Способ лечения острого постстрептококкового гломерулонефрита в эксперименте

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной нефрологии, и касается лечения острого постстрептококкового гломерулонефрита в эксперименте. Экспериментальному животному, которому смоделирован острый постстрептококковый гломерулонефрит, добавляют в рацион питания препарат «Ультрасорб^R» из расчета 3 г в сутки в течение 10 дней. Одновременно внутрибрюшинно вводят препарат амоксиклав в дозе 100 мг/кг. Способ обеспечивает сохранение клубочкового аппарата почки, уменьшение белковой дистрофии эпителиоцитов.

 

Изобретение относится к медицине, а именно к нефрологии и экспериментальной медицине, и может быть использовано для повышения эффективности лечения острого постстрептококкового гломерулонефрита в эксперименте путем оптимизации диеты.

Острый гломерулонефрит - острое постинфекционное диффузное пролиферативно-экссудативное заболевание почек, характеризующееся иммунным поражением клубочкового аппарата почек. Для данной патологии, даже в отсутствие почечной недостаточности, типично проявление эндогенной интоксикации в результате тканевой деструкции и гипоксии. По данным литературы (Шулутко Б.И. Нефрология 2002. Современное состояние проблемы.-СПб.: Ренкор. 2002. - 780 с.; Мухин Н.А., Козловский Л.В., Шилов Е.М. Рациональная фармакотерапия в нефрологии: Рук. для практических врачей. Т.13. - М.: Литтера, 2006. - 896 с.; Игнатова М.С., Коровина Н.А. Диагностика и лечение нефропатий у детей.-М.: ГЭОТАР-Медиа, 2007. - 336 с.) общие принципы диеты при остром постстрептококковом гломерулонефрите заключаются в ограничении потребления соли и воды в острый период болезни, ограничении потребления белка в случае значительного снижения скорости клубочковой фильтрации и развития олигурии.

В доступной научной и патентной литературе мы не встретили данных о применении в диете при остром постстрептококковом гломерулонефрите в качестве компонента функционального питания комплекса ферментированных и неферментированных пищевых волокон.

Изобретение направлено на решение задачи: исследование эффективности комплекса ферментированных и неферментированных пищевых волокон «Ультрасорб^R» в качестве компонента функционального питания при лечении острого постстрептококкового гломерулонефрита в эксперименте.

Технический результат: повышение эффективности лечения острого постстрептококкового гломерулонефрита в эксперименте путем оптимизации диеты.

Указанные задачи достигаются путем включения в качестве компонента функционального питания экспериментальным животным (беспородным белым крысам) с острым постстрептококковым гломерулонефритом, одновременно с препаратом амоксиклав в дозе 100 мг/кг внутрибрюшинно в течение 10 дней, комплекса ферментированных и неферментированных пищевых волокон «Ультрасорб^R» в количестве 10% суточного объема пищи, из расчета 3 г в сутки, предварительно механически измельчая его и смешивая с кормом.

Препарат «Ультрасорб^R» (ТУ 9295-006-05344371-2006; № госрегистрации: 77.99.23.3. У2066.3.06 от 10.03.2006. Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека) не является лекарством, выпускается ЗАО «Ягодное», г.Киров, д.Югрино, Россия и используется в качестве дополнительного источника пищевых волокон практически здоровыми людьми при воздействии неблагоприятных экологических и производственных факторов, при повышенном риске формирования дисбактериоза, онкологических заболеваний, сахарного диабета. Также комплекс пищевых волокон «Ультрасорб^R» применяется отдельно или как дополнение при лечении заболеваний желудочно-кишечного тракта (стоматиты, дисбиоз, острые кишечные инфекции, язвенная болезнь желудка и двенадцатиперстной кишки, гастриты, холециститы, гепатиты, энтериты, колиты); нарушении обмена веществ (атеросклероз, ожирение, сахарный диабет, гипергликемия); вторичной иммунной недостаточности; алкогольной интоксикации; воспалительной патологии кожи микробного и аллергического происхождения.

