Способ определения антибактериальной активности аэробных споровых микроорганизмов bacillus subtilis


 


Владельцы патента RU 2451085:

Государственное научное учреждение Якутский научно-исследовательский институт сельского хозяйства Россельхозакадемии (RU)

Способ может быть использован в биотехнологии и ветеринарии. Для определения антибактериальной активности аэробных споровых микроорганизмов Bacillus subtilis проводят посев тест-культур по всей поверхности мясопептонного агара в чашках Петри. Подготавливают гранулы цеолита Хонгуринского месторождения в течение 60 мин при комнатной температуре и обрабатывают их суспензией штаммов бактерий-антагонистов Bacillus subtilis ТНП-3-ДЕП и Bacillus subtilis ТНП-5-ДЕП. Помещают их на чашки Петри. Инкубируют и учитывают результаты посева по силе роста бактерий антагонистов после 72 ч инкубирования. Это обеспечивает эффективность определения антибактериальной активности бактерий. 1 табл.

 

Способ определения антибактериальной активности аэробных споровых микроорганизмов рода Bacillus.

Изобретение относится к области ветеринарной микробиологии, в частности к лабораторным методам определения свойств микробов-антагонистов.

Известен способ определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам путем диффузии в мясопептонный агар с бумажного диска в чашках Петри (Справочник по микробиологическим и вирусологическим исследованиям. - М.: Медицина, 1982. - С.180-181).

Известен способ профилактики болезней органов дыхания и повышения продуктивности молодняка оленей путем использования пробиотика «Сахабактисубтил» из штаммов бактерий Bacillus subtilis ТНП-3-ДЕП и Bacillus subtilis ТНП-5-ДЕП, адсорбированных на цеолите (RU 2385729 C1, 10.04.2010 г.). Однако данный способ не применяется для определения антибактериальной активности аэробных споровых микроорганизмов в лабораторных условиях.

В основу изобретения положена задача разработки способа определения антибактериальной активности микробов-антагонистов в отношении патогенных и условно-патогенных микроорганизмов.

Технический результат изобретения - способ эффективного определения антагонистических свойств микробного препарата путем помещения цеолита Хонгуринского месторождения, адсорбировавшего микробы-антагонисты, на Чашки Петри с тест-культурами. В качестве микробов-антагонистов используют штаммы бактерий Bacillus subtilis ТНП-3-ДЕП и Bacillus subtilis ТНП-5-ДЕП. Гранулы цеолита, обработанные суспензией штаммов бактерий, обладают антагонистическими свойствами в отношении тест-культур Е. coli, Str. aureas, Sal. Typhimurium.

Технический результат изобретения достигается следующим образом.

Штаммы бактерий Bacillus subtilis ТНП-3-ДЕП и Bacillus subtilis THП-5-ДЕП адсорбируют на цеолите Хонгуринского месторождения. Гранулы цеолита, адсорбировавшие микроорганизмы, помещают в чашки Петри посеянными с тест-культурами микроорганизмов и учитывают антибактериальную активность микробов-антагонистов по зоне задержки роста условно-патогенных и патогенных микроорганизмов.

Микроорганизмы, адсорбированные на цеолите, задерживают рост и развитие условно-патогенных и патогенных микроорганизмов.

В качестве микроба-антагониста используют штаммы бактерий Bacillus subtilis ТНП-3-ДЕП и Bacillus subtilis THП-5-ДЕП, депонированные в коллекции микроорганизмов Всероссийского государственного института контроля, стандартизации и сертификации ветеринарных препаратов (ВГНКИ). Справки о депонировании выданы 6 февраля 2001 г. за №180/15 и №181/15.

Штаммы бактерий могут быть получены в лаборатории по разработке микробных препаратов ГНУ Якутский научно-исследовательский институт сельского хозяйства Россельхозакадемии и ВГНКИ.

Штаммы бактерий Bacillus subtilis ТНП-3-ДЕП и Bacillus subtilis THП-5-ДЕП выращивают в мясопептонном агаре рН 7,0-7,2 в течение 5 суток при 37°C, а затем суспензируют в равных соотношениях в физиологическом растворе хлористого натрия в концентрации 2 млрд KOE/мл.

Цеолит Хонгуринского месторождения фракции 2-5 мм отмывают, сушат при 150°C. Затем цеолит помещают в суспензию, содержащую 2 млрд KOE/мл штаммов бактерий Bacillus subtilis ТНП-3-ДЕП и Bacillus subtilis THР-5-ДЕП на 60 минут при комнатной температуре из расчета 5 г цеолита на 20 мл суспензии микроорганизмов.

В качестве тест-культур используют штаммы бактерий Е. coli-1257, Str. aureas-209P, Sal. Typhimurium. Посев тест-культур производят по всей поверхности мясопептонного агара в чашках Петри.

Гранулы цеолита после выдержанной экспозиции помещают на середину чашки Петри и ставят в термостат при 37°C. Просмотр роста микроорганизмов в чашках проводят через 72 часа.

В качестве контроля на чашки Петри помещают цеолит, обработанный дистиллированной водой, и бумажные диски с адсорбированными штаммами бактерий-антагонистов Bacillus subtilis ТНП-3-ДЕП и Bacillus subtilis THП-5-ДЕП.

