Способ аффинного выделения аутоантител класса igg к иммунорегуляторному цитокину tnf

Изобретение относится к медицине и касается способа выделения фракций аутоантител класса IgG к иммунорегуляторному цитокину TNF из сыворотки крови человека с использованием комплекса процедур аффинной хроматографии и процедуры магнитной сепарации, проводимой с использованием магнитных частиц, покрытых стрептавидином, и поликлональных антител к TNF, меченых биотином. Изобретение обеспечивает получение чистых фракций аутоантител к TNF класса IgG. 1 табл.

 

Изобретение относится к иммунологии и биотехнологии, а именно к способам аффинного выделения аутоантител к цитокинам.

Аутоантитела к цитокинам признаются исследователями как весьма существенные биологические эффекторные молекулы, регулирующие иммунный ответ in vivo. Аутоантитела к цитокинам были обнаружены в фармацевтических препаратах иммуноглобулина (VIIg) и у здоровых людей, от которых данные препараты были получены. Характеристика человеческих аутоантител к цитокинам выявляет их поликлональную природу и принадлежность преимущественно к IgG классу. В последние годы многими исследовательскими группами сообщается об обнаружении аутоантител, специфичных к интерферонам (INF-α, INF-β, INF-γ), некоторым интерлейкинам (IL-1α, IL-2, IL-3, IL-4, IL-6, IL-8, IL-9, IL-10, IL-12), факторам роста (GM-CSF, M-CSF, LIF, Oncostatin M, VEGF) и фактору некроза опухолей (Watanabe M., Uchida К., Nakagaki К., Trapnell В., Nakata К. High avidity cytokine autoantibodies in health and disease: Pathogenesis and mechanisms. // Cytokine & Growth Factor Reviews. - 2010. - doi: 10.1016/j.cytogfr. 2010.03.003).

Аутоантитела к цитокинам способны играть роль в патогенезе заболеваний или предрасположенности к ним, а также могут нести ответственность за физические проявления связанные с заболеванием.

Одним из значимых цитокинов с широким спектром действия является фактор некроза опухоли (TNF), для которого показано увеличение содержания при различных состояниях. Существует широкий спектр заболеваний, при которых роль TNF считается крайне важной.

На сегодняшний день исследованию аутоантител к фактору некроза опухоли посвящено небольшое количество работ. Так, аутоантитела к TNF были обнаружены в сыворотках крови здоровых доноров, в большем количестве - в сыворотках крови пациентов с туберкулезом, грамотрицательной бактериальной септицемией, кистозным фиброзом с хронической легочной инфекцией, рассеянным склерозом, а также с различными ревматическими заболеваниями. Вместе с тем, наличие аутоантилел к TNF, их вклад в регуляцию биологической активности самого цитокина и участие в патогенетических процессах при различных заболеваниях изучены недостаточно.

На сегодняшний день, в большинстве работ по изучению участия аутоантител к цитокинам, и в том числе к TNF, в регуляции их активности содержание аутоантител выражают в единицах оптической плотности. Однако, такой подход создает трудности при сравнении данных, полученных различными группами исследователей вследствие использования различных реагентов и методов для определения аутоантител и делает невозможным сравнение содержания аутоантител различных классов и подклассов в пределах каждой исследуемой группы доноров.

В связи с чем, предпочтительным представляется выделение чистых фракций аутоантител, которые могут быть использованы в качестве калибровочных образцов при постановке ИФА для определения абсолютных количеств аутоантител к цитокинам, а также позволят определить биологическую активность аутоантител.

Описан способ (прототип), при котором фракции аутоантител выделяли из сыворотки крови человека методом аффинной хроматографии с использованием хроматографического сорбента (CNBr)-активированной Sepharose 4B (Pharmacia, Uppsala, Sweden), связанного с TNF. Фракции, связавшиеся с TNF, были собраны и нейтрализованы. В каждой собранной фракции методом ИФА было определено содержание антител, и фракции с наиболее высоким содержанием антител были объединены и диализованы против PBS. Далее данные фракции были дополнительно очищены с использованием колонки с Protein А сорбентом, нейтрализованы и сконцентрированы. Была показана нейтрализующая активность полученной фракции аутоантител в отношении TNF (цитотоксический тест на клеточной линии WEHI 164). (Sioud M., Dybwad A., Jespersen L., Suleyman S., Natvig J.B., Føorre O. Characterization of naturally occurring autoantibodies against tumour necrosis factor-alpha (TNF-alpha): in vitro function and precise epitope mapping by phage epitope library. // Clin Exp Immunol. - 1994. - Vol.98 (3). - P.520-525.)

