Бициклические гетероароматические соединения в качестве lh агонистов и фармацевтическая композиция

Изобретение относится к новому производному бициклического гетероароматического соединения общей формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли

обладающему агонистической активностью в отношении лютеинизирующего гормона (LH). Соединения могут быть использованы для получения лекарственных средств для контроля способности к зачатию. В соединениях общей формулы (I) R¹ представляет R⁷; R⁷ представляет (6-10С)арил, необязательно замещенный в орто- и/или мета-положении атомом галогена; NHR⁸, OR⁸, где R⁸ означает (1-8С)алкил, который может быть замещен атомом галогена, (1-8С)алкилкарбонил, (1-8С)алкилкарбонилокси, фенил, (6-10С)арилкарбониламино, 5-метил-2-фенилимидазол-4-илом, (6С)гетероциклоалкилом, в котором 1-2 гетероатома, выбранных из азота и кислорода, этилоксикарбонилметилтио(1-4С)алкокси, амино, (6-7С)гетероарилом; или (5-6С)гетероарил, содержащий в качестве гетероатома азот, кислород или серу; R² представляет (1-8С)алкил, либо (6-10С)арил, необязательно замещенный одним или более заместителями, выбранными из (1-8С)алкокси; или (5-6С)гетероарил, содержащий в качестве гетероатома азот, кислород или серу; R³ представляет (1-8C)алкил, возможно замещенный (6-14С)арилом, возможно замещенный галогеном, (1-4С)алкокси, (1-4С)алкоксикарбонилом, моно- или три(6-10С)циклоалкилом, (6-10С)арилом, (5-6C)гетероарилом, содержащим в качестве гетероатома азот, кислород или серу; (5-7С)гетероциклоалкилом, содержащим 2 гетероатома, выбираемых из азота или кислорода; (3-8С)циклоалкил, (2-7С)гетероциклоалкил, содержащий 2 гетероатома, выбираемых из азота или кислорода; либо (6-10С)арил, необязательно замещенный одним или более заместителями, выбранными из (1-8С)алкокси; Х представляет S или N(R⁴); Y представляет N; R⁴ представляет Н, (1-8С)алкил, фенил(1-8С)алкил; или Х представляет S, а Y представляет СН; Z представляет NH₂ или ОН; А представляет S, О или связь; В представляет N(H), O или связь. Изобретение также относится к фармацевтической композиции. 3 н. и 11 з.п. ф-лы, 1 табл.

 

Изобретение относится к соединениям, обладающим агонистической или ангонистической активностью в отношении гликопротеинового гормона, в частности к соединениям, обладающим агонистической активностью в отношении лютеинизирующего гормона (LH). Кроме того, изобретение относится к производным бициклических гетероароматических соединений, к содержащим их фармацевтическим композициям, а также к применению данных соединений в лечебной терапии, в частности, при использования для контроля зачатия.

Гонадотропины выполняют важные функции во множестве функций тела, включая мегаболизм, регулирование температуры и репродуктивный процесс. Гипофизарный гонадотропин FSH, например, играет стержневую роль в стимулировании развития и созревания фолликула, тогда как LH индуцирует овуляцию (Sharp R.M., Clin. Endocrinol. 33:787-807, 1990; Dorrington и Armstrong, Recent Prog.Horm.Res. 35:301-342, 1979). В настоящее время LH применяют клинически, в сочетании с FSH для стимуляции яичников, то есть гиперстимуляции яичников для оплодотворения in vitro (IVF) и индуцирования овуляции у бесплодных ановулярных женщин (Insler V., Int.J.Fertility 33:85-97, 1988, Navotg и Rosenwaks, J.Vitro Fert.Embryo Transfer 5:3-13, 1988), а также в случае мужского гипогонадизма и мужского бесплодия.

Гонадотропины действуют на специфические клетки половых желез для инициирования дифференцировки и стероидогенеза яичников и семенников. Действие данных гипофизарных и плацентарных гормонов опосредовано специфическими плазматическими мембранными рецепторами, которые являются членами большого семейства G-протеинсвязанных рецепторов. Они состоят из отдельного полипептида с семью трансмембранными доменами и способны взаимодействовать с Gs протеином, приводя к активизации аденилциклаэы.

Гонадотропины, предназначенные для терапевтических целей, могут быть выделены из источника мочи человека и имеют низкую чистоту (Morse et al., Amer.J.Reproduct.Immunol. и Microbiology 17:143, 1988). Альтернативно, они могут быть получены как рекомбинантные гонадотропины.

Как и в случае других терапевтических белков, гонадотропины необходимо вводить или подкожно или внутримышечно. Было бы несомненным преимуществом, однако, активировать рецептор с помощью небольшой молекулы, которую можно было бы вводить посредством, например, перорального или чрескожного пути введения.

В настоящем изобретении описано получение таких низкомолекулярных аналогов гормонов, которые селективно активируют один из гонадотропиновых рецепторов. Это следует рассматривать в качестве одного из главных преимуществ настоящего изобретения.

Таким образом, изобретение относится к бициклическим гетероароматическим производным общей формулы I или их фармацевтически приемлемой соли, или их сольвату

где R¹ представляет NR⁵R⁶, OR⁵, SR⁵ или R⁷, предпочтительно R¹ представляет R⁷;

R⁵ и R⁶ независимо выбраны из Н, (1-8С)алкила, (2-8С)алкенила, (2-8С)алкинила, (3-8С)циклоалкила, (2-7С)гетероциклоалкила, (1-8С)алкилкарбонила, (6-14С)арилкарбонила, (6-14С)арила или (4-13С)гетероарила, или R⁵ и R⁶ вместе объединены в (2-7С)гетероциклоалкильное кольцо;

R⁷ представляет (3-8С)циклоалкил, (2-7С)гетероциклоалкил, (6-14С)арил или (4-13С)гетероарил, предпочтительно R⁷ представляет (6-14С)арил или (4-13С)гетероарил;

R² представляет (1-8С)алкил, (2-8С)алкенил, (2-8С)алкинил либо (6-14С)арил или (4-13С)гетероарил, оба необязательно замещенные одним или более заместителями, выбранными из (1-8С)алкила, (1-8С)алкилтио, (1-8С)(ди)алкиламино, (1-8С)алкокси, (2-8С)алкенила или (2-8С)алкинила;

R³ представляет (1-8С)алкил, (2-8С)алкенил, (2-8С)алкинил, (3-8С)циклоалкил,-(2-7С)гетероциклоалкил либо (6-14С)арил или (4-13С)гетероарил, оба необязательно замещенные одним или более заместителями, выбранными из (1-8С)алкила, (1-8С)(ди)алкиламино или (1-8С)алкокси, предпочтительно R³ представляет (1-8С)алкил, более предпочтительно (1-4С)алкил, даже более предпочтительно R³ представляет изопропил или трет-бутил;

Х представляет S, О или N(R⁴);

R⁴ представляет Н, (1-8С)алкил, (1-8С)алкилкарбонил, (6-14С)арилкарбонил или (6-14С)арил(1-8С)алкил;

Y представляет СН или N, предпочтительно Y представляет N;

Z представляет NH₂ или ОН;

А представляет S, N(H), N(R⁹), О или связь;

R⁹ может быть выбран из тех же групп, которые описаны для R², и В представляет N(Н), О или связь.

Алкильная группа, алкенильная группа или алкинильная группа, если присутствует в R⁵ и/или R⁶ в указанной выше формуле, может быть необязательно замещена одним или более заместителями, выбранными из гидроксила, (6-14С)арила, (1-8С)алкокси, (1-8С)алкилкарбонилокси, (6-14С)арилкарбонилокси, (1-8С)алкоксикарбонила, (6-14С)арилоксикарбонила, (1-8C)алкилкарбонила, (6-14С)арилкарбонила, амина, (1-8С)алкиламинокарбонила, (6-14С)ариламинокарбонила, (1-8С) алкилкарбониламино, (6-14С)арилкарбониламино, (6-14С)(ди)ариламино и/или (1-8С)(ди)алкиламино.

Если R⁷ представляет (6-14С)арил или (4-13С)гетероарил, арил может быть необязательно замещен в орто и/или мета-положении одним или более заместителями, выбранными из R⁸, (6-14С)арила, (4-13С)гетероарила, (2-7С)гетероциклоалкила, (3-8С)циклоалкила, NHR⁸, OR⁸ и/или SR⁸, где R⁸ представляет (6-14C)арил, (4-13C)гетероарил, (1-8C)алкилкарбонил, (6-14С) арилкарбонил, (1-8С)алкил, (2-8С)алкенил, (2-8C)алкинил, алкильная группа которых может быть необязательно замещена одним или более заместителями, выбранными из гидроксила, (1-8С)алкокси, (2-7С)гетероциклоалкил((1-8С)алкокси, (3-8)циклоалкил((1-8С)алкокси, (6-14С)арил((1-8С)алкокси, (4-13С)гетероарил((1-8С)алк)окси, (2-7С)гетероциклалкила, (3-8С) циклоалкила, (6-14С)арила, (4-13С)гетероарила, (1-8С) алкоксикарбонила, (6-14С)арилоксикарбонила, (1-8C)алкилкарбонилокси, (1-14С)арилкарбонилокси, (1-8С)алкилкарбонила, (6-14С)арилкарбонила, амино, (1-8С)алкиламинокарбонила, (6-14С)ариламинокарбонила, (1-8С)алкилкарбониламино, (6-14С)арилкарбониламино, (6-14С)(ди)ариламино и/или (1-8C)(ди)алкиламино. Предпочтительно заместители при ариле в R⁷ выбраны из NHR⁸ или OR⁸. R⁸ предпочтительно представляет (1-8С)алкилкарбонил, (6-14C)арилкарбонил, (1-8С)алкил. Большинство предпочтительных заместителей в алкильной группе представляют (2-7С)гетероциклоалкил, (1-6С)(ди)алкиламино и амин.

Алкильная группа, алкенильная группа или алкилнильная группа, если они присутствуют в R⁹ или R² в указанной выше формуле, необязательно могут быть замещены одним или более заместителями, выбранными из (6-14С)арила, (4-13С)гетероарила, (1-8С)алкилкарбонила, (6-14С)арилкарбонила, (1-8C)алкилкарбонилокси, (6-14C)арилкарбонилокси, (6-14С)арилоксикарбонила и/или (1-8С)алкоксикарбонила.

Алкильная группа, алкенильная группа или алкинильная группа, если они присутствуют в R³ в указанной выше формуле, необязательно могут быть замещены одним или более заместителями, выбранными из гидроксила, (1-8С)алкокси, (6-14С)арилокси, (3-8С)циклоалкил((1-8С)алк)окси, (2-7С)гетероциклоалкил((1-8С)алк)окси, (6-14С)арил((1-8С)алк)окси, (4-13С)гетероарил((1-8С)алк)окси, (2-7С)гетероциклоалкила, (6-14С)арила, (4-13С)гетероарила, (1-8С)алкоксикарбонила, (6-14С)арилоксикарбонила, (1-8С)алкилкарбонилокси, (6-14С)арилкарбонилокси, (1-8С)алкилкарбонила, (6-14С)арилкарбонила, амино, (1-8С)алкиламинокарбонила, (6-14С)ариламинокарбонила, (1-8С)алкилкарбониламино, (6-14С)арилкарбониламино, (6-14С)(ди)ариламино или (18С)(ди)алкиламино.

Предпочтительными соединениями согласно изобретению являются соединения общей формулы I, где Х представляет S и/или Z представляет NH₂. Среди данных предпочтительных соединений особенно предпочтительными являются те, в которых Х представляет S и Z представляет NH₂, даже более предпочтительными соединениями являются те, где в дополнение Y представляет N. Наиболее предпочтительными являются соединения, в которых, в дополнение к указанным выше определениями X, Z и Y, R¹ определен как представляющий собой (6-14С)арил и (4-13С)гетероарил. Наиболее предпочтительно А представляет S.

Сверхпредпочтителывами соединениями изобретения являются производные бициклических гетероароматических соединений, имеющие общую формулу I, где

R¹ представляет (6-14С)арил или (4-13С)гетероарил,

R² представляет (1-8С)алкил, (2-8С)алкенил, (2-8С)алкинил либо (6-14С)арил или (4-13С)гетероарил, оба необязательно замещенные одним или более заместителями, выбранными из (1-8С)алкила, (1-8С)алкилтио, (1-8С)алкокси, (2-8С)алкеиила или (2-8С)алкинила,

R³ представляет (1-8С)алкил, (2-8С)алкенил, (2-8С)алкинил, (3-8С)циклоалкил, (2-7С)гетероциклоалкил либо (6-14С)арил или (4-13С)гетероарил, оба необязательно замещенные одним или более заместителями, выбранными из (1-8С)алкила, (1-8С)(ди)алкиламино или (1-8С)алкокси,

Х представляет S, Z представляет NH₂, А представляет S и В представляет N(Н), О или связь.

Данные соединения имеют общую структуру

R¹ представляет (6-10С)арил, необязательно замещенный одним или более заместителями, выбранными из (1-8С)алкокси, галогена, (1-4С)алкокси, (1-4С)алкоксикарбонила, или (5-6С)гетероарил, содержащий в качестве гетероатома азот, кислород или серу;

R² представляет (1-8С)алкил, (6-10С) арил, необязательно замещенный одним или более заместителями, выбранными из (1-8С)алкокси, или (5-6С)гетероарил, содержащий в качестве гетероатома азот, кислород или серу,

R³ представляет (1-8С)алкил, возможно замещенный галогеном, (1-4С)алкокси, (1-4С)алкоксикарбонилом моно- или три(6-10С)циклоалкилом, (6-10С)арилом, (5-6С)гетероарилом, (5-7С)гетероциклоалкилом, содержащим в качестве гетероатома азот, кислород или серу; (3-8С)циклоалкип, (2-7С)гетероциклоалкил либо (6-10С)арил, необязательно замещенной одним или более заместителями, выбранными из (1-8С) алкокси;

В представляет N(H), О или связь; Y представляет СН или N.

Наиболее предпочтительными соединениями являются соединения общей формулы I, более предпочтительно общей формулы II, где В представляет N или О, при этом наиболее предпочтительно, когда B представляет N. R² и/или R³ предпочтительно представляют (1-8С)алкил, более предпочтительно (1-4С)алкил, и Y предпочтительно представляет N.

Особенно предпочтительными соединениями согласно изобретению являются те, в которых R³ представляет изопропил или трет-бутил, при этом трет-бутил является наиболее предпочтительным.

Из изобретения исключены соединения, представляющие собой метил-5-амино-4-фенил-2-метилтиотиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоксилат, этил-5-амино-4-фенил-2-метилтиотиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоксилат, метил-5-амино-4-(4-метоксифенил)-2-метилтиотиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоксилат, этил-5-амино-4-(4-метоксифенил)-2-метилтиотиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоксилат, метил-5-амино-4-(4-хлорфенил)-2-метилтиотиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоксилат или этил-5-амино-4-(4-хлорфенил)-2-метилтиотиено[2, 3-d]пиримидин-6-карбоксилат.

Исключенные из заявляемого объема притязаний соединения описаны в публикациях Phosph.Sulf.Sil.Rel.Chem: 60, 223-231, 1991; J.Chem.Res., Synop.(6):290-291, 1998, и Sulfur Lett. 9:101-108, 1989.

Термин (1-8С)алкил, как он использован в определении формул I и II, означает разветвленную или неразветвленную алкильную группу, имевшую 1-8 атомов углерода, например метил, этил, пропил, изопропил, бутил, втор-бутил, трет-бутил, гексил и октил (1-6С). Алкильные группы являются предпочтительными, при этом наиболее предпочтительной является (1-3С)алкильная.

Термин (2-8С)алкенил означает разветвленную или неразветвленную алкенильную группу, имеющую 2-8 атомов углерода, такую как этенил, 2-бутенил и т.д.

Термин (2-8С)алкинил означает разветвленную или неразветвленную алкинильную группу, имеющую 2-8 атомов углерода, такую как этинил и пропинил.

Термин (3-8С)циклоалкил означает циклоалкильную группу, имеющую 3-8 атомов углерода, представляющую собой циклопропил, циклобутил, циклогексил, циклогептил или циклооктил.

Термин (2-7С)гетероциклоалкил означает гетероциклоалкильную группу, имеющую 3-8 атомов углерода, предпочтительно 3-5 атомов углерода, и включающую по крайней мере один гетероатом, выбранный из N, О и S. Предпочтительными являются N или О. Наиболее предпочтительны пиперидин, морфолин и пирролидин.

Термин (1-8С)алкокси означает алкоксильную группу, имеющую 1-8 атомов углерода, где алкильный фрагмент имеет такие же значения, как определено выше. (1-6С)Алкоксильные группы являются предпочтительными, наиболее предпочтительной является (1-3С)алкоксигруппа.

Термин (1-8С)алкоксикарбонил означает алкоксикарбонильную группу, в которой алкильная группа содержит 1-8 атомов углерода и имеет такие же значения, как определено выше.

Термин (1-8С)(ди)алкиламино означает (ди)алкиламиногруппу, имеющую 1-8 атомов углерода, где алкильная группа имеет такие же значения, как определено выше.

Термин (6-14С)(ди)ариламино означает (ди)ариламиногруппу, имеющую 6-14С атомов углерода, арильный фрагмент имеет такие же значения, как определено выше.

Термин (1-8С)алкилтио означает алкилтиогруппу, имеющую 1-8 атомов углерода, алкильный фрагмент имеет такие же значения, как определено выше.

Термин (6-14С)арил означает ароматическую углеводородную группу, имеющую 6-14 атомов углерода, такую как фенил, нафтил, тетрагидронафтил, инденил, антрацил, которая необязательно может быть замещена одним или более заместителями, такими как, но не ограничиваясь ими, гидрокси, галоген, нитро, трифторметил, циано, (1-8С) алкилкарбониламино, (1-8С)алкиламинокарбонил или (1-8С)(ди)алкиламино, при этом алкильные фрагменты имеют такие же значения, как определено выше. Предпочтительной ароматической углеводородной группой является фенил.

Термин (6-14С)арилоксикарбонил означает арилоксикарбонильную группу, в которой арильная группа содержит 6-14 атомов углерода и имеет такие же значения, как определено выше.

Термин (6-14С)арил(1-8С)алкил означает арилалкильную группу, имеющую 7-22 атома углерода, где алькильная группа представляет собой (1-8С)алкильную группу, и арильная группа представляет собой (6-14С)арил, как определено ранее. Предпочтительными арилалкильными группами являются фенил(1-8С)алкильные группы, такие как бензил.

