Антитела к амилоиду бета 4, имеющие гликозилированную вариабельную область
В изобретении описана фармацевтическая и диагностическая композиция, содержащая молекулу антитела, способную специфически распознавать β-А4-пептид/Аβ4, где молекула антитела является моногликозилированной или дважды гликозилированной молекулой антитела. Композиция может содержать смесь указанных антител. Моногликозилированная молекула антитела содержит один гликозилированный остаток аспарагина (Asn) в положении 52 аминокислотных последовательностей вариабельной области тяжелой цепи (VH), приведенных в описании, а дважды гликозилированная молекула антитела содержит гликозилированный остаток аспарагина (Asn) в том же положении указанных последовательностей обоих связывающих сайтов антитела. Композиция может также содержать менее 5% молекул антител, у которых ни один из антигенсвязывающих центров не содержит указанного гликозилированного остатка аспарагина в VH. Изоформы антитела, описанные в изобретении, можно с высокой степенью эффективности применять, например, при фармацевтическом вмешательстве в амилоидогенез или процесс образования амилоидных бляшек, в частности, болезнь Альцгеймера. 13 з.п. ф-лы, 41 ил., 2 табл.
Текст описания приведен в факсимильном виде.
1. Композиция для специфического распознавания β-А4-пептида/Аβ4, содержащая молекулу антитела, способную специфически распознавать β-А4-пептид/Аβ4, причем эта молекула антитела является моногликозилированной молекулой антитела или дважды гликозилированной молекулой антитела, или указанная композиция содержит смесь указанной моногликозилированной молекулы антитела или указанной дважды гликозилированной молекулы антитела, где указанная моногликозилированная молекула антитела содержит один гликозилированный остаток аспарагина (Asn) в положении 52 SEQ ID NO: 2 или SEQ ID NO: 6 в вариабельной области тяжелой цепи (VH), а указанная дважды гликозилированная молекула антитела содержит гликозилированный остаток аспарагина (Asn) в положении 52 SEQ ID NO: 2 или SEQ ID NO: 6 вариабельной области тяжелой цепи (VH) обоих связывающих сайтов антитела, и где указанная композиция содержит в количестве менее 5% молекулу антитела, которая отличается тем, что ни один из антигенсвязывающих центров молекулы антитела не содержит гликозилированный остаток аспарагина (Asn) в вариабельной области тяжелой цепи (VH).
2. Композиция по п.1, где указанные молекулы антитела содержат CDR1 вариабельные области тяжелой цепи, как представлено в SEQ ID NO: 10, CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, как представлено в SEQ ID NO: 12, CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, как представлено в SEQ ID NO: 14, CDR1 вариабельной области легкой цепи, как представлено в SEQ ID NO: 16, CDR2 вариабельной области легкой цепи, как представлено в SEQ ID NO: 18, и/или CDR3 вариабельной области легкой цепи, как представлено в SEQ ID NO: 20.
3. Композиция по п.1, в которой гликозилированный остаток аспарагина (Asn) в вариабельной области тяжелой цепи (VH) находится в CDR2-участке.
4. Композиция по п.1, где β-А4-пептид/Аβ4 имеет следующую последовательность:
DAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNKGAIIGLMVGGVVIA (SEQ ID NO: 3) или фрагмент указанной последовательности, состоящий по меньшей мере из 15 аминокислот.
