Способ определения ареактогенного действия препарата пробиотика

Изобретение относится к медицине и фармакологии и может быть использовано при клинических исследованиях препаратов пробиотиков. Для определения ареактогенного действия препарата пробиотика у 20 половозрелых, здоровых и интактных самцов инбредных мышей BALB/c, содержащихся в стандартных условиях вивария - каждая особь изолированно от других, после хендлинга в течение 1 минуты, при комнатной температуре, при исключении дополнительных звуковых и световых раздражающих факторов определяют ежедневно в течение 5 дней в качестве критериев ареактогенного действия препарата пробиотика наличие статистически достоверного снижения по сравнению с исходными усредненными значениями усредненных значений количества пересеченных периферических квадратов, пересеченных центральных квадратов, заглядываний в норки, стоек с опорой, стоек без опоры, груминга и болюсов, получаемых в течение 2 минут в тесте «открытое поле», эквивалентном в пересчете на размер мыши, через 60 минут после перорального введения максимальной однократной дозы препарата пробиотика, эквивалентной в пересчете на массу животного, без или с проведением мышам в течение последних 30 минут мягкого иммобилизационного стресса. И устанавливают: наличие ареактогенного действия препарата пробиотика при наличии не менее 2 критериев ареактогенного действия препарата пробиотика после перорального введения максимальной однократной дозы препарата пробиотика, эквивалентной в пересчете на массу животного, и прекращают испытания препарата пробиотика в качестве психотропного адаптогена. Способ обеспечивает информативность доклинического определения ареактогенного действия препаратов пробиотиков.

 

Изобретение относится к медицине и фармакологии и может быть использовано при доклинических исследованиях препаратов пробиотиков.

Известен способ определения ориентировочной и условно-рефлекторной деятельности крыс в условиях открытого поля. Согласно известному способу исследования проводились на беспородных крысах обоего пола в условиях открытого поля, представляющего собой круглую площадку диаметром 100 см, ограниченную по окружности непрозрачными бортами высотой 40 см. Вся площадь открытого поля была расчерчена на квадраты со стороной 20 см. В местах пересечения линий были равномерно расположены 16 отверстий диаметром 3 см. Время экспозиции каждого животного в открытом поле составляло 2 минуты. Выделялись 9 визуально отличающихся элементарных поведенческих актов: 1) груминг, 2) обнюхивание, 3) движение на месте, 4) неподвижность, 5) локомоция, 6) заглядывание в норки, 7) вертикальная стойка без опоры на бортик, 8) вертикальная стойка с опорой на бортик, 9) оцепенение (Кремневская С.И., Зацепин Э.П., Королев С.М. «Этологофармакологическая характеристика центральных М-холинолитиков» // Физиологический журнал СССР им. И.М.Сеченова №4, 1991; Кремневская С.И., Гельман В.Я., Зацепин Э.П., Королев С.М. «Выделение различных компонентов ориентировочной реакции крыс в условиях открытого поля» // Физиологический журнал СССР им. И.М.Сеченова №2, 1991).

Основным недостатком известного способа исследования поведения использованных лабораторных животных (крыс) в открытом поле является то, что он неинформативен при доклиническом определении ареактогенного действия препарата пробиотика in vivo, вследствие:

во-первых, кратковременности и мягкости ареактогенного действия препаратов пробиотиков;

во-вторых, недостаточной чувствительностью крыс к ареактогенному действию препаратов пробиотиков;

в-третьих, отсутствия сочетанного устранения факторов, дестабилизирующих результаты исследования: возраста, состояния здоровья и пола мышей; влияния циркадианных ритмов животных; совместного содержания животных в общей клетке; раздражающих информационных и эмоциональных факторов; неадекватного ориентировочного поведения мышей на открытом поле стандартных размеров;

в-четвертых, отсутствия использования адекватного дозированного стрессорного фактора в сочетании с оптимальным интервалом действия препаратов пробиотиков.

В основу изобретения положена задача обеспечения информативности доклинического определения ареактогенного действия препаратов пробиотиков.

Задача решена тем, что у 20 половозрелых, здоровых и интактных самцов инбредных мышей BALB/c, содержащихся в стандартных условиях вивария - каждая особь изолированно от других, после хендлинга в течение 1 минуты, при комнатной температуре, при исключении звуковых и световых раздражающих факторов определяют ежедневно в течение 5 дней в качестве критериев ареактогенного действия препарата пробиотика наличие статистически достоверного снижения по сравнению с исходными усредненными значениями усредненных значений количества пересеченных периферических квадратов, пересеченных центральных квадратов, заглядываний в норки, стоек с опорой, стоек без опоры, груминга и болюсов, получаемых в течение 2 минут в тесте «открытое поле», эквивалентном в пересчете на размер мыши, через 60 минут после перорального введения максимальной однократной дозы препарата пробиотика, эквивалентной в пересчете на массу животного, без или с проведением мышам в течение последних 30 минут мягкого иммобилизационного стресса, и устанавливают наличие ареактогенного действия препарата пробиотика при наличии не менее 2 критериев ареактогенного действия препарата пробиотика после перорального введения максимальной однократной дозы препарата пробиотика, эквивалентной в пересчете на массу животного, и прекращают испытания препарата пробиотика в качестве психотропного адаптогена; отсутствие ареактогенного действия препарата пробиотика при отсутствии критериев ареактогенного действия препарата пробиотика после перорального введения максимальной однократной дозы препарата пробиотика, эквивалентной в пересчете на массу животного, и продолжают испытания препарата пробиотика в качестве психотропного адаптогена.