В чашках Петри с микробами-антагонистами, адсорбированными на цеолите, отсутствует рост условно-патогенных и патогенных микроорганизмов. Отмечается рост штаммов бактерий subtilis ТНП-3-ДЕП и Bacillus subtilis THП-5-ДЕП.

В чашках с цеолитом, обработанным только дистиллированной водой, отмечается рост тест-культур. В пробах с бумажными дисками отмечается рост тест-объектов по краям чашек и рост микробов-антагонистов вокруг дисков.

Таким образом, гранулы цеолита Хонгуринского месторождения, адсорбировавшего штаммы бактерий-антагонистов Bacillus subtilis ТНП-3-ДЕП и Bacillus subtilis THП-5-ДЕП, можно использовать для определения антагонистической активности в отношении патогенных и условно-патогенных микроорганизмов.

Результаты по изучению антагонистических свойств штаммов Bacillus subtilis, адсорбированных на цеолите-хонгурине

Тест-культуры Результаты просмотра посевов
2 млрд КОЕ/мл
24 ч 72 ч 5 суток
Цеолит + Bacillus subtilis ТНП-3-ДЕП и Bacillus subtilis ТНП-5-ДЕП
1 E. coli - - -
2 Sal. typhimurium ± - -
3 Str. aureas - - -
Контроль (цеолит+вода)
1 E. coli + + +
2 Sal. typhimurium + + +
3 Str. aureas + + +
Контроль (бумажные диски+Bacillus subtilis)
1 E. coli ± ± ±
2 Sal. typhimurium ± ± ±
3 Str. aureus ± ± ±
Обозначение: (-) - сплошной рост микроба антагониста; (+) - рост тест-культуры; (±) - единичный рост колоний тест-культуры и сплошной рост антагониста.

Способ определения антибактериальной активности аэробных споровых микроорганизмов Bacillus subtilis, включающий посев тест-культур по всей поверхности мясо-пептонного агара в чашках Петри, приготовление суспензии штаммов-антагонистов Bacillus subtilis ТНП-3-ДЕП и Bacillus subtilis ТНП-5-ДЕП, содержащей 2 млрд KOE/мл, обработку полученной суспензией приготовленных гранул цеолита Хонгуринского месторождения в течение 60 мин при комнатной температуре с последующим помещением их на чашки Петри, инкубацию и учет результатов посева по силе роста бактерий антагонистов после 72 ч инкубирования.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к области биологии, может быть использовано для экологического мониторинга и оценки водоемов. .
Изобретение относится к ветеринарной медицине, касается скрининга (поиска) пробиотических препаратов против кислотоустойчивых микроорганизмов и может быть использовано для скрининга (поиска) пробиотических препаратов против нокардиоформных актиномицетов in vivo.

Изобретение относится к биохимии. .
Изобретение относится к медицинской микробиологии, дерматовенерологии и лабораторной диагностике и представляет собой контрольный штамм Neisseria gonorrhoeae, предназначенный для внутрилабораторного контроля качества исследований при проведении лабораторной диагностики гонококковой инфекции культуральным методом.

Изобретение относится к области токсикологии и санитарно-гигиенических измерительных технологий, а именно к способам измерения и испытания с использованием жизнеспособных микроорганизмов.
Изобретение относится к области биохимии. .

Изобретение относится к биотехнологии, к способу введения молекулы пептидной нуклеиновой кислоты (ПНК) в цитозоль или в ядро клетки. .

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к получению ингибиторов адгезии и/или агрегации тромбоцитов, и может быть использовано в медицине. .

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для оценки исходного состояния фагоцитирующих клеток (нейтрофилы, моноциты, макрофаги) по способности к активации в норме и при патологии.

Изобретение относится к биотехнологии и предназначено для выбора штаммов микроорганизмов-деструкторов нефти и нефтепродуктов. .
Изобретение относится к области медицины, а именно клинической микробиологии

Изобретение относится к медицине, а именно к медицинской микробиологии, и может быть использовано в клинической практике для прогнозирования развития бактериального осложнения стафилококковой этиологии после гриппа
Изобретение относится к области микробиологии, биотехнологии и может быть использовано для оценки способности бактерий к биохимической детоксикации микотоксинов с целью последующего включения наиболее перспективных видов и штаммов в пробиотические препараты направленного действия - на биотрансформацию микотоксинов

Изобретение относится к биотехнологии и генной инженерии, а именно к бактериальному сенсору для детекции изменения pH

Изобретение относится к области медицинской микробиологии, в частности к идентификации токсигенных штаммов Vibrio cholerae O1, определению их биовара (классического или эльтор) и дифференциации V

Изобретение относится к области медицины, а именно медицинской микробиологии

Изобретение относится к медицинской микробиологии и представляет собой оригинальный штамм возбудителя псевдотуберкулеза, содержащий хромосомный ген суперантигена Y.pseudotuberculosis YPMa/YPMc (ypmA/C), плазмиды с мол

Изобретение относится к медицинской микробиологии и представляет собой оригинальный штамм возбудителя псевдотуберкулеза, содержащий хромосомный ген суперантигена Y.pseudotuberculosis YPMa/YPMc (ypmA/C) и используемый как тест-штамм для дифференциации бактерий Y.pseudotuberculosis генетической группы IIa
Наверх