Способ выделения дигидрокверцетина

 

Изобретение относится к медицине, а именно к химико-фармацевтической промышленности, и касается способа выделения дигидрокверцетина (ДКВ) из опилок древесины лиственницы Целью изобетения является сокращение времени способа и повышение степени очистки ДКВ Цепь достигается тем. что в охлажденный экстракт, полученный путем экстракции опилок древесины лиственницы водой при нагревании, вносят полиамидный порошок при соотношении 1:10, смесь перемешивают в течение 2 ч отфильтрованный полиамидный порошок высушивают, целевой продукт экстрагируют этилацетатом и кристаллизуют его из горячей воды Положительный эффект заключается в сокращении времени способа с 26 ч по прототипу до 11.4 ч по заявляемому способу и в повышении степени очистки целевого продукта с 94% до 97% 2 ил

2000797

Изобретение относится к медицине, а именно к химико-фармацевтической промышленности, и касается способа выделения дигидрокверцетина (ДКВ), ДКВ обладает широким спектром биологической активности: проявляет противовоспалительное и радиозацитное действие (журнал "Фармакология и токсикология". М

5, 1975, с. 607).

Известен способ выделения ДКВ иэ ко- 10 ры Дугласовой пихты путем обработки водного экстракта коры сульфитом щелочных металлов (Патент США М 2744919). Однако применение сульфитных реагентов в данном процессе нежелательно из-за их акис- 15 ляющей способности, ДКВ в этом случае в значительном количестве переходит в кверцетин, Кроме того значительные различия в химическом составе водорастворимых экстрактивных веществ коры Дугласовой пихты 20 и древесины лиственницы не позволяют использовать этот способ как аналог для выделения ДКВ из водных экстрактов последней.

Наиболее близким к. заявляемому является способ выделения ДКВ путем экстракции опилок древесины лиственницы водой при нагревании, охлаждения экстракта, фильтровз IH$I, хроматографирования на колонке с полиамидом, элюирования водно- З0 ацетоновой смесью и упаривания.

Недостатками известного способа является использование хроматографического процесса выделения ДКВ, требующего peryn plioro аналитического контроля за ходом разделения, что затрудняет осуществление известного способа в промышленном масштабе. Применение флуориметрического метода определения чистоты выделяемого

ДКВ в прототипе не позволяет избиратель- 40 но определять содержание целевого flpo" дукта. Выделяемый по данному способу

ДКВ требует дополнительной очистки.

Целью изобретения является сокращение времени способа и повышение степени 45 очистки ДКВ.

Поставленная цель достигается тем, что водную экстракцию древесины лиственницы ведут при 98 — 100 С с последующим выделением ДКВ путем перемешивания 50 водного экстракта с полиамидным порошком в адсорбере с динамическим режимом и последующей промывкой полиамида этилацетатом. избирательно растворяющим

ДКВ и не смешивающимся с водой, 55

Кристаллизация выделенного таким образом сырого ДКВ из горячей воды позволяет получить продукт с содержанием основного вещества 90 — 96$. При этом контроля гтепени чистоты ДКВ используется метод ВЭЖХ, позволяющий количественно оценить содержание ДКВ и каждой иэ возможных примесей.

Для увеличения эффективности процесса предложена обработка водного экстракта поливмидным порошком в динамическом режиме и последующее вымывание ДКВ с высушенного полиамида этилацетатом-растворителем, не смешивающимся с водой.

Введение этой стадии предотвращает нежелательные явления, замедляющие процесс: уплотнение сорбента, "заиливание" и т.п„ возникающие при пропускании водного экстракта через слой полиамида в колонке.

Кроме того применение этилацетата эффективнее по сравнению с использованием более полярных растворителей (ацетон, спирты. например, изопропиловый спирт), приводящих к получению продукта с более низким содержанием основного вещества (60 — 65 ).

