Способ профилактики туберкулеза
Владельцы патента RU 2266753:
Всероссийский научно-исследовательский институт бруцеллеза и туберкулеза животных (ВНИИБТЖ) (RU)
Изобретение относится к ветеринарной иммунологии. Способ включает иммунизацию животных в возрасте 10-20 суток вакциной БЦЖ, исследование аллергической туберкулиновой пробой и реиммунизацию в возрасте 14-16 месяцев вакциной БЦЖ. Затем через каждые 12 месяцев животных реиммунизируют противотуберкулезной бесклеточной вакциной ТБЦ-2 подкожно в дозе 5-7 мг белка на одно животное до оздоровления фермы (хозяйства). Исследования на туберкулез проводят через 6 месяцев. Способ позволяет создавать у животных перманентный протективный иммунитет, за счет чего возможно повысить профилактический эффект в 1,5-2 раза. 6 табл.
Изобретение относится к ветеринарной иммунологии, в частности к способу специфической профилактики, и может быть использован для профилактики и оздоровления животноводческих ферм от туберкулеза.
Известен способ профилактики туберкулеза молодняка крупного рогатого скота (патент РФ №2146533, кл. А 61 К 39/04, 31/115; В.Н.Ласкавый, Э.Д.Лакман, 20.03.2000), который предусматривает введение телятам в возрасте от 1 до 10 суток внутримышечно в область крупа по 3-4 мл туберкулина и через 30-40 минут таким же способом вводят по 4-5 мл препарата, содержащего в качестве основного начала формальдегид, а в качестве целевых добавок NaCl и дистиллированную воду. Оба препарата вводят однократно и внутримышечно.
Недостатком данного способа является то, что такого рода иммунизация не создает у телят длительного противотуберкулезного иммунитета и поэтому в неблагополучных по туберкулезу хозяйствах молодняк старших возрастов и коровы будут не защищены от туберкулеза.
Известен также способ профилактики туберкулеза животных (патент СССР №1790414, кл. А 61 К 39/04; А.С.Донченко с соавт., 23.01.93. Бюл. №3), который предусматривает иммунизацию животных вакциной БЦЖ с иммуномодулятором (высокомолекулярная РНК из дрожжей), затем иммуномодулятор вводят повторно без вакцины БЦЖ через 13-15 дней в том же количестве (0,5-50 мг/кг).
Недостатком данного способа является то, что использование для иммунизации иммуномодулятора повышает не только иммуногенные, но и усиливает реактогенные свойства вакцины БЦЖ, что снижает продолжительность протективного иммунитета у животных. Следовательно, известный способ профилактики длительно не защищает животных от заболевания туберкулезом.
Известен также способ специфической профилактики туберкулеза крупного рогатого скота в неблагополучных хозяйствах с помощью вакцины БЦЖ (Наставление по применению вакцины БЦЖ при туберкулезе крупного рогатого скота, 26.02.1990 г.), согласно которому вакциной БЦЖ прививают телят однократно в возрасте 10-20 дней. Это позволяет сократить сроки оздоровления ферм с меньшими материальными затратами. Однако известный способ профилактики туберкулеза защищает животных в течение только одного года.
В ряде хозяйств течение туберкулеза приобретает длительный, стационарный характер. Эпизоотический процесс туберкулеза в таких хозяйствах становится неуправляемым и оздоровление их методом систематических аллергических исследований, как правило, не достигается. Это явилось основанием для использования радикального метода оздоровления - путем полной одномоментной замены неблагополучного поголовья здоровым (Профилактика и борьба с заразными болезнями, общими для человека и животных // Сб. санитарных и ветеринарных правил. - М., 1996). Подготовка неблагополучной фермы для размещения здорового скота требует выполнения большого объема работ по санации помещений и территорий, что сопровождается большими материальными затратами.
Задачей изобретения является повышение эффективности профилактики туберкулеза путем создания у животных перманентного (непрерывного) иммунитета против туберкулеза.