Термин (4-13С)гетероарил означает замещенную или незамещенную ароматическую группу, имеющую 3-13 атомов углерода, предпочтительно 4-9, включающую, по крайней мере, один гетероатом, выбранный из N, О и/или S, такую как имидазолил, тиенил, бензтиенил, хинолил, тетрагидрохинолил, изохинолил, тетрагидроизохинолил, индолил, акридинолил, фурил или пиридил. Заместители гетероарильной группы могут быть выбраны из группы заместителей, перечисленных для арильной группы. Предпочтительными гетероарильными группами являются тиенил, фурил и пиридил.

Термин “присоединенный” в (2-7С)гетероциклоалкильном кольце в определении NR⁵R⁶, где R⁵ и R⁶ вместе с атомом азота, с которым они связаны, представляют кольцо, означает кольцо, содержащее атом азота и дополнительно имеющее вплоть до 2-7 атомов углерода, причем указанное кольцо может содержать ненасыщенные связи или один или более гетероатомов, выбранных из N, О и/или S. Примерами таких колец являются азетидин, пирролидин, пиперидин, пиперазин, морфолин и тиоморфолин.

Термин галоген означает фтор, хлор, бром или иод.

Термин (2-7С)гетероциклоалкил(1-8С)алкокси означает гетероциклоалкильную группу, содержащую 3-8 атомов углерода, как определено выше, присоединенную к (1-8С)алкоксильной группе, где алкоксильный фрагмент имеет значение, определенное выше.

Термин (3-8С)циклоалкил(1-8С)алкокси означает циклоалкильную группу, содержащую 3-8 атомов углерода, как определено выше, присоединенную к (1-8С)алкоксильной группе, где алкоксильный фрагмент имеет значение, определенное выше.

Термин (6-14С)арил(1-8С)алкокси означает арильную группу, содержащую 6-14 атомов углерода, как определено выше, присоединенную к (1-8С)алкоксильной группе, где алкоксильный фрагмент имеет значение, определенное выше.

(4-13С)Гетероарилалкоксигруппы представляют собой аналоги (6-14С)арилалкоксигрупп, включая по крайней мере один гетероатом, выбранный из N, О и S.

Термин (1-8С)алкилкарбонил означает алкилкарбонильную группу, алкильная группа, которой содержит 1-8 атомов углерода и имеет такие же значения, как определено выше.

Термин (6-14С)арилкарбонил означает арилкарбонильную группу, арильная группа которой содержит 6-14 атомов углерода и имеет такое же значение, как определено выше.

Термин (1-8С)алкилкарбонилокси означает алкилкарбонилоксигруппу, алкильная группа которой содержит 1-8 атомов углерода имеет такие же значения, как определено выше.

Термин (6-14С)арилкарбонилокси означает арилкарбонилоксигруппу, арильная группа которой содержит 6-14 атомов углерода и имеет такое же значение, как определено выше.

Термин (1-8С)алкилиминокарбонил означает алкиламинокарбонильную группу, алкильная группа которой содержит 1-8 атомов углерода и имеет такое же значение, как определено выше.

Термин (6-14С)ариламинокарбонил означает ариламинокарбонильную группу, арильная группа которой содержит 6-14 атомов углерода и имеет такое же значение, как определено выше.

Термин (1-8С)алкилкарбониламино означает алкилкарбониламиногруппу, алкильная группа которой содержит 1-8 атомов углерода и имеет такое же значение, как определено выше.

Термин (6-14С)арилкарбониламино означает арилкарбониламиногруппу, арильная группа которой содержит 6-14 атомов углерода и имеет такое же значение, как определено выше.

Термин (2-7С)гетероциклоалкилокси означает гетероциклоалкильную группу, содержащую 3-8 атомов углерода, как определено выше, присоединенную к атому кислорода.

Термин (3-8С)циклоалкилокси означает циклоалкильную группу, содержащую 3-8 атомов углерода, как определено ранее, присоединенную к атому кислорода.

Термин (6-14С)арилокси означает арильную группу, содержащую 6-14 атомов углерода, как определено выше, присоединенную к атому кислорода. (4-13С)Гетероарилоксигруппы представляют собой аналоги (6-14С)арилоксигрупп, включая по крайней мере один гетероатом, выбранный из N, О и S.

Было показано, что соединения указанной выше формулы I способны связываться с LH рецептором и проявляют агонистическую по отношению к LH активность.

Изобретение дополнительно относится к фармацевтической композиции, включающей производное бициклического гетероароматического соединения или его соли, имеющего общую формулу I.

Фармацевтические композиции, которые включают этил-5-амино-4-фенил-2-этоксикарбонилметилтиотиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоксилат, метил-5-амино-4-фенил-2-метилтиотиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоксилат или этил-5-амино-4-фенил-2-метилтиотиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоксилат, подпадают под объем настоящего изобретения. Таким образом, соединения согласно изобретению могут использоваться в терапии. Дополнительный аспект изобретения относится к применению бициклического гетероароматического соединения, имеющего общую формулу I, для получения лекарственного средства для контроля способности к зачатию. Предпочтительно настоящие соединения используют для активации LH рецептора.

Производные бициклических гетероароматических соединений данного изобретения могут обладать одним или более хиральными атомами углерода. Следовательно, соединения могут быть получены в виде хирально чистых соединений или в виде смеси дистереомеров и/или энатиомеров. Способы получения хирально чистых соединений хорошо известны в данной области, например кристаллизация или хроматография.

Для терапевтического применения соли соединений формулы I представляют собой такие соли, в которых противоион является фармацевтически приемлемым. Однако кислотно-аддитивные соли оснований, соответствующих формуле I, могут также найти применение, например, для получения или очистки фармацевтически приемлемого соединения. Все соли независимо от того, являются ли они фармацевтически приемлемыми или нет, включены в объем настоящего изобретения.

Примеры кислотно-аддитивных солей включают соли, полученные из минеральных кислот, таких как хлористоводородная кислота, фосфорная кислота, серная кислота, предпочтительно из хлористоводородной кислоты, и органических кислот, таких как лимонная кислота, винная кислота, уксусная кислота, молочная кислота, малеиновая кислота, малоновая кислота, фумаровая кислота, гликолевая кислота, янтарная кислота и тому подобное.

Подходящие пути введения соединений формулы I или их фармацевтически приемлемых солей, также указанных в данном описании как активный ингредиент, представляют собой внутримышечные инъекции, подкожные инъекции, внутривенные инъекции или внутрибрюшинные инъекции, пероральное или внутриназальное введение. Предпочтительно соединения можно вводить перорально. Точная доза и режим введения активного ингредиента или его фармацевтической композиции необходимым образом будут зависеть от терапевтического действия, которое необходимо достигнуть (лечение бесплодия; контрацепция) и могут изменяться в зависимости от конкретного соединения, пути введения, возраста и состояния индивидуального субъекта, которому следует вводить данное лекарственное средство.

Обычно при парентеральном введении требуются более низкие дозы, чем при других методах введения, которые более зависят от абсорбции. Однако доза для человека предпочтительно составляет 0,0001-25 мг на 1 кг веса тела. Желаемая доза может присутствовать в виде одной дозы или в виде множества поддоз, вводимых через подходящие временные интервалы в течение дня, или, в случае реципиентов женского пола, в виде доз для введения с подходящими суточными интервалами в течение менструального цикла. Дозировка, также как и режим введения, могут различаться для реципиентов женского и мужского пола.

В случае in vitro или ex vivo применений, таких как IVF применения, соединения изобретения следует применять в инкубационной среде в концентрации приблизительно 0,01-5 мкг/мл.

Таким образом, настоящее изобретение также относится к фармацевтическим композициям, содержащим бициклическое гетероароматическое соединение согласно формуле I, включая в том числе фармацевтические композиции, содержащие этил-5-амино-4-фенил-2-этоксикарбонилметилтиотиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоксилат, метил-5-амино-4-фенил-2-метилтиотиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоксилат или этил-5-амино-4-фенил-2-метилтиотиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоксилат, 6-ацетил-5-амино-4-фенил-2-(2-оксопропилтио)тиено[2,3-d]пиримидин, 5-амино-6-бензоил-4-фенил-2-фенилкарбонилметилтиотиено[2,3-d]пиримидин или 5-амино-6-(4-хлорбензоил)-4-фенил-2-[(4-хлорфенил)карбонилметилтио]тиено[2,3-d]пиримидин в смеси с фармацевтически приемлемыми вспомогательными добавками и, необязательно, другими терапевтическими агентами.

Вспомогательные добавки должны быть “приемлемыми” в смысле совместимости с другими ингредиентами композиции и не должны оказывать вредного воздействия на реципиентов.

Фармацевтические композиции включают подходящие для перорального, ректального назального, местного (включая чрескожное, буккальное и сублингвальное), вагинального или парентерального (включая подкожное, внутримышечное, внутривенное и внутрикожное) введения. Композиции могут быть получены любыми способами, хорошо известными в области фармацевтики, например, с использованием таких способов, как описано Gennaro et al., Remington's Pharmaceutical Sciences (18^th ed., Mack Publishing company, 1990, в особенности, см. Part 8: Pharmaceutical Preparations и Their Manufacture (Часть 8: Фармацевтические препараты и их получение).

Такие способы включают стадию введения активного ингредиента в состав с любым вспомогательным агентом. Вспомогательный агент(ы), также именуемые вспомогательными ингредиентами, включают общепринятые в данной области (Gennaro, выше), такие как наполнители, связующие вещества, разбавители, дезинтегранты, смазывающие вещества, красители, вкусовые агенты и смачивающие агенты.

Фармацевтические композиции, подходящие для перорального введения, могут присутствовать в виде дискретных препаративных лекарственных форм, таких как пилюли, таблетки или капсулы, или в виде порошка или гранул, или в виде раствора или суспензии. Активный ингредиент также может присутствовать в виде болюса или пасты. Композиции дополнительно могут быть переработаны в суппозитории или клизмы для ректального введения.

Для парентерального введения подходящие композиции включают водные и неводные стерильные инъекции. Композиции могут присутствовать в контейнерах для единичной дозы или для множества доз, например в герметично закрытых сосудах или ампулах, и могут храниться в высушенном вымораживанием (лиофилизованном) виде, требующем только добавления стерильного жидкого носителя, например воды, перед употреблением.

Композиции или составы, подходящие для введения посредством назальной ингаляции, включают мелкоизмельченные порошки или тонкораспыленные жидкости, которые можно генерировать с помощью снабженных дозатором аэрозольных упаковок, распылителей или воздушных инжекторов.

Производные бициклических гетероароматических соединений изобретения также можно вводить в форме имплантируемых фармацевтических устройств, состоящих из ядра активного вещества, заключенного в контролирующую скорость высвобождения мембрану. Такие имплантаты применяют подкожно или местно, и они будут высвобождать активный ингредиент с приблизительно постоянной скоростью на протяжении относительно больших промежутков времени, например от недель до лет. Способы получения имплантируемых фармацевтических устройств как таковые известны в данной области, например описаны в Европейском патенте 0303306 (AKZO N.V.).

Таким образом, соединения согласно настоящему изобретению можно использовать в тех же клинических целях, что и природный LH, с тем преимуществом, что они проявляют измененные свойства стабильности и могут вводиться различными способами.

Соединения настоящего изобретения, где B=NH, представленные формулой (I-a), обычно могут быть получены в соответствии с известной в данной области реакцией конденсации кислоты формулы (III) с амином формулы (IV).

Указанное выше взаимодействие обычно проводят при комнатной температуре в подходящем растворителе, например в апротонном растворителе, таком как N,N-диметилформамид или дихлорметан, с использованием агента сочетания, такого как тетрафторборат O-(бензотриазол-1-ил)-N,N,N’,N’-тетраметилурония (TBTU) или гексафторфосфат бромтрипирролидинфосфония (PyBrOP), и третичного основания, например N,N-диизопропилэтиламина.

Аналогично соединения формулы (I), где В=O, представленные формулой (1-b), могут быть получены таким же способом, как описано выше для соединений формулы (I-a), исходя из кислот общей структуры (III) и спиртов формулы (V).

Соединения формулы (I), где В представляет связь, представленные формулой (I-c), могут быть получены конденсацией пиридилхлоридов (VI), где W = CN или C(O)(OEt), с соединениями общей структуры (VII) в подходящих растворителях, таких как этанол, метанол или тетрагидрофуран, при повышенной температуре (50°С) в присутствии основания, например этоксида натрия, метоксида натрия, карбоната калия или гидроксида калия.

Альтернативно, соединения формулы (I-c), где X = S, представленные формулой (I-d) могут быть получены из тиоамидов структуры (VIII), где W является таким, как определено выше, и соединений формулы (IX), где V = галоген, такой как бромид или хлорид, с использованием указанного выше способа.

Подобные циклизации описаны в литературе, см., например, Ю.А.Шаранин, А.М.Шестопалов и В.К.Промоненков, J.Org.Chem. USSR (Engl.Transl.), 20:1828, 1984, Z.H.Khalil и A.A.Geies, Phosph.Sulf.Silic.Relat.Elem. 60:223, 1991.

Подходящим способом получения промежуточных кислот (III) является известное в данной области омыление под действием оснований этиловых сложных эфиров общей формулы (X). Омыление происходит в присутствии основания, такого как гидроксид лития, гидроксид калия или гидроксид натрия, в смеси водного диоксана при повышенной температуре (от 80°С до температуры кипения с обратным холодильником).

Соединения формулы (X) могут быть получены циклизацией пиридилхлоридов (VI) с HXCH₂C(O)OEt, как описано выше при синтезе соединений (I-c). В некоторых случаях можно выделить промежуточный не подвергнутый циклизации продукт, который циклизуется при повторной обработке основанием. Альтернативно, соединения формулы (X), где X=S, также могут быть получены с помощью такого же способа, как описано для синтеза производных (I-d), циклизацией (VIII) с VCH₂C(O)OEt (IX), где V такой, как определено выше.

Подобные циклизации существуют в литературе. Например, тиено-циклизации описаны A.A.Santilli, D.H.Kim и S.V.Wanser, J.Heterocycl.Chem., 8:445, 1971; S.Kohra, Y.Tominaga и A.Hosomi, J.Heterocycl.Chem., 25:959, 1988; H.Vieweg, U.Krasselt, N.Bohm, J.Prantz и G.Wagner, Pharmazie 45:731, 1990; H.Vieweg и G.Wagner, Pharmazie 46:51, 1991; G.Wagner. H.Vieweg и S.Leitner, Pharmazie 48:588, 1993. Пирролоциклизации описаны, например, D.H.Kim и A.A.Santiili, J.Heterocycl.Chem., 6:819, 1969.

Соединения формулы (VI), где W такой, как определено выше, могут быть синтезированы в соответствии с литературными способами, например, описанными A.A.Santilli, D.H.Kim и S.V.Wanser, J.Heterocycl.Chem., 8:445, 1971. В типичном варианте осуществления амид общей структуры (XI) обрабатывают РОСl₃ при повышенной температуре (от 80°С до температуры кипения с обратным холодильником). Добавление подходящего растворителя, например диоксана, и/или добавление либо PCl₅, либо N,N-диметиланилина к реакционной смеси может привести к более короткому времени взаимодействия и более высоким выходам хлоридов (VI).

При другом подходе амиды (XI) могут быть обработаны при повышенной температуре (предпочтительно, температура кипения с обратным холодильником) SOCl₂, давая соединения формулы (VI), как описано в литературе D.H.Kim и A.A.Santilii, J.Heterocycl.Chem. 6:819, 1969.

Соединения формулы (VIII), где W является таким, как определено выше, могут быть получены обработкой производных (XI) сульфурирующим агентом, например P₂S₅, или реагентом Лоуссона (Lawesson), в подходящем растворителе, таком как пиридин, при повышенной температуре (предпочтительно, при температуре кипения с обратным холодильником), см. Z.H.Khalil, Phosph.Sulf.Silic.Relat.Elem. 60:223, 1991.

Кроме того, соединения общей формулы (VIII), где Y=CH и А представляет связь, представленные формулой (VIII-a), могут быть синтезированы циклизацией α,β-ненасыщенных кетонов формулы (XII) и тиоацетамида (XIII).

В типичном эксперименте соединения (XII) и (XIII) подвергают взамодействию в растворителе, таком как этанол, метанол или тетрагидрофуран, при повышенной температуре (предпочтительно, при температуре кипения с обратным холодильником) в присутствии основания, например пиперидина, триэтиламина, метоксида натрия или этоксида натрия. Подобные циклизации известны в литературе: H.Vieweg, V.Hanfeld, S.Leitner и G.Wagner, Pharmazie 44:639, 1989; H.Vieweg и G.Wagner, Pharmazie 46:51, 1991.

Альтернативно, соединения формулы (VIII-a, W=CN) могут быть синтезированы, исходя из α,β-ненасыщенных динитрилов общей структуры (XIV) и тиоацетамидов (XV), как описано G.A.H.Elgemeie, Heterocycles 31:123, 1990.

Соединения формулы (XI), где Y=N, представленные формулой (ХI-a), могут быть получены с помощью нескольких подходов на основе литературных данных.

Например, производные формулы (ХI-a), где R¹=(6-14)арил или (4-13С)гетероарил, могут быть синтезированы конденсацией этиловых сложных эфиров (XVI), где W является таким, как определено выше, с альдегидами (XVII) и соединениями (XVIII), которые могут представлять собой изотиомочевину (XVIII-a), изомочевину (XVIII-b), монозамещенные гуанидины (XVIII-c), дизамещенные гуанидины (XVIII-d) или амидины (XVIII-e).

В типичном эксперименте компоненты (XVI), (XVII) и (XVIIIa-e) суспендируют в подходящем растворителе, например этаноле, метаноле, N,N-диметилформамиде, N-метилпирролидиноне, тетрагидрофуране или пиридине, и добавляют основание, такое как карбонат калия, ацетат натрия, метоксид натрия или этоксид натрия. Взаимодействие происходит при повышенной температуре (от 70°С до температуры кипения с обратным холодильником). После фильтрования остаток помещают в воду и подкисляют (pH 2), после чего продукты (ХI-a) выпадают в осадок (S.Kambre, K.Saito и H.Kishi, Synthesis, 287 (1979); A.M.Abd-Alfattah, S.M.Hussain и А.М.El-Reedy, Tetrahedron, 39, 3197 (1983); S.M.Hussain, A.A.El-Barbary и S.A.Mansour, J.Heterocycl.Chem., 22, 169 (1985)). В случае, когда W=C(O)OEt, ароматизация происходит при добавлении окислителя, такого как DDQ или кислород. Подобные циклизации также можно проводить на твердом носителе, таком как смола Меррифилда (Merrifield) с использованием подходящего линкера, см., например, A.L.Mrzinzik и E.R.Felder, J.Org.Chem., 63, 723 (1998); T.Masquelin, D.Sprenger, R.Baer, F.Gerber и Y.Mercadal, Helv.Chim.Acta 81, 646 (1998).