Недостатком данного подхода является отсутствие очистки полученной фракции аутоантител от примеси TNF, которая при элюировании может смываться с колонки с аффинным сорбентом Sepharose, таким образом, часть аутоантител во фракции может находится в связанном с цитокином состоянии, что может оказать влияние при использовании полученной фракции аутоантител для постановки тестов на биологическую активность и при применении полученной фракции в качестве калибровочного образца для определения абсолютного содержания аутоантител в сыворотке крови человека. Кроме того, используемый на второй стадии очистки сорбент Protein А не позволяет выделить аутоантитела подкласса IgG3, что делает невозможным применение очищенной фракции аутоантител к TNF в качестве калибровочного образца для определения абсолютного содержания аутоантител к TNF подкласса IgG3 в сыворотке крови человека.

Задачей настоящего изобретения является создание эффективного способа выделения аутоантител класса IgG к иммунорегуляторному цитокину TNF.

Сущность предлагаемого изобретения заключается в следующем:

Из сыворотки крови человека выделяют антитела класса IgG с использованием колонки с аффинным сорбентом Protein G. При проведении элюции полученные фракции аутоантител нейтрализуют, объединяют и диализуют. Далее фракции аутоантител наносят на колонку со связанным с TNF аффинным сорбентом. При проведении элюции полученные фракции аутоантител к TNF нейтрализуют, объединяют и диализуют. Далее проводят магнитную сепарацию для очистки фракции аутоантител к TNF от примеси TNF. Для магнитной сепарации используют магнитные частицы, покрытые стрептавидином и поликлональные антитела к TNF. Поликлональные антитела к TNF метят биотином, проводят совместную инкубацию магнитных частиц и меченых биотином поликлональных антител, полученный комплекс инкубируют с фракциями аутоантител к TNF, выделенных в ходе процедур аффинной хроматографии, и собирают надосадочную жидкость, содержащую очищенные фракции аутоантител.

Принципиальным отличием разработанного способа от прототипа является использование магнитных частиц, связанных с мечеными биотином поликлональными антителами к TNF, для очистки фракции аутоантител к TNF от примеси самого цитокина, что исключает возможность искажения результатов тестов на биологическую активность полученной фракции аутоантител, вследствие влияния TNF, а также результатов иммуноферментного анализа для определения абсолютного содержания аутоантител к TNF в сыворотках крови человека с использованием в качестве калибровочных образцов полученных фракций аутоантител к TNF, из-за возможности конкуренции присутствующего во фракции аутоантител TNF с TNF, пришитым к подложке для проведения ИФА.

Кроме того, использование сорбента Protein G позволяет выделить аутоантитела класса IgG всех четырех подклассов, что позволяет применение очищенной фракции аутоантител к TNF в качестве калибровочного образца для определения абсолютного содержания аутоантител к TNF подклассов IgG1, IgG2, IgG3 и IgG4 в сыворотке крови человека, а также при постановке тестов на биологическую активность аутоантител к TNF позволяет учесть вклад всех подклассов IgG.

Предлагаемое изобретение позволяет выделить чистые фракции аутоантител к TNF всех четырех подклассов иммуноглобулина G, очищенные от примеси самого TNF, в связи с чем полученная фракция может быть использована в различных биологических тестах предполагающих использование аутоантител к TNF класса IgG.

Техническим результатом изобретения является получение чистых фракций аутоантител к TNF класса IgG.

Изобретение осуществляется следующим образом.

Сыворотка крови человека получается путем центрифугирования цельной крови в течение 15 мин (3000 об/мин). Перенос сыворотки крови человека в соответствующий буфер, необходимый для дальнейших процедур аффинной очистки антител, осуществляется с помощью колонки с сорбентом Bio-Gel P6 DG (Bio-Rad, США). Высокомолекулярные фракции с Bio Gel P6 DG наносятся на колонку с Protein G Sepharose Fast Flow аффинным сорбентом (GE Healthcare, США). Хроматографические процедуры проводятся в соответствии с инструкцией производителя. Используются следующие буфера: рабочий буфер - 20 mM фосфатно-солевой буфер (PBS) (рН=7,4), буфер для удаления неспецифически связавшихся компонентов - 20 mM PBS, содержащий тритон × 100 (0,1%) (рН=7,4), буфер для элюции - 0,1 М Gly - Cl (рН=2,5). При проведении элюции полученную фракцию нейтрализуют до физиологических значений рН 1М Tris-HCl буфером (рН 9,0). Фракции антител объединяют и диализуют против 20 mM PBS (рН=7,4). Диализованные фракции антител наносят на колонку со связанным с TNF аффинным сорбентом Affi-Gel (Bio-Rad, США).

