ж% Х7 Хб II

0,0

9 8

4 сортообразцы