Предлагаемый способ получения ДКВ обладает следующими достоинствами: способ базируется на легкодоступном сырье. В качестве сырья можно использовать отходы древесины лиственницы, накапливающиеся в больших количествах на целлюлозных и деревообрабатывающих предприятиях; технологический процесс получения

ДКВ не содержит химических превращений.

Выделяемый ДКВ является нативным природным соединением, сохраняющим трансконфигурацию центра хиральности и оптическую активность ((а )и = +22,45О); предлагаемый способ легко можно реализовать в промышленном масштабе на стандартном оборудовании; применение водонесмешивающегося растворителя, избирательно растворяющего флавоноиды, в частности зтилацетат, позволяет получить продукт высокой степени чистоты, Пример 1, 200 r опилок древесины лиственницы заливают 2 л горячей воды и кипятят с обратным холодильником в течение 1 ч. Горячий раствор отфильтровывают от опилок и получают водный экстракт (1,67 л) с концентрацией ДКВ 0,065, что составляет 1,085 г.

В охлажденный водный экстракт вносят

11 г полиамидного порошка (соотношение

ДКВ и порошка 1:10). Полученную смесь интенсивно перемешивают в течение 2 ч, после чего полиамидный порошок отфильтровывают и высушивают на воздухе.

Сухой полиамидный порошок заливают (220 мл) и выдерживают смесь при перемешивании в течение 30 мин 3;» м полиамид2000797

50 ный порошок отфильтровывают и этилацетатный фильтрат упаривают. Получают 1,12 г сырого продукта, содержащего 82 ДКВ, После кристаллизации сырого продукта из горячей воды (80 С) получают 0,95 г ДКВ с чистотой 91 . Выход ДКВ 87,2 от извлеченного из древесины.

Пример 2. В условиях примера 1 из

250 г опилок и 2,5 л горячей воды получили

2,1 л водного экстракта с концентрацией

ДКВ 0,068 Экстракт перемешивали с 13,8 г полиамидного порошка. Смыв ДКВ с высушенного полиамида провели 276 мл этилацетата, Получили 1,51 г сырого продукта, содержащего 81,2 ДКВ. После двухкратной перекристаллиэации из горячей воды получили 1,24 г ДКВ с чистотой 94,5%, Выход ДКВ

86,6 от извлеченного из древесины.

Количественный анализ за содержанием ДКВ в выделяемых продуктах осуществляли методом ВЭЖХ на приборе

"Милихром" с УВ-детектором, рабочая длина волны 290 нм, колонка 60 2,1 мм, сорбент Сепарон С в, подвижная фаза— ацетонитрил — 2 -ная уксусная кислота (30:70 об), Относительная ошибка определения при уровне вероятности 0,95 не превышает 3%, Как видно из примера 1 оптимальное время контакта при перемешивании составляет

2 ч. Оно установлено путем контроля эа наличием в жидкой фазе, т.е. в экстракте, смешиваемом с полиамидным порошком, флавоноидных соединений с помощью экспресс-пробы: капля экстракта наносится на хроматографическую бумагу, пятно высушивается и обрабатывается 1 -ным спиртовым раствором А!С!з и после подсушивания просматривается в УФ-свете. По мере снижения концентрации флавоноидных соединений на бумагу в одно пятно производят нанесение нескольких капель. Отсутствие ярко-желтого свечения соответствует полной сорбции (полному поглощению) флавоноидных соединений полиамидным порошком.

Оптимальное соотношение экстракта и полиамидного порошка составляет 1:10.

Описанным путем устанавливалось количество полиамидного порошка, необходимого для полного поглощения флавоноидных соединений, 5

В прототипе соотношение экстракта и полиамидного порошка составляет 1:20, чем и обьясняется больший расход полиамида.

При проведении процесса под словами

"интенсивное перемешивание" подразумевается перемешивание с равномерным распределением полиамидного порошка по всему обьему экстракта.

