Способ оценки структуры мембран эритроцитов периферической крови беременных при обострении герпес-вирусной инфекции

Авторы патента:

G01N33/53 - иммунологический анализ, анализ биоспецифического связывания, материалы для этого (препараты для терапевтических целей, содержащие антигены или антитела,A61K; гептены вообще, см. соответствующие рубрики в классе C07; пептиды, например протеины, вообще C07K)

Владельцы патента RU 2458348:

Федеральное государственное бюджетное учреждение "Дальневосточный научный центр физиологии и патологии дыхания" Сибирского отделения РАМН (RU)

Изобретение относится к области медицины и может быть использовано для оценки структуры мембран эритроцитов. Способ заключается в том, что в третьем триместре гестации при титре антител к вирусу герпеса 1:12800 в образце крови определяют содержание интерлейкина-8 и серотонина. При увеличении содержания интерлейкина-8 до 37,0±0,9 пг/мл (контроль - 15,2±1,2 пг/мл), серотонина до 1,97±0,02 мкмоль/л (контроль - 0,42±0,03 мкмоль/л), что приводит к нарастанию микровязкости мембран эритроцитов до 0,86±0,005 F_э/F_м (контроль - 1,14±0,006 F_э/F_м), оценивают угрозу нарушения их структурно-функционального состояния. 2 пр.

Цель изобретения заключается в прогнозировании нарушения структуры мембран эритроцитов под влиянием герпес-вирусной инфекции, обострение которой в третьем триместре беременности приводит к активизации в периферической крови интерлейкина-8 (IL-8), увеличивающего содержание серотонина, что приводит к изменению микровязкости мембран эритроцитов и снижает их устойчивость.

Цитокины противовоспалительного действия, к которым относится IL-8, оказывают повреждающее действие на клетки тканевых систем организма. IL-8 вырабатывается нейтрофилами, фибробластами, децидуальными клетками, гемопоэтическими элементами, способствуя выделению в кровь таких биологически активных веществ, как серотонин (Н.Ю.Сотникова, А.В.Кудряшова, Н.В.Крошкина, 2006; R.Turner, К.Weingand, 1998; Sato Motoyoshi, 1996). Однако в доступной литературе не описано влияние IL-8 и серотонина на микровязкость мембран эритроцитов.

Прототипом избран способ прогнозирования устойчивости мембран эритроцитов при обострении герпес-вирусной инфекции у беременных, основанный на определении содержания лизофосфатидилхолина и белка полосы-3 с последующим вычислением дискриминантного уравнения (Луценко М.Т., Андриевская И.А. «Способ прогнозирования устойчивости мембран эритроцитов при обострении герпес-вирусной инфекции у беременных». Мед. информатика, 2009. - №1, 19. - С.23-30). Однако в отличие от прототипа в нашем способе предлагается принять за основу повреждающего действия на структуру мембран эритроцитов у беременных, в третьем триместре перенесших обострение герпес-вирусной инфекции, действие IL-8 на содержание серотонина, которые становятся повреждающим фактором микровязкости мембран эритроцитов.

В отличие от описанного прототипа проводится подробный анализ изменения микровязкости мембран эритроцитов, возникающей вследствие обострения герпес-вирусной инфекции у беременных в третьем триместре (титр антител к вирусу герпеса - 1:12800), приводящей к активизации выработки IL-8, что способствует повышению в крови биогенно-активных веществ (серотонина), способствующих изменению на этом фоне микровязкости мембран эритроцитов.

Цель достигается тем, что оценка изменения микровязкости мембран эритроцитов исследуется путем определения коэффициента эксимеризации пирена, который равен отношению интенсивности флюоресценции эксимеров к интенсивности флюоресценции мономеров при одновременном включении метода дискриминантного анализа.

Заявленный способ имеет следующие приемы

Исследования проводились на базе стационара акушерского отделения клиники Дальневосточного научного центра физиологии и патологии дыхания СО РАМН. Изучена у 30 беременных в третьем триместре гестации устойчивость мембран эритроцитов при увеличении содержания IL-8 и серотонина, что приводит к увеличению микровязкости мембран. Все исследования были проведены с учетом требований Хельсинской декларации Всемирной ассоциации «Этические принципы проведения научных медицинских исследований с участием человека» с поправками 2000 г. и «Правилами клинической практики в Российской Федерации», утвержденными Приказом Минздрава РФ от 19.06.2003 г. №266.

