Способ определения лимфаденотропного действия препарата рекомбинантного человеческого интерферона- 2

Изобретение относится к области лабораторной диагностики и может быть использовано при определении лимфаденотропного действия препарата рекомбинантного человеческого интерферона-α₂. Сущность изобретения состоит в том, что в ротовую полость опытной инбредной мыши BALB/c однократно вводят глицериносодержащий раствор рекомбинатного человеческого интерферона-α₂ в нетоксичной дозе, через 30-60 минут одновременно забивают опытную мышь и интактную мышь, готовят криостатные и парафиновые гистологические срезы ткани лимфатических узлов опытной и интактной мышей, в подобных гистологических срезах ткани лимфатических узлов опытной и интактной мышей определяют интерферон-α₂ методом непрямого иммунофлюоресцентного анализа, тканевые базофилы, окрашенные по Романовскому-Гимзе, сравнивая интенсивность специфического свечения и число тканевых базофилов определяют лимфоаденотропное действие препарата рекомбинатного человеческого интерферона-α₂. Техническим результатом является разработка способа, позволяющего установить наличие лимфоаденотропного действия препарата рекомбинантного человеческого интерферона-α₂.

 

Изобретение относится к медицине и может быть использовано при определении лимфаденотропного действия препарата рекомбинатного человеческого интерферона-α₂.

Известен способ определения лимфаденотропного действия препарата рекомбинатного человеческого интерферона-α₂ на основе обнаружения в лимфатических узлах увеличения количества клеток, объема мякотных тяжей и лимфоидных узелков, сокращения объема краевого синуса, уменьшения объема цитоплазмы, численности свободных и прикрепленных рибосом, объема, количества и суммарной длины профиля среза внутренней мембраны митохондрий, появления эритроцитов, увеличения численности зрелых плазмоцитов, нейтрофилов и тучных клеток (Майбородин И.В. Лимфоидные органы при воздействии интерферона. Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук. - Новосибирск, 1992. - 16 с.).

Недостатками известного прототипа является то, что:

- отсутствует критерий прямого лимфаденотропного действия препарата рекомбинатного человеческого интерферона-α₂;

- используется большой перечень критериев лимфаденотропного действия препарата рекомбинатного человеческого интерферона-α₂ и не определены наиболее информативные из них, что увеличивает трудозатраты при определении лимфаденотропного действия препарата рекомбинатного человеческого интерферона-α₂.

В основу изобретения положена задача обеспечения информативной, нетрудоемкой регистрации прямого лимфаденотропного действия препарата рекомбинатного человеческого интерферона-α₂.

Задача решена тем, что согласно заявляемому способу в ротовую полость опытной инбредной мыши BALB/c однократно вводят глицериносодержащий раствор рекомбинатного человеческого интерферона-α₂ в нетоксичной дозе, через 30-60 минут одновременно забивают опытную мышь и интактную мышь, готовят криостатные и парафиновые гистологические срезы ткани лимфатических узлов опытной и интактной мышей, в подобных гистологических срезах ткани лимфатических узлов опытной и интактной мышей определяют интерферон-α₂ методом непрямого иммунофлюоресцентного анализа, тканевые базофилы, окрашенные по Романовскому-Гимзе, сравнивая интенсивность специфического свечения и число тканевых базофилов, и устанавливают:

при отсутствии в подобных участках гистологических срезов ткани лимфатических узлов опытной мыши усиления специфического свечения и при отсутствии тканевых базофилов - отсутствие прямого лимфаденотропного действия рекомбинатного человеческого интерферона-α₂, и прекращают исследования препарата рекомбинатного человеческого интерферона-α₂;

при наличии в подобных участках гистологических срезов ткани лимфатических узлов опытной мыши усиления специфического свечения и при появлении тканевых базофилов - наличие прямого лимфаденотропного действия рекомбинатного человеческого интерферона-α₂ и продолжают исследования препарата рекомбинатного человеческого интерферона-α₂.

В результате проведенных нами исследований были выбраны наиболее чувствительные к лимфаденотропному действию препарата рекомбинатного человеческого интерферона-α₂ животные - мыши линии BALB/c; установлена необходимость использования нетоксичной для выбранных чувствительных животных дозы глицериносодержащего раствора рекомбинатного человеческого интерферона-α₂; определено время забоя опытной и интактной мышей; определено сочетание двух критериев, обеспечивающих у выбранных чувствительных животных информативную, нетрудоемкую регистрацию прямого лимфаденотропного действия препарата рекомбинатного человеческого интерферона-α₂, а именно сравнительного определения в идентичных участках гистологических срезов ткани лимфатических узлов опытной и интактной мышей интенсивности специфического свечения при определении интерферона-α₂ методом непрямого иммунофлюоресцентного анализа и числа тканевых базофилов.