Альтернативно, производные формулы (ХI-a), где R¹ не является (6-14С)арилом или (4-13С)гетероарилом, могут быть получены замещением Сl в производных формулы (VI-a) или замещением 4-SMe в соединениях формулы (XI-b).

Подобные реакции замещения известны в литературе, например, S.Kohra, Y.Tominaga и A.Hosomi, J.Heterocycl.Chem. 25:959, 1988; A.A.Santilli, D.H.Kim и S.V.Wanser, J.Heterocycl.Chem., 8:445, 1971; J.Clark, M.S.Shannet, D.Korakas и G.G.Varvounis, J.Heterocycl.Chem., 30:1065, 1993; S.Tumkevicius, Liebigs Ann.Org.Biorg.Chem. 9:1703, 1995.

Пиридины общей формулы (XI), где Y=CH, A=S и W=CN, представленные формулой (XX), получают последовательным алкилированием α,β-ненасыщенных динитрилов общей структуры (XIV) сероуглеродом и иодистым алкилом R²-I, с получением соединения общей формулы (XIX), как описано P.Milart, Tetrahedron 54:15643-156556, 1998. Последующая циклизация соединений формулы (XIX) в кислых условиях, как описано K.Peseke, Z.Chem., 29:442-443 (1989) дает пиридины общей формулы (XX).

Способы определения рецепторного связывания, а также in vitro и in vivo анализы для определения биологической активности гонадотропинов хорошо известны. Обычно экспрессированный рецептор приводят в контакт с исследуемым соединением и измеряют связывание или стимуляцию, либо ингибирование функционального ответа.

Для измерения функционального ответа выделенную ДНК, кодирующую LH-рецепторный ген, предпочтительно рецептор человека, экспрессируют в подходящих клетках-хозяевах. Такая клетка может представлять собой клетку яичника китайского хомяка, но также подходят и другие клетки. Предпочтительно клетки имеют происхождение от млекопитающих (Jia et al., Mol.Endocrin., 5:757-776, 1991).

Способы конструирования клеточных линий, экспрессирующих рекомбинантный LH, хорошо известны в данной области (Sambrook et al., Molecular Cloning: a Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, последнее издание). Экспрессия рецептора достигается экспрессией ДНК, кодирующей желаемый белок. Способы сайт-направленного мутагенеза, лигирования дополнительных последовательностей, ПЦР и конструкции подходящих экспрессирующих систем все, к настоящему времени, хорошо известны в данной области. Части или целиком ДНК, кодирующие желаемый белок, могут быть сконструированы синтетически с использованием стандартных твердофазных способов, предпочтительно для включения сайтов рестрикции для облегчения лигирования. Подходящие контрольные элементы для транскрипции и трансляции включенной кодирующей последовательности могут обеспечиваться ДНК-кодирующими последовательностями. Как хорошо известно, в настоящее время доступны экспрессионные системы, которые совместимы с большим множеством хозяев, в том числе прокариотическими хозяевами, такими как бактерии, и эукариотическими хозяевами, такими как дрожжи, клетки растений, клетки насекомых, клетки млекопитающих, птичьи клетки и тому подобное.

Экспрессирующие рецептор клетки затем приводят в контакт с исследуемым соединением, чтобы наблюдать связывание или стимуляцию, либо ингибирование функционального ответа.

Альтернативно, для измерения связывания соединения можно использовать выделенные клеточные мембраны, содержащие экспрессированный рецептор.

Для измерения связывания можно использовать радиоактивно или флуоресцентно меченные соединения. В качестве ссылочного соединения можно использовать рекомбинантный LH человека. В качестве альтернативы также можно осуществлять анализы конкурентного связывания.

Другой анализ включает скрининг соединений агонистов LH рецептора путем определения стимуляции рецептора, опосредованного цАМФ аккумуляцией. Таким образом, такой способ включает экспрессию рецептора на клеточной поверхности клетки-хозяина и подвергание клетки воздействию исследуемым соединением. Затем измеряют количество цАМФ. Уровень цАМФ будет снижаться или возрастать в зависимости от ингибирующего или стимулирующего действия исследуемого соединения при связывании с рецептором.

В дополнение к непосредственному измерению, например, уровней цАМФ в клетках, подвергаемых воздействию, можно использовать клеточные линии, которые в дополнение к трансфекции с помощью кодирующего ДНК рецептора также трансфектированы второй ДНК, кодирующей отчетный ген, экспрессия которого отвечает уровню цАМФ. Такие отчетные гены могут быть цАМФ-индуцируемыми или могут быть конструированы таким образом, чтобы они являлись связанными с новыми цАМФ-отзывающимися элементами. Обычно экспрессию отчетного гена можно контролировать любым ответным элементом, реагирующим на изменяющиеся уровни цАМФ. Подходящие отчетные гены представляют собой, например, LacZ, щелочную фосфатазу, люциферазу светлячков и зеленый флуоресцентный белок. Принципы таких трансактивационных анализов хорошо известны в данной области и описаны, например, в Stratowa Ch., Himmler А. и Czernilofsky A.P. (1995), Curr.Opin.Biotechnol. 6:574.

Для избирательных активных соединений исследование при 10^-5 М должно приводить к активности, превышающей на 20% максимальную активность в том случае, когда в качестве ссылки используют LH. Другим критерием может быть значение EC₅₀, которое должно быть <10^-5 М, предпочтительно <10^-7 М.

Для квалифицированного специалиста в данной области будет очевидно, что желаемые значения EC₅₀ зависят от исследуемого соединения. Например, соединение с EC₅₀, которое меньше 10^-5 М, обычно рассматривается в качестве кандидата для лекарственного отбора. Предпочтительно, данное значение составляет ниже 10^-7 М. Однако соединение, которое имеет более высокое значение EC₅₀, но является селективным для конкретного рецептора, даже может являться лучшим кандидатом.

Скрининг соединений, являющихся агонистами LH-рецептора, также может быть осуществлен с использованием биоанализа мышиных клеток Лейдига (Van Damme M., Robersen D. и Diczfalusy E. (1974). Acta Endocrinol. 77:655-671, Mannaerts В., Kloosterboer H. и Schuurs A. (1987). Neuroendocrinology of reproduction (Нейроэндокринология репродукции). R. Rolland et al., Eds., Elsevier Science Publishers B.V., 49-58). В данном анализе стимуляция LH-рецептора, опосредованная продуцированном тестостерона, может быть измерена в клетках Лейдига, выделенных у самцов мышей.

Для измерения in vivo активности соединений агонистов LH рецептора может быть исследовано индуцирование овуляции у незрелых мышей. В данном анализе незрелые самки мышей могут быть подвергнуты первичному воздействию FSH мочи и приблизительно через 48 часов обработаны соединением агонистом LH. Животных умерщвляют после обработки LH агонистом и число женских зародышевых клеток в яйцеводе оценивают с помощью микроскопии.

Соединения настоящего изобретения можно применять клинически при тех режимах, где в настоящее время используют LH или hCG. Это включает замену LH у субъектов с гипогонадальной пониженной функцией половых желез либо мужского, либо женского пола, введение в середине цикла для индуцирования овуляции (индуцирование овуляции (0I) или контролируемая гиперстимуляция (СОН)) или стимуляции желтого тела.

Следующие примеры являются иллюстрацией изобретения, и их никоим образом не следует интерпретировать для ограничения объема изобретения.

Пример 1

Этил-5-амино-4-(3-метоксифенил)-2-метилтиотиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоксилат

(а) 5-Циано-4-(3-метоксифенил)-2-метилтио-6-оксопиримидин

Смесь сульфата S-метилизотиомочевины (139 мг), 3-метоксибензальдегида (243 мкл), этилцианоацетата (112 мкл) и карбоната калия (145 мг) в абсолютном этаноле (2 мл) перемешивали при 60°С в течение 5 часов. Реакционную смесь охлаждали до 0°С на ледяной бане, фильтровали и остаток нагревали в воде до тех пор, пока не получали прозрачный раствор. Раствор подкисляли 2 н. НСl до рН 2 и охлаждали до 0°С на ледяной бане. Полученные кристаллы отфильтровывали и сушили в вакууме. Выход 186 мг.

Масс-спектр-ESI: [М+Н]⁺=274,2.

ТСХ: R_f=0,50, силикагель, дихлорметан/метанол=9/1 об/об.

(b) 6-Хлор-5-циано-4-(3-метоксифенил)-2-метилтиопиримидин

К перемешиваемому раствору 5-циано-4-(3-метоксифенил)-2-метилтио-6-оксопиримидина (305 мг) в сухом диоксане (1 мл) добавляли РОСl₃ (0,75 мл). После выдерживания в течение 3 часов при 80°С смесь охлаждали до 0°С на ледяной бане и медленно добавляли измельченный лед. После прекращения экзотермической реакции добавляли воду (3 мл), твердые вещества отфильтровывали и сушили в вакууме. Выход 244 мг.

Масс-спектр-ESI: [М+Н]⁺=292,2.

ТСХ: R_f=0,86, силикагель, дихлорметан.

(c) Этил-5-амино-4-(3-метоксифенил)-2-метилтиотиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоксилат

Этоксид натрия (1,4 н., 957 мкл) добавляли к перемешиваемому раствору этил-2-меркаптоацетата (92 мкл) и 6-хлор-5-циано-4-(3-метоксифенил)-2-метилтиопиримидина (244 мг) в сухом этаноле (4 мл). Через 3 часа при 50°С смесь охлаждали до 0°С на ледяной бане, разбавляли водой (5 мл) и твердые вещества собирали фильтрованием и сушили в вакууме. Выход 260 мг.

Масс-спектр-ESI: [М+Н]⁺=376,2.

ТСХ: R_f=0,44, силикагель, дихлорметан.

Пример 2

Этил-5-амино-2-этилтио-4-фенилтиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоксилат

Циклизацию S-этилизотиомочевины · НВr (185 мг), бензальдегида (203 мкл) и этилцианоацетата (117 мкл), обработку продукта РОСl_з и последующее взаимодействие с этил-2-меркаптоацетатом осуществляли в соответствии со способами, описанными в примере 1. Выход 49 мг.

Масс-спектр-ESI: [M+Н]⁺=360,2.

ТСХ: R_f=0,46, силикагель, дихлорметан.

Пример 3

Этил-5-амино-2-н-пентилтио-4-фенилтиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоксилат

Циклизацию S-н-пентилизотиомочевины (146 мг), бензальдегида (203 мкл) и этилцианоацетата (112 мкл), обработку продукта POCl₃ и последующее взаимодействие с этил-2-меркаптоацетатом осуществляли в соответствии со способами, описанными в примере 1. Выход 45 мг.

Масс-спектр-ESI: [М+Н]⁺=402,4.

ТСХ: R_f=0,57, силикагель, дихлорметан.

Пример 4

Этил-5-амино-2-н-пентилтио-4-(3-тиенил)тиено[2,3-d] пиримидин-6-карбоксилат

Циклизацию S-н-пентилизотиомочевины (146 мг), тиофен-3-карбоксальдегида (183 мкл) и этилцианоацетата (112 мкл), обработку продукта РОСl₃ и последующее взаимодействие с этил-2-меркаптоацетатом осуществляли в соответствии со способами, описанными в примере 1. Выход 4 мг.

Масс-спектр-ESI: [М+Н]⁺=408,2.

ТСХ: R_f=0,65, силикагель, дихлорметан.

Пример 5

Этил-5-амино-4-(3-фурил)-2-н-пентилтиотиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоксилат

Циклизацию S-н-пентилизотиомочевины (146 мг), 3-фуральдегида (129 мкл) и этилцианоацетата (112 мкл), обработку продукта РОСl₃ и последующее взаимодействие с этил-2-меркаптоацетатом осуществляли в соответствии со способами, описанными в примере 1. Выход 18 мг.

Масс-спектр-ESI: [М+Н]⁺=392,2.

TCX: R_f=0,60, силикагель, дихлорметан.

Пример 6

Этил-5-амино-2-бензилтио-4-фенилтиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоксилат

Циклизацию S-бензилизотиомочевины (203 мг), бензальдегида (203 мкл) и этилцианоацетата (112 мкл), обработку продукта РОСl₃ и последующее взаимодействие с этил-2-меркаптоацетатом осуществляли в соответствии со способами, описанными в примере 1. Выход 114 мг.

Масс-спектр-ESI: [М+Н]⁺=422,0.

TCX: R_f=0,70, силикагель, дихлорметан.

Пример 7

Этил-5-амино-2-бензилтио-4-(3-тиенил)тиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоксилат

Циклизацию S-бензилизотиомочевины (203 мг), тиофен-3-карбоксальдегида (183 мкл) и этилцианоацетатом (112 мкл), обработку продукта РОСl₃ и последующее взаимодействие с этил-2-меркаптоацетатом осуществляли в соответствии со способами, описанными в примере 1. Выход 34 мг.

Масс-спектр-ESI: [М+Н]⁺=428,3.

TCX: R_f=0,65, силикагель, дихлорметан.

Пример 8

Этил-5-амино-2-бензилтио-4-(3-фурил)тиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоксилат

Циклизацию S-бензилизотиомочевины (203 мг), 3-фуральдегида (129 мкл) и этилцианоацетата (112 мкл), обработку продукта РОСl₃ и последующее взаимодействие с этил-2-меркаптоацетатом осуществляли в соответствии со способами, описанными в примере 1. Выход 38 мг.

Масс-спектр-ESI: [М+Н]⁺=412,2.

ТСХ: R_f=0,60, силикагель, дихлорметан.

Пример 9

Этил-5-амино-2-бензилтио-4-(3-метоксифенил)тиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоксилат

Циклизацию S-бензилизотиомочевины (203 мг), 3-метоксибензальдегида (243 мкл) и этилцианоацетата (112 мкл), обработку продукта РОСl₃ и последующее взаимодействие с этил-2-меркаптоацетатом осуществляли в соответствии со способами, описанными в примере 1. Выход 31 мг.

Масс-спектр-ESI: [М+Н]⁺=452,2.

ТСХ: R_f=0,52, силикагель, дихлорметан.

Пример 10

Этил-5-амино-2-(4-хлорбензилтио)-4-фенилтиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоксилат

Циклизацию S-п-хлорбензилизотиомочевины·НСl (237 мг), бензальдегида (203 мкл) и этилцианоацетата (117 мкл), обработку продукта РОСl₃ и последующее взаимодействие с этил-2-меркаптоацетатом осуществляли в соответствии со способами, описанными в примере 1. Выход 34 мг.

Масс-спектр-ESI: [М+Н]⁺=456,2.

ТСХ: R_f=0,74, силикагель, дихлорметан.

Пример 11

Этил-5-амино-2-этоксикарбонилметилтио-4-(3-метоксифенил)тиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоксилат

Циклизацию сульфата S-метилизотиомочевины (139 мг), 3-метоксибензальдегида (243 мкл) и этилцианоацетата (112 мкл), обработку продукта РОСl₃ и последующее взаимодействие с этил-2-меркаптоацетатом осуществляли в соответствии со способами, описанными в примере 1. Выход 37 мг.

Масс-спектр-ESI: [М+Н]⁺=448,2.

ТСХ: R_f=0,12, силикагель, дихлорметан.

Пример 12

Этил-5-амино-2-метилтио-4-(3-тиенил)тиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоксилат

Циклизацию сульфата S-метилизотиомочевины (695 мг), тиофен-3-карбоксальдегида (910 мкл) и этилцианоацетата (580 мкл), обработку продукта РОСl₃ и последующее взаимодействие с этил-2-меркаптоацетатом осуществляли в соответствии со способами, описанными в примере 1. Выход 176 мг.

Масс-спектр-ESI: [М+Н]⁺=352,2.

TCX: R_f=0,52, силикагель, дихлорметан.

Пример 13

Этил-5-амино-4-(3-фурил)-2-метилтиотиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоксилат

Циклизацию сульфата S-метилизотиомочевины (139 мг), 3-фуральдегида (129 мкл) и этилцианоацетата (112 мкл), обработку продукта РОСl₃ и последующее взаимодействие с этил-2-меркаптоацетатом осуществляли в соответствии со способами, описанными в примере 1. Выход 32 мг.

Масс-спектр-ESI: [М+Н]⁺=336,2.

TCX: R_f=0,38, силикагель, дихлорметан.

Пример 14

Этил-5-амино-4-(2-фторфенил-2-метилтиотиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоксилат

Циклизацию сульфата S-метилизотиомочевины (139 мг), 2-фторбензальдегида (211 мкл) и этилцианоацетата (112 мкл), обработку продукта РОСl₃ и последующее взаимодействие с этил-2-меркаптоацетатом осуществляли в соответствии со способами, описанными в примере 1. Выход 91 мг.

Масс-спектр-ESI: [М+Н]⁺=364,0.

TCX: R_f=0,51, силикагель, дихлорметан.

Пример 15

Этил-5-амино-4-(3-бромфенил)-2-метилтиотиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоксилат

Циклизацию сульфата S-метилизотиомочевины (139 мг), 3-бромбензальдегида (233 мкл) и этилцианоацетата (112 мкл), обработку продукта РОСl₃ и последующее взаимодействие с этил-2-меркаптоацетатом осуществляли в соответствии со способами, описанными в примере 1. Выход 170 мг.

Масс-спектр-ESI: [М+Н]⁺=426,2.

ТСХ: R_f=0,70, силикагель, дихлорметан.

Пример 16

Этил-5-амино-2-метилтио-4-(4-пиридил)тиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоксилат

Циклизацию сульфата S-метилизотиомочевины (139 мг), 4-пиридинкарбоксальдегида (191 мкл) и этилцианоацетата (112 мкл), обработку продукта РОСl₃ и последующее взаимодействие с этил-2-меркаптоацетатом осуществляли в соответствии со способами, описанными в примере 1. Выход 29 мг.

Масс-спектр-ESI: [М+Н]⁺=347,2.

ТСХ: R_f=0,54, силикагель, дихлорметан.

Пример 17

Этил-5-амино-2-метилтио-4-(2-пиридил)тиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоксилат

Циклизацию сульфата S-метилизотиомочевины (139 мг), 2-пиридинкарбоксальдегида (190 мкл) и этилцианоацетата (112 мкл), обработку продукта РОСl₃ и последующее взаимодействие с этил-2-меркаптоацетатом осуществляли в соответствии со способами, описанными в примере 1. Выход 73 мг.

Масс-спектр-ESI: [М+Н]⁺=347,2.

ТСХ: R_f=0,50, силикагель, дихлорметан.

Пример 18

Этил-5-амино-2-метилтио-4-(2-тиенил)тиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоксилат

Циклизацию сульфата S-метилизотиомочевины (139 мг), тиофен-2-карбоксальдегида (189 мкл) и этилцианоацетата (112 мкл), обработку продукта РОСl₃ и последующее взаимодействие с этил-2-меркаптоацетатом осуществляли в соответствии со способами, описанными в примере 1. Выход 106 мг.