1. Изменение микровязкости мембран эритроцитов проводили методом латеральной диффузии гидрофобного флюоресцентного зонда пирена. Определение микровязкости основано на образовании эксимеров (активных димеров) пирена в липидном окружении (Г.Е.Добрецов, 1989). Флюоресценцию пирена измеряли на спектрофотометре «Hitachi». Для определения микровязкости липидного бислоя находили интенсивность флюоресценции или свечение пирена при длине волны возбуждения 286 нм, длина волны мономеров - 395 нм, длина волны эксимеров - 470 нм. Оценка микровязкости основывается на вычислении коэффициента эксимеризации пирена (F_экс = F₄₇₀/F₃₉₅), который равен отношению интенсивности флюоресценции эксимеров к интенсивности флюоресценции мономеров. Коэффициент эксимеризации находится в обратной зависимости от микровязкости и обозначается как F_экс/F_мон.

2. Титр антител к вирусу герпеса определяли иммуноферментным методом на спектрофотометре «Stat Fax-2100» (USA).

3. IL-8 определяли методом твердофазного ИФА с использованием моноклональных антител фирмы ООО «Протеиновый контур» (Санкт-Петербург) на анализаторе иммуноферментных реакций «Униплан» АИФР-01, ЗАО «Пикон» (Москва).

4. Серотонин выявляли методом твердофазного ИФА с помощью реагентов «IBL» (Германия) на анализаторе АИФР-01, «Униплан» (Москва).

Показано, что при обострении герпес-вирусной инфекции в организме беременной повышается выработка IL-8, что приводит к увеличению в периферической крови серотонина, отрицательно влияющего на белково-липидное строение мембран эритроцитов, увеличивая их микровязкость.

Подобного подхода к решению вопроса, касающегося изменения белково-липидного комплекса мембран эритроцитов на фоне увеличения содержания в периферической крови IL-8 и серотонина при индуцирующем действии герпес-вирусной инфекции, в литературе не отмечено.

Исследования показали, что при обострении в третьем триместре беременности герпес-вирусная инфекция (титр антител к вирусу герпеса - 1:12800) индуцирует повышение выработки интерлейкина-8 (IL-8) до 37,0±0,9 пг/мл (контроль - 15,2±1,2 пг/мл; р<0,001), стимулирует увеличение в крови серотонина до 1,97±0,02 мкмоль/л (контроль - 0,42±0,03 мкмоль/л; р<0,001) и приводит к нарастанию микровязкости мембран эритроцитов. Белок-липидные контакты уменьшаются до 0,86±0,005 F_э/F_м (контроль - 1,14±0,006 F_э/F_м; р<0,05). Создается угроза нарушения структурно-функционального состояния мембран эритроцитов и, прежде всего, увеличение микровязкости.

Пример 1

Беременная А., 20 лет. Беременность 32 недели. Обострение герпес-вирусной инфекции на 30 неделе гестации. Титр антител к вирусу герпеса 1:12800. До обострения герпес-вирусной инфекции в периферической крови содержание IL-8 было 18,0 пг/мл; серотонина - 0,57 мкмоль/л; микровязкость в мембранах эритроцитов - 1,24 F_э/F_м.

После обострения герпес-вирусной инфекции содержание IL-8 увеличилось до 37,9 пг/мл; серотонина - 1,98 мкмоль/л; микровязкости - 0,866 F_э/F_м. У беременной при отмеченных показателях создается угроза нарушения структуры мембран эритроцитов.

Пример 2

Беременная X., 21 год. Беременность 34 недели. Титр антител к вирусу герпеса 1:12800. До обострения герпес-вирусной инфекции в периферической крови содержание IL-8 - 12,0 пг/мл; серотонина - 0,42 мкмоль/л; микровязкости в мембранах эритроцитов - 1,14 F_э/F_м.