Способ профилактики осуществляется иммунизацией вакциной БЦЖ телят в возрасте до 20 суток, реиммунизацией вакциной БЦЖ телок в возрасте 14-16 месяцев, затем нереагирующих животных на ППД-туберкулин дополнительно иммунизируют противотуберкулезной бесклеточной вакциной ТБЦ-2 в дозе 5-7 мг белка на одно животное. Последующие реиммунизации вакциной ТБЦ-2 проводят через каждые 12 месяцев в течение 4-6 лет (время возможной реинфекции). Коров, ревакцинированных ТБЦ-2, исследуют аллергической туберкулиновой пробой через каждые 6 месяцев.
Противотуберкулезная бесклеточная вакцина ТБЦ-2 - новый тип неживой бесклеточной (молекулярной) вакцины. Способ получения вакцины включает культивирование микобактерий из штамма БЦЖ, выделение 2 фракций - цитоплазматической и фракции клеточных оболочек. Фракцию клеточных оболочек конъюгируют на целлюлозной матрице в присутствии треххлористого хрома, затем добавляют цитоплазматическую фракцию. Испытание препарата на лабораторных животных и молодняке крупного рогатого скота показало, что вакцина нового типа обладает высокой иммуногенностью (патент 2217164, МПК А 61 К 39/04 от 27.11.2003, бюл. №33).
Пример 1. Для опыта отобрали 20 телок и в возрасте 10-20 дней, привили вакциной БЦЖ в кожу шеи по 1 мг (1-я группа). Для контроля также отобрали 20 телок в возрасте до 20-ти дней, которым вакцину БЦЖ не вводили (2-я группа).
Затем через 45 дней после иммунизации телят обеих групп исследовали на туберкулез с помощью однократной ППД-туберкулиновой пробы, больными считают среди привитых животных по утолщению кожной складки на 15 мм и выше (патент №1829929, МПК А 61 В 10/00 от 23.07.93, бюл №27) и среди непривитых телят по утолщению кожной складки на 3 мм и выше (Наставление по применению (ППД) туберкулинов для млекопитающих и птиц. Утверждено Департаментом ветеринарии МСХ и П РФ от 16.02.1999 года).
С целью оценки иммунного статуса в периферической крови животных опытных групп определили число иммунокомпетентных клеток в абсолютном содержании (иммунологические параметры). Реакцией спонтанного розеткообразования (Е-рок) определили количество Т-лимфоцитов; реакцией непрямого глобулинового розеткообразования (ЕА-рок) - клетки-киллеры; комплементарным розеткообразованием (ЕАС-рок) - В-лимфоциты; лимфоциты, реагирующие с антигенами микобактерий с помощью розеткообразования (ЕТ-рок) с эритроцитами быка, адсорбировавшими туберкулин. Подсчет лейкоцитов и лейкограмм проводили по общепринятым методикам.
Далее иммунологические параметры исследовали дискретно-динамическим методом, который автоматизирован специальной программой для ЭВМ (заявка на выдачу патента №00669275 от 21.01.2003 г.). По результатам этих исследований составлены дифференциально-прогностические таблицы, позволяющие оценить иммунный статус животных, привитых противотуберкулезными препаратами.
В результате исследований установили (табл.1) высокую активность иммунокомпетентных клеток у 75% животных через 5 месяцев после иммунизации вакциной БЦЖ, у 40% животных через 12 месяцев (табл.2) и у 35% животных через 14 месяцев (табл.3).
Результаты этих исследований убеждают о необходимости проведения реиммунизаций телок в возрасте 14 месяцев вакциной БЦЖ внутрикожно в дозе 1 мг на одно животное.
Иммунный статус у животных после ревакцинации определяли также с помощью дискретно-динамического анализа. Установили у 70% животных (табл.4) повышенную активность иммунокомпетентных клеток через 6 месяцев и у 25% животных через 14 месяцев после ревакцинации.
