Способ определения степени эндогенной интоксикации у собак
Изобретение относится к ветеринарии, а именно к биологическим способам определения степени эндогенной интоксикации. Способ включает смешивание в пропорции 1:1 сыворотки крови больного животного и спермы крупного рогатого скота (гранулу замороженной спермы с оценкой в 5 баллов) и через 5 минут после смешивания методом дифференциальной окраски определение процента живых спермиев, где при значении от 30 до 45% определяют легкую степень эндогенной интоксикации, от 15 до 30% - среднюю степень, а при значении от 0 до 15% - тяжелую степень эндогенной интоксикации. Технический результат: создание быстрого и дешевого метода выявления эндогенной интоксикации и определения степени ее тяжести. Способ позволяет диагностировать и вести контроль за динамикой развития эндотоксикоза, а также за эффективностью проводимой терапии. 3 табл.
Изобретение относится к ветеринарии, а именно к биологическим способам определения степени эндогенной интоксикации.
Для диагностики эндогенной интоксикации применяют клинические и лабораторные методы.
Клиническая оценка эндотоксикоза напрямую зависит от опыта и знаний врача, требует определенного промежутка времени (иногда несколько часов) для наблюдения за состоянием животного. Вместе с тем, будучи поверхностной и субъективной, она не дает отображения всей глубины патологического процесса в организме и не позволяет определить минимальные сдвиги в состоянии животного, что затрудняет назначение адекватной терапии.
Существующие лабораторные способы определения эндогенной интоксикации (определение летальности мышей с предварительно блокированной ретикуло-эндотелиальной системой (РЭС) в ответ на введение сыворотки больного животного с ЭИ; воздействие этой же сыворотки на миграцию лейкоцитов в гемокультуре; на культуру клеток куриного эмбриона; изолированную петлю кишки экспериментального животного; на аквариумных рыбок гуппиков; метод тестирования токсичности плазмы или сыворотки крови на простейших: парамециях, тетрахименах) представляют собой дорогостоящие, трудоемкие исследования.
В медицине известен метод определения токсичности биологических жидкостей, использующий в качестве тест-объекта подвижные клетки млекопитающих, какими могут быть спермии крупного рогатого скота (КРС). Метод основан на определении подвижности сперматозоидов в измененной биологической пробой среде, которая фиксируется с помощью аппарата, разработанного во ВНИИМТ. Оптическим зондом служит лазерный луч, а фиксация подвижности сперматозойдов быка происходит автоматически (А.Л.Костюченко, А.Н.Бельских, А.Н.Тулупов Интенсивная терапия послеоперационной раневой инфекции и сепсиса. - СПб: Фолиант, 2000. - 448 с.). Недостатком метода является использование в определении дорогостоящего специального оборудования.
Целью изобретения является создание объективного, быстрого и дешевого метода выявления эндогенной интоксикации и определения степени ее тяжести. Способ позволяет диагностировать и вести контроль за динамикой эндотоксикоза, а также за эффективностью проводимой терапии.
Поставленная цель достигается тем, что сыворотку крови больного животного смешивают в пропорции 1:1 с заранее приготовленной спермой КРС (гранулу замороженной спермы с оценкой в 5 баллов растворяют в 0,8 мл 3%-ного раствора цитрата натрия). В результате действия на спермии эндогенных токсинов, находящихся в сыворотке крови больного животного, происходит повреждение их оболочки.
Через 5 минут после смешивания определяют процент живых спермиев методом дифференциальной окраски (Практикум по акушерству, гинекологии и искусственному осеменению сельскохозяйственных животных / В.С.Шипилов, Г.В.Зверева, И.И.Родин, В.Я.Никитин. - М.: Агропромиздат, 1988. - 335 с.). Для этого к капле полученной смеси добавляют 1-2 капли 5%-ного водного раствора эозина, перемешивают, делают мазок на предварительно подготовленном предметном стекле, который после высыхания просматривают под микроскопом при увеличении 400-600 раз.
При смешивании смеси сыворотки и спермы с водным раствором эозина живые спермии с прямолинейно-поступательным движением не окрашиваются, а мертвые и ослабленные (с колебательным движением) вследствие повышенной проницаемости для краски оболочки, поврежденной токсинами, окрашиваются в розовый цвет.
Производят подсчет окрашенных (мертвых) и неокрашенных (живых) спермиев. По формуле
определяют процент живых спермиев. По проценту живых спермиев определяют степень эндогенной интоксикации, используя шкалу.
Шкала оценки тяжести эндотоксикоза у собак
| Клиническая тяжесть течения | % живых спермиев |
| здоровые | 45-47 |
| легкая | 30-45 |
| средняя | 15-30 |
| тяжелая | 0-15 |
Пример 1. Опытных животных разделили на четыре группы по принципу пар-аналогов (n=10 голов) с учетом клинических признаков проявления степени тяжести эндогенной интоксикации: 1 группа - контрольная (здоровые животные); 2 группа - (опытная) легкая степень; 3 группа - (опытная) средняя степень; 4 группа - (опытная) тяжелая степень. Соответствие клинических признаков и степени тяжести эндотоксикоза представлено в таблице 1.
У животных каждой группы получили сыворотку крови. Полученную сыворотку крови смешали в пропорции 1:1 с заранее приготовленной спермой КРС (гранулу замороженной спермы с оценкой в 5 баллов растворили в 0,8 мл 3%-ного раствора цитрата натрия).