Сущность изобретения поясняется на следующих примерах, показывающих обеспечение информативной, нетрудоемкой регистрации прямого лимфаденотропного действия препарата рекомбинатного человеческого интерферона-α₂ при использовании заявляемого способа.

Пример 1. В ротовую полость опытной инбредной мыши BALB/c однократно вводили глицериносодержащий раствор рекомбинатного человеческого интерферона-α₂ в нетоксичной дозе 20 ME. Через 30 минут одновременно забивали опытную мышь и интактную мышь, готовили криостатные и парафиновые гистологические срезы ткани лимфатических узлов опытной и интактной мышей. В криостатных срезах методом непрямого иммунофлюоресцентного анализа определяли интерферон-α₂ .В парафиновых срезах, окрашенных по Романовскому-Гимза, определяли тканевые базофилы. Сравнительный просмотр подобных участков срезов ткани лимфатических узлов опытной и интактной мышей выявил отсутствие усиления специфического свечения и отсутствие тканевых базофилов, поэтому было установлено отсутствие прямого лимфаденотропного действия рекомбинатного человеческого интерферона-α₂, и были прекращены исследования препарата рекомбинатного человеческого интерферона-α₂.

Пример 2. В ротовую полость опытной инбредной мыши BALB/c однократно вводили глицериносодержащий раствор рекомбинатного человеческого интерферона-α₂ в нетоксичной дозе 100 ME. Через 45 минут одновременно забивали опытную мышь и интактную мышь, готовили криостатные и парафиновые гистологические срезы ткани лимфатических узлов опытной и интактной мышей. В криостатных срезах методом непрямого иммунофлюоресцентного анализа определяли интерферон-α. В парафиновых срезах, окрашенных по Романовскому-Гимза, определяли тканевые базофилы. Сравнительный просмотр подобных участков срезов ткани лимфатических узлов опытной и интактной мышей выявил наличие усиления специфического свечения и появление тканевых базофилов, поэтому было установлено наличие прямого лимфаденотропного действия рекомбинатного человеческого интерферона-α₂, и были продолжены исследования препарата рекомбинатного человеческого интерферона-α₂.

Пример 3. В ротовую полость опытной инбредной мыши BALB/c однократно вводили глицериносодержащий раствор рекомбинатного человеческого интерферона-α₂ в нетоксичной дозе 500 ME. Через 60 минут одновременно забивали опытную мышь и интактную мышь, готовили криостатные и парафиновые гистологические срезы ткани лимфатических узлов опытной и интактной мышей. В криостатных срезах методом непрямого иммунофлюоресцентного анализа определяли интерферон-α₂. В парафиновых срезах, окрашенных по Романовскому-Гимза, определяли тканевые базофилы. Сравнительный просмотр подобных участков срезов ткани лимфатических узлов опытной и интактной мышей выявил наличие усиления специфического свечения и появление тканевых базофилов, поэтому было установлено наличие прямого лимфаденотропного действия рекомбинатного человеческого интерферона-α₂, и были продолжены исследования препарата рекомбинатного человеческого интерферона-α₂.

Способ определения лимфаденотропного действия рекомбинантного человеческого интерферона-α₂ на основании оценки морфофункционального состояния лимфоидной ткани, отличающийся тем, что в ротовую полость опытной инбредной мыши BALB/c однократно вводят глицериносодержащий раствор рекомбинантного человеческого интерферона-α₂ в нетоксичной дозе, через 30-60 мин одновременно забивают опытную мышь и интактную мышь, готовят криостатные и парафиновые гистологические срезы ткани лимфатических узлов опытной и интактной мышей, в подобных гистологических срезах ткани лимфатических узлов опытной и интактной мышей определяют интерферон-α₂ методом непрямого иммунофлюоресцентного анализа, тканевые базофилы, окрашенные по Романовскому-Гимзе, сравнивая интенсивность специфического свечения и число тканевых базофилов, и устанавливают:

при отсутствии в подобных участках гистологических срезов ткани лимфатических узлов опытной мыши усиления специфического свечения и при отсутствии тканевых базофилов - отсутствие прямого лимфаденотропного действия рекомбинантного человеческого интерферона-α₂ и прекращают исследования препарата рекомбинантного человеческого интерферона-α₂;

при наличии в подобных участках гистологических срезов ткани лимфатических узлов опытной мыши усиления специфического свечения и при появлении тканевых базофилов - наличие прямого лимфаденотропного действия рекомбинантного человеческого интерферона-α₂ и продолжают исследования препарата рекомбинантного человеческого интерферона-α₂.