Последующую реиммунизацию коров опытной группы провели через 14 месяцев бесклеточной вакциной ТБЦ-2. Перед реиммунизацией животных исследовали туберкулиновой аллергической пробой и установили, что у всех коров кожная реакция на ППД-туберкулин отсутствовала. Коровам опытной группы вакцину ТБЦ-2 ввели подкожно в дозе 6 мг белка на одно животное.
Через 6 месяцев после введения вакцины ТБЦ-2 животных исследовали туберкулиновой аллергической пробой и оценку иммунного статуса коров провели дискретно-динамическим анализом. Туберкулиновой аллергической реакции у коров не обнаружено. Иммунный статус коров, реиммунизированных вакциной ТБЦ-2, описан в таблице 5, где у 12 из 20 коров (60%) установили повышенную активность иммунокомпетентных клеток.
Аналогичные исследования коров проведены через 9 месяцев после реиммунизации вакциной ТБЦ-2. Животных, реагирующих на ППД-туберкулин, не выявлено, оценка иммунного статуса коров показана в дифференциально-прогностической таблице 6.
Таким образом, в эксперименте разработана схема вакцинации крупного рогатого скота, позволяющая создавать у животных перманентный протективный иммунитет, этим самым повысить профилактический эффект в 1,5-2 раза.
Пример 2. Производственное испытание схемы вакцинации крупного рогатого скота провели в ОПХ СибМИС Таврического района Омской области.
В хозяйстве по причине туберкулеза в 1999 году поголовье крупного рогатого скота сдали на убой. После проведения санитарных мероприятий в одно из подготовленных помещений разместили 144 телки в возрасте 14-16 месяцев из благополучных по туберкулезу ферм. При исследовании на туберкулез по всей группе дважды получили отрицательный результат. При исследовании через 4 месяца после завоза выделили 18 животных, реагирующих на туберкулин. Провели диагностический убой животных и у двух патологоанатомическим исследованием установили туберкулез.
Затем дважды двойной туберкулиновой пробой исследовали оставшихся животных, отделили реагирующих на ППД-туберкулин и нереагирующих животных привили вакциной БЦЖ внутрикожно в дозе 1 мг на одно животное.
Через 14 месяцев после иммунизации вакциной БЦЖ коров исследовали туберкулиновой аллергической пробой и установили, что у всех животных реакция отсутствовала. Также дискретно-динамическим анализом иммунологических параметров было установлено уменьшенное число взаимосвязей в системе иммунитета, что явилось основанием провести реиммунизацию коров бесклеточной вакциной ТБЦ-2. Коров через 6 и 12 месяцев после реиммунизации исследовали аллергической реакцией и установили, что все животные не реагируют на ППД-туберкулин.
Следовательно, реиммунизация вакциной ТБЦ-2 предохраняет животных от заболевания туберкулезом и позволяет контролировать стадо крупного рогатого скота на туберкулез аллергической реакцией 2 раза в год (через 6 месяцев после ревакцинации). В последующем по результатам дискретно-динамического анализа ревакцинацию провели еще дважды с интервалом 12 месяцев, что позволило в условиях неблагополучной по туберкулезу крупного рогатого скота ферме сохранить благополучие стада более 3 лет (срок наблюдения), предотвратить экономический ущерб только за один год на сумму 432 тыс. рублей.
В дальнейшем родившихся телят от коров данного стада иммунизируют вакциной БЦЖ в возрасте 10-20 дней, затем через 30-45 дней после иммунизации их дополнительно исследуют на туберкулез с помощью однократной туберкулиновой пробы, нереагирующих телят допрививают, реагирующих по увеличению кожной складки до 15 мм и более изолируют, после откорма сдают на убой. Из вакцинированного молодняка комплектуют отдельные группы по полу и возрасту и содержат обособленно. Повторное исследование однократной туберкулиновой пробой привитого молодняка проводят через 14 месяцев, реагирующих сдают на убой, нереагирующих телок формируют в отдельное стадо (телки перед осеменением) и ревакцинируют БЦЖ. В дальнейшем с этими животными поступают как описано ранее.
