Способ экспериментального заражения крупного рогатого скота

 

Использование: ветеринария, экспериментальное заражение, сибирская язва. Сущность изобретения: перорально вводят споровую культуру высоковирулентного сибиреязвенного штамма "Ч-7", которую заключают в желатиновые капсулы объемом 0,6-0,7 см³ и помещают в кусочки хлеба размером 4-4,5 · 2-2,5 · 3-3,5 см³. Кусочки хлеба охотно поедаются животными, что обеспечивает попадание всей дозы инфекционного материала в организм. При этом культуру каждому животному задают в 3-4 капсулах. Доза заражения составляет 0,75-1,5 млрд. спор. 3 табл.

Изобретение относится к ветеринарии и инфекционной патологии, в частности к способам заражения животных, и может быть использовано при оценке эффективности средств специфической профилактики сибирской язвы сельскохозяйственных животных (вакцины, лечебные сыворотки и т.д.), а также для получения кож животных, павших от этой инфекции, которые необходимы для проверки активности и специфичности преципитирующей сибиреязвенной сыворотки.

Известен способ заражения, при котором легко воспроизводится сибирская язва, заканчивающаяся гибелью животных (белые мыши, морские свинки, кролики, овцы, козы, северные олени, лошади). Эти способы предусматривают введение культуры возбудителя сибирской язвы животным подкожно или внутрикожно с помощью шприца. Обычно применяют культуру в споровой форме, что позволяет легко дозировать инфекционный материал, определять ЛД₅₀ и, безусловно, смертельную его дозу. Существование указанных способов заражения перечисленных видов животных дает возможность оценивать активность специфических препаратов, применяемых при сибирской язве, так как на фоне гибели контрольных, иммунизированные животные в том или ином проценте остаются живыми (ГОСТ 15991-86 "Вакцина СТИ живая против сибирской язвы животных").

В естественных условиях крупный рогатый скот является высокочувствительным видом к данному заболеванию, легко заражается и погибает в течение двух-пяти дней после инфицирования организма. Однако все испытанные до настоящего времени способы искусственного заражения крупного рогатого скота культурами возбудителя сибирской язвы приводили к переболеванию животных, но, как правило, летальный эффект получить не удавалась. Были испытаны подкожный (Л.Пастер, 1881; Х.Х. Абдуллин с соавт. 1970-1975), внутрикожный (С.Г. Колесов с сотр.) способы введения культуры, а также инокуляция ее с кормом, смешанным с толченным стеклом для вызывания повреждения слизистой оболочки рта и пищевода (Л.Пастер); в подслизистую губы (Ш.Х.Харисов с сотр. 1970-1971; Г. И. Романов с соавт. 1974), интратрахеально (Г.И.Романов со специалистами Орловской биофабрики, 1983), непосредственно в легкие (Н.П.Буравцева с соавт. 1983). При испытании различных способов инфекционный материал вводили как в вегетативной, так и в споровой формах в огромных дозах, доходящих до 50 млрд. микробных тел (Г.И.Романов с сотр. 1983), применяли культуры различных по вирулентности штаммов (Ч-7, 1159, 81, СО₁, ЗБК₂ и др.). Испытан метод введения культуры возбудителя сибирской язвы в соски вымени коров (Н. П.Буравцева с соавт. 1983).

Поскольку разработанные методы, средства и схемы специфической профилактики сибирской язвы, выполненные на овцах, и экстраполированные на крупном рогатом скоте, не отвечают современным требованиям борьбы с сибиреязвенной инфекцией, существует необходимость разработки надежного и достоверного метода оценки эффективности специфических препаратов на крупном рогатом скоте. Кроме того, парентеральные методы введения культуры крупному рогатому скоту не являются адекватными естественному способу заражения животных, поскольку заражение их со смертельным исходом на пастбищах в основном происходит через корм (перорально). Учитывая сказанное, мы решили испытать пероральный метод заражения крупного рогатого скота.

Целью изобретения является разработка эффективного метода заражения крупного рогатого скота возбудителем сибирской язвы с высоким летальным исходом.

Для достижения поставленной цели предлагается способ перорального введения споровой культуры высоковирулентного сибиреязвенного штамма "Ч-7", которую заключают в желатиновые капсулы, вместимостью 0,6-0,7 см³, а последние помещают в кусочки хлеба размером 4-4,5 х 2-2,5 х 3-3,5 см³. Кусочки хлеба охотно поедаются животными, что обеспечивает попадание всей дозы инфекционного материала в организм. Существенным моментом при использовании данного метода является и то, что каждому животному культуру задают в нескольких капсулах (не менее трех штук).

Введение культуры в капсулах позволяет предупредить распространение возбудителя во внешней среде, как это происходит в случае когда животных заражают с инфицированным кормом, что является важным моментом соблюдения требований противоэпидемического режима.

Способ заражения, предлагаемый нами, состоит из следующих этапов: приготовление споровой культуры, изучение ее свойств и определение содержания живых спор в 1 см³ культуры; заключение изготовленной культуры в желатиновые капсулы и помещение последних в кусочки хлеба; скармливание опытным животным кусочков хлеба с инфицированным материалом.