Поскольку ранее использованный флуориметрический метод не позволяет отличить и римесь к ДКВ родственного флавоноидного соединения — дигидрокемпферола (аромадендрина) иэ-за их неодинаковых спектральных характеристик, то приводимая в прототипе степень чистоты

ДКВ завышена. Как видно из хроматограмм, полученных современным методом ВЭЖХ— получаемый в заявляемом способе ДКВ имеет спепень чистоты 97,27ь с примесью

2,8 дигидрокемпферола (рис. 2), à полученный в условиях прототипа ДКВ по данным флуориметрического анализа имеет

94 степень чистоты, а по данным ВЭЖХ—

81,1 с примесью 2,8 аромадендрина и

2,6 нарингенина (рис, 1).

Таким образом, предлагаемый способ выделения ДКВ позволяет сократить время способа с 26 часов по прототипу по 11,4 часа и повысить степень очистки целевого продукта с 94 до 97, На фиг. 1 представлена хроматограмма субстанции ДКВ, полученной в условиях прототипа; по данным флуориметрического анализа содержит 94 ДКВ, по методу

ВЭЖХ 81,1%; на фиг. 2 — хроматограмма субстанции ДКВ, полученной по заявляемому способу: по методу ВЭЖХ содержит

97 2 ß ДКВ

Использовался жидкостный хроматограф "Милихром", сорбент Сепарон 18, колонна 60 2,1 мм. Подвижная фаза ацетонитрил-2 -ная уксусная кислота, 30;70 об. Скорость потока 50 мкл/мин, УФдетектор, аналитическая длина воды 290 нм.

Обьем вводимой пробы 2 мкл раствора ДКВ и ацетонитриле с концентрацией 1 мгlмл.

При использовании предлагаемого спосаба сокращается время на выделения ДКВ, (56) Авторское свидетельство СССР

М 351847, кл, С 07 D 7/24, 1970.

2000797

П ототип

2 ч

2 ч ние ние

2ч порошком

2,5ч

Фильтрование

0,5 ч

2ч ка

2,5 ч смесью

Фильтрование

Упаривание

0,5ч

2,5ч

0,5 ч

2 %-ной HCI

Упаривание

1 ч сушка по ошка

ИТОГО: 26ч

ИТОГО: 11,4 ч

Экстракция опилок древесины лиственницы водой при нагревании 2ч

Охлаждение экстракта и фильтроваПодготока колонки к хроматографированию 1ч

Пропускание экстракта

Промывка колонки водой 7 ч

Элюирование колонки водно-ацетоновой

Регенерация сорбента ацетоном

2,5ч

Контроль за ходом хроматографического процесса 2ч

Формула изобретения

СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ ДИГИДРОКВЕРЦЕТИНД путем экстракции опилок древесины лиственницы водой при нагревании, охлаждения, фильтрования и упаривания, отличающийся тем, что, с целью сокращения времени способа и повышения степаЗаявляемый способ

Экстракция опилок древесины лиственницы водой при нагревании 1ч

Охлаждение экстракта и фильтроваПеремешивание экстракта с полиамидным

Высушивание полиамидного порошЭкстракция этилацетатом: 1-я стадия регенерации полиамидного порошка,5 ч

Кристаллизация: растворение 0,5 ч охлаждение и выпадение кристаллов 0,5 ч фильтрование 0,15 ч

Регенерация (2-я стадия) полиамидного ни очистки, в охлажденный экстракт вносят полиамидный порошок в соотношении 1: 10, смесь перемешивают в течение

2 ч, отфильтрованный полиамидный порошок высушивают, целевой продукт экстрагируют этилацетатом и кристаллизуют его из горячей воды.

2000797

2000797 европ

О 2 08 Р lan 1O erg

Iuz Я

Составитель Т.Проскурина

Гехред М.Моргентал Корректор Е. Папп

Редактор

Заказ 3096

Тираж Подписное

НГ10 "Поиск" Роспатента

113035. Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издэтеллский комбинат "Патент". r. Ужгород, ул.l r аринa 101