Последующие вакцинации коров ТБЦ-2 проводят ежегодно в течение 4-6 лет (время возможной реинфекции) после оздоровления хозяйства (фермы) от туберкулеза. Исследование коров на туберкулез проводят 2 раза в год через 6 месяцев. Из числа реагирующих отбирают 2-3 коровы для проведения контрольно-диагностического убоя.
| Таблица 1 | |||||||||
| Дифференциально-прогностическая таблица по оценке иммунного статуса у телок через 5 месяцев после иммунизации вакциной БЦЖ, тыс/мкл | |||||||||
| № п/п | Сочетание, вариабельный параметр (базис) | Интактные | Привитые | ||||||
| n | t-критерий по Стьюденту | вариабельный | базис | n | t-критерий по Стьюденту | вариабельный | базис | ||
| 1 | В-лимфоциты (Т-киллеры) | 20 | 3,46 | ⇐0,71 | ⇐0,65 | 20 | 2,55 | ⇐0,29 | ⇐0,46 |
| 2 | Т-киллеры (лейкоциты) | 2,92 | ⇐1,21 | ⇐6,65 | |||||
| 3 | Антигенреактивные лимфоциты (лейкоциты) | 2,50 | ⇐0,73 | ⇐6,65 | |||||
| 4 | Лейкоциты (В-лимфоциты) | 2,42 | ⇐6,20 | ⇐1,05 | |||||
| 5 | В - (Т-лимфоциты) | 2,29 | ⇐0,76 | ⇐1,01 | |||||
| 6 | Лейкоциты (Т-киллеры) | 2,27 | ⇐6,20 | ⇐0,65 | |||||
| 7 | Т-лимфоциты (лейкоциты) | 4,29 | ⇐0,80 | ⇐6,20 | |||||
| 8 | Т-лимфоциты (нейтрофилы) | 3,63 | ⇐0,53 | ⇐1,10 | |||||
| 9 | Лимфоциты (нейтрофилы) | 2,89 | ⇐3,26 | ⇐1,10 | |||||
| 10 | Антигенреактивные лимфоциты (Т-киллеры) | 2,82 | ⇐0,28 | ⇐0,46 | |||||
| 11 | Нейтрофилы (лимфоциты) | 2,72 | ⇐1,03 | ⇐3,38 | |||||
| 12 | Лейкоциты (Т-лимфоциты) | 2,58 | ⇐5,13 | ⇐0,64 | |||||
| 13 | В - (антигенреактивные лимфоциты) | 2,49 | ⇐0,64 | ⇐0,42 | |||||
| 14 | Нейтрофилы (Т-лимфоциты) | 2,20 | ⇐0,94 | ⇐0,64 | |||||
| Количество иммунных животных | 7 | 35% | 15 | 75% |
| Таблица 2 | |||||||||
| Дифференциально-прогностическая таблица по оценке иммунного статуса у телок через 12 месяцев после иммунизации вакциной БЦЖ, тыс/мкл | |||||||||
| № п/п | Сочетание, вариабельный параметр (базис) | Интактные | Привитые | ||||||
| n | t-критерий по Стьюденту | вариабельный | базис | n | t-критерий по Стьюденту | вариабельный | базис | ||
| 1 | Антигенреактивные-(В-лимфоциты) | 20 | 3,31 | ⇐0,12 | ⇐1,85 | 20 | |||
| 2 | Лейкоциты (В-лимфоциты) | 4,26 | ⇐6,92 | ⇐1,85 | |||||
| 3 | Лейкоциты (Т-киллеры) | 2,75 | ⇐6,23 | ⇐0,99 | 3,08 | >=10,4 | >=2,12 | ||