Масс-спектр-ESI: [М+Н]⁺=381,2.

ТСХ: R_f=0,67, силикагель, дихлорметан.

Пример 19

Этил-5-амино-2,4-дифенилтиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоксилат

Циклизацию бензамидина·НСl (156 мг), бензальдегида (203 мкл) и этилцианоацетата (117 мкл), обработку продукта РОСl₃ и последующее взаимодействие с этил-2-меркаптоацетатом осуществляли в соответствии со способами, описанными в примере 1. Выход 101 мг.

Масс-спектр-ESI: [М+Н]⁺=376,2.

ТСХ: R_f=0,60, силикагель, дихлорметан.

Пример 20

Этил-5-амино-2-фенил(3-тиенил)тиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоксилат

Циклизацию бензамидина·НСl (156 мг), тиофен-3-карбоксальдегида (183 мкл) и этилцианоацетата (117 мкл), обработку продукта РОСl₃ и последующее взаимодействие с этил-2-меркаптоацетатом осуществляли в соответствии со способами, описанными в примере 1. Выход 203 мг.

Масс-спектр-ESI: [М+Н]⁺=382,0.

ТСХ: R_f=0,65, силикагель, дихлорметан.

Пример 21

Этил-5-амино-4-(3-фурил)-2-фенилтиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоксилат

Циклизацию бензамидина·НСl (156 мг), 3-фуральдегида (129 мкл) и этилцианоацетата (117 мкл), обработку продукта РОСl₃ и последующее взаимодействие с этил-2-меркаптоацетатом осуществляли в соответствии со способами, описанными в примере 1. Выход 157 мг.

Масс-спектр-ESI: [М+Н]⁺=366,2.

ТСХ: R_f=0,55, силикагель, дихлорметан.

Пример 22

Этил-5-амино-4-(3-метоксифенил)-2-фенилтиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоксилат

Циклизацию бензамидина·НСl (157 мг), 3-метоксибензальдегида (243 мкл) и этилцианоацетата (112 мкл), обработку продукта РОСl₃ и последующее взаимодействие с этил-2-меркаптоацетатом осуществляли в соответствии со способами, описанными в примере 1. Выход 164 мг.

Масс-спектр-ESI: [М+H]⁺=406,2.

ТСХ: R_f=0,66, силикагель, дихлорметан.

Пример 23

Этил-5-амино-2-(4-хлорфенил)-4-фенилтиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоксилат

Циклизацию 4-хлорбензамидина (772 мг), бензальдегида (1,0 мл) и этилцианоацетата (1,07 мл), обработку продукта РОСl₃ и последующее взаимодействие с этил-2-меркаптоацетатом осуществляли в соответствии со способами, описанными в примере 1. Выход 300 мг.

Масс-спектр-ESI: [М+Н]⁺=410,0.

ТСХ: R_f=0,77, силикагель, дихлорметан/гептан=3/1 (об/об).

Пример 24

Этил-5-амино-4-фенил-2-(2-тиенил)тиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоксилат

Циклизацию 2-амидинотиофена·НСl (162 мг), бензальдегида (203 мкл) и этилцианоацетата (117 мкл), обработку продукта РОСl₃ и последующее взаимодействие с этил-2-меркаптоацетатом осуществляли в соответствии со способами, описанными в примере 1. Выход 159 мг.

Масс-спектр-ESI: [М+Н]⁺=382,0.

ТСХ: R_f=0,80, силикагель, дихлорметан.

Пример 25

Этил-5-амино-2-(2-тиенил)-4-(3-тиенил)тиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоксилат

Циклизацию 2-амидинотиофена·НСl (162 мг), тиофен-2-карбоксальдегида (183 мкл) и этилцианоацетата (117 мкл), обработку продукта РОСl₃ и последующее взаимодействие с этил-2-меркаптоацетатом осуществляли в соответствии со способами, описанными в примере 1. Выход 139 мг.

Масс-спектр-ESI: [М+Н]⁺=388,2.

ТСХ: R_f=0,60, силикагель, дихлорметан.

Пример 26

Этил-5-амино-4-(3-фурил)-2-(2-тиенил)тиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоксилат

Циклизацию 2-амидинотиофена·НСl (162 мг), 3-фуральдегида (129 мкл) и этилцианоацетата (117 мкл), обработку продукта РОСl₃ и последующее взаимодействие с этил-2-меркаптоацетатом осуществляли в соответствии со способами, описанными в примере 1. Выход 131 мг.

Масс-спектр-ESI: [М+Н]⁺=372,0.

ТСХ: R_f=0,90, силикагель, дихлорметан.

Пример 27

Этил-5-амино-4-(3-метоксифенил)-2-(2-тиенил)тиено[2,3-d] пиримидин-6-карбоксилат

Циклизацию 2-амидинотиофена·НС1 (162 мг), 3-метоксибензальдегида (243 мкл) и этилцианоацетата (112 мкл), обработку продукта РОСl₃ и последующее взаимодействие с этил-2-меркаптоацетатом осуществляли в соответствии со способами, описанными в примере 1. Выход 186 мг.

Масс-спектр-ESI: [М+Н]⁺=412,2.

ТСХ: R_f=0,61, силикагель, дихлорметан.

Пример 28

Этил-5-амино-4-фенил-2-(4-пиридил)тиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоксилат

Циклизацию 4-амидинопиридина·НСl (157 мг), бензальдегида (203 мкл) и этилцианоацетата (117 мкл), обработку продукта РОСl₃ и последующее взаимодействие с этил-2-меркаптоацетатом осуществляли в соответствии со способами, описанными в примере 1. Выход 121 мг.

Масс-спектр-ESI: [М+Н]⁺=377,2.

ТСХ: R_f=0, силикагель, дихлорметан.

Пример 29

Этил-5-амино-2-(4-пиридил)-4-(3-тиенил)тиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоксилат

Циклизацию 4-амидинопиридина·НСl (157 мг), тиофен-3-карбоксальдегида (183 мкл) и этилцианоацетата (117 мкл), обработку продукта РОСl₃ и последующее взаимодействие с этил-2-меркаптоацетатом осуществляли в соответствии со способами, описанными в примере 1. Выход 12 мг.

Масс-спектр-ESI: [М+Н]⁺=283,0.

ТСХ: R_f=0,85, силикагель, дихлорметан.

Пример 30

Этил-5-амино-4-(3-фурил)-2-(4-пиридил)тиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоксилат

Циклизацию 4-амидинопиридина·НСl (157 мг), 3-фуральдегида (129 мкл) и этилцианоацетата (117 мкл), обработку продукта РОСl_з и последующее взаимодействие с этил-2-меркаптоацетатом осуществляли в соответствии со способами, описанными в примере 1. Выход 51 мг.

Масс-спектр-ESI: [М+Н]⁺=367,0.

ТСХ: R_f=0,05, силикагель, дихлорметан.

Пример 31

Этил-5-амино-4-(3-метоксифенид)-2-(4-пиридил)тиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоксилат

Циклизацию 4-амидинопиридина·НСl (157 мг), 3-метоксибензальдегида (243 мкл) и этилцианоацетата (112 мкл), обработку продукта РОСl₃ и последующее взаимодействие с этил-2-меркаптоацетатом осуществляли в соответствии со способами, описанными в примере 1. Выход 153 мг.

Масс-спектр-ESI: [М+Н]⁺=407,2.

ТСХ: R_f=0,42, силикагель, дихлорметан/метанол=95/5 (об/об).

Пример 32

Этил-5-амино-2-метиламино-4-фенилтиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоксилат

Циклизацию 1-метилгуанидина·НСl (110 мг), бензальдегида (203 мкл) и этилцианоацетата (117 мкл), обработку продукта РОСl₃ и последующее взаимодействие с этил-2-меркаптоацетатом осуществляли в соответствии со способами, описанными в примере 1. Выход 48 мг.

Масс-спектр-ESI: [М+Н]⁺=329,2.

ТСХ: R_f=0,85, силикагель, дихлорметан/метанол=95/5 (об/об).

Пример 33

Этил-5-амино-2-метилтио-4-фенилтиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоксилат

Циклизацию сульфата S-метилизотиомочевины (8,35 г), бензальдегида (12,2 мл) и этилцианоацетата (6,70 мл), обработку продукта РОСl₃, и последующее взаимодействие с этил-2-меркаптоацетатом осуществляли в соответствии со способами, описанными в примере 1. Выход 7,98 г.

Масс-спектр-ESI: [М+Н]⁺=346,2.

ТСХ: R_f=0,92, силикагель, дихлорметан.

Пример 34

5-Амино-2-метилтио-4-фенилтиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоновая кислота

Гидроксид лития (923 мг) добавляли к перемешиваемому раствору 760 мг этил-5-амино-2-метилтио-4-фенилтиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоксилата (см. пример 33) в смеси диоксан/вода=9/1 (об/об) и смесь нагревали при 80°С в течение 24 часов. Реакционную смесь выливали в воду и экстрагировали этилацетатом при рН 2. Органический слой промывали водой и насыщенным раствором соли и сушили над сульфатом натрия. Фильтрат выпаривали досуха. Выход 766 мг.

Масс-спектр-ESI: [M+H]⁺=318,0.

ТСХ: R_f=0,49, силикагель, дихлорметан/метанол=9/1 (об/об).

Пример 35

Фенил-5-амино-2-метилтио-4-фенилтиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоксилат

К перемешиваемому раствору 40 мг 5-амино-2-метилтио-4-фенилтиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоновой кислоты, которая была синтезирована способом, описанным в примере 34, в дихлорметане (2 мл) добавляли N,N-диизопропилэтиламин (100 мкл), фенол (13 мг) и гексафторфосфат бромтрипирролидинофосфония (79 мг). Через 20 часов добавляли воду (2 мл), смесь интенсивно перемешивали и впоследствии фильтровали через РЕ-фильтр. Органическую фазу концентрировали в вакууме и остаток хроматографировали на силикагеле (Isolute, 2 г) с использованием дихлорметана в качестве элюента. Выход 16 мг.

Масс-спектр-ESI: [М+Н]⁺=394,2.

ТСХ: R_f=0,32, силикагель, дихлорметан.

Пример 36

н-Бутил-5-амино-2-метилтио-4-фенилтиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоксилат

Этерификацию 5-амино-2-метилтио-4-фенилтиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоновой кислоты (40 мг) н-бутанолом (13 мкл) осуществляли в соответствии со способом, описанным в примере 35. Остаток хроматографировали на силикагеле (Isolute, 2 г) с использованием дихлорметана в качестве элюента. Выход 7 мг.

Масс-спектр-ESI: [М+Н]⁺=374,2.

ТСХ: R_f=0,66, силикагель, дихлорметан.

Пример 37

Циклогексил-5-амино-2-метилтио-4-фенилтиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоксилат

Этерификацию 5-амино-2-метилтио-4-фенилтиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоновой кислоты (40 мг) циклогексанолом (14 мкл) осуществляли в соответствии со способом, описанным в примере 35. Остаток хроматографировали на силикагеле (Isolute, 2 г) с использованием дихлорметана в качестве элюента. Выход 14 мг.

Масс-спектр-ESI: [М+Н]⁺=400,2.

ТСХ: R_f=0,66, силикагель, дихлорметан.

Пример 38

Бензил-5-амино-2-метилтио-4-фенилтиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоксилат

Этерификацию 5-амино-2-метилтио-4-фенилтиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоновой кислоты (40 мг) бензиловым спиртом (14 мкл) осуществляли в соответствии со способом, описанным в примере 35. Остаток хроматографировали на силикагеле (Isolute, 2 г) с использованием дихлорметана в качестве элюента. Выход 10 мг.

Масс-спектр-ESI: [М+Н]⁺=408,2.

ТСХ: R_f=0,66, силикагель, дихлорметан.

Пример 39

3-Бром-2-R-метил-1-пропил-5-амино-2-метилтио-4-фенилтиено [2,3-d]пиримидин-6-карбоксилат

Этерификацию 5-амино-2-метилтио-4-фенилтиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоновой кислоты (40 мг) 3-бром-2-R-метилпропан-1-олом (14 мкл) осуществляли в соответствии со способом, описанным в примере 35. Остаток хроматографировали на силикагеле (Isolute, 2 г) с использованием дихлорметана в качестве элюента. Выход 5 мг.

Масс-спектр-ESI: [М+Н]⁺=454,2.

ТСХ: R_f=0,66, силикагель, дихлорметан.

Пример 40

4-Метоксифенил-S-амино-2-метилтио-4-фенилтиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоксилат

Этерификацию S-амино-2-метилтио-4-фенилтиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоновой кислоты (40 мг) 4-метоксифенолом (17 мг) осуществляли в соответствии со способом, описанным в примере 35. Остаток хроматографировали на силикагеле (Isolute, 2 г) с использованием смеси гептан/дихлорметан=1/1 (об/об) в качестве элюента. Выход 26 мг.

Масс-спектр-ESI: [М+Н]⁺=424,2.

ТСХ: R_f=0,64, силикагель, дихлорметан.

Пример 41

3-Метоксифенил-5-амино-2-метилтио-4-фенилтиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоксилат

Этерификацию 5-амино-2-метилтио-4-фенилтиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоновой кислоты (40 мг) 3-метоксифенолом (17 мг) осуществляли в соответствии со способом, описанным в примере 35. Остаток хроматографировали на силикагеле (Isolute, 2 г) с использованием смеси гептан/дихлорметан=1/1 (об/об) в качестве элюента. Выход 29 мг.

Масс-спектр-ESI: [М+Н]⁺=424,2.

ТСХ: R_f=0,60, силикагель, дихлорметан.

Пример 42

2-Метоксифенил-5-амино-2-метилтио-4-фенилтиено[2,3-d]пирмидин-6-карбоксилат

Этерификацию 5-амино-2-метилтио-4-фенилтиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоновой кислоты (40 мг) 2-метоксифенолом (17 мг) осуществляли в соответствии со способом, описанным в примере 35. Остаток хроматографировали на силикагеле (Isolute, 2 г) с использованием смеси гептан/дихлорметан=1/1 (об/об) в качестве элюента. Выход 19 мг.

Масс-спектр-ESI: [M+H]⁺=424,2.

ТСХ: R_f=0,60, силикагель, дихлорметан.

Пример 43

2,3-Диметоксифенил-5-амино-2-метилтио-4-фенилтиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоксилат

Этерификацию 5-амино-2-метилтио-4-фенилтиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоновой кислоты (40 мг) 2,3-диметоксифенолом (21 мг) осуществляли в соответствии со со способом, описанным в примере 35. Остаток хроматографировали на силикагеле (Isolute, 2 г) с использованием смеси гептан/дихлорметан=1/1 (об/об) в качестве элюента. Выход 12 мг.

Масс-спектр-ESI: [М+Н]⁺=454,2.

ТСХ: R_f=0,36, силикагель, дихлорметан.

Пример 44

2,4-Диметоксифенил-5-амино-2-метилтио-4-фенилтиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоксилат

Этерификацию 5-амино-2-метилтио-4-фенилтиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоновой кислоты (40 мг) 2,4-диметоксифенолом (21 мг) осуществляли в соответствии со способом, описанным в примере 35. Остаток хроматографировали на силикагеле (Isolute, 2 г) с использованием смеси гептан/дихлорметан=1/1 (об/об) в качестве элюента. Выход 20 мг.

Масс-спектр-ESI: [M+H]⁺=454,4.

ТСХ: R_f=0,38, силикагель, дихлорметан.

Пример 45

3,5-Метоксифенил-5-амино-2-метилтио-4-фенилтиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоксилат

Этерификацию 5-амино-2-метилтио-4-фенилтиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоновой кислоты (40 мг) 3,5-диметоксифенолом (21 мг) осуществляли в соответствии со способом, описанным в примере 35. Остаток хроматографировали на силикагеле (Isolute, 2 г) в смеси гептан/дихлорметан=1/1 (об/об) в качестве элюента. Выход 18 мг.

Масс-спектр-ESI: [М+Н]⁺=454,2.

ТСХ: R_f=0,60, силикагель, дихлорметан.

Пример 46

Изопропил-5-амино-2-метилтио-4-фенилтиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоксилат

Этерификацию 5-амино-2-метилтио-4-фенилтиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоновой кислоты (40 мг) 2-пропанолом (10 мкл) осуществляли в соответсчИвии со способом, описанным в примере 35. Остаток хроматографировали на силикагеле (Isolute, 2 г) с использованием смеси гептан/дихлорметан=1/1 (об/об) в качестве элюента. Выход 12 мг.

Масс-спектр-ESI: [М+Н]⁺=360,2.

TCX: R_f=0,66, силикагель, дихлорметан.

Пример 47

2-Тиенилметил-5-амино-2-метилтио-4-фенилтиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоксилат

Этерификацию 5-амино-2-метилтио-4-фенилтиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоновой кислоты (40 мг) 2-тиофенметанолом (17 мкл) осуществляли в соответствии со способом, описанным в примере 35. Остаток хроматографировали на силикагеле (Isolute, 2 г) с использованием смеси гептан/дихлорметан=1/1 (об/об) в качестве элюента. Выход 18 мг.

Масс-спектр-ESI: [М+H]⁺=414,2.

TCX: R_f=0,74, силикагель, дихлорметан.

Пример 48

3-Тиенилметил-5-амино-2-метилтио-4-фенилтиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоксилат

Этерификацию 5-амино-2-метилтио-4-фенилтиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоновой кислоты (40 мг) 3-тиофенметанолом (15 мг) осуществляли в соответствии со способом, описанным в примере 35. Остаток хроматографировали на силикагеле (Isolute, 2 г) с использованием смеси гептан/дихлорметан=1/1 (об/об) в качестве элюента. Выход 12 мг.

Масс-спектр-ESI: [M+H]⁺=414,2.

TCX: R_f=0,74, силикагель, дихлорметан.

Пример 49

2-Адамантилметил-5-амино-2-метилтио-4-фенилтиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоксилат

Этерификацию 5-амино-2-метилтио-4-фенилтиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоновой кислоты (40 мг) 1-адамантанметанолом (22 мг) осуществляли в соответствии со способом, описанным в примере 35. Остаток хроматографировали на силикагеле (Isolute, 2 г) с использованием смеси гептан/дихлорметан=1/1 (об/об) в качестве элюента. Выход 15 мг.

Масс-спектр-ESI: [M+H]⁺=466, 2.

TCX: R_f=0,81, силикагель, дихлорметан.