Основной компонент препарата «Ультрасорб^R» - ферментированные нерастворимые и растворимые пищевые волокна. Пищевые волокна относятся к растительным углеводам (полисахаридам), которые не метаболизируются ферментами макроорганизма. Патогенетической основой профилактического и лечебного действия пищевых волокон являются короткоцепочечные жирные кислоты, образующиеся при ферментации пищевых волокон нормальной микрофлорой толстого кишечника, а также «жесткие» структурные компоненты пищевых волокон, обладающие сорбционной способностью. Короткоцепочечные жирные кислоты усиливают экспрессию генов, определяющих синтез ферментов, обеспечивающих защиту клетки от свободнорадикального повреждения; являются регуляторами дифференцировки и апоптоза многочисленных типов клеток; их оптимальный обмен является значимым для поддержания водно-электролитного равновесия и минерального обмена; являются основой энергообеспечения представителей нормофлоры.

Способ осуществляют следующим образом.

Эксперимент выполнен на 40 животных - самцах и самках беспородных белых крыс четырехмесячного возраста, содержащихся в стандартных условиях вивария в соответствии с нормами, утвержденными приказом Министра здравоохранения СССР от 10 марта 1966 г. №163 и приказом Минздрава СССР от 10.10.83 №1179 (пункт 4.1). Все эксперименты проведены в соответствии с «Правилами проведения работ с использованием экспериментальных животных» (Приложение к приказу Министерства здравоохранения СССР от 12.08.1977 г. №755) и «Европейской конвенцией о защите позвоночных животных, используемых для экспериментов или в иных научных целях» от 18 марта 1986 г.

Животные были разделены на 4 экспериментальные группы:

I группа - контрольная (интактные животные), типовой рацион вивария, n=8;

II группа - моделирование острого постстрептококкового гломерулонефрита (забор аутопсийного материала осуществляли у 8 животных на 21 день, у 8 животных - на 31 день эксперимента), типовой рацион вивария, n=16;

III группа - моделирование острого постстрептококкового гломерулонефрита, экспериментальная терапия амоксиклавом (забор аутопсийного материала осуществляли на 31 день эксперимента), типовой рацион вивария, n=8;

IV группа - моделирование острого постстрептококкового гломерулонефрита, экспериментальная терапия амоксиклавом, типовой рацион вивария с добавлением комплекса пищевых волокон «Ультросорб^R» (забор аутопсийного материала осуществляли на 31 день эксперимента), n=8.

Гломерулонефрит у животных моделируют по оригинальной методике, используя многократную иммунизацию убитой нагреванием бульонной культурой нефритогенного штамма пиогенного стрептококка - Dick-I Streptococcus pyogenes (ГНИИ стандартизации и контроля им. Л.А.Тарасевича). Штамм пиогенного стрептококка вводят 1 раз в день внутрибрюшинно по схеме: 3 цикла, каждый из которых состоял из 1, 3, 5 дней иммунизации и 2 дней перерыва между циклами.

Экспериментальную терапию начинают на 21 день эксперимента. Терапия амоксиклавом проводится из расчета 100 мг/кг в сутки в течение 10 дней, внутрибрюшинно. На 31 день от начала иммунизации животных выводят из эксперимента путем перерезки спинного мозга под эфирным наркозом с соблюдением правил эвтаназии.

Для проведения гистологического исследования почки животных фиксируют в 10% нейтральном формалине, подвергают обезвоживанию в спиртах возрастающей крепости, заливают в парафин. Срезы получают на ротационном микротоме, окрашивают гематоксилином и эозином, пикрофуксином по Ван-Гизону, нитратом серебра по Футу. Исследуют микропрепараты в проходящем свете светового микроскопа, объектив 40.

Результаты экспериментов подвергнуты статистической обработке с применением компьютерных программ Microsoft Excel и Biostat.

При морфологическом исследовании почки животных контрольной группы имели бобовидную форму, капсула почки легко снималась, поверхность - светло-коричневая, блестящая, гладкая. На разрезе - корковое вещество светло-коричневого цвета, мозговое вещество - темно-красное. Лоханка не расширена, ее слизистая оболочка гладкая, блестящая.

При проведении гистологического исследования у животных контрольной группы не было выявлено гистологических признаков развития острого нефрита. При проведении гистологического исследования в почках четко выявлялась капсула почки, корковое вещество с почечными тельцами и извитыми канальцами, мозговое вещество почки. Прямые канальцы в мозговом веществе и собирательные трубочки без особенностей. Визуализировались сосочки и почечная лоханка, выстланная переходным эпителием. Капсула Боумена имеет толщину (0,321±0,001 мкм), сосудистые клубочки нефрона не изменены. Проксимальные и дистальные почечные канальцы располагались между почечными тельцами, их структура типична.

