Способ оценки тяжести течения сочетанных форм атопического дерматита у детей

Изобретение относится к области лабораторной диагностики и может быть использовано для оценки тяжести течения сочетанных форм атопического дерматита. Сущность изобретения состоит в том, что в плазме крови с помощью LAL-теста определяют содержание эндотоксина, и при его значении 1,37±0,52 EU/мл устанавливают тяжелое течение сочетанных форм атопического дерматита, при значении 1,06±0,47 EU/мл среднетяжелое течение, а при значении 0,25±0,12 EU/мл легкое течение сочетанных форм атопического дерматита. Техническим результатом является создание способа, позволяющего определить тяжесть течения сочетанных форм атопического дерматита по содержанию эндотоксина в плазме крови.

 

Предлагаемое изобретение относится к медицине, а именно к детской дерматологии.

В связи с увеличением частоты сочетанных форм атопического дерматита у детей, устойчивостью к традиционной противоаллергической терапии необходим поиск новых причин и механизмов в развитии данной патологии.

При многих инфекционных и неинфекционных патологических процессах эндотоксин грамотрицательных бактерий вызывает в организме антигенную стимуляцию, изменяет регуляцию антителогенеза, активирует Т- и В-клетки, освобождает биологически активные вещества, нарушает метаболические процессы и может обуславливать респираторный дистресс-синдром. Подобные нарушения отмечаются и при сочетанных формах аллергических заболеваний, когда одновременно проявления отмечаются на кожных покровах и слизистых оболочках дыхательных путей. В процессе аллергической реакции происходит освобождение преформированных биологически активных веществ, образование новых медиаторов аллергии, которые вызывают повышение проницаемости сосудов микроциркуляторного русла, нарушаются окислительно-восстановительные процессы, развиваются метаболические нарушения и гипоксия клетки, отмечается дисбактериоз кишечника. Вышесказанное позволяет предположить, что при данной патологии создаются все условия для усиленного образования и поступления эндотоксина в кровоток (Яковлев М.Ю., 1995).

Эндотоксин является обязательным компонентом внешней мембраны грамотрицательных бактерий, населяющих кишечник человека. В состав эндотоксина входят липополисахарид, протеиновые и фосфолипидные формы. Большая часть эндотоксина выводится из организма с каловыми массами. Некоторое количество эндотоксина из кишечника проникает в системный кровоток, где нейтрализуется клетками Купфера, макрофагами легких, селезенки, надпочечников (Пермяков Н.К., и соавт., 1989). При физиологической эндотоксинемии отсутствует патологическое действие эндотоксина, что связано с наличием антиэндотоксиновых антител. При различных патологических состояниях развивается системная эндотоксинемия, чему способствует избыточное разрушение микрофлоры при кишечных инфекциях, дисбактериозе, в процессе антибактериальной терапии, повреждении кишечного барьера при механических сдавлениях, действии вазоактивных агентов, замедлении портального кровотока при шоковых состояниях и т.п. Повышенный уровень эндотоксина сопровождается гиперкатехоламинемией, активацией симпатической нервной системы и системы комплемента, что приводит к лизису лейкоцитов и агрегации тромбоцитов с освобождением биологически активных веществ, вызывающих «медиаторный хаос» (Серов В.Н. и соавт., 1987). При этом повышается проницаемость капилляров, секвестрация жидкости, развивается клеточная гипоксия и нарастают метаболические нарушения с угнетением окислительно-восстановительных процессов в организме, что приводит к нарушению микроциркуляции, снижению детоксикационной функции печени, клубочковой фильтрации почек и т.п. (Пермяков Н.К. и соавт., 1989). Эндотоксин способствует коагулопатическим нарушениям и обладает прямым повреждающим действием на эндотелий, активирует фактор Хагемана, индуцирует высвобождение прокоагуляционных факторов полиморфноядерными лейкоцитами и макрофагами, может быть причиной развития ДВС-синдрома и эндотоксинового шока (Яковлев М.Ю., 1995).