Пример 50

2-N-Пирролидино-1-этил-5-амино-2-метилтио-4-фенилтиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоксилат

К перемешиваемому раствору 40 мг 5-амино-2-метилтио-4-фенилтиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоновой кислоты, которая была синтезирована способом, описанным в примере 34, в дихлорметане (2 мл) добавляли N,N-диизопропилэтиламин (40 мкл), 1-(2-гидроксиэтил)пирролидин (20 мкл) и тетрафторборат O-(бeнзoтpиaзoл-1-ил)-N,N,N’,N’-тeтpaмeтилypoния (40 мг). Через 20 часов растворитель выпаривали и остаток хроматографировали на силикагеле (Isolute, 2 г) с использованием смеси гептан/дихлорметан=100/0 (об/об)=>0/100 (об/об) в качестве элюента. Выход 13 мг.

Масс-спектр-ESI: [М+Н]⁺=415,0.

ТСХ: R_f=0,07, силикагель, дихлорметан/метанол=98/2 (об/об).

Пример 51

Изопропил-5-амино-4-(3-метоксифенил)-2-фенилтиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоксилат

Этил-5-амино-4-(3-метоксифенил)-2-фенилтиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоксилат (см. пример 22) сначала гидролизовали в соответствующую кислоту (52 мг) с использованием способа, описанного в примере 34, с последующей этерификацией 2-пропанолом (12 мкл) в соответствующий сложный эфир в соответствии с примером 35. Остаток хроматографировали на силикагеле (Isolute, 2 г) с использованием смеси гептан/дихлорметан=1/1 (oб/oб) в качестве элюента. Выход 18 мг.

Масс-спектр-ESI: [М+Н]⁺=420,2.

ТСХ: R_f=0,66, силикагель, дихлорметан.

Пример 52

Фенил-5-амино-4-(3-метоксифенил)-2-фенилтиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоксилат

Этерификацию 5-амино-4-(3-метоксифенил)-2-фенилтиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоновой кислоты (52 мг) фенолом (15 мг) осуществляли в соответствии со способами, описанными в примере 51. Остаток хроматографировали на силикагеле (Isolute, 2 г) с использованием смеси гептан/дихлорметан=1/1 (об/об) в качестве элюента. Выход 36 мг.

Масс-спектр-ESI: [М+H]⁺=454,4.

ТСХ: R_f=0,73, силикагель, дихлорметан.

Пример 53

Изопропил-5-амино-2-(2-тиенил)-4-(3-тиенил)тиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоксилат

Этил-5-амино-2-(2-тиенил)-4-(3-тиенил)тиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоксилат (см. пример 25) сначала гидролизовали в соответствующую кислоту (45 мг), используя способы, описанные в примере 34, с последующей этерификацией 2-пропанолом (11 мкл) в соответствующий сложный эфир в соответствии с примером 35. Остаток хроматографировали на силикагеле (Isolute, 2 г) с использованием смеси гептан/дихлорметан=1/1 (об/об) в качестве элюента. Выход 11 мг.

Масс-спектр-ESI: [М+H]⁺=402,2.

ТСХ: R_f=0,66, силикагель, дихлорметан.

Пример 54

Фенил-5-амино-2-(2-тиенил)-4-(3-тиенил)тиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоксилат

Этерификацию 5-амино-2-(2-тиенил)-4-(3-тиенил)тиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоновой кислоты (45 мг) фенолом (13 мг) осуществляли в соответствии со способами, описанными в примере 53. Остаток хроматографировали на силикагеле (Isolute, 2 г) в смеси гептан/дихлорметан=1/1 (об/об) в качестве элюента. Выход 13 мг.

Масс-спектр-ESI: [М+H]⁺=436,4.

ТСХ: R_f=0,73, силикагель, дихлорметан.

Пример 55

Изопропил-5-амино-2-метилтио-4-фенилтиено[2,3-d]пиримидин-6-ксарбоксамид

Взаимодействие 5-амино-2-метилтио-4-фенилтиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоновой кислоты (40 мг) с 2-аминопропаном (12 мкл) осуществляли в соответствии со способом, описанным в примере 35. Остаток хроматографировали на силикагеле (Isolute, 2 г) с использованием дихлорметана в качестве элюента. Выход 7 мг.

Масс-спектр-ESI: [М+H]⁺=359,2.

ТСХ: R_f=0,23, силикагель, дихлорметан.

Пример 56

Бензил-5-амино-2-метилтио-4-фенилтиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоксамид

Взаимодействие 5-амино-2-метилтио-4-фенилтиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоновой кислоты (40 мг) с бензиламином (15 мкл) осуществляли в соответствии со способом, описанным в примере 35. Остаток хроматографировали на силикагеле (Isolute, 2 г) с использованием дихлорметана в качестве элюента. Выход 32 мг.

Масс-спектр-ESI: [М+H]⁺=407,2.

ТСХ: R_f=0,24, силикагель, дихлорметан.

Пример 57

н-Бутил-5-амино-2-метилтио-4-фенилтиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоксамид

Взаимодействие 5-амино-2-метилтио-4-фенилтиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоновой кислоты (40 мг) с 1-аминобутаном (13 мкл) осуществляли в соответствии со способом, описанным в примере 35. Остаток хроматографировали на силикагеле (Isolute, 2 г) с использованием дихлорметана в качестве элюента. Выход 18 мг.

Масс-спектр-ESI: [М+H]⁺=373,2.

ТСХ: R_f=0,25, силикагель, дихлорметан.

Пример 58

Циклопропил-5-амино-2-метилтио-4-фенилтиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоксамид

Взаимодействие 5-амино-2-метилтио-4-фенилтиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоновой кислоты (40 мг) с циклопропиламином (9 мкл) осуществляли в соответствии со способом, описанным в примере 35. Остаток хроматографировали на силикагеле (Isolute, 2 г) с использованием дихлорметана в качестве элюента. Выход 9 мг.

Масс-спектр-ESI: [М+H]⁺=357,2.

ТСХ: R_f=0,14, силикагель, дихлорметан.

Пример 59

Циклогексил-5-амино-2-метилтио-4-фенилтиено[2,3-d]пиримидин-

6-карбоксамид

Взаимодействие 5-амино-2-метилтио-4-фенилтиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоновой кислоты (40 мг) с циклогексиламином (16 мкл) осуществляли в соответствии со способом, описанным в примере 35. Остаток хроматографировали на силикагеле (Isolute, 2 г) с использованием дихлорметана в качестве sa элюента. Выход 11 мг.

Масс-спектр-ESI: [М+H]⁺=399,2.

ТСХ: R_f=0,32, силикагель, дихлорметан.

Пример 60

4-Метоксибензил-5-амино-2-метилтио-4-фенилтиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоксамид

Взаимодействие 5-амино-2-метилтио-4-фенилтиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоновой кислоты (40 мг) с 4-метоксибензиламином (18 мкл) осуществляли в соответствии со способом, описанным в примере 35. Остаток хроматографировали на силикагеле (Isolute, 2 г) с использованием дихлорметана в качестве элюента. Выход 25 мг.

Масс-спектр-ESI: [М+H]⁺=437,2.

ТСХ: R_f=0,20, силикагель, дихлорметан.

Пример 61

1-Нафтилметил-5-амино-2-метилтио-4-фенилтиено [2,3-d]пиримидин-6-карбоксамид

Взаимодействие 5-амино-2-метилтио-4-фенилтиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоновой кислоты (40 мг) с 1-нафтилметиламином (20 мкл) осуществляли в соответствии со способом, описанным в примере 35. Остаток хроматографировали на силикагеле (Isolute, 2 г) с использованием дихлорметана в качестве элюента. Выход 20 мг.

Масс-спектр-ESI: [М+H]⁺=457,2.

ТСХ: R_f=0,32, силикагель, дихлорметан.

Пример 62

Фенил-5-амино-2-метилтио-4-фенилтиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоксамид

Взаимодействие 5-амино-2-метилтио-4-фенилтиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоновой кислоты (39 мг) с анилином (909 мкл) осуществляли в соответствии со способом, описанным в примере 35. Остаток хроматографировали на силикагеле (Isolute, 2 г) с использованием дихлорметана в качестве элюента. Выход 37 мг.

Масс-спектр-ESI: [М+H]⁺=393,0.

ТСХ: R_f=0,95, силикагель, этилацетат/пиридин/уксусная кислота/вода=363/20/6/11 (об/об/об/об).

Пример 63

2-Тиенилметил-5-амино-2-метилтио-4-фенилтиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоксамид

Взаимодействие 5-амино-2-метилтио-4-фенилтиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоновой кислоты (40 мг) с 2-тиофенметиламином (14 мкл) осуществляли в соответствии со способом, описанным в примере 35, и сырой продукт очищали хроматографией на силикагеле (Isolute, 2 г) с использованием смеси гептан/дихлорметан=1/1 (об/об) в качестве элюента. Выход 12 мг.

Масс-спектр-ESI: [М+H]⁺=413,2.

ТСХ: R_f=0,23, силикагель, дихлорметан.

Пример 64

1-Адамантилметил-5-амино-2-метилтио-4-фенилтиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоксамид

Взаимодействие 5-амино-2-метилтио-4-фенилтиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоновой кислоты (40 мг) с 1-адамантанметиламином (22 мкл) осуществляли в соответствии со способом, описанным в примере 35, и сырой продукт очищали хроматографией на силикагеле (Isolute, 2 г) с использованием смеси гептан/дихлорметан=1/1 (об/об) в качестве элюента. Выход 29 мг.

Масс-спектр-ESI: [М+H]⁺=465,4.

ТСХ: R_f=0,33, силикагель, дихлорметан.

Пример 65

н-Гептил-5-амино-2-метилтио-4-фенилтиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоксамид

Взаимодействие 5-амино-2-метилтио-4-фенилтиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоновой кислоты (40 мг) с 1-аминогептаном (25 мкл) осуществляли в соответствии со способом, описанным в примере 50. Остаток хроматографировали на силикагеле (Isolute, 2 г) с использованием смеси гептан/дихлорметан=1/1 (об/об) в качестве элюента. Выход 37 мг.

Масс-спектр-ESI: [М+H]⁺=415,2.

ТСХ: R_f=0,87, силикагель, дихлорметан/метанол=98/2 (об/об).

Пример 66

3-Фенил-1-пропил-5-амино~2-метилтио-4-фенилтиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоксамид

Взаимодействие 5-амино-2-метилтио-4-фенилтиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоновой кислоты (40 мг) с 3-фенил-1-пропиламином (24 мкл) и осуществляли в соответствии со способом, описанным в примере 50. Остаток хроматографировали на силикагеле (Isolute, 2 г) с использованием смеси гептан/дихлорметан=1/1 (об/об) в качестве элюента. Выход 32 мг.

Масс-спектр-ESI: [М+H]⁺=435,2.

ТСХ: R_f=0,83, силикагель, дихлорметан/метанол=98/2 (об/об).

Пример 67

1,1-Диэтокси-4-бутил-5-амино-2-метилтио-4-фенилтиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоксамид

Взаимодействие 5-амино-2-метилтио-4-фенилтиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоновой кислоты (40 мг) с 4,4-диэтоксибутиламином (30 мкл) осуществляли в соответствии со способом, описанным в примере 50. Остаток хроматографировали на силикагеле (Isolute 2 г) с использованием смеси гептан/дихлорметан=1/1 (об/об) в качестве элюента. Выход 47 мг.

Масс-спектр-ESI: [М+H]⁺=461,2.

ТСХ: R_f=0,38, силикагель, дихлорметан/метанол=98/2 (об/об).

Пример 68

(3R)-(-)-1-Бензил-3-пирроалидиниламино-5-амино-2-метилтио-4-фенилтиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоксамид

Взаимодействие 5-амино-2-метилтио-4-фенилтиено [2,3-d]пиримидин-6-карбоновой кислоты (40 мг) с (3R)-(-)-1-бензил-3-аминопирролидином (29 мкл) осуществляли в соответствии со способом, описанным в примере 50. Остаток хроматографировали на силикагеле (Isolute, 2 г) с использованием смеси гептан/дихлорметан=1/1 (об/об) в качестве элюента. Выход 50 мг.

Масс-спектр-ESI: [М+H]⁺=476,2.

ТСХ: R_f=0,21, силикагель, дихлорметан/метанол=98/2 (об/об).

Пример 69

3-Метоксикарбонил-1-пропил-5-амино-2-метилтио-4-фенилтиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоксамид

Взаимодействие 5-амино-2-метилтио-4-фенилтиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоновой кислоты (40 мг) с метил-4-аминобутиратом (26 мг) осуществляли в соответствии со способом, описанным в примере 50. Остаток хроматографировали на силикагеле (Isolute, 2 г) с использованием смеси гептан/дихлорметан=1/1 (об/об) в качестве элюента. Выход 39 мг.

Масс-спектр-ESI: [М+H]⁺=417,0.

ТСХ: R_f=0,46, силикагель, дихлорметан/метанол=98/2 (об/об).

Пример 70

Изопропил-5-амино-4-(3-метоксифенил)-2-метилтиотиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоксамид

Этил-5-амино-4-(3-метоксифенил)-2-метилтиотиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоксилат {см. пример 1) сначала гидролизовали в соответствующую кислоту (248 мг) с использованием способа, описанного в примере 34, с последующим взаимодействием с 2-аминопропаном (111 мкл) для получения соответствующего амида в соответствии с примером 50. Указанное в заголовке соединение очищали хроматографией на силикагеле с использованием смеси дихлорметан/метанол=98/2 (об/об) в качестве элюента с последующей кристаллизацией из этанола. Выход 147 мг.

Масс-спектр-ESI: [М+H]⁺=389,0.

ТСХ: R_f=0,19, силикагель, дихлорметан.

Пример 71

Изопропил-5-амино-4-(3-метоксифенил)-2-фенилтиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоксамид

Этил-5-амино-4-(3-метоксифенил)-2-фенилтиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоксилат (см. пример 22) сначала гидролизовали в соответствующую кислоту (52 мг) с использованием способа, описанного в примере 34, с последующим взаимодействием с 2-аминопропаном (13 мкл) для получения соответствующего амида в соответствии с примером 35. Остаток хроматографировали на силикагеле (Isolate, 2 г) с использованием смеси гептан/дихлорметан=1/1 (об/об) в качестве элюента. Выход 12 мг.

Масс-спектр-ESI: [М+H]⁺=419,4.

ТСХ: R_f=0,17, силикагель, дихлорметан.

Пример 72

Изопропил-5-амино-4-(3-метоксифенил)-2-(2-тиенил)тиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоксамид

Этил-5-амино-4-(3-матоксифенил)-2-(2-тиенил)тиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоксилат (см. пример 27) сначала гидролизовали в соответствующую кислоту (464 мг) с использованием способа, описанного в примере 34, с последующим взаимодействием с 2-аминопропаном (190 мкл) удля получения соответствующего амида в соответствии с примером 50. Указанное в заголовке соединение хроматографировали на силикагеле с использованием смеси дихлорметан/метанол=98/2 (об/об) в качестве элюента. Выход 332 мг.

Масс-спектр-ESI: [М+H]⁺=425,2.

TCX: R_f=0,23, силикагель, дихлорметан.

Пример 73

Изопропил-5-амино-2-(2-тиенил)-4-(3-тиенил)тиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоксамид

Этил-5-амино-2-(2-тиенил)-4-(3-тиенил)тиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоксилат (см. пример 25) сначала гидролизовали в соответствующую кислоту (753 мг) с использованием способа, описанного в примере 34, с последующим взаимодействием с 2-аминопропаном (326 мкл) для получения соответствующего амида в соответствии с примером 50. Указанное в заголовке соединение хроматографировали на силикагеле с использованием смеси дихлорметан/метанол=98/2 (об/об). Выход 646 мг.

Масс-спектр-ESI: [М+H]⁺=401,2.

TCX: R_f=0,29, силикагель, дихлорметан.

Пример 74

Этил-5-амино-7-метил-2-метилтио-4-фенилпирроло[2,3-d]пиримидин-6-карбоксилат

(а) 5-Циано-6-(этоксикарбонилметил)(метил)амино-2-метилтио-4-фенилпиримидин

Смесь бикарбоната натрия (160 мг) и этил-N-метилглицината·НСl (438 и мг) в этаноле нагревали при температуре кипения с обратным холодильником. Через 2 часа добавляли 6-хлор-5-циано-2-метилтио-4-фенилпиримидин (100 мг, см. пример 1b) и реакционную смесь нагревали при температуре кипения с обратным холодильником еще в течение 2,5 часов.

Твердые вещества удаляли фильтрованием, после чего продукт кристаллизовали из фильтрата. Выход 65 мг.

Масс-спектр-ESI: [М+H]⁺=343,2.

ТСХ: R_f=0,52, силикагель, дихлорметан.

(b) Этил-5-амино-7-метил-2-метилтио-4-фенилпирроло[2,3-d]пиримидин-6-карбоксилат

Этоксид натрия (1,4 н., 52 мкл) добавляли к перемешиваемому раствору 5-циано-6-(этоксикарбонилметил)(метил)амино-2-метилтио-4-фенилпиримидина в сухом этаноле (1 мл). Через 3 часа при 60°С смесь охлаждали до 0°С на ледяной бане, твердые вещества собирали фильтрованием и сушили в вакууме. Выход 40 мг.

Масс-спектр-ESI: [М+H]⁺=343,2.

ТСХ: R_f=0,53, силикагель, дихлорметан.

Пример 75

Этил-5-амино-7-бензил-2-метилтио-4-фенилпирроло[2,3-d]пиримидин-6-карбоксилат

Конденсацию 6-хлор-5-циано-2-метилтио-4-фенилпиримидина (100 мг) с этил-N-бензилглицинатом (0,45 мл) и последующую циклизацию очищенного 5-циано-6-N-(этил-N-бензилглицинат)-2-метилтио-4-фениламинопиримидина (хроматографировали на силикагеле с использованием смеси гептан/дихлорметан=1/3 (об/об)=>1/0 (об/об)) в конечный продукт проводили в соответствии со способами, описанными в примере 74. Выход 75 мг.

Масс-спектр-ESI: [М+H]⁺=419,2.

TCX: R_f=0,78, силикагель, дихлорметан.

Пример 76

Этил-5-амино-2-метилтио-4-(3-феноксифенил)тиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоксилат

Циклизацию сульфата S-метилизотиомочевины (139 мг), 3-феноксибензальдегида (39 мг) и этилцианоацетата (112 мкл), обработку продукта POCl₃ и последующее взаимодействие с этил-2-меркаптоацетатом осуществляли в соответствии со способами, описанными в примере 1. Указанное в заголовке соединение очищали хроматографией на силикагеле с использованием смеси гептан/этилацетат=100/0 (об/об)=>80/20 (об/об) в качестве элюента. Выход 7,0 мг.

Масс-спектр-ESI: [М+H]⁺=438,0.

TCX: R_f=0,61, силикагель, дихлорметан.