В результате проведенных нами доклинических исследований свойств препаратов пробиотиков in vivo на основе установления кратковременности пика (60 минут) и мягкости ареактогенного действия препаратов пробиотиков были выбраны наиболее чувствительные к действию препаратов пробиотиков животные - мыши линии BALB/c, введены информативные параметры ареактогенного действия препаратов пробиотиков и регламентированы условия их определения (в том числе: использование теста «открытое поле», эквивалентного в пересчете на размер мыши, подбор половозрелых, здоровых, интактных самцов инбредных мышей BALB/c, изолированность каждой особи от других, учет влияния циркадианных ритмов животных, дозировка препаратов пробиотиков, временные интервалы определения показателей, проведение исследования при комнатной температуре, устранение звуковых и световых раздражающих факторов, использование адекватного дозированного стрессорного фактора в сочетании с оптимальным интервалом действия препаратов пробиотиков), обеспечивающие в совокупности повышение информативности заявляемого способа.

Заявляемый способ определения ареактогенного действия препарата пробиотика является новым и в литературе не описан.

Техническим результатом заявляемого изобретения является обеспечение информативности доклинического определения ареактогенного действия препаратов пробиотиков за счет установления кратковременности пика и мягкости ареактогенного действия препаратов пробиотиков, выбора наиболее чувствительных к действию препаратов пробиотиков животных - мышей линии BALB/c, введения информативных параметров ареактогенного действия препаратов пробиотиков и регламентирования условий их определения.

Сущность изобретения поясняется на следующих примерах, показывающих информативность доклинического определения ареактогенного действия препаратов пробиотиков при использовании заявляемого изобретения.

Пример 1. Использовалась группа из 20 самцов половозрелых, здоровых и интактных инбредных мышей BALB/c. Каждая особь содержалась в стандартных условиях вивария изолированно от других. В ходе эксперимента каждая мышь подвергалась хендлингу в течение 1 минуты перед каждым помещением в «открытое поле». Первоначально при исключении раздражающих информационных и эмоциональных факторов в течение 2 минут у каждой мыши определяли ежедневно в течение 5 дней исходные показатели количества пересеченных периферических квадратов, пересеченных центральных квадратов, заглядываний в норки, стоек с опорой, стоек без опоры, груминга и болюсов в тесте «открытое поле», эквивалентном в пересчете на размер мыши. Затем, через 60 минут после перорального введения максимальной однократной дозы препарата ацилакта, эквивалентной в пересчете на массу животного, с проведением 10 мышам в течение последних 30 минут иммобилизационного стресса, при комнатной температуре, при исключении дополнительных звуковых и световых раздражающих факторов в течение 2 минут у каждой мыши повторно определяли показатели количества пересеченных периферических квадратов, пересеченных центральных квадратов, заглядываний в норки, стоек с опорой, стоек без опоры, груминга и болюсов в тесте «открытое поле», эквивалентном в пересчете на размер мыши. Производили подсчет и сравнение усредненных значений количества пересеченных периферических квадратов, пересеченных центральных квадратов, заглядываний в норки, стоек с опорой, стоек без опоры, груминга и болюсов, исходных и полученных через 60 минут после перорального введения ацилакта. Установили отсутствие определяемых критериев ареактогенного действия ацилакта после перорального введения максимальной однократной дозы препарата пробиотика, эквивалентной в пересчете на массу животного, поэтому было установлено отсутствие ареактогенного действия препарата пробиотика, и были продолжены доклинические испытания ацилакта в таблетках в качестве психотропного адаптогена.