С целью подтверждения воспроизводимости модели острого постстрептококкового гломерулонефрита забор макропрепаратов у 8 животных осуществляли на 21 день эксперимента. При проведении морфологического исследования почки у иммунизированных животных имели бобовидную форму, увеличены в размерах, набухшие. На разрезе корковое вещество - серовато-коричневого цвета, мозговое вещество - вишнево-красное. Лоханка не изменена.

При проведении гистологического исследования аутопсийного материала, полученного от иммунизированных животных к 21 дню эксперимента, в ткани почек выявлялось полнокровие сосудов коркового и мозгового слоев, большое количество увеличенных гиперцеллюлярных клубочков (около 60%) с резко уменьшенным мочевым пространством, инфильтрированных нейтрофильными гранулоцитами и лимфоцитами, с мезангиальной пролиферацией. Отмечалось сужение просветов капилляров за счет пролиферации эндотелиальных и мезангиальных клеток, что выражалось в появлении лапчатых клубочков. Таким образом, в этом сроке отмечалась экссудативная фаза воспаления в клубочках. В проксимальных и дистальных канальцах нефронов имелись участки белковой дистрофии эпителия, воспалительная инфильтрация стромы лимфоцитами с примесью нейтрофилов и гистиоцитов.

При проведении морфологического исследования почек иммунизированных животных на 31 день эксперимента макроскопически наблюдались признаки отека почечной ткани; лоханка не изменена, стенка не утолщена.

При проведении гистологического исследования аутопсийного материала в клубочках (изменения наблюдались в 80% клубочках) начинали преобладать процессы пролиферации, что выражалось в появлении наряду с мезангиальной и эндотелиальной пролиферацией отложения нитей фибрина и белковых масс в капсуле Боумена, сращении капилляров клубочка с капсулой и образовании микрополулуний в отдельных клубочках. Имелся тромбоз капилляров клубочков. Их базальная мембрана была значительно утолщена (2,081±1,216 мкм, p<0,1). В проксимальных и дистальных канальцах отмечалась белковая дистрофия эпителия, в межуточной ткани почек - воспалительная инфильтрация нейтрофильными гранулоцитами и лимфоцитами.

У животных 3 группы (моделирование острого постстрептококкового гломерулонефрита, экспериментальная терапия амоксиклавом, типовой рацион вивария) при заборе аутопсийного материала также отмечалось увеличение почек в размерах. Пирамиды были темно-красные, корковое вещество - серовато-коричневого цвета.

При проведении гистологического исследования в тканях почек отмечались расширение клубочковых капилляров и их полнокровие, лимфоцитарная инфильтрация интерстициального пространства клубочка и перигломерулярная инфильтрация, пролиферация мезангиальных клеток, утолщение гломерулярной базальной мембраны. В части клубочков выявлялось значительное утолщение капсулы клубочка (1,617±1,018 мкм, p<0,1), спайки капиллярных петель с капсулой и спайки внутри клубочка. Изменения отмечались в 50% клубочках.

При заборе аутопсийного материала у животных 4 группы, иммунизированных культурой нефритогенного штамма Str.pyogenes, получавших экспериментальную терапию амоксиклавом, типовой рацион вивария с включением в рацион питания комплекса ферментированных и неферментированных пищевых волокон «Ультрасорб^R», почки животных были незначительно увеличены в размерах, почечная капсула, лоханка, ткань почки на разрезе визуально не изменены.

При проведении гистологического исследования большинство клубочков имели нормальную структуру и морфометрические характеристики. В отдельных клубочках (не более 20%) отмечалась пролиферация мезангиальных клеток, наличие спаек и полнокровие капилляров. Толщина капсулы Шумлянского-Боумена составляла в среднем 0,813±1,165 мкм и не имела достоверных отличий от нормы (p>0,1).

Примеры конкретного выполнения

Пример 1. Самцу белой беспородной крысы (№2), массой 198,0 г, в течение 3 недель внутрибрюшинно 1 раз в день вводили микробную суспензию культуры Streptococcus pyogenes по следующей схеме: 3 цикла, каждый из которых состоял из 1, 3, 5 дней иммунизации и 2 дней перерыва между циклами. Терапия амоксиклавом проводилась из расчета 100 мг/кг в сутки в течение 10 дней, внутрибрюшинно, с 21 дня эксперимента. На 31 день от начала иммунизации животное вывели из эксперимента путем перерезки спинного мозга под эфирным наркозом с соблюдением правил эвтаназии, почки фиксировали в 10% нейтральном формалине с целью последующего морфологического исследования.