Пример 77

Этил-5-амино-4-(3-н-бутоксифенил)-2-метилтиотиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоксилат

(а) 3-н-Бутоксибензальдегид

Диэтилазодикарбоксилат (3,31 мл) добавляли по каплям к охлажденному (0°С) раствору 3-гидроксибензальдегида (2,44 г), н-бутанола (1,83 мл) и трифенилфосфина (5,51 г) в тетрагидрофуране. После перемешивания при комнатной температуре в течение 4 часов добавляли раствор 2 н. гидроксида натрия (150 мл) и перемешивание продолжали в течение 20 минут. Реакционную смесь экстрагировали дихлорметаном (150 мл). Органический слой промывали водой, 1%-ной лимонной кислотой, водой и насыщенным раствором соли, сушили над сульфатом натрия и концентрировали в вакууме. К сырому (неочищенному продукту) добавляли этилацетат (3×25 мл) и твердые вещества удаляли фильтрованием. Остаток хроматографировали на силикагеле с использованием смеси гептан/этилацетат=100/0 (об/об)=>60/40 (об/об) в качестве элюента. Выход 1,64 г.

Масс-спектр-ESI: [М+H]⁺=179,2.

ТСХ: R_f=0,80, силикагель, гептан/этилацетат=1/1 (об/об).

(b) Этил-5-амино-4-(3-н-бутоксифенил)-2-метилтиотиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоксилат

Циклизацию сульфата S-метилизотиомочевины (139 мг), 3-н-бутоксибензальдегида (357 мг) и этилцианоацетата (112 мкл), обработку продукта РОСl₃ и последующее взаимодействие с этил-2-меркаптоацетатом осуществляли в соответствии со способами, описанными в примере 1. Указанное в заголовке соединение очищали хроматографией на силикагеле с использованием смеси гептан/этилацетат=100/0 (об/об)=>80/20 (об/об) в качестве элюента и кристаллизацией из этанола. Выход 78 мг.

Масс-спектр-ESI: [М+H]⁺=418,0.

ТСХ: R_f=0,61, силикагель, дихлорметан.

Пример 78

Этил-4-(3-[2-ацетоксиэтокси]фенил)-5-амино-2-метилтиотиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоксилат

(a) 3-(2-Ацетоксиэтокси)бензальдегид

Каталитическое количество N,N-диметиламинопиридина добавляли к перемешиваемому раствору 3-(2-гидроксиэтокси)бензальдегида (1,66 г) в уксусном ангидриде (9 мл) и пиридине (3 мл). Через 2 часа реакционную смесь концентрировали в вакууме, остаток растворяли в этилацетате и промывали 0,5 н. соляной кислотой, водой, 5% бикарбонатом натрия, водой и насыщенным раствором соли, сушили над сульфатом натрия и выпаривали досуха. Выход 2,16 г.

Масс-спектр-ESI: [М+H]⁺=209,2.

ТСХ: R_f=0,60, силикагель, гептан/этилацетат=1/1 (об/об).

(b) Этил-4-(3-[2-ацетоксиэтокси]фенил)-5-амино-2-метилтиотиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоксилат

Циклизацию сульфата S-метилизотиомочевины (139 мг), 3-(2-ацетоксиэтокси)бензальдегида (357 мг) и этилцианоацетата (112 мкл), обработку продукта, РОСl₃ и последующее взаимодействие с этил-2-меркаптоацетатом осуществляли в соответствии со способами, описанными в примере 1. Повторное ацетилирование сырого продукта (уксусный ангидрид/пиридин=3/1 (об/об), 4 ч), концентрирование смеси и последующая очистка хроматографией на силикагеле в дихлорметане давали указанное в заголовке соединение. Выход 6,0 мг.

Масс-спектр-ESI: [М+H]⁺=448, 5.

TCX: R_f=0,66, силикагель, дихлорметан/метанол=98/2 (об/об).

Пример 79

Этил-5-амино-2-метилтио-4-(3-н-октилоксифенил)тиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоксилат

(а) 3-(н-Октилокси)бензальдегид

3-Гидроксибензальдегид (977 мг), 1-хлороктан (1,35 мл) и карбонат цезия (3,9 г) перемешивали в диоксане при 80°С. Через 60 часов реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, твердые вещества удаляли фильтрованием и промывали дихлорметаном. Объединенные фильтраты концентрировали в вакууме, растворяли в этилацетате и промывали водой и насыщенным раствором соли, сушили над сульфатом натрия, выпаривали досуха и очищали хроматографией на силикагеле с использованием смеси дихлорметан/метанол=100/0 (об/об)=>98/2 (об/об). Выход 338 мг.

Масс-спектр-ESI: [М+H]⁺=235,2.

TCX: R_f=0,95, силикагель, дихлорметан/метанол=95/5 (об/об).

(b) Этил-5-амино-2-метилтио-4-(3-н-октилоксифенил)тиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоксилат

Циклизацию сульфата S-метилизотиомочевины (139 мг), 3-н-октилоксибензальдегида (338 мг) и этилцианоацетата (112 мкл), обработку продукта POCl₃ и последующее взаимодействие с этил-2-меркаптоацетатом осуществляли в соответствии со способами, описанными в примере 1. Чистое указанное в заголовке соединение получали после хроматографии на силикагеле с использованием смеси дихлорметан/метанол=100/0 (об/об)=>90/10 (об/об) в качестве элюента. Выход 12 мг.

Масс-спектр-ESI: [М+H]⁺=474,2.

ТСХ: R_f=0,65, силикагель, дихлорметан.

Пример 80

Этил-5-амино-4-(3-[N-бензоиламиноэтокси]фенил)-2-метилтиотиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоксилат

Циклизацию сульфата S-метилизотиомочевины (278 мг), 3-(2-N-бензоиламиноэтокси)бензальдегида (538 мг, синтезирован из 3-гидроксибензальдегида (977 мг) и N-(2-хлорэтил)бензамида (1,47 г) с помощью способа, описанного в примере 79а) и этилцианоацетата (224 мкл), обработку продукта РОСl₃ и последующее взаимодействие с этил-2-меркаптоацетатом осуществляли в соответствии со способами, описанными в примере 1. Чистое указанное в заголовке соединение получали после хроматографии на силикагеле с использованием смеси дихлорметан/этилацет=100/0 (об/об)=>80/20 (об/об) в качестве элюента. Выход 3,9 мг.

Масс-спектр-ESI: [М+H]⁺=509,2.

ТСХ: R_f=0,68, силикагель, дихлорметан/метанол=95/5 (об/об).

Пример 81

Этил-5-амино-4-(3-{2-[5-метил-2-фенилимидазол-4-ил]этокси}фенил)-2-метилтиотиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоксилат

(a) 4-Гидроксиметил-5-|метил-2-фенилимидазол·НСl

2,3-Бутандион (30 мл) и раствор ацетата натрия (33 г) в воде (80 мл) добавляли к раствору бензамидина·НСl (66 г) в воде (300 мл) при 0°C. Через 1,5 часа твердые вещества отфильтровывали, промывали водой и нагревали в 4 н. НСl (750 мл). Полученный прозрачный раствор охлаждали на ледяной бане.

Кристаллы отфильтровывали, промывали водой и сушили над гидроксидом калия при 50°С. Выход 44 г. Т.пл. 164-166°С.

(b) 4-Хлорметил-5-метил-2-фенилимидазол·НСl

Раствор тионилхлорида (100 мл) в бензоле (100 мл) медленно добавляли к перемешиваемой суспензии 4-гидроксиметил-5-метил-2-фенилимидазола·НСl (44 г) в бензоле (150 мл). Через 2 часа добавляли диэтиловый эфир и полученные твердые вещества отфильтровывали, промывали диэтиловым эфиром и сушили в вакууме. Выход 60 г. Т.пл. 200-205°С.

(c) 4-Цианометил-5-метил-2-фенилимидазол

Раствор 4-хлорметил-5-метил-2-фенилимидазола·НСl (40,5 г) в диметилсульфоксиде (400 мл) добавляли к перемешиваемому раствору цианида натрия (80 г) в диметилсульфоксиде (600 мл) на протяжении 30 минут. Через 20 часов твердые вещества отфильтровывали, промывали водой и сушили в вакууме. Выход 14 г. Т.пл. 97-100°С.

(d) 4-Этоксикарбонилметил-5-метил-2-фенилимидазол

Хлористоводородную кислоту в этаноле (35%, 150 мл) добавляли к 4-циaнoмeтил-5-мeтил-2-фeнилимидaзoлy (20,5 г) и нагревали до температуры кипения с обратным холодильником. Через 1 час реакционную смесь выливали в воду (400 мл) и добавляли NaOH (рН>8) с последующей экстракцией дихлорметаном (3 раза). Объединенные органические слои сушили над сульфатом натрия и выпаривали досуха в вакууме. Выход 17,3 г. Т.пл. 119-122°С.

(e) 4-Гидроксиэтил-5-метил-2-фенилимидазол

Раствор 4-этоксикарбонилметил-5-метил-2-фенилимидазола (19 г) в тетрагидрофуране (100 мл) добавляли по каплям (в течение 45 мин) к литийалюминийгидриду (10 г) в тетрагидрофуране (150 мл). Через 2 часа кипящую реакционную смесь оставляли на ночь при комнатной температуре. Смесь охлаждали на ледяной бане и добавляли воду (40 мл) и тетрагидрофуран (50 мл). Твердые вещества отфильтровывали и промывали диэтиловым эфиром. Выход 20 г. Т.пл. 164-167°С.

(f) 4-Хлорэтил-5-метил-2-фенилимидазол·НСl

Раствор тионилхлорида (50 мл) в бензоле (50 мл) медленно добавляли (1 час) к перемешиваемой суспензии 4-гидроксиэтил-5-метил-2~фенилимидазола (20 г) в бензоле (250 мл) при 70°С. Через 1,5 часа реакционную смесь концентрировали в вакууме, растворяли в воде (500 мл) и промывали диэтиловым эфиром. Доводили рН до >8 аммиаком и смесь экстрагировали диэтиловым эфиром (2 раза). Объединенные органические слои сушили над сульфатом натрия и выпаривали в вакууме. Полученное масло растворяли в этаноле. Добавляли хлористоводородную кислоту в этаноле (35%, 2 мл) и диэтиловый эфир, твердые вещества собирали фильтрованием и перекристаллизовывали из этанола. Выход 7,5 г. Т.пл. 188-190°С.

(g) Этил-5-амино-4-(3-{2-[5-метил-2-фенилимидазол-4-ил]этокси}фенил)-2-метилтиотиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоксилат

Циклизацию сульфата S-метилизотиомочевины (139 мг), 3-{2-[5-метил-2-фенилимидазол-4-ил]этокси}бензальдегида (496 мг, синтезированного из 3-гидроксибензальдегида (489 мг) и 4-хлорэтил-5-метил-2-фенилимидазола (1,03 г) с помощью способа, описанного в примере 79а) и этилцианоацетата (112 мкл), обработку продукта POCl₃ и последующее взаимодействие с этил-2-меркаптоацетатом осуществляли в соответствии со способами, описанными в примере 1. Чистое, указанное в заголовке соединение получали после хроматографии на силикагеле с использованием смеси дихлорметан/этилацетат=100/0 (об/об)=>70/30 (об/об) в качестве элюента. Выход 9,2 мг.

Масс-спектр-ESI: [М+H]⁺=546,2.

ТСХ: R_f=0,43, силикагель, дихлорметан/метанол=95/5 (об/об).

Пример 82

Этил-5-амино-2-метилтио-4-(3-[2-N-морфолиноэтокси]фенил)тиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоксилат

Циклизацию сульфата S-метилизотиомочевины (209 мг), 3-(2-N-морфолиноэтоксибензальдегида (705 мг, синтезированного из 3-гидроксибензальдегида (1,17 г) и N-(2-хлорэтил)морфолина (1,44 г) с помощью способа, описанного в примере 79а) и этилцианоацетата (168 мкл), обработку продукта РОСl₃ и последующее взаимодействие с этил-2-меркаптоацетатом осуществляли в соответствии со способами, описанными в примере 1. Выход 35,2 мг.

Масс-спектр-ESI: [М+H]⁺=475,2.

ТСХ: R_f=0,55, силикагель, дихлорметан/метанол=95/5 (об/об).

Пример 83

Этил-5-амино-4-(3-[2-хлорэтокси]фенил)-2-метилтиотиено[2,3-d] пиримидин-6-карбоксилат

Циклизацию сульфата S-метилизотиомочевины (209 мг), 3-(2-гидроксиэтокси)бензальдегида (499 мг) и этилцианоацетата (168 мкл), обработку продукта POCl₃ и последующее взаимодействие с этил-2-меркаптоацетатом осуществляли в соответствии со способами, описанными в примере 1. Чистое указанное в заголовке соединение получали после хроматографии на силикагеле с использованием дихлорметана в качестве элюента. Выход 1,7 мг.

Масс-спектр-ESI: [М+H]⁺=424,0.

ТСХ: R_f=0,45, силикагель, дихлорметан.

Пример 84

Этил-5-амино-2-метилтио-4-(3-[2-{этилоксикарбонилметилтио}этоксифенил)тиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоксилат

Циклизацию сульфата S-метилизотиомочевины (209 мг), 3-(2-гидроксиэтокси)бензальдегида (499 мг) и этилцианоацетата (168 мкл), обработку продукта РОСl₃ и последующее взаимодействие с этил-2-меркаптоацетатом осуществляли в соответствии со способами, описанными в примере 1. Чистое указанное в заголовке соединение получали после хроматографии на силикагеле с использованием дихлорметана в качестве элюента. Выход 2,8 мг.

Масс-спектр-ESI: [М+H]⁺=508,2.

ТСХ: R_f=0,14, силикагель, дихлорметан.

Пример 85

Этил-5-гидрокси-2-метилтио-4-фенилтиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоксилат

а) 5-Этилоксикарбонил-2-метилтио-4-фенил-4,5-дигидро-6-оксопиримидин

Смесь сульфата S-метилизотиомочевины (418 мг), бензальдегида (320 мкл), диэтилмалоната (478 мкл) и карбоната калия (435 мг) в абсолютном этаноле (5 мл) перемешивали при 50°С в течение 4 часов, реакционную смесь выпаривали досуха, остаток растворяли в этилацетате и промывали с 0,5 н. соляной кислотой, водой, 5%-ным бикарбонатом натрия, водой и насыщенным раствором соли, сушили над сульфатом натрия и выпаривали досуха. Выход 546 мг.

Масс-спектр-ESI: [М+H]⁺=293,2.

ТСХ: R_f=0,63, силикагель, дихлорметан/метанол=95/5 (об/об).

(b) 5-Этилоксикарбонил-2-метилтио-4-фенил-6-оксопиримидин

Смесь 5-этилоксикарбонил-2-метилтио-4-фенил-4,5-дигидро-6-оксопиримидина (273 мг) и 2,З-дихлор-5,6-дициано-1,4-бензохинона (200 мг) в изопропаноле (5 мл) перемешивали в течение 16 часов. Реакционную смесь выпаривали досуха, остаток растворяли в дихлорметане и перемешивали с 5%-ным тиосульфатом натрия в течение 5 минут. Органический слой промывали 5%-ным бикарбонатом натрия и водой (2х), сушили над сульфатом натрия и выпаривали досуха. Чистое указанное в заголовке соединение излучали после хроматографии на силикагеле с использованием смеси дихлорметан/метанол 98/2 (об/об) в качестве элюента. Выход 63 мг.

Масс-спектр-ESI: [М+H]⁺=291,2.

ТСХ: R_f=0,50, силикагель, дихлорметан/метанол=95/5 (об/об).

(с) Этил-5-гидрокси-2-метилтио-4-фенилтиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоксилат

Обработку 5-этилоксикарбонил-2-метилтио-4-фенил-6-оксопиримидина (63 мг) и РОСl₃ (304 мкл) и последующее взаимодействие продукта с этил-2-меркаптоацетатом осуществляли в соответствии со способами, описанными в примере 1. Чистое укзанное в заголовке соединение получали после хроматографии на силикагеле с использованием смеси гептан/этилацетат 100/0=>60/40 (об/об) в качестве элюента. Выход 48 мг.

Масс-спектр-ESI: [М+H]⁺=347,2.

ТСХ: R_f=0,72, силикагель, дихлорметан.

Пример 86

Этил-3-амино-4,6-дифенилтиено[2,3-b]пиридин-2-карбоксилат

Альдольную конденсацию ацетофенона (2,33 мл) и бензальдегида (2,24 мл), циклизацию α,β-ненасыщенного кетона с 2-цианотиоацетамидом и последующее взаимодействие с этил-2-хлорацетатом осуществляли в соответствии со способами, описанными в Pharmazie, 44:639-640 (1989). Выход 65 мг.

Масс-спектр-ESI: [М+H]⁺=375,0.

ТСХ: R_f=0,6, силикагель, дихлорметан.

Пример 87

Этил-3-амино-6-нафтил-4-фенилтиено[2,3-b]пиридин-2-карбоксилат

Альдольную конденсацию 2-ацетонафтона (1,70 г) и бензальдегида (1,12 мл), циклизацию α,β-ненасыщенного кетона с 2-цианотиоацетамидом и последующее взаимодействие с этил-2-хлорацетатом осуществляли в соответствии со способами, описанными в примере 86. Выход 1,05 г.

Масс-спектр-ESI: [М+H]⁺=425,2.

ТСХ: R_f=0,75, силикагель, дихлорметан.

Пример 88

Этил-3-амино-4-фенил-6-(2-тиенил)тиено[2,3-b]пиридин-2-карбоксилат

Альдольную конденсацию 2-ацетилтиофена (1,08 мл) и бензальдегида (1,12 мл), циклизацию α,β-ненасыщенного кетона-2-цианотиоацетамидом и последующее взаимодействие с этил-2-хлорацетатом осуществляли в соответствии со способами, описанными в примере 86. Выход 767 мг.

Масс-спектр-ESI: [М+H]⁺=381,2.

ТСХ: R_f=0,70, силикагель, дихлорметан.

Пример 89

Этил-3-амино-6-нафтил-4-(2-тиенил)тиено[2,3-b]пиридин-2-карбоксилат

Альдольную конденсацию 2-ацетонафтона (1,70 г) и 2-тиофенкарбоксальдегида (1,03 мл), циклизацию α,β-ненасыщенного кетона с 2-цианотиоацетамидом и последующее взаимодействие с этил-2-хлорацетатом осуществляли в соответствии со способами, описанными в примере 86. Выход 1,58 г.

Масс-спектр-ESI: [М+H]⁺=431,2.

ТСХ: R_f=0,75, силикагель, дихлорметан.

Пример 90

Этил-3-амино-6-фенил-4-(2-тиенил)тиено[2,3-b]пиридин-2-карбоксилат

Альдольную конденсацию ацетофенона (1,17 мл) и 2-тиофенкарбоксальдегида (1,03 мл), циклизацию α,β-ненасыщенного кетона с 2-цианотиоацетамидом и последующее взаимодействие с этил-2-хлорацетатом осуществляли в соответствии со способами, описанными в примере 86. Выход 1,04 г.