Связывание TNF с аффинным сорбентом и Хроматографические процедуры по выделению антител проводят согласно инструкции производителя. Используются следующие буфера: рабочий буфер - 20 mM PBS (pH=7,4), буфер для удаления неспецифически связавшихся компонентов - 1М гуанидин-HCl (рН=7,4), буфер для элюции - 0,1 М Gly-HCl (рН=2,5). При проведении элюции полученную фракцию нейтрализуют до физиологических значений рН 1М Tris-HCl буфером (рН 9,0). Фракции аутоантител к TNF объединяют и диализуют против 20 mM PBS (pH=7,4).

Для магнитной сепарации используют магнитные частицы (Dynabeads М-280, Dynalbiotech) покрытые стрептавидином. Кроличьи поликлональные антитела к TNF метят биотином (ORIGEN, США), далее проводится соинкубация магнитных частиц и поликлональных антител, после отмывки, полученный комплекс инкубируют с фракциями аутоантител к TNF, полученных в ходе процедур аффинной хроматографии, и собирают надосадок, содержащий очищенные фракции аутоантител.

Фракция аутоантител к TNF была выделена из сыворотки крови условно здоровых доноров. Чистота фракции и соответствие по молекулярному весу иммуноглобулинам класса G были подтверждены электрофоретически (данные не представлены). Чистота фракции, а именно отсутствие в ней примеси TNF, дополнительно проверена методами ИФА и ЭХЛ (данные не представлены).

Далее с использованием набора для проведения ИФА, включающего рекомбинантный человеческий TNF и моноклональные антитела к классам и подклассам иммуноглобулинов человека меченные пероксидазой хрена, были определены абсолютное содержание аутоантител к TNF подклассов IgG1, IgG2, IgG3 и IgG4 в сыворотках крови условно здоровых доноров с использованием в качестве калибровочного материала полученной фракции аутоантител к TNF (табл.1).

Таблица 1
Содержание аутоантител к TNF по подклассам в сыворотке крови условно здоровых доноров (n=10). Результаты представлены в нг/мл.
IgG1 IgG2 IgG3 IgG4
169,1* (35,1-180,8) 66,6*# (47,8-69,8) 109,0* (85,3- 128,0) 34,7 (28,4-42,4)
Примечание: * - достоверно (р<0,05) по сравнению содержанием IgG4;
# - достоверно (р<0,05) по сравнению содержанием IgG3.

Использование колонок с аффинными сорбентами Protein G и Affi-Gel, связанного с TNF, и процедуры дополнительной очистки с применением магнитных бус является эффективным способом получения аутоантител класса IgG к TNF, что подтверждается тестами на чистоту фракции и соответствие ее по молекулярному весу иммуноглобулинам класса G, а также возможностью использования полученной фракции в качестве калибровочного материала для определения абсолютного содержания аутоантител к TNF в сывоторках крови человека. Таким образом, в результате проведенных исследований разработан способ аффинного выделения аутоантител класса IgG к иммунорегуляторному цитокину TNF, котый может быть использован для всех других цитокинов.

Способ выделения фракций аутоантител к иммунорегуляторному цитокину TNF из сыворотки крови человека с использованием комплекса процедур аффинной хроматографии, отличающийся тем, что проводят выделение антител класса IgG с использованием аффинного сорбента Protein G, после проведения элюции полученные фракции аутоантител нейтрализуют, объединяют и диализуют, далее фракции аутоантител наносят на колонку со связанным с TNF аффинным сорбентом, после проведения элюции полученные фракции аутоантител к TNF нейтрализуют, объединяют и диализуют, после этого проводят их магнитную сепарацию с использованием магнитных частиц, причем магнитные частицы, покрытые стрептавидином, со-инкубируют с мечеными биотином поликлональными антителами к TNF и полученный комплекс инкубируют с фракциями аутоантител к TNF, затем собирают надосадочную жидкость, содержащую очищенные фракции аутоантител.



 

Похожие патенты:

Настоящее изобретение относится к химическому маркеру для скрытой маркировки веществ, материалов и изделий, включающему механическую смесь фталеинов, силикагеля, карбоновой кислоты и низкоокисленного атактического полипропилена, отличающемуся тем, что он дополнительно содержит 3-(3'-метил-4'-гидроксифенил)-3-(4"-гидроксифенил) фталид структурной формулы при следующем соотношении компонентов, мас.%: фенолфталеин - 0,5-28,0; о-крезолфталеин - 14,1-56,5; силикагель - 15,0-25,0; лимонная или щавелевая кислота - 2,0-4,0; низкоокисленный атактический полипропилен - 10,0-16,0; 3-(3'-метил-4'-гидроксифенил)-3-(4"-гидроксифенил) фталид - 8,0-39,3.