После обострения герпес-вирусной инфекции содержание IL-8 - 36,1 пг/мл; серотонина - 1,96 мкмоль/л; микровязкость мембран эритроцитов - 0,859 F_э/F_м. Создается угроза нарушения структуры мембран эритроцитов.

Литература

1. Бордюшков Ю.Н., Горошинская И.А., Франциянц Е.М., Ткачева Г.Н., Горло Е.И., Нескубина И.В. Структурно-функциональные изменения мембран лимфоцитов и эритроцитов под воздействием переменного магнитного поля. // Вопросы мед. химии. - 2000. - Т.46. - №1. - С.72-80.

2. Владимиров Ю.А., Добрецов Г.Е. Флюоресцентные зонды в исследовании биологических мембран. - М.: Наука, 1980. - 430 с.

3. Горошинская И.А., Голотина Л.Ю., Горло Е.И., Ровда Т.А., Бордюшков Ю.Н. Изменение микровязкости мембран лимфоцитов и эритроцитов крови онкологических больных. // Вопросы мед. химии. - 1999. - Т.45. - №1. - С.53-57.

4. Добрецов Г.Е. Флюоресцентные зонды в исследовании клеток, мембран и липопротеидов. - М.: Наука, 1989. - С.191-206.

5. Луценко М.Т., Ишутина Н.А., Андриевская И.А. Способ оценки структурно-функционального состояния мембран эритроцитов периферической крови у беременных при обострении герпес-вирусной инфекции. Патент №2389021, выдан 10 мая 2010 г.

6. Веденеева М.В., Гагаева Ю.В., Крошкина Н.В., Кудряшова А.В., Панова И.А., Сотникова Н.Ю. Продукция цитокинов децидуальными макрофагами при физиологической беременности и синдроме задержки внутриутробного развития плода. // Журн. Цитокины и воспаление. - 2006. - №1. - С.1-3.

7. Motoyoshi Sato, Takashi Miyazaki, Voshiharu Murata Antioxidants inhibit tumor necrosis factor-α mediated stimulation of interleukin-8, monocyte chemoattractant prtein-1 and collagenase expression in cultured human synovial cells // J. Reumatol. - 1996. - Vol.23, №3. - P.432-438.

8. Turner R., Weingand K. Association between interleukin-8 concentration in nasal secretions and severity of symptoms of experimental zhinovirus colds // Clin. Infec. Diseases. - 1998. Vol.26, №4. - P.840-846.

Способ оценки структуры мембран эритроцитов периферической крови беременных при обострении герпес-вирусной инфекции, характеризующийся тем, что в третьем триместре гестации при титре антител к вирусу герпеса 1:12800 в образце крови определяют содержание интерлейкина-8 и серотонина, и при увеличении содержания интерлейкина-8 до 37,0±0,9 пг/мл (контроль - 15,2±1,2 пг/мл), серотонина до 1,97±0,02 мкмоль/л (контроль - 0,42±0,03 мкмоль/л), что приводит к нарастанию микровязкости мембран эритроцитов до 0,86±0,005 F_э/F_м (контроль - 1,14±0,006 F_э/F_м), оценивают угрозу нарушения их структурно-функционального состояния.

Изобретение относится к медицине, а именно к аллергологии, и касается способа прогноза количества обострений у больных бронхиальной астмой. .

Способ и набор для иммуноферментного определения функциональной активности с1-ингибитора по альтернативному пути // 2458346

Изобретение относится к способу определения функциональной активности компонентов комплемента в сыворотке крови человека при диагностике ряда заболеваний и в биологических препаратах.

Моноклональные антитела и одноцепочечные фрагменты антител против клеточно-поверхностного специфического для простаты мембранного антигена // 2458073

Способ прогнозирования хронического пылевого бронхита у работников угледобывающей промышленности // 2457490

Изобретение относится к медицине. .

Панель сывороток, содержащих антитела к антигенам hcv разных субтипов // 2456617

Изобретение относится к области медицины, а именно биотехнологии и иммунологии, и может быть использовано в технологии изготовления панелей сывороток, содержащих антитела к вирусам гепатита С разных субтипов.

Способ экспресс-диагностики смешанной герпесвирусной и бактериальной инфекции у детей // 2456616

Изобретение относится к области медицины и касается способа диагностики смешанной герпесвирусной и бактериальной инфекции у детей. .