Масс-спектр-ESI: [М+H]⁺=381,2.

ТСХ: R_f=0,70, силикагель, дихлорметан.

Пример 91

Этил-3-амино-6-(2-фурил)-4-(2-тиенил)тиено[2,3-b]пиридин-2-карбоксилат

Альдольную конденсацию 2-фуральдегида (1,01 г) и 2-тиофенкарбоксальдегида (1,03 мл), циклизацию α,β-ненасыщенного кетона с 2-цианотиоацетамидом и последующее взаимодействие с этил-2-хлорацетатом осуществляли в соответствии со способами, описанными в примере 86. Выход 443 мг.

Масс-спектр-ESI: [М+H]⁺=371,2.

ТСХ: R_f=0,55, силикагель, дихлорметан.

Пример 92

Этил-3-амино-4,6-ди(2-тиенил)тиено[2,3-b]пиридин-2-карбоксилат

Альдольную конденсацию 2-ацетилтиофена (1,08 мл) и 2-тиофенкарбоксальдегида (1,03 мл), циклизацию α,β-ненасыщенного кетона с 2-цианотиоацетамидом и последующее взаимодействие с этил-2-хлорацетатом осуществляли в соответствии со способами, описанными в примере 86. Выход 1,04 г.

Масс-спектр-ESI: [М+H]⁺=387,0.

ТСХ: R_f=0,76, силикагель, дихлорметан.

Пример 93

Этил-3-амино-4-(3-метоксифенил)-6-фенилтиено[2,3-b]пиридин-2-карбоксилат

Альдольную конденсацию ацетофенона (1,17 мл) и 3-метоксибензальдегида (1,4 мл), циклизацию α,β-ненасыщенного кетона с 2-цианотиоацетамидом и последующее взаимодействие с этил-2-хлорацетатом осуществляли в соответствии со способами, описанными в примере 86. Выход 164 мг.

Масс-спектр-ESI: [М+H]⁺=405,2.

ТСХ: R_f=0,65, силикагель, дихлорметан.

Пример 94

3-Амино-2-бензоил-4,6-дифенилтиено[2,3-b]пиридин

Альдольную конденсацию ацетофенона (2,33 мл) и бензальдегида (2,24 мл), циклизацию α,β-ненасыщенного кетона с 2-цианотиоацетамидом и последующее взаимодействие с 2-хлорацетофеноном осуществляли в соответствии со способами, описанными в примере 86. Выход 57 мг.

Масс-спектр-ESI: [М+H]⁺=407,4.

ТСХ: R_f=0,65, силикагель, дихлорметан.

Пример 95

3-Амино-2-бензоил-6-нафтил-4-фенилтиено[2,3-b]пиридин

Альдольную конденсацию 2-ацетонафтона (1,70 г) и бензальдегида (1,12 мл), дциклизацию α,β-ненасыщенного кетона с 2-цианотиоацетамидом и последующее взаимодействие с 2-хлорацетофеноном осуществляли в соответствии со способами, описанными в примере 86. Выход 50 мг.

Масс-спектр-ESI: [М+H]⁺=457,2.

ТСХ: R_f=0,69, силикагель, дихлорметан.

Пример 96

3-Амино-2-бензоил-4-фенил-6-(2-тиенил)тиено[2,3-b]пиридин

Альдольную конденсацию 2-ацетилтиофена (1,08 мл) и бензальдегида (1,12 мл), циклизацию α,β-ненасыщенного кетона с 2-цианотиоацетамидом и последующее взаимодействие с 2-хлорацетофеноном осущесгвяяли в соответствии со способами, описанными в примере 86. Выход 57 мг.

Масс-спектр-ESI: [М+H]⁺=413,2.

ТСХ: R_f=0,69, силикагель, дихлорметан.

Пример 97

3-Амино-2-бензоил-6-нафтил-4-(2-тиенил)тиено[2,3-b]пиридин

Альдольную конденсацию 2-ацетонафтона (1,70 г) и 2-тиофенкарбоксальдегида (1,03 мл), циклизацию α,β-ненасыщенного кетона с 2-цианотиоацетамидом и последующее взаимодействие с 2-хлорацетофеноном осуществляли в соответствии со способами, описанными в примере 86. Выход 66 мг.

Масс-спектр-ESI: [М+H]⁺=463,0.

ТСХ: R_f=0,67, силикагель, дихлорметан.

Пример 98

3-Амино-2-бензоил-6-фенил-4-(2-тиенил)тиено[2,3-b]пиридин

Альдольную конденсацию ацетофенона (1,17 мл) и 2-тиофенкарбоксальдегида 1(1,03 мл), циклизацию α,β-ненасыщенного кетона с 2-цианотиоацетамидом и последующее взаимодействие с 2-хлорацетофеноном осуществляли в соответствии со способами, описанными в примере 86. Выход 67 мг.

Масс-спектр-ESI: [М+H]⁺=413,2.

ТСХ: R_f=0,71, силикагель, дихлорметан.

Пример 99

3-Амино-2-бензоил-6-(2-фурил)-4-(2-тиенил)тиено[2,3-b]пиридин

Альдольную конденсацию 2-ацетилфурана (1,01 г) и 2-тиофенкарбоксальдегида (1,03 мл), циклизацию α,β-ненасыщенного кетона с 2-цианотиоацетамидом и последующее взаимодействие с 2-хлорацетофеноном осуществляли в соответствии со способами, описанными в примере 86. Выход 65 мг.

Масс-спектр-ESI: [М+H]⁺=403,2.

ТСХ: R_f=0,65, силикагель, дихлорметан.

Пример 100

3-Амино-2-бензоил-4,6-ди(2-тиенил)тиено[2,3-b]пиридин

Альдольную конденсацию 2-ацетилтиофена (1,08 мл) и 2-тиофенкарбоксальдегида (1,03 мл), циклизацию α,β-ненасыщенного кетона с 2-цианотиоацетамидом и последующее взаимодействие с 2-хлорацетофеноном осуществляли в соответствии со способами, описанными в примере 86. Выход 67 мг.

Масс-спектр-ESI: [М+H]⁺=419,0.

ТСХ: R_f=0,57, силикагель, дихлорметан.

Пример 101

3-Амино-2-бензоил-4-(3-метоксифенил)-6-фенилтиено[2,3-b]пиридин

Альдольную конденсацию ацетофенона (1,17 мл) и 3-метоксибензальдегида (1,4 мл), циклизацию α,β-ненасыщенного кетона с 2-цианотиоацетамидом и последующее взаимодействие с 2-хлорацетофеноном осуществляли в соответствии со способами, описанными в примере 86. Выход 31 мг.

Масс-спектр-ESI: [М+H]⁺=437,2.

ТСХ: R_f=0,57, силикагель, дихлорметан.

Пример 102

Изопропил-3-амино-4,6-дифенилтиено[2,3-b]пиридин-2-карбоксамид

(а) 3-Амино-4,6-дифенилтиено[2,3-b]пиридин-2-карбоновая кислота

Гидроксид лития (59 мг) добавляли к перемешиваемому раствору 53 мг этил-3-амино-4,2-дифенилтиено[2,3-b]пиридин-2-карбоксилата (см. примеры 86) в смеси диоксан/вода=9/1 (об/об) и смесь нагревали при 80°С в течение 72 часов. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и подкисляли до рН 2. Кристаллы собирали фильтрованием и сушили в вакууме. Выход 33 мг.

Масс-спектр-ESI [М+H]⁺=47,2.

ТСХ: R_f=0,05, силикагель, дихлорметан/метанол=97/3 (об/об).

(b) Изопропил-3-амино-4,6-дифенилтиено[2,3-b]пиридин-2-карбоксамид

К перемешиваемому раствору 3-амино-4,6-дифенилтиено[2,3-b]пиридин-2-карбоновой ксислоты (33 мг) в дихлорметане добавляли N,N-диизопропиэтиламин (36 мкл), изопропиламин (12 мкл) и тетрафторборат О-(бензотриазол-1-ил)-N,N,N’,N’-тетраметилурония (33 мг). Через 16 часов растворитель выпаривали и остаток хроматографировали на силикагеле с использованием дихлорметана в качестве элюента. Выход 21 мг.

Масс-спектр-ESI: [М+H]⁺=388,2.

ТСХ: R_f=0,6, силикагель, дихлорметан/метанол=97/3 (об/об).

Пример 103

Изопропил-3-амино-6-нафтил-4-фенилтиено[2,3-b]пиридин-2-карбоксамид

Этил-3-амино-6-нафтил-4-фенилтиено[2,3-b]пиридин-2-карбоксилат (см. пример 87) сначала гидролизовали в соответствующую кислоту (50 мг) с последующим взаимодействием с изопропиламином (16 мкл) для получения соответствующего амида, используя способы, описанные в примере 102. Выход 17 мг.

Масс-спектр-ESI: [М+H]⁺=438,2.

ТСХ: R_f=0,6, силикагель, дихлорметан/метанол=97/3 (об/об).

Пример 104

Изопропил-3-амино-4-фенил-6-(2-тиенил)тиено[2,3-b]пиридин-2-карбоксамид

Этил-3-амино-4-фенил-6-(2-тиенил)тиено[2,3-b]пиридин-2-карбоксилат (см. пример 88) сначала гидролизовали в соответствующую кислоту (50 мг) с последующим взаимодействием с изопропиламином (18 мкл) для получения соответствующего амида, используя способы, описанные в примере 102. Выход 6 мг.

Масс-спектр-ESI: [М+H]⁺=394,2.

ТСХ: R_f=0,6, силикагель, дихлорметан/метанол=97/3 (об/об).

Пример 105

Изопропил-3-амино-6-нафтил-4-(2-тиенил)тиено[2,3-b]пиридин-2-карбоксамид

Этил-3-амино-6-нафтил-4-(2-тиенил)тиено[2,3-b]пиридин-2-карбоксилат (см. пример 89) сначала гидролизовали в соответствующую кислоту (50 мг) с последующим взаимодействием с изопропиламином (16 мкл) для получения соответствующего амида, используя способы, описанные в примере 102. Выход 16 мг.

Масс-спектр-ESI: [М+H]⁺=444,2.

ТСХ: R_f=0,6, силикагель, дихлорметан/метанол=97/3 (об/об).

Пример 106

Изопропил-3-амино-6-фенил-4-(2-тиенил)тиено[2,3-b]пиридин-2-карбоксамид

Этил-3-амино-6-фенил-4-(2-тиенил)тиено[2,3-b]пиридин-2-карбоксилат (см. пример 90) сначала гидролизовали в соответствующую кислоту (50 мг) с последующим взаимодействием с изопропиламином (18 мкл) для получения соответствующего амида, используя способы, описанные в примере 102.

Выход 16 мг.

Масс-спектр-ESI: [М+H]⁺=394,2.

ТСХ: R_f=0,6, силикагель, дихлорметан/метанол=97/3 (об/об).

Пример 107

Изопропил-3-амино-6-(2-фурил)-4-(2-тиенил)тиено[2,3-b]пиридин-2-карбоксамид

Этил-3-амино-6-(2-фурил)-4-(2-тиенил)тиено[2,3-b]пиридин-2-карбоксилат (см. пример 91) сначала гидролизовали в соответствующую кислоту (50 мг) с последующим взаимодействием с иэопропиламином (18 мкл) для получения соответствующего амида, используя способы, описанные в примере 102. Выход 7 мг.

Масс-спектр-ESI: [М+H]⁺=384,0.

ТСХ: R_f=0,6, силикагель, дихлорметан/метанол=97/3 (об/об).

Пример 108

Изопропил-3-амино-4,6-ди(2-тиенил)тиено[2,3-b]пиридин-2-карбоксамид

Этил-3-амино-4,6-ди(2-тиенил)тиено[2,3-b]пиридин-2-карбоксилат (см. пример 92) сначала гидролизовали в соответствующую кислоту (50 мг) с последующим взаимодействием с изопропиламином (18 мкл) для получения соответствующего амида, используя способы, описанные в примере 102. Выход 35 мг.

Масс-спектр-ESI: [М+H]⁺=400,2.

ТСХ: R_f=0,6, силикагель, дихлорметан/метанол=97/3 (об/об).

Пример 109

Изопропил-3-амино-4-(3-метоксифенил)-6-фенилтиено[2,3-b]пиридин-2-карбоксамид

Этил-3-амино-4-(-метоксифенил)-6-фенилтиено[2,3-b]пиридин-2-карбоксилат (см. пример 93) сначала гидролизовали в соответствующую кислоту (50 мг), затем подвергали взаимодействию с изопропиламином (17 мкл) для получения соответствующего амида, используя способы, описанные в примере 102. Выход 28 мг.

Масс-спектр-ESI: [М+H]⁺=418,2.

ТСХ: R_f=0,6, силикагель, дихлорметан/метанол=97/3 (об/об).

Пример 110

трет-Бутил-3-амино-6-метилтио-4-(3-метоксифенил)тиено[2,3-b] пиридин-2-карбоксамид

(a) 1.1-Дициано-2-метил-2-(3-метоксифенил)этен

Раствор 3-метоксиацетофенона (3,46 г) и нитрила малоновой кислоты (6,89 мл) в бензоле (40 мл) обрабатывали АсОН (2,30 мл) и ацетатом аммония (1,50 г) и реакционную смесь нагревали при азеотропной отгонке с использованием насадки Дина-Старка.

Через 5 часов реакционную смесь охлаждали до температуры окружающей среды, разбавляли EtOAc, промывали водой и насыщенным раствором соли, сушили (MgSO₄) и концентрировали в вакууме. Остаток очищали флэш-хроматографией на силикагеле с использованием смеси EtOAc/гептан=3/7 (об/об) в качестве элюента. Выход 6,4 г.

Масс-спектр-ESI: [М+H]⁺=199,2.

ТСХ: R_f=0,6, силикагель, EtOAc/гептан=2/3 (об/об).

(b) 1,1-Ди(метилтио)-3-(3-метоксифенил)-4,4-дицианобутадиен

1,1-Дициано-2-метил-2-(3-метоксифенил)этен (пример 110а, 6,4 г), сероуглерод (3,85 мл) и метилиодид (9,9 мл) добавляли к предварительно полученной суспензии гидрида натрия (60% дисперсия в минеральном масле, 1,60 г) в ДМФ (200 мл). Через 7 часов реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении, повторно растворяли в EtOAc, промывали водой и насыщенным раствором соли, сушили (MgSO₄) и концентрировали в вакууме. Остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле (элюент: EtOAc/гeптaн=3/7 (об/об). Выход 3,92 г.

Масс-спектр-ESI: [М+H]⁺=303,1.

ТСХ: R_f=0,5, силикатель, EtOAc/гептан=2/3 (об/об).

(с) 2-Метилтио-4-(3-метоксифенил)-5-цианопиридин-6-он

Раствор 1,1-ди(метилтио)-3-(3-метоксифенил)-4,4-дицианобутадиена (пример 110b, 3,92 г) в EtOH (50 мл) обрабатывали 48% водн. НВr (39 мл) и раствор нагревали при температуре кипения с обратным холодильником в течение 3 часов. После охлаждения реакционной смеси на ледяной бане (0°С) осадок отфильтровывали, промывали водой и сушили в вакууме. Выход 2,4 г.

Масс-спектр-ESI: [М+H]⁺=273,2.

ТСХ: R_f=0,47, силикагель, CH₂Cl₂/MeOH=9/1 (об/об).

(d) трет-Бутил-3-амино-6-метилтио-4-(3-метоксифенил)тиено[2,3-b]пиридин-2-карбоксамид

Обработку 2-метилтио-4-(3-метоксифенил)-5-цианопиридин-6-она (2,4 г, пример 110с) POСl₃ и последующее взаимодействие с этил-2-меркаптоацетатом осуществляли в соответствии со способами, описанными в примере 1. Полученное производное - этил-3-амино-4-(3-метоксифенил)-6-метилтиотиено[2,3-d]пиримидин-2-карбоксилат (2,6 г) сначала гидролизовали в соответствующую кислоту (2,2 г) с использованием способа, описанного в примере 34, затем подвергали взаимодействию с трет-бутиламином (2 мл), получая соответствующий амид в соответствии с примером 50. Указанное в заголовке соединение очищали хроматографией на силикагеле с использованием смеси гептан/EtOAc=3/1 (об/об) в качестве элюента. Выход 2,11 г.

Масс-спектр-ESI: [М+H]⁺=402,3.

ТСХ: R_f=0,37, силикагель, гептан/EtOAc=3/2 (об/об).

Пример 111

трет-Бутил-5-амино-2-метилтио-4-(N-бензоил-З-аминофенил)тиено[2,3-d]-пиримидин-6-карбоксамид

(a) Этил-5-амино-2-метилтио-4-(3-нитрофенил)тиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоксилат

Циклизацию сульфата S-метилизотиомочевины (700 мг), 3-нитробензальдегида (750 мг) и этилцианоацетата (560 мкл), обработку продукта РОСl₃ и последующее взаимодействие с этил-2-меркаптоацетатом осуществляли в соответствии со способами, описанными в примере 1. Очищенное указанное в заголовке соединение получали после хроматографии на силикагеле с использованием смеси гептан/EtOAc=3/2 (об/об) в качестве элюента. Выход 780 мг.

Масс-спектр-ESI: [М+H]⁺=391,3.

ТСХ: R_f=0,35, силикагель, гептан/EtOAc=3/2 (об/об).

(b) трет-Бутил-5-амино-2-метилтио-4-(3-аминофенил)тиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоксамид

Этил-5-амино-2-метилтио-4-(3-нитpoфeнил)тиeнo[2,3-d]пиримидин-6-карбоксилат (пример 111a, 780 мг) растворяли в 10 мл диоксана. Затем добавляли 10 мл EtOH и хлорид олова(II) (1,1 г) и реакционную смесь перемешивали в течение ночи при 90°С. После концентрирования реакционной смеси в вакууме остаток повторно растворяли в EtOAc (50 мл) и промывали 10 мл 4 М NaOH, сушили (MgSO₄) и концентрировали при пониженном давлении. Этиловый сложный эфир полученного производного - этил-5-амино-2-метилтио-4-(3-аминофенил)тиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоксилата (558 мг) омыляли в соответствующую кислоту (430 мг) с использованием способа, описанного в примере 34, с последующим взаимодействием с трет-бутиламином (200 мкл) для образованиям соответствующего трет-бутиламида (в соответствии с примером 50). Указанное в заголовке соединение очищали хроматографией на силикагеле с использованием смеси гептан/EtOAc=3/1 (об/об) в качестве элюента. Выход 391 мг.

Масс-спектр-ESI: [М+H]⁺=388,0.

ТСХ: R_f=0,43, силикагель, гептан/EtOAc=3/2 (об/об).

