Способ диагностики перстневидно-клеточного рака в эксперименте
Владельцы патента RU 2399053:
Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования Смоленская государственная медицинская академия федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию (RU)
Изобретение относится к области медицины, а именно к онкологии. Для диагностики перстневидно-клеточного рака в эксперименте проводят оценку хемилюминесценции (ХЛ) цельной разведенной крови на 10 сутки после введения гомогената опухоли РС-1 лабораторному животному. Измеряют интенсивность I-го - I1 и II-го - I2 пиков, вычисляют модуль их разности (|ΔI|). Если |ΔI| выше 400 условных единиц ХЛ, то это свидетельствует о развитии перстневидно-клеточного рака в эксперименте. Способ упрощает диагностику перстневидно-клеточного рака в эксперименте. 2 табл.
Изобретение относится к медицине и может быть использовано в экспериментальной медицине для диагностики злокачественных опухолей.
Известен способ диагностики злокачественной опухоли в эксперименте, например перстневидно-клеточного рака (РС-I), при котором животное декапитируют, проводят гистологическое исследование опухоли. Материал фиксируют 10% раствором нейтрального формалина, заливают в парафин, приготавливают ультратонкие срезы и окрашивают гематоксилином и эозином. Затем под микроскопом наблюдают признаки перстневидно-клеточного рака, который представлен недифференцированными однотипными клетками с резко выраженной способностью образовывать муцино-мукоид (слизь), не способными формировать железистые структуры (Руководство по патологоанатомической диагностике опухолей человека / Под ред. Н.А.Краевского, А.В.Смольянинова, Д.С.Саркисова, 3-е издание. - М.: Медицина, 1982, 512 с., с.170-171).
Метод достаточно трудоемок, требует выведения животного из эксперимента, что не позволяет проводить динамические наблюдения, а также требует рутинных гистологических исследований и квалифицированного специалиста - морфолога.
Задачей данного изобретения является объективизация способа диагностики злокачественной опухоли в эксперименте.
Сущность предложенного изобретения состоит в том, что проводят оценку хемилюминесценции (ХЛ) цельной разведенной крови лабораторного животного, измеряют интенсивность I-го - I1 и II-го - I2 пиков и вычисляют модуль их разности - |ΔI|, и если |ΔI| выше 400 условных единиц (у.е.) ХЛ, то это свидетельствует о развитии перстневидно-клеточного рака.
Оценка кинетики ХЛ цельной разведенной крови позволяет определить интенсивность биохимических реакций, сопровождающих жизнедеятельность клеток крови в условии их кооперативного взаимодействия. Известно, что рост опухоли сопровождается изменением реактивности лейкоцитов периферической крови, которые вносят основной вклад в процесс ХЛ цельной крови.
Пример. Крысе линии Vistar моделировали опухолевый процесс, для чего под кожу левой задней конечности вводили гомогенат опухоли PC-I. На 10 сутки под эфирным наркозом у животного производили забор крови из хвостовой вены. Полученную кровь разводили в соотношении 60 мкл цельной гепаринизированной крови на 400 мкл р-ра Хенкса и 100 мкл люминола. Затем исследовали кинетику ХЛ на биохемилюминесцентном анализаторе БЛМ 3606М-01 в течение 6 часов.
При анализе полученной кинетики ХЛ вычисляли значения интенсивности ХЛ I-го - I1=243 у.е. и II-го - I2=1074 y.e. пиков. Затем рассчитывали |ΔI|=I1-I2=831 у.е. Так как 831 у.е. больше 400 у.е., то можно говорить о развитии перстневидно-клеточного рака.
Далее животное декапитировали, опухоль забирали на гистологическое исследование. Методом микроскопии выявили наличие признаков опухоли РС-I: наличие однотипных диссоциированных опухолевых клеток со слабо выраженными признаками формирования альвеолярных структур, которые лежат хаотично, солидно, разделены слизью, что подтверждало данные исследования.
Способ апробирован на 5 крысах линии Vistar массой 180-200 г. Животным моделировали опухолевый процесс путем введения гомогената опухоли РС-I под кожу левой задней конечности. На 10 сутки у экспериментальных животных развивалась опухоль. У всех животных по описанной выше методике рассчитывали |ΔI|, данные сведены в таблицу 1.
У всех крыс значение |ΔI| было выше 400 у.е., а при гистологическом исследовании выявлялись признаки опухоли РС-I. Среднегрупповое значение |ΔI| у животных с привитой опухолью на 10 сутки составило 475,8±745,1 у.е., а у интактных животных - 240,38±106,11 у.е. (таблица 2).
Таким образом, предложенный способ диагностики перстневидно-клеточного рака в эксперименте является простым, объективным, надежным и может быть широко использован в экспериментальной медицине для прижизненной диагностики данного онкологического процесса.
| Таблица 1 | ||
| № крысы | |ΔI| у животных с привитой опухолью на 10 сутки | |ΔI| у интактных животных |
| 1 | 800 | 67 |
| 2 | 1285 | 194 |
| 3 | 831 | 179 |
| 4 | 543 | 257 |
| 5 | 2420 | 396 |
| 6 | 332 | |
| 7 | 319 | |
| 8 | 179 |
| Таблица 2 | ||
| Животные с привитой опухолью на 10 сутки (n=5) | Интактные животные (n=8) | |
| Среднегрупповое значение |ΔI| (M±m) | 1175,8±745,1 | 240,38±106,11 |
Способ диагностики перстневидно-клеточного рака в эксперименте, отличающийся тем, что после введения гомогената опухоли РС-1 лабораторному животному проводят оценку хемилюминесценции (ХЛ) цельной разведенной крови на 10 сутки после введения гомогената, при этом измеряют интенсивность I-го - I1 и II-го - I2 пиков, вычисляют модуль их разности (|ΔI|), и если |ΔI| выше 400 условных единиц ХЛ, то это свидетельствует о развитии перстневидно-клеточного рака в эксперименте.