5. Композиция по п.1, отличающаяся тем, что молекула антитела содержит тяжелую цепь (VH), которая кодируется:
(а) молекулой нуклеиновой кислоты, имеющей нуклеотидную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 1:
CAGGTGGAATTGGTGGAAAGCGGCGGCGGCCTGGTGCAACCGGGCGGCAGC
CTGCGTCTGAGCTGCGCGGCCTCCGGATTTACCTTTAGCAGCTATGCGATGAGCTGG
GTGCGCCAAGCCCCTGGGAAGGGTCTCGAGTGGGTGAGCGCTATTAATGCTTCTGGT
ACTCGTACTTATTATGCTGATTCTGTTAAGGGTCGTTTTACCATTTCACGTGATAATT
CGAAAAACACCCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGCGTGCGGAAGATACGGCCGTG
TATTATTGCGCGCGTGGTAAGGGTAATACTCATAAGCCTTATGGTTATGTTCGTTATT
TTGATGTTTGGGGCCAAGGCACCCTGGTGACGGTTAGCTCA;
(б) молекулой нуклеиновой кислоты, которая кодирует полипептид, имеющий аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 2:
QVELVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAINAS
GTRTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGKGNTHKPYGYVR
YFDVWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 2);
(в) молекулой нуклеиновой кислоты, которая гибридизуется с молекулой нуклеиновой кислоты, указанной в подпункте (а) или (б), и которая кодирует полипептид, обладающий способностью связываться с β-А4-пептидом/Аβ4, который имеет следующую аминокислотную последовательность:
DAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNKGAIIGLMVGGVVIA (SEQ ID NO: 3),
или обладает способностью связываться с его фрагментом, состоящим по меньшей мере из 15 аминокислот;
(г) молекулой нуклеиновой кислоты, которая гибридизуется с молекулой нуклеиновой кислоты, указанной в подпункте (а) или (б), и которая кодирует полипептид, обладающий способностью связываться по меньшей мере с двумя областями β-А4-пептида/Аβ4, имеющего следующую аминокислотную последовательность:
DAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNKGAIIGLMVGGVVIA (SEQ ID NO: 3),
или по меньшей мере с двумя областями фрагмента SEQ ID NO: 3,
который содержит по меньшей мере 15 аминокислот, причем указанные две области β-А4-пептида/Аβ4 или его фрагмента содержат аминокислоты в положениях 3-6 и в положениях 18-26; или
(д) нуклеотидной последовательностью, которая в результате вырожденности генетического кода соответствует нуклеотидной последовательности, указанной в одном из подпунктов (а)-(г).
6. Композиция по п.1, в которой указанная молекула антитела содержит тяжелую цепь, выбранную из группы, включающей:
(а) полипептид тяжелой цепи, кодируемый молекулой нуклеиновой кислоты, которая представлена в SEQ ID NO: 5, 23 или 25;
(б) полипептид тяжелой цепи, имеющий аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 6 или 26;
(в) полипептид тяжелой цепи, кодируемый молекулой нуклеиновой кислоты, которая гибридизуется с молекулой нуклеиновой кислоты, указанной в подпункте (а), и которая кодирует полипептид, обладающий способностью связываться с β-А4-пептидом/Аβ4, имеющий следующую аминокислотную последовательность:
DAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNKGAIIGLMVGGVVIA (SEQ ID NO: 3), или его фрагмент, который состоит по меньшей мере из 15 аминокислот; или
(г) полипептид тяжелой цепи, кодируемый молекулой нуклеиновой кислоты, которая гибридизуется с молекулой нуклеиновой кислоты, указанной в подпункте (а), и которая кодирует полипептид, обладающий способностью связываться по меньшей мере с двумя областями β-А4-пептида/Аβ4, имеющий следующую аминокислотную последовательность: DAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNKGAIIGLMVGGVVIA (SEQ ID NO: 3), или по меньшей мере с двумя областями фрагмента SEQ ID NO: 3, который состоит по меньшей мере из 15 аминокислот, где указанные две области β-А4-пептида/Аβ4 или его фрагмента содержат аминокислоты в положениях 3-6 и в положениях 18-26.
7. Композиция по п.1, в которой гликозилирование на остатке Asn в VH-области осуществлено с помощью структуры, выбранной из группы, включающей
(а) сахарную структуру биантенного комплексного типа;
(б) сахарную структуру биантенного гибридного типа;
(в) сахарную структуру биантенного олигоманнозного типа; и
(г) сахарную биантенную структуру, представляющую собой любую из структур, указанных на фиг.5 или фиг.27.
8. Композиция по п.7, в которой сахарная структура не содержит коревого фукозилирования.
9. Композиция по п.3, в которой CDR2-участок имеет аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 12.
10. Композиция по п.1, которая получена методом рекомбинации.
11. Композиция по п.1, которая получена в СНО-клетке.
12. Композиция по п.11, где СНО-клетка представляет собой клетку линии СНО К1 или СНО K1 SV.
13. Композиция по любому из пп.1-12, представляющая собой диагностическую или фармацевтическую композицию, включающую указанную очищенную молекулу антитела в подходящей дозе и дополнительно содержащую фармацевтически приемлемый носитель.
14. Композиция по п.1, которая предназначена для лечения, предупреждения или диагностики болезней, связанных с амилоидозом или образованием амилоидных бляшек.