Патологическая эндотоксинемия установлена при острых заболеваниях органов дыхания у детей и взрослых бронхитах, респираторном дистресс-синдроме, хронических заболеваниях печени, лучевом поражении, кардиогенном, септическом и геморрагическом шоках, инфаркте миокарда, хроническом пиелонефрите, мочекаменной болезни, хронической почечной недостаточности, антифосфолипидном синдроме, менингококковой инфекции, перитоните (Хабриев Р.У. и соавт., 1993).

В доступной нам литературе не было обнаружено работ, посвященных изучению эндотоксина при сочетанных формах атопического дерматита у детей.

Целью изобретения является установление патогенетической значимости эндотоксина при сочетанных формах атопического дерматита у детей.

Определение концентрации плазменного эндотоксина проводилось LAL-тестом. Материалом для исследования служила плазма, которая забиралась и хранилась в строго апирогенных условиях. Готовился набор пробирок, содержащих по 0,1 мл тестируемую плазму, раствор эндотоксина с известной концентрацией (0,5 EU/мл, 0,25 EU/мл, 0,125 EU/мл, 0,06 EU/мл, 0,03 EU/мл, 0,015 EU/мл), чистую воду. В каждую пробирку добавляли 0,1 мл препарата Е-ТОХАТЕ® (Limulus Amebocyte Lysate). После инкубации в термостате в течение 1 часа при 37°С проводили тестирование, которое заключалось в следующем: пробирку с образцом поворачивали на 180° и наблюдали признаки гелеобразования.

Положительный тест состоял в образовании густого геля, который допускает полный переворот пробирки без его разрушения. Все другие результаты (жидкий гель, повышение вязкости, чистая жидкость) считали отрицательными. Для определения уровня эндотоксина в образце, показывающем положительный результат, делали его разведения чистой водой (в 2, 4, 6, 8, 10 раз и т.д.) и тестировали каждое как исходное, пока не получался отрицательный результат. Уровень эндотоксина определяли умножением величины, обратной наибольшему разведению образца, дающему положительный тест, на наименьшую концентрацию стандартного раствора эндотоксина, дающего положительный тест. Результат выражали в EU/мл. Пример расчета: тест образца положительный при разведении 1/32 и отрицательный при 1/64. Тест стандартного раствора эндотоксина положительный при 0,06 EU/мл и отрицательный при 0,03 EU/мл.

Концентрация плазменного эндотоксина определяли у 40 детей в возрасте от 1 года до 15 лет с сочетанными формами атопического дерматита у детей и 20 практически здоровых в качестве контроля. Мальчики составили 72,5% (29 человек), девочки - 27,5% (11). Тяжесть течения кожных форм аллергии оценивалась по шкале SCORAD и распределялась следующим образом: тяжелое течение - 32,5% (13), среднетяжелое - 45% (18), легкое - 22,5% (9). Анализ полученных данных показал, что у детей с сочетанными формами атопического дерматита в периоде обострения отмечается увеличение уровня плазменного эндотоксина до 1,01±0,30 EU/мл, в контрольной группе его значения составили - 0,002±0,001 EU/мл (р<0,001).