Сразу же после смешивания, через 5 минут и через 10 минут, определили процент живых спермиев методом дифференциальной окраски, путем добавления к 1 капле смеси 1-2 капель 5%-ного водного раствора эозина. Капли быстро перемешивали и из смеси делали тонкий мазок на предметном стекле. После высыхания просматривали под микроскопом при увеличении в 400-600 раз.
| Таблица 1 | ||||
| Выраженность клинических признаков у собак с разной степенью тяжести эндотоксикоза | ||||
| Симптомы | Группы животных (n=10) | |||
| 1 контрольная | 2 опытная | 3 опытная | 4 опытная | |
| Степень тяжести эндотоксикоза | ||||
| Здоровые животные | Легкая | Средняя | Тяжелая | |
| Пульс, уд./мин | До 100 (160) | 100-120(161-180) | 121-180(181-250) | 180-250 и выше |
| Наполнение пульса | Хорошее | Удовлетворительное | Резко повышено | Нитевидный, не пальпируется |
| Астения | 1-2 | 2-3 | 1 | Более 5 |
| Цвет слизистых | Розовые | Розовые | Ярко-бардового цвета | Бледные |
| СНК, сек | 1-2 | 2-3 | 1 | Более 5 |
| Одышка | Нет | Частота дыхании 30-40 | Частота дыхания 41-60 | Частота дыхания выше 60 |
| Рвота, в час | Нет | 1 раз | 2 раза | Более 3 |
| Вздутие живота | Нет | Имеется легкий тимпанит при перкуссии | Выраженное увеличение живота хорошо определяется тимпанит | Живот раздут и напряжен |
| Анурия, мл*ч/кг | 20 | 15 | 10 | 0 |
| Степень обезвоживания | Нет | Слабо выражено | Умеренно выражено | Резко выражено |
| Температура, С° | 39,3 | 38,5 | 39,5-40 | Ниже 36 |
| Изменение тонов сердца | Нет | Усиление тонов сердца | Пресистолический ритм галопа, ослабление I тона, маятникообразный ритм |
В нескольких полях зрения микроскопа подсчитывали подряд 500 спермиев, неокрашенных (живых) и окрашенных в розовый цвет (мертвых). Для определения процента живых спермиев пользовались следующей формулой:
где П - процент живых спермиев; Ж - число сосчитанных неокрашенных (живых) спермиев.
| Таблица 2 | |||
| Процент живых спермиев за промежутки времени | |||
| Группы | Промежутки времени | ||
| 0 мин | 5 мин | 10 мин | |
| 1 | 49-50 | 45-47 | 25-30 |
| 2 | 49-50 | 30-45 | 20-25 |
| 3 | 48-50 | 15-30 | 0-15 |
| 4 | 45-50 | 0-15 | 0 |
Из таблицы 2 видно, что результаты, полученные сразу после смешивания сыворотки крови и спермы, практически не отличаются по группам и не дают объективных данных, так как эндотоксины, видимо, еще не успели подействовать на спермии. Через 10 минут после смешивания процент гибели спермиев высок даже в сыворотке от здоровых животных. Это говорит о том, что через данный промежуток времени на спермии губительно начинают действовать не только эндотоксины, но и экзогенные факторы (температура и сама сыворотка животного). Таким образом, оптимальное время определения процента живых спермиев 5 минут после смешивания сыворотки крови со спермой КРС.
В результате получили шкалу оценки тяжести эндотоксикоза у собак (таблица 3).
| Таблица 3 | |
| Шкала оценки тяжести эндотоксикоза у собак | |
| Клиническая тяжесть течения | % живых спермиев |
| здоровые | 45-47 |
| легкая | 30-45 |
| средняя | 15-30 |
| тяжелая | 0-15 |
Пример 2.
Собака породы пудель в возрасте 3 лет поступила в клинику.
По словам хозяев у собаки начались роды 5 часов назад. Ни одного щенка она не родила. Общее состояние собаки резко ухудшилось: она лежит, не встает, живот раздут и напряжен, схватки и потуги отсутствуют, видимые слизистые оболочки бледные, резко выражено обезвоживание организма, пульс 200 уд./мин, частота дыхания 67 дых./мин, температура тела 36 С°.
При оценке степени тяжести эндогенной интоксикации получили 13% живых спермиев. Это тяжелая степень тяжести эндотоксикоза. Собаке незамедлительно назначена операция кесарево сечение. Одновременно во время операции внутривенно капельно вводили 9%-ный раствор натрия хлорида 400 мл, 40%-ный раствор глюкозы 10 мл, аспаркам 5 мл и дофамин 5 мл.
Операция прошла успешно. Матку пришлось экстирпировать, так как на ней были участки некроза.
На следующий день состояние собаки мало изменилось, однако она стала приподнимать голову, и у нее стал более осмысленным взгляд. При повторном определении степени тяжести эндотоксикоза было получено 25% живых спермиев, что указывает на среднюю степень тяжести и свидетельствует об улучшении состояния животного и правильности проводимого лечения.
Способ определения степени эндогенной интоксикации у собак, характеризующийся тем, что сыворотку крови больного животного и спермы крупного рогатого скота с оценкой 5 баллов смешивают в пропорции 1:1, через пять минут после смешивания методом дифференциальной окраски устанавливают процент живых спермиев и при значении от 30 до 45% определяют легкую степень эндогенной интоксикации, от 15 до 30% - среднюю степень, а при значении от 0 до 15% - тяжелую степень эндогенной интоксикации.