Способ профилактики отторжения трансплантата трупной почки // 2456615

Изобретение относится к области медицины, а именно к трансплантологии. .

Способ оценки эффективности ингаляционной антибактериальной терапии нозокомиальной пневмонии, вызванной грамотрицательной флорой // 2456614

Способ прогнозирования снижения транспортной функции белка полосы-3 мембраны эритроцитов новорожденного от матерей, перенесших обострение герпес-вирусной инфекции в третьем триместре беременности // 2456613

Изобретение относится к области медицины и описывает способ прогнозирования снижения транспортной функции белка полосы-3 мембран эритроцитов новорожденного от матерей, перенесших обострение герпес-вирусной инфекции в третьем триместре беременности, где в периферической крови новорожденного определяют содержание TNF , выявляют в мембранах эритроцитов новорожденных методом диск-электрофореза в полиакриламидном геле (10%) с додецилсульфатом натрия белок полосы-3, вычисляют значение дискриминантной функции по формуле Dф=(5.167 × полоса-3)+(2.196×TNF ), где Dф - дискриминантная функция, полоса-3 - белок стромы мембраны эритроцитов, TNF - интерлейкин в крови новорожденных, и при Dф более 218.67 прогнозируют снижение транспортной функции анионов с помощью белка полосы-3 через мембраны эритроцитов новорожденного.

Способ прогнозирования формирования хронического лимфолейкоза и развития сочетанных осложнений в дебюте заболевания // 2458349

Изобретение относится к медицине и описывает способ прогнозирования формирования хронического лимфолейкоза и развития сочетанных осложнений в дебюте заболевания, включающий выделение ДНК из периферической венозной крови, отличающийся тем, что проводят анализ полиморфизма гена рецептора фактора некроза опухоли 2-го типа (+1663 A/G TNFR2) и прогнозируют повышенный риск формирования хронического лимфолейкоза и развития сочетанных осложнений в дебюте заболевания в случае выявления аллеля +1663 G TNFR2

Способ диагностики сложной гиперплазии эндометрия без атипии // 2459211

Изобретение относится к медицине, а именно к гинекологии, и касается способа диагностики сложной гиперплазии эндометрия без атипии

Микроорганизмы и их фракции, индуцирующие специфичный к углеводу клеточный иммунитет // 2460074

Изобретение относится к проведению теста на клеточный иммунный ответ в целях профилактики и лечения заболеваний, связанных с наличием определенных углеводных эпитопов, в частности положительному по углеводному эпитопу опухолей

Антитела и пептидные антигены для получения антител, имеющих селективную специфичность связывания с биологически активным интактным паратиреоидным гормоном (птг(ртн))1-84 // 2460737

Изобретение относится к иммунологии

Способ прогнозирования течения псориаза // 2461007

Изобретение относится к области медицины, а именно к дерматологии, и может быть использовано для прогнозирования течения псориаза

Тест-система ифа для серологической диагностики парвовирусной инфекции крупного рогатого скота и определения уровня поствакцинальных антител // 2461008

Изобретение относится к ветеринарной вирусологии и биотехнологии и касается тест-системы ИФА для серологической диагностики парвовирусной инфекции крупного рогатого скота и определения уровня поствакцинальных антител

Способ прогнозирования формирования вирусологического ответа у больных хроническим гепатитом с // 2461834

Изобретение относится к области медицины, а именно к инфекционным болезням и иммунологии, и предназначено для прогнозирования формирования вирусологического ответа у больных хроническим гепатитом С

Способ диагностики поражения легких у больных геморрагической лихорадкой с почечным синдромом // 2461835

Изобретение относится к области медицины, а именно к внутренним и инфекционным болезням, и касается способа прогнозирования риска развития дыхательной недостаточности у больных гемморагической лихорадкой с почечным синдромом

Способ прогнозирования течения экземы у больных с сопутствующим хроническим гастродуоденитом // 2461836

Изобретение относится к области медицины, а именно к дерматологии, и может быть использовано для лабораторного способа прогнозирования течения экземы с сопутствующей патологией гастродуоденальной зоны