| 4 | Т-киллеры (лейкоциты) | 3,14 | >=2,22 | >=8,50 | |||||
| Количество иммунных животных | 6 | 30% | 8 | 40% |
| Таблица 3 | |||||||||
| Дифференциально-прогностическая таблица по оценке иммунного статуса у телок через 14 месяцев после иммунизации вакциной БЦЖ, тыс/мкл | |||||||||
| № п/п | Сочетание, вариабельный параметр (базис) | Интактные | Привитые | ||||||
| n | t-критерий по Стьюденту | вариабельный | базис | n | t-критерий по Стьюденту | вариабельный | базис | ||
| 1 | Е- (лейкоциты) | 20 | 3,20 | ⇐2,02 | ⇐7,30 | 20 | |||
| 2 | ЕТ- (нейтрофилы) | 2,17 | ⇐1,26 | ⇐1,55 | |||||
| 3 | Т-киллеры (Т-лимфоциты) | 3,30 | ⇐1,41 | ⇐1,17 | |||||
| 4 | В-лимфоциты (Т-киллеры) | 2,44 | ⇐1,06 | ⇐1,64 | |||||
| 5 | В- (Т-лимфоциты) | 2,23 | ⇐1,14 | ⇐1,17 | |||||
| Количество иммунных животных | 6 | 30% | 7 | 35% |
| Таблица 4 | |||||||||
| Дифференциально-прогностическая таблица по оценке иммунного статуса у телок и нетелей, привитых вакциной БЦЖ, тыс/мкл | |||||||||
| Через 6 месяцев после вакцинации | Через 14 месяцев после вакцинации | ||||||||
| № п/п | Сочетание, вариабельный параметр (базис) | n | t-критерий по Стьюденту | вариабельный | Базис | n | t-критерий по Стьюденту | вариабельный | Базис |
| 1 | Т-лимфоциты (лейкоциты) | 20 | 2,71 | ⇐0,90 | ⇐6,40 | 20 | 4,56 | ⇐0,79 | ⇐7,80 |
| 2 | Лейкоциты (Т-лимфоциты) | 4,29 | ⇐8,10 | ⇐1,30 | 2,73 | ⇐7,93 | ⇐0,69 | ||
| 3 | Нейтрофилы (Т-киллеры) | 2.55 | ⇐1,50 | ⇐0,61 | |||||
| 4 | Лейкоциты (Т-киллеры) | 4,29 | ⇐8,10 | ⇐1,14 | 2,44 | ⇐8,38 | ⇐0,61 | ||
| Количество иммунных животных | 14 | 70% | 5 | 25% |
| Таблица 5 | |||||
| Дифференциально-прогностическая таблица по оценке иммунного статуса у коров через 6 месяцев после ревакцинации ТБЦ-2, тыс/мкл | |||||
| № п/п | Сочетание, вариабельный параметр (базис) | n | t-критерий по Стьюденту | Вариабельный | Базис |
| 1 | В - (Т-лимфоциты) | 20 | 5,00 | ⇐0,42 | ⇐0,36 |
| 2 | Т-киллеры (лейкоциты) | 4,50 | ⇐1,07 | ⇐4,90 | |
| 3 | Антигенреактивные (В-лимфоциты) | 4,45 | ⇐0,10 | ⇐0,44 | |
| 4 | Лейкоциты (Т-киллеры) | 4,11 | ⇐4,87 | ⇐1,14 | |
| 5 | Антигенреактивные (Т-лимфоциты) | 3.80 | ⇐0,08 | ⇐0,36 | |
| 6 | Лейкоциты (Т-лимфоциты) | 3,76 | ⇐4,87 | ⇐0,36 | |
| 7 | Т-лимфоциты (антигенреактивные) | 3,46 | ⇐0,40 | ⇐0,07 | |