П р и м е р 1. Приготовление спорового инфекционного материала, изучение культуральных, морфологических, биологических свойств, определение содержания живых спор в 1 см³ культуры проводится так же, как культуры сибиреязвенного вакцинного штамма СТИ-1 по методике, описанной в "Инструкции по изготовлению и контролю вакцины СТИ против сибирской язвы животных", утвержденной Главным управлением ветеринарии Госагропрома СССР 16 февраля 1987 года и ГОСТ 15991 "Вакцина СТИ живая против сибирской язвы животных".

Изготовленную и изученную культуру с известной концентрацией (0,75-1,5 млрд. спор) наливают по 0,5 см³ в желатиновые капсулы. Каждую капсулу помещают в кусочек хлеба, в котором предварительно делают гнездо глубиной 3-3,5 см и диаметром соответствующим толщине капсулы (0,6-0,8 см), а затем отверстие гнезда закрывают хлебом.

Подготовленные описанным способом кусочки хлеба в количестве по 3-4 штуки скармливают животным, которые охотно поедают их. Никакой фиксации животных не требуется. Животные тяжело переболевают и, как правило, погибают от сибирской язвы в течение не более 100 ч.

Для сравнения в качестве известных способов заражения животных были использованы парентеральные методы введения культуры (в подслизистую губы, в лимфоузел), а также испытана культура другого вирулентного сибиреязвенного штамма 1159. Результаты опыта приведены в табл. 1. Как видно из данных, приведенных в табл. 1, вызвать заболевание с характерной клиникой сибирской язвы и гибелью животных удается только при применении предлагаемого перорального способа.

П р и м е р 2. Шесть голов телят 7-9 месячного возраста были заражены перорально предлагаемым методом культурой штамма "Ч-7". Животным первой группы (3 головы) было скормлено по 3 капсулы, в каждой из которых содержалось по 0,25 млрд. спор в объеме 0,5 см³ (доза заражения 0,75 млрд. спор). Животным второй группы (3 головы) было скормлено по 3 капсулы, в каждой из которых содержалось по 0,5 млрд. спор в объеме 0,5 см³ (доза заражения 1,5 млрд. спор).

Результаты заражения крупного рогатого скота культурой возбудителя сибирской язвы штамма "Ч-7" пероральным способом (предлагаемый способ) приведены в табл. 2. Как видно из данных, помещенных в табл. 2, все животные, зараженные в дозах 0,75-1,5 млрд. спор предлагаемым способом, погибли от сибирской язвы.

П р и м е р 3. С целью изучения возможности применения предлагаемого метода для оценки специфической активности вакцины СТИ против сибирской язвы, а также возможности изучения иммунитета против данной инфекции у крупного рогатого скота, привитого противосибиреязвенными вакцинами, был поставлен следующий опыт. Четыре головы крупного рогатого скота в возрасте 9 месяцев были вакцинированы противосибиреязвенной вакциной СТИ серии N 48, изготовленной Орловской биофабрикой 16 октября 1985 года, в объеме по 0,75 см³ (согласно Наставлению по применению указанного препарата). Через 15 дней вакцинированные животные одновременно с двумя бычками такого же возраста, которым вакцину не вводили, были заражены предлагаемым пероральным способом в дозе по 0,75 млрд. спор. Результаты заражения приведены в табл. 3.

Из данных, приведенных в табл. 3, видно, что все вакцинированные животные остались живыми, а контрольные погибли от сибирской язвы.

Таким образом, предлагаемый способ заражения крупного рогатого скота по сравнению с известными способами позволяет вызвать заболевание животных сибирской язвой с хорошо выраженными характерными клиническими признаками болезни, которое заканчивается гибелью практически всех зараженных интактных животных. Предлагаемый способ позволяет оценить наличие иммунитета у вакцинированных животных и тем самым вооружает ветеринарную практику надежным методом заражения крупного рогатого скота, который найдет широкое применение при оценке эффективности специфических противосибиреязвенных препаратов, а также открывает перспективу более глубокого изучения иммуногенеза при сибирской язве.

Предлагаемый способ выгодно отличается от известных по удобству технического выполнения, при котором отпадает необходимость стерилизации шприцев, фиксации животных и нанесения им травм во время исполнения приема.

Формула изобретения

СПОСОБ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОГО ЗАРАЖЕНИЯ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА, предусматривающий введение культуры возбудителя сибирской язвы, отличающийся тем, что из культур возбудителя используют споровую культуру штамма Bacillus antrucis Ч-7, при этом введение осуществляют перорально в дозе 0,75 - 1,5 млрд. живых спор, заключенных в 3 - 4 желатиновых капсулах объемом 0,6 - 0,7 мл и помещенных в кусочки хлеба размером 4 - 4,5 · 2 - 2,5 · 3 - 3,5 см³.

РИСУНКИ

Рисунок 1