Способ выведения фагоустойчивых мутантов актиномицетов

Авторы патента:

C12N15/01 - получение мутантов без введения чужеродного генетического материала; способы их защиты

C12N1/14 - микробные грибки (культуры грибов A01G 1/04; грибы в качестве нового вида растений A01H 15/00); питательные среды для них

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕН ИЯК АВТОРСКОМУ СВМДЕТЕЛЬСТВУ

СОтбз СМвтбмих

Социалистических

Республик

Завсссимоp от авт. свидетельства №

Кл. 30h, 6

Заявлено 25.1V,1964 (№ 896992,. 31-16) с пpiHicce+HIHBHtHeM заявки №

МПК А 61k

УДК 615.779.931.002.2 (088,8) Приоритег

Опубликовано 09.Х.1967. Бюллетень № 21

Квинтет ло делауе изобретений и открытий при Совете Министров

СССР!

Дата опубликования описания 12.XII 1967

Авторы, изобретения

С. И. Алиханян и В. Г, Жданов

Заявитель

СПОСОЬ ВЫВЕДЕНИЯ ФАГОУСТОЙЧИВЫХ МУТАНТОВ

АКТИНОМИЦETOВ

4, Йзвесгные способы выведения фагоустойчивых штаммов актиномицетов продуцентов антибиотиков, предусмапри вающие отбор колоний из рассева фаголизата, как лравило, ттриводят |к получению штаммов с пониженной антибиотической активностью и устойчивых только к тому фагу, из фаголизата которого был отобран устойчивый штамм.

Сущность предлагаемого способа за ключается в том, что опоры акпи номицета обрабатывают мутагенными факторами и рассеивают íà поверх носпи агаризован ной среды в чашечки Петри № 1. После образования колоний с них делают два,последовательных отпечапка на чашку № 2 с агаризованной средой,и на та кую же чашку № 3 с добавлением акти нофага. С чашки № 2 отби рают копии колоний, выросших на чашке № 3, и отбирают среди них фагоустойчи вые мута нты, Для получеция фагоуспойчивых мутантов акти|номицетов по предлагаемому способу суспензию опор актиномицета об рабатывают оптимальной дозой этилена мина и ультрафиолетовыми лучами, быстрыми нейтронами или другими мутагенами и рассевают на поверх ность агаризованной среды в чашки з концентрации, обеспечивающей рост 500вЂ”

600 .колоний. Через 7 вЂ” 8 дней в зависимости от темпов, роста колоний штамма актиномицета с каждой чашки № 1 щеткой, имеющей

300 вЂ” 400 иголок, делают два последовательных отпечатка на чашки № 2 и 3. Чашки № 2 содержат обычную агаризованную среду, а чашки № 3 эту же среду с добавлением

5 актинофага. После 7 вЂ” 8-дневной инкубации в чашках № 2 вырастают,все отпечатавшиеся колонии, а на чашках № 3 вЂ” лишь фагоустойчивые. Для выделения среди этих фагоустойчивых колоний мутантов их копии, найденные

10 на чашке ¹ 2, проверяют на фагоустойчивость. Те колонии,,которые окажутся фагоустойчи|выми несмотря на отсутствие контакта с фагом, долж ны быть пр изнаны мутантамл.

Экспериментальные данные свидетель15 ствуют о том, что частота мутаций штамма

Actinomyces erythrens по фагоустойчивости под действием мутагенных факторов рав на примерно 1 на 100000 колоний. Таким образом с 250 чашек Петри можно получить одну

20 фагоустойчивую мутацию. Из семи полученных таким образом фагоустойчивых мутантов у штамма Actincmyeås erythrens ИАЭ-1э трп варианта не только со:оранили свою акпивность, но и превысили активность исходного

25 штамма, Предмет изобретения

Способ выведения фагоустойчивых мутантов актиномицетов,путем отбора, отличаю30 и1ийся тем, что споры актиномицетов обраба203838

Составитель В. А. Таратута

Редактор В. Н. Торопова Техред Л. Я. Бриккер Корректоры; Н, И. Быстрова и С. Ф. Гоптаренко

Заказ 3829/14 Тираж 535 Подписное

ЦНИИПИ Комитета по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССР

Москва, Центр, пр. Серова, д. 4

Типография, пр. Сапунова, 2 тывают мутаген ными факторами, рассевают на поверхности агаризованной среды в чашки Певри № 1, после образования колоний с них делают два последовательных отпечатка на чашку Петри № 2 с агаризо ван ной средой и на чашку Петри № 3 с агаризованной средой, в которую добавлен акти нофаг, с чашки № 2 отбирают копии колоний, выросших на чашке № 3, среди:них отбирают

5 фагоустойчивые мутанты,