При проведении гистологического исследования аутопсийного материала в 50% клубочков отмечались расширение клубочковых капилляров и их полнокровие, лимфоцитарная инфильтрация интерстициального пространства клубочка и перигломерулярная инфильтрация, пролиферация мезангиальных клеток, утолщение гломерулярной базальной мембраны. В части клубочков выявлялось значительное утолщение капсулы клубочка, спайки капиллярных петель с капсулой и спайки внутри клубочка. В части проксимальных извитых канальцев отмечалась белковая дистрофия эпителиоцитов.

Пример 2. Самке белой беспородной крысы (№5), массой 185,0 г, в течение 3 недель внутрибрюшинно 1 раз в день вводили микробную суспензию культуры Streptococcus pyogenes по следующей схеме: 3 цикла, каждый из которых состоял из 1, 3, 5 дней иммунизации и 2 дней перерыва между циклами. Терапия амоксиклавом проводилась из расчета 100 мг/кг в сутки в течение 10 дней, внутрибрюшинно с 21 дня эксперимента. В качестве компонента функционального питания в рацион экспериментального животного в течение 10 дней, также с 21 дня эксперимента был добавлен комплекс ферментированных и неферментированных пищевых волокон «Ультрасорб^R» из расчета 3 г в сутки.

На 31 день от начала иммунизации животное вывели из эксперимента путем перерезки спинного мозга под эфирным наркозом с соблюдением правил эвтаназии, почки фиксировали в 10% нейтральном формалине с целью последующего морфологического исследования.

При проведении гистологического исследования аутопсийного материала в 35% клубочках отмечалось расширение клубочковых капилляров, их полнокровие, была выражена лимфоцитарная инфильтрация интерстициального пространства клубочка и перигломерулярная инфильтрация, пролиферация мезангиальных клеток. Утолщение гломерулярной базальной мембраны было незначительное. Остальные клубочки были интактные. Капсула их не была утолщена, мочевое пространство свободно. Проксимальные и дистальные почечные канальцы были с типичной структурой. Белковая дистрофия эпителиоцитов выражена незначительно.

Пример 3. Самке белой беспородной крысы (№7), массой 190,0 г, в течение 3 недель внутрибрюшинно 1 раз в день вводили микробную суспензию культуры Streptococcus pyogenes по следующей схеме: 3 цикла, каждый из которых состоял из 1, 3, 5 дней иммунизации и 2 дней перерыва между циклами. Терапия амоксиклавом проводилась из расчета 100 мг/кг в сутки в течение 10 дней, внутрибрюшинно с 21 дня эксперимента. В качестве компонента функционального питания в рацион экспериментального животного в течение 10 дней, также с 21 дня эксперимента был добавлен комплекс ферментированных и неферментированных пищевых волокон «Ультрасорб^R» из расчета 3 г в сутки.

На 31 день от начала иммунизации животное вывели из эксперимента путем перерезки спинного мозга под эфирным наркозом с соблюдением правил эвтаназии, почки фиксировали в 10% нейтральном формалине с целью последующего морфологического исследования.

При проведении гистологического исследования аутопсийного материала не более чем в 30% клубочках отмечались расширение клубочковых капилляров и их полнокровие, лимфоцитарная инфильтрация интерстициального пространства клубочка, перигломерулярная инфильтрация, пролиферация мезангиальных клеток, утолщение гломерулярной базальной мембраны. Остальные клубочки были интактные. Капсула Шумлянского-Боумена не была утолщена, мочевое пространство свободно. Между почечными тельцами выявлялись проксимальные и дистальные почечные канальцы с типичной структурой. Белковая дистрофия эпителиоцитов была выражена незначительно.

Способ лечения острого постстрептококкового гломерулонефрита в эксперименте, заключающийся в том, что экспериментальному животному в качестве диеты добавляют в рацион питания препарат «Ультрасорб^R» из расчета 3 г в сутки в течение 10 дней одновременно с препаратом амоксиклав в дозе 100 мг/кг внутрибрюшинно.