Уровень эндотоксина у пациентов с сочетанными формами атопического дерматита существенно зависит от стадии активности аллергического процесса со стороны кожи и респираторного тракта. У пациентов с одновременной активацией кожного процесса и приступом бронхиальной астмы уровень плазменного эндотоксина составил 1,71±0,51 EU/мл и был в 9,5 раз выше, чем в период ремиссии атопического дерматита и бронхиальной астмы - 0,18±0,08 EU/мл (р<0,001), и в 3 раза выше, чем у больных с обострением атопического дерматита и ремиссией бронхиальной астмы 0,57±0,25 EU/мл (р<0,001). Изучение клинических особенностей сочетанных формам атопического дерматита у детей в условиях эндотоксинемии показало, что уровень эндотоксина в крови зависит от тяжести заболевания. Так, при тяжелом течении сочетанных форм атопического дерматита (индекс SCORAD более 60 баллов, частота приступов бронхиальной астмы 1 раз в неделю и чаще, объем форсированного выдоха за 1 с - ОФВ1 составляет менее 60% от нормы) в периоде обострения содержание плазменного эндотоксина составило 1,37±0,52 EU/мл, что было в 5,5 раза выше, чем при легких формах (индекс SCORAD до 30 баллов, частота приступов бронхиальной астмы - 1 раз в месяц и реже, ОФВ1 - до 80% от нормы) - 0,25±0,12 EU/мл, (р<0,001) и в 1,3 раза - по сравнению со среднетяжелым течением (индекс SCORAD от 30 до 60 баллов, частота приступов 2-3 раза в месяц, ОФВ1 - 60-80% от нормы) - 1,06±0,47 EU/мл. Установлена прямая зависимость между уровнем эндотоксинемии и тяжестью течения атопического дерматита (г=0,58, р<0,05), а также с частотой приступов бронхиальной астмы (г=0,49, р<0,05) и их продолжительностью (г=0,52, р<0,05). Изучение показателей эндотоксинемии в зависимости от длительности заболевания выявило существенные различия. Так, наиболее высокие значения плазменного эндотоксина отмечаются в периоде обострения при сроках от начала заболевания более 5 лет (1,40±0,39 EU/мл). Тогда как при длительности болезни до 3-х лет его уровень был в 2,1 раза ниже (0,68±0,31 EU/мл), р<0,05. Также было установлено, что уровень эндотоксина различается в зависимости от клинической формы атопического дерматита у пациентов с сочетанными формами атопического дерматита. Так, наиболее высокие значения определяются при распространенных формах заболевания (1,37±0,55 EU/мл), при лихеноидных формах его количество составило 1,01±0,70 EU/мл, а при эритематозно-сквамозных - 0,31±0,17 EU/мл.

Таким образом, при сочетанных формах атопического дерматита у детей развивается патологическая эндотоксинемия, наиболее выраженная при одновременной активности аллергического процесса со стороны кожи и респираторного тракта, а также при тяжелом течении заболевания, распространенных формах атопического дерматита и длительности болезни более 5 лет. Патологическая эндотоксинемия указывает на избыточное поступление эндотоксина из кишечника и приводит к утяжелению клинических проявлений как атопического дерматита, так и бронхиальной астмы. В стадии ремиссии уровень эндотоксина достоверно снижается по сравнению с периодом обострения, но его значения достоверно превышают показатели контрольной группы, что свидетельствует о хронической эндогенной интоксикации организма.

Источники информации

1. Яковлев М.Ю. Роль системной эндотоксинемии в физиологии и патологии человека // Успехи теоретической медицины. - Москва. - 1995. - С.10-11.

2. Хабриев Р.У., Аниховская И.А., Бойченко А.В., Большаков СВ. и соавт. Оценка состояния здоровья человека и диагностической тест-системой «СОИС-ИФА» // Сборник научных трудов: Актуальные проблемы общей и частной патологии. - Москва. - 1993. - С.10-14.

3. Серов В.Н., Бондаренко Е.В., Яковлев М.Ю. Иммунологическая диагностика эндотоксинемии в акушерско-гинекологической практике // Сборник научных трудов НИИЭИ им. Н.Ф.Гамалеи АМН СССР. - 1987. - С.128-131.

4. Пермяков Н.К., Яковлев М.Ю., Миронюк А.А. Эндотоксин кишечной микрофлоры в патологии печени // Архив патологии. - 1989. - №9. - С.3-9.

5. Michel O. Indoor Endotoxin and Astma. // Allergy clinical immunology International 1999. - Vol.11 №4. P.109-111.

6. Nightingale I.A., Rogers D.E., et al Effect at inhaled endotoxin on induced sputum in normal, atopic and atopic astmatic subjicts // Thorax. 1998 №53. P.563.

Способ оценки тяжести течения сочетанных форм атопического дерматита у детей, отличающийся тем, что в плазме крови с помощью LAL-теста определяют содержание эндотоксина, и при его значении 1,37±0,52 EU/мл устанавливают тяжелое течение сочетанных форм атопического дерматита, при значении 1,06±0,47 EU/мл - средней степени тяжести, а при значении 0,25±0,12 EU/мл - легкое течение сочетанных форм атопического дерматита.