Пример 2. Использовалась группа из 20 самцов половозрелых, здоровых и интактных инбредных мышей BALB/c. Каждая особь содержалась в стандартных условиях вивария изолированно от других. В ходе эксперимента каждая мышь подвергалась хендлингу в течение 1 минуты перед каждым помещением в «открытое поле». Первоначально при исключении раздражающих информационных и эмоциональных факторов в течение 2 минут у каждой мыши определяли ежедневно в течение 5 дней исходные показатели количества пересеченных периферических квадратов, пересеченных центральных квадратов, заглядываний в норки, стоек с опорой, стоек без опоры, груминга и болюсов в тесте «открытое поле», эквивалентном в пересчете на размер мыши. Затем, через 60 минут после перорального введения максимальной однократной дозы препарата, содержащего Bifidobacterium bifidum 1C, эквивалентной в пересчете на массу животного, с проведением 10 мышам в течение последних 30 минут иммобилизационного стресса, при комнатной температуре, при исключении дополнительных звуковых и световых раздражающих факторов в течение 2 минут у каждой мыши повторно определяли показатели количества пересеченных периферических квадратов, пересеченных центральных квадратов, заглядываний в норки, стоек с опорой, стоек без опоры, груминга и болюсов в тесте «открытое поле», эквивалентном в пересчете на размер мыши. Производили подсчет и сравнение усредненных значений количества пересеченных периферических квадратов, пересеченных центральных квадратов, заглядываний в норки, стоек с опорой, стоек без опоры, груминга и болюсов, исходных и полученных через 60 минут после перорального введения препарата, содержащего Bifidobacterium bifidum 1C. Установили наличие всех определяемых критериев ареактогенного действия препарата, содержащего Bifidobacterium bifidum 1С, после перорального введения максимальной однократной дозы препарата пробиотика, эквивалентной в пересчете на массу животного, поэтому было установлено наличие ареактогенного действия препарата пробиотика, и были прекращены доклинические испытания препарата, содержащего Bifidobacterium bifidum 1С, в качестве психотропного адаптогена.

Пример 3. Использовалась группа из 20 самцов половозрелых, здоровых и интактных инбредных мышей BALB/c. Каждая особь содержалась в стандартных условиях вивария изолированно от других. В ходе эксперимента каждая мышь подвергалась хендлингу в течение 1 минуты перед каждым помещением в «открытое поле». Первоначально при исключении дополнительных раздражающих информационных и эмоциональных факторов в течение 2 минут у каждой мыши определяли ежедневно в течение 5 дней исходные показатели количества пересеченных периферических квадратов, пересеченных центральных квадратов, заглядываний в норки, стоек с опорой, стоек без опоры, груминга и болюсов в тесте «открытое поле», эквивалентном в пересчете на размер мыши. Затем через 60 минут после перорального введения максимальной однократной дозы препарата, содержащего Bifidobacterium bifidum 1С и Bifidobacterium bifidum 791, эквивалентной в пересчете на массу животного, без проведения мышам в течение последних 30 минут иммобилизационного стресса, при комнатной температуре, при исключении дополнительных звуковых и световых раздражающих факторов в течение 2 минут у каждой мыши повторно определяли показатели количества пересеченных периферических квадратов, пересеченных центральных квадратов, заглядываний в норки, стоек с опорой, стоек без опоры, груминга и болюсов в тесте «открытое поле», эквивалентном в пересчете на размер мыши. Производили подсчет и сравнение усредненных значений количества пересеченных периферических квадратов, пересеченных центральных квадратов, заглядываний в норки, стоек с опорой, стоек без опоры, груминга и болюсов, исходных и полученных через 60 минут после перорального введения препарата, содержащего Bifidobacterium bifidum 1С и Bifidobacterium bifidum 791. Установили наличие 2 определяемых критериев ареактогенного действия препарата, содержащего Bifidobacterium bifidum 1С и Bifidobacterium bifidum 791, после перорального введения максимальной однократной дозы препарата пробиотика, эквивалентной в пересчете на массу животного, поэтому было установлено наличие ареактогенного действия препарата пробиотика, и были прекращены доклинические испытания препарата, содержащего Bifidobacterium bifidum 1С и Bifidobacterium bifidum 791, в качестве психотропного адаптогена.

Способ определения ареактогенного действия препарата пробиотика, характеризующийся тем, что у 20 половозрелых, здоровых и интактных самцов инбредных мышей BALB/c, содержащихся в стандартных условиях вивария - каждая особь изолированно от других, после хендлинга в течение 1 мин, при комнатной температуре, при исключении дополнительных звуковых и световых раздражающих факторов определяют ежедневно в течение 5 дней в качестве критериев ареактогенного действия препарата пробиотика наличие статистически достоверного снижения по сравнению с исходными усредненными значениями усредненных значений количества пересеченных периферических квадратов, пересеченных центральных квадратов, заглядываний в норки, стоек с опорой, стоек без опоры, груминга и болюсов, получаемых в течение 2 мин в тесте «открытое поле», эквивалентном в пересчете на размер мыши, через 60 мин после перорального введения максимальной однократной дозы препарата пробиотика, эквивалентной в пересчете на массу животного, без или с проведением мышам в течение последних 30 мин мягкого иммобилизационного стресса, и устанавливают: наличие ареактогенного действия препарата пробиотика при наличии не менее 2 критериев ареактогенного действия препарата пробиотика после перорального введения максимальной однократной дозы препарата пробиотика, эквивалентной в пересчете на массу животного, и прекращают испытания препарата пробиотика в качестве психотропного адаптогена; отсутствие ареактогенного действия препарата пробиотика при отсутствии критериев ареактогенного действия препарата пробиотика после перорального введения максимальной однократной дозы препарата пробиотика, эквивалентной в пересчете на массу животного, и продолжают испытания препарата пробиотика в качестве психотропного адаптогена.