| 8 | Т-лимфоциты (Т-киллеры) | 3,37 | ⇐0,47 | ⇐1,14 | |
| 9 | Т-киллеры (Т-лимфоциты) | 3,35 | ⇐1,16 | ⇐0,36 | |
| 10 | Т-лимфоциты (лейкоциты) | 3,30 | ⇐0,40 | ⇐4,90 | |
| 11 | Лейкоциты (В-лимфоциты) | 3,17 | ⇐5,00 | ⇐0,44 | |
| 12 | Т - (В-лимфоциты) | 3,13 | ⇐0,42 | ⇐0,44 | |
| 13 | В-лимфоциты (лейкоциты) | 2,60 | ⇐0,51 | ⇐4,90 | |
| 14 | Лейкоциты (антигенреактивные) | 2,53 | ⇐4,90 | ⇐0,07 | |
| 15 | В-лимфоциты (антигенреактивные) | 2,51 | ⇐0,45 | ⇐0,07 | |
| 16 | Т-киллеры (антигенреактивные) | 2,41 | ⇐1,07 | ⇐0,07 | |
| 17 | В-лимфоциты (Т-киллеры) | 2,38 | ⇐0,59 | ⇐1,14 | |
| 18 | Т-киллеры (В-лимфоциты) | 2,37 | ⇐1,26 | ⇐0,44 | |
| 19 | Антигенреактивные (нейтрофилы) | 2,36 | ⇐0,13 | ⇐0,68 | |
| 20 | Антигенреактивные (лейкоциты) | 2,30 | ⇐0,09 | ⇐4,90 | |
| 21 | Нейтрофилы (В-лимфоциты) | 2,24 | ⇐0,80 | ⇐0,44 | |
| Количество иммунных животных | 12 | 60% |
| Таблица 6 | |||||
| Дифференциально-прогностическая таблица по оценке иммунного статуса у коров через 9 месяцев после ревакцинации ТБЦ-2, тыс/мкл | |||||
| № п/п | Сочетание, вариабельный параметр (базис) | n | t-критерий по Стьюденту | Вариабельный | Базис |
| 1 | Т-лимфоциты (лейкоциты) | 20 | 5,56 | ⇐0 53 | ⇐4,70 |
| 2 | В-лимфоциты (лейкоциты) | 3,48 | ⇐0,46 | ⇐4,70 | |
| 3 | Т - (В-лимфоциты) | 3,26 | ⇐0,60 | ⇐0,49 | |
| 4 | Лейкоциты (Т-лимфоциты) | 3,25 | ⇐4,82 | ⇐0,51 | |
| 5 | Лейкоциты (В-лимфоциты) | 3,15 | ⇐4,83 | ⇐0,49 | |
| 6 | Лейкоциты (Т-киллеры) | 2,57 | ⇐4,90 | ⇐0,97 | |
| 7 | В - (Т-лимфоциты) | 2,57 | ⇐0,43 | ⇐0,51 | |
| 8 | В-лимфоциты (Т-киллеры) | 2,27 | ⇐0,44 | ⇐0,97 | |
| 9 | В-лимфоциты (антигенреактивные) | 2,23 | ⇐0, 54 | ⇐0,30 | |
| Количество иммунных животных | 9 | 45% |
Способ профилактики туберкулеза, включающий иммунизацию животных в возрасте 10-20 суток вакциной БЦЖ, затем исследование аллергической туберкулиновой пробой и реиммунизацию в возрасте 14-16 месяцев вакциной БЦЖ, отличающийся тем, что затем через 12 месяцев не реагирующих на туберкулин животных реиммунизируют противотуберкулезной бесклеточной вакциной ТБЦ-2 подкожно в дозе 5-7 мг белка на одно животное, после чего реиммунизацию вакциной ТБЦ-2 проводят через каждые 12 месяцев до оздоровления фермы (хозяйства), а исследования на туберкулез проводят через 6 месяцев.