(с) трет-Бутил-5-амино-2-метилтио-4-(N-бензоил-3-аминофенил)тиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоксамид

трет-Бутил-5-амино-2-метилтио-4-(3-аминофенил)тиено[2,3-d]пиpимидин-6-кapбoкcaмид (пример 111b, 391 мг) растворяли в 10 мл CH₂Cl₂. Затем добавляли N,N-диизопропилэтиламин (600 мкл) и бензоилхлорид (210 мг) и реакционную смесь перемешивали в течение 2 часов. Реакционную смесь разбавляли CH₂Cl₂ (50 мл) и промывали насыщенным водным раствором NaHCO₃. Органический слой сушили (MgSO₄) и концентрировали при пониженном давлении. Указанное в заголовке соединение очищали хроматографией на силикагеле с использованием смеси гептан/EtOAc=3/1 (об/об) в качестве элюента. Выход 348 мг.

Масс-спектр-ESI: [М+H]⁺=492,1.

ТСХ: R_f=0,50, силикагель, гептан/EtOAc=3/2 (об/об).

Пример 112

трет-Бутил-5-амино-2-метилтио-4-(3-метоксифенил)тиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоксамид

Этил-5-амино-4-(3-метоксифенил)-2-метилтиотиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоксилат (см. пример 1, 400 мг) сначала гидролизовали в соответствующую кислоту (340 мг) с использованием способа, описанного в примере 34, с последующим взаимодействием с трет-бутиламином (150 мкл), получая соответствующий амид в соответствии с примером 50. Указанное в заголовке соединение очищали хроматографией на силикагеле с использованием смеси гептан/EtOAc=3/1 (об/об) в качестве элюента. Выход 310 мг.

Масс-спектр-ESI: [М+H]⁺=403,0.

ТСХ: R_f=0,32, силикагель, гептан/EtOAc=3/2 (об/об).

Пример 113

N-Метил-N-изопропил-5-амино-2-метилтио-4-(3-метоксифенил)тиено [2,3-d]пиримидин-6-карбоксамид

Этил-5-амино-4-(3-метоксифенил)-2-метилтиотиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоксилат (см. пример 1) сначала гидролизовали в соответствующую кислоту (340 мг) с использованием способа, описанного в примере 34, затем подвергали взаимодействию с N-метил-N-изопропиламином (150 мкл), получая соответствующий амид в соответствии с примером 50. Указанное в заголовке соединение очищали хроматографией на силикагеле с использованием смеси гептан/EtOAc=3/1 (об/об) в качестве элюента. Выход 271 мг.

Масс-спектр-ESI: [М+H]⁺=404,0.

ТСХ: R_f=0,34, силикагель, гептан/EtOAc=3/2 (об/об).

Пример 114

трет-Бутил-5-амино-2-этокси-4-(3-метоксифенил)тиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоксамид

трет-Бутил-5-амино-2-метилтио-4-(3-метоксифенил)тиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоксамид (см. пример 112, 1,1 г) растворяли в трифторуксусной кислоте (20 мл) и добавляли 3-хлорпербензойную кислоту (mСРВА, 1,23 г). После перемешивания в течение 2 часов реакционную смесь концентрировали в вакууме, повторно растворяли в CH₂Cl₂ (50 мл), промывали насыщенным водным NaHCO₃, сушили (MgSO₄) и концентрировали при пониженном давлении. Остаток, содержащий соответствующий 2-метилсульфоксид, затем растворяли в EtOH (10 мл) и добавляли KO-t-Bu (1 г). После нагревания при температуре кипения с обратным холодильником в течение ночи реакционную смесь подкисляли 1 М НСl, концентрировали в вакууме, повторно растворяли в CH₂Cl₂ (50 мл), промывали насыщенным водным NаНСО₃, сушили (MgSO₄) и концентрировали при пониженном давлении. Очистку полученного таким образом масла проводили хроматографией на силикагеле с использованием смеси гептан/EtOAc=3/1 (об/об) в качестве элюента. Выход 356 мг.

Масс-спектр-ESI: [М+H]⁺=401,6.

ТСХ: R_f=0,50, силикагель, гептан/EtOAc=3/2 (об/об).

Пример 115

5-Амино-2-(2-тиенил)-4-(3-метоксифенил)-6-(N-морфолинокарбонил)тиено[2,3-d]пиримидин

Этил-5-амино-4-(3-метоксифенил)-2-(2-тиенил)тиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоксилат (561 мг, см. пример 27) сначала гидролизовали в соответствующую кислоту (464 мг) с использованием способа, описанного в примере 34, и затем подвергали взаимодействию с морфолином (300 мкл), получая соответствующий амид в соответствии с примером 50. Указанное в заголовке соединение хроматографировали на силикагеле с использованием смеси гептан/EtOAc=3/2 (об/об) в качестве элюента. Выход 457 мг.

Масс-спектр-ESI: [М+H]⁺=453,2.

ТСХ: R_f=0,16, силикагель, гептан/EtOAc=3/2 (об/об).

Пример 116

трет-Бутил-5-амино-2-метилтио-4-(N-(2-трет-бутиламино)ацетил)-3-аминофенил)тиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоксамид

трет-Бутил-5-амино-2-метилтио-4-(3-аминофенил)тиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоксамид (пример 111b, 195 мг) растворяли в 5 мл CH₂Cl₂. Затем добавляли N,N-диизопропилэтиламин (300 мкл) и бромацетилхлорид (120 мг) и реакционную смесь перемешивали в течение 2 часов. Реакционную смесь разбавляли CH₂Cl₂ (20 мл) и промывали насыщенным водным NaНСО₃. Органический слой затем обрабатывали трет-бутиламином (2 мл). После выдерживания в течение ночи реакционную смесь опять промывали насыщенным водным раствором NаНСО₃, сушили (MgSO₄) и концентрировали в вакууме. Очистку остатка осуществляли с использованием хроматографии на силикагеле (элюент: CH₂Cl₂/MeOH=от 1/0 до 9/1 (об/об)). Выход 155 мг.

Масс-спектр-ESI: [М+H]⁺=501,2.

ТСХ: R_f=0,64, силикагель, CH₂Cl₂/MeOH=9/1 (об/об).

Пример 117

трет-Бутил-5-амино-2-метилтио-4-(3-(3-(3-пиридил)пропокси)фенил)тиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоксамид

трет-Бутил-5-амино-2-метилтио-4-(3-метоксифенил)тиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоксамид (400 мг, пример 112) растворяли в охлажденном (0°C) CH₂Cl₂ (10 мл) и добавляли по каплям ВВr₃ (300 мкл). После перемешивания в течение ночи при комнатной температуре реакционную смесь разбавляли CH₂Cl₂ (50 мл) и промывали насыщенным водным NаНСО₃. Органический слой сушили (MgSO₄) и концентрировали почти досуха. Оставшееся масло добавляли по каплям в колбу с перемешиваемым толуолом (50 мл). Полученный таким образом остаток (360 мг), содержащий трет-бутил-5-амино-2-метилтио-4-(3-гидроксифенил)тиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоксамид отфильтровывали и сушили в вакууме, затем растворили в ТГФ (10 мл) и добавляли РРh₃ (600 мг), 3-(3-пиридил)пропанол (270 мг) и азодикарбонилдипиперидин (ADDP, 600 мг). После перемешивания в течение ночи реакционную смесь разбавляли CH₂Cl₂ (50 мл), промывали насыщенным водным NаCO₃, сушили (MgSО₄) и очищали хроматографией на силикагеле (элюент: CH₂Cl₂/MeOH=от 1/0 до 95/5 (об/об)). Выход 271 мг.

Масс-спектр-ESI: [М+H]⁺=508,2.

ТСХ: R_f=0,56, силикагель, CH₂Cl₂/MeOH=96/4 (об/об).

Пример 118

In vitro-тест на LH биоактивность на мышиных клетках Лейдига

У самцов мышей лютеинизирующий гормон (LH) индуцирует продуцирование тестостерона в семенных клетках Лейдига. Данная активность также обнаруживается относящимся к хориону гонадотропином человека (KCG), который связывается с теми же самыми целевыми клеточными рецепторами, что и LH. In vitro анализ клеток Лейдига (van Damme et al., 1974; модифицированный Mannaerts et al., 1987) используют для определения LH биоактивности соединений, которые связываются с LH рецептором клеток Лейдига, что в свою очередь вызывает продуцирование тестостерона.

Для данного анализа клетки Лейдига выделяют из семенников (яичек) зрелых, возраста от 9 до 13 недель, мышей (штамм: HSD/Cpb: SE, Harlan, The Netherlands). Таким образом, мышей умерщвляют и семенники быстро удаляют и декапсулируют. Каждый семенник переносят в отдельную лунку планшета для тканевых культур, содержащего 0,75 мл культуральной среды на лунку. Содержимое каждой лунки пропускают через 30 см стеклянную трубку (внутренний диаметер 2,5 мм, суженная до 1,2 мм в 4 местах в середине). Полученную суспензию фильтруют через 30 мкм нейлоновую сетку и фильтрат предварительно инкубируют в 50 мл пластиковой пробирке в течение 30 минут при 37°С в инкубаторе в насыщенной водой атмосфере, состоящей из 95% воздуха/5% СО₂. После инкубирования пробирку центрифугируют при 1600 Н/кг в течение 5 минут и супернатант (надосадочную жидкость) декантируют. Полученные осадки от центрифугирования повторно суспендируют в культуральной среде (0,5 мг исходного семенника/мл и сохраняют гомогенность суспензии с помощью очень медленного ее перемешивания на магнитной мешалке.

Данную суспензию клеток Лейдига (100 мкл) добавляют в лунки микротитровочного планшета, содержащего 50 мкл ссылочного соединения, исследуемого соединения или носителя (культуральная среда) на лунку. В качестве ссылочного соединения используют стандартные образцы LH или hCG, от калиброванные относительно Международных ссылочных препаратов LH или hCG человека, предоставленных Национальным Институтом Биологических Стандартов и Контролей (National Institute for Biological Standards и Controls (NIBSC, London, UK). Исследуемое и ссылочное соединения растворяют, разводят и анализируют в той же самой культуральной среде. Планшеты, содержащие ссылочные и исследуемые соединения, инкубируют в течение 4 часов при 37°С в инкубаторе в насыщенной водой атмосфере, состоящей из 95% воздуха/5% СО₂. После инкубирования планшеты герметично закрывают и хранят при -20°С до измерения тестостерона.

Перед измерением тестостерона содержимое микротитровочных планшетов оттаивают при комнатной температуре и планшеты центрифугируют при 150 Н/кг в течение 5 минут. Аликвоту в 30 мкл супернатанта из каждой лунки разводят культуральной средой (60х) для получения подходящего разведения при измерении тестостерона. Аликвоты (12,5 мкл) каждого разведеного тест-образца затем анализируют с использованием набора для непосредственаого измерения тестостерона RIA. Результаты представлены в таблице.

Пример 119

Анализ индукции овуляции in vivo для LH биоактивности на незрелых самках мышей

У самок незрелых мышей, которых стимулировали фолликулостимулирующим гормоном (FSH), овуляция может быть индуцирована лютеинизирующим гормоном (LH) или хорионным гонатропином человека (hCG), который связывается с тем же LH-рецептором на фолликулах Граафиана. Связывание с LH-рецептором инициирует биохимический каскад, который в конце концов приводит к разрыву фолликула и экструзии зрелого ооцита. Для измерения in vivo активности LH-агонистических соединений незрелых мышей возрастом 20 дней (B6D2F1 штамм, Broekman Institute, the Netherlands) подвергают первичному воздействию FSH мочи (Humegon; 12,5 МЕ/л, 0,1 мл подкожно) для инициации фолликулогенеэа. Через сорок восемь часов после FSH обработки животным вводят исследуемое соединение, ссылочное соединение или носитель (10% раствор кремофора).

Исследуемые соединения (50 мг/кг в 0,1 мл) и носитель (0,1 мл) вводят р.о. (перорально), ссылочные соединения (500 МЕ/кг hCG в 0,1 мл) вводят в виде инъекции s.c. (подкожно). В качестве ссылочного соединения используют стандартные образцы hCG, откалиброванные относительно Международных ссылочных препаратов hCG человека, предоставленных Национальным Институтом Биологических Стандартов и Контролей (National Institute for Biological Standards и Controls (NIBSC, London, UK). Через двадцать четыре часа после введения исследуемого соединения, ссылочного соединения или носителя животных умерщвляют сворачиванием шеи. Яйцеводы иссекают и собирают в 0,9% NaCl. Затем яйцеводы помещают между двумя стеклянными пластинами и исследуют на предмет присутствия или отсутствия овулированных яйцеклеток под микроскопом. Число овулированных яйцеклеток, присутствующих в яйцеводах, является показателем in vivo LH-биоактивности. Результаты представлены в таблице.

1. Производное бициклического гетероароматического соединения общей формулы I или его фармацевтически приемлемая соль

где

R¹ представляет R⁷;

R⁷ представляет (6-10С)арил, необязательно замещенный в орто- и/или мета-положении атомом галогена; NHR⁸, OR⁸, где R⁸ означает (1-8С)алкил, который может быть замещен атомом галогена, (1-8С)алкилкарбонил, (1-8С)алкилкарбонилокси, фенил, (6-10С)арилкарбониламино, 5-метил-2-фенилимидазол-4-илом, (6С)гетероциклоалкилом, в котором 1-2 гетероатома выбраны из азота и кислорода, этилоксикарбонилметилтио(1-4С)алкокси, амино, (6-7С)гетероарилом; или (5-6С)гетероарил, содержащий в качестве гетероатома азот, кислород или серу;

R² представляет (1-8С)алкил, либо (6-10С)арил, необязательно замещенный одним или более заместителями, выбранными из (1-8С)алкокси; или (5-6С)гетероарил, содержащий в качестве гетероатома азот, кислород или серу;

R³ представляет (1-8C)алкил, возможно замещенный (6-14С)арилом, возможно замещенный галогеном, (1-4С)алкокси, (1-4С)алкоксикарбонилом, моно- или три(6-10С)циклоалкилом, (6-10С)арилом, (5-6)гетероарилом, содержащим в качестве гетероатома азот, кислород или серу; (5-7С)гетероциклоалкилом, содержащим 2 гетероатома, выбираемых из азота или кислорода; (3-8С)циклоалкил, (2-7С)гетероциклоалкил, содержащий 2 гетероатома, выбираемых из азота или кислорода; либо (6-10С)арил, необязательно замещенный одним или более заместителями, выбранными из (1-8С)алкокси;

Х представляет S или N(R⁴);

Y представляет N;

R⁴ представляет Н, (1-8С)алкил, фенил(1-8С)алкил;

или Х представляет S, а Y представляет СН;

Z представляет NH₂ или ОН;

А представляет S, О или связь;

В представляет N(H), O или связь;

обладающие агонистической активностью в отношении лютеинизирующего гормона (LH), при условии, что соединение не представляет собой метил 5-амино-4-фенил-2-метилтиотиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоксилат, этил 5-амино-4-фенил-2-метилтиотиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоксилат, метил 5-амино-4-(4-метоксифенил)-2-метилтиотиено[2,3-d] пиримидин-6-карбоксилат, этил 5-амино-4-(4-метоксифенил)-2-метилтиотиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоксилат, метил 5-амино-4-(4-хлорфенил)-2-метилтиотиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоксилат или этил 5-амино-4-(4-хлорфенил)-2-метилтиотиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоксилат.

2. Производное соединения по п.1, где Х представляет S и/или Z представляет NH₂, обладающие агонистической активностью в отношении лютеинизирующего гормона (LH).

3. Производное соединения по п.1 или 2, где Х представляет S, Z представляет NH₂ и R¹ представляет (6-14С)арил или (4-13С)гетероарил, обладающие агонистической активностью в отношении лютеинизирующего гормона (LH).

4. Производное соединения по пп.1-3, где В представляет N или О, обладающие агонистической активностью в отношении лютеинизирующего гормона (LH).

5. Соединение по пп.1-4, где В представляет N, обладающие агонистической активностью в отношении лютеинизирующего гормона (LH).

6. Соединение по пп.1-5, где R³ представляет изопропил или трет-бутил, обладающие агонистической активностью в отношении лютеинизирующего гормона (LH).

7. Соединение по пп.1-6, где Y=N, обладающие агонистической активностью в отношении лютеинизирующего гормона (LH).

8. Производное бициклического гетероароматического соединения общей формулы II или его фармацевтически приемлемая соль

где

R¹ представляет (6-10С)арил, необязательно замещенный одним или более заместителями, выбранными из (1-8С)алкокси, галогена, (1-4С)алкокси, (1-4С)алкоксикарбонила, или (5-6С)гетероарил, содержащий в качестве гетероатома азот, кислород или серу;

R² представляет (1-8С)алкил, (6-10С)арил, необязательно замещенный одним или более заместителями, выбранными из (1-8С)алкокси, или (5-6С)гетероарил, содержащий в качестве гетероатома азот, кислород или серу,

R³ представляет (1-8С)алкил, возможно замещенный галогеном, (1-4С)алкокси, (1-4С)алкоксикарбонилом, моно- или три(6-10С)циклоалкилом, (6-10С)арилом, (5-6C)гетероарилом, (5-7С)гетероциклоалкилом, содержащим в качестве гетероатома азот, кислород или серу; (3-8С)циклоалкил, (2-7С)гетероциклоалкил либо (6-10С)арил, необязательно замещенный одним или более заместителями, выбранными из (1-8С)алкокси;

В представляет N(H), O или связь;

Y представляет СН или N;

при условии, что соединение не представляет собой метил 5-амино-4-фенил-2-метилтиотиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоксилат, этил 5-амино-4-фенил-2-метилтиотиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоксилат, метил 5-амино-4-(4-метоксифенил)-2-метилтиотиено[2,3-d] пиримидин-6-карбоксилат,

этил 5-амино-4-(4-метоксифенил)-2-метилтиотиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоксилат, метил 5-амино-4-(4-хлорфенил)-2-метилтиотиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоксилат или этил 5-амино-4-(4-хлорфенил)-2-метилтиотиено[2,3-d]пиримидин-6-карбоксилат.

9. Производное соединения по п.8, где В представляет N(Н) или О.

10. Соединение по п.8 или 9, где В представляет N(Н).

11. Соединение по пп.8-10, где R³ представляет изопропил или трет-бутил.

12. Соединение по пп.8-11, где Y представляет N.

13. Соединение по пп.8-12, где R² представляет (1-4С)алкил.

14. Фармацевтическая композиция, обладающая агонистической активностью в отношении лютеинизирующего гормона (LH), включающая производное бициклического гетероароматического соединения по пп.1-13 или его фармацевтически приемлемую соль в смеси с фармацевтически приемлемой добавкой.