Изобретение относится к тестовому датчику аналита, содержащему, по меньшей мере, две подложки, образующие емкость, причем емкость имеет основную область и, по меньшей мере, две, по существу, химически изолированные вторичные зоны анализа, причем основная область, по существу, разделяет эти, по меньшей мере, две, по существу, химически изолированные вторичные зоны анализа; по меньшей мере, один первый рабочий электрод, включающий в себя первый проводник и композицию реагента, размещенный в основной области; по меньшей мере, один первый противоэлектрод, включающий в себя второй проводник и, по меньшей мере, одно первое окислительно-восстановительное вещество, размещенный в первой вторичной зоне анализа; и, по меньшей мере, один второй противоэлектрод, включающий в себя третий проводник и, по меньшей мере, одно второе окислительно-восстановительное вещество, размещенный во второй вторичной зоне анализа, при этом рабочий электрод, первый противоэлектрод и второй противоэлектрод являются независимо адресуемыми.

Изобретение относится к лесном экосистемам, экологии и охране природы. .
Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной гематологии. .
Изобретение относится к исследованиям в области охраны окружающей среды, а именно к способам биогеохимического мониторинга загрязнения объектов окружающей среды кадмием.

Изобретение относится к области экологии и предназначено для оценки степени токсичности нетрадиционных органических удобрений на основе органических отходов, в частности осадков сточных вод (ОСВ) в лабораторных условиях.

Изобретение относится к области иммунодиагностического тестирования и, в частности, к иммунологическому тестовому элементу. .

Изобретение относится к медицине, а именно к гастроэнтерологии, и может быть использовано для лечения злокачественных опухолей и метастазов в печени. .

Изобретение относится к биофизическому определению токсичности вод и водных растворов. .
Изобретение относится к области медицины и предназначено для прогнозирования успешности профилактики инфекционных осложнений у недоношенных новорожденных детей в период выхаживания в условиях стационара. Недостатками известных способов является отсутствие данных об его использовании у недоношенных детей и, в том числе, в целях профилактики и невысокая степень точности. Предлагается прогнозирование успешности профилактики инфекционных осложнений у недоношенных новорожденных детей в период выхаживания в условиях стационара проводить путем учета перинатального анамнеза, клинико-лабораторных данных, назначения пробиотика, причем в качестве пробиотика назначают жидкую форму Е. faecium L3, определяют показатели линейных классификационных функций ЛКФ1 (отсутствие инфекционных осложнений) и ЛКФ2 (наличие инфекционных осложнений) по формулам: ЛКФ1=-12,2-1,29Х1-0,27Х2-0,87Х3+4,75Х4+3,13Х5+10,68Х6, ЛКФ2=-8,78+0,74Х1+0,93Х2-0,15Х3+3,78Х4+2,77Х5+7,6Х6, где X1 - отягощенный акушерско-гинекологический анамнез (0 - нет; 1 - есть), Х2 - хроническая никотиновая интоксикация матери (0 - нет; 1 - есть), Х3 - родоразрешение методом кесарева сечения (0 - нет; 1 - есть), Х4 - эозинофилия в клиническом анализе крови ребенка (0 - нет; 1 - есть), Х5 - результат оценки количества эшерихий в фекалиях ребенка по данным метода ПЦР в реальном времени (1 - недостаточное; 2 - нормальное; 3 - повышенное), Х6 - использование в комплексной терапии недоношенного ребенка жидкой пробиотической формы Е. faecium L3 (1 - нет; 2 - есть), сравнивают значения показателей ЛКФ1 и ЛКФ2 и прогнозируют успешность профилактики при ЛКФ1>ЛКФ2. Использование заявленного способа позволяет повысить эффективность выхаживания недоношенных детей, предупредить формирование хронических заболеваний, уменьшить число неблагоприятных исходов. 2 пр.

Использование: для испытаний образцов многослойных материалов на прочность к действию ударных нагрузок ядерного взрыва, в частности рентгеновского излучения. Сущность: заключается в том, что выполняют предварительное определение толщины сублимированного слоя материала и его удаление, закрепление взрываемой фольги на испытываемый образец, а также неравномерный контактный нагрев материала электронагревателем, разряд через электропроводящую фольгу импульса электрического тока, приводящий к взрыву фольги и нагружению образца механическим импульсом давления от взрывной ударной волны, при этом дополнительно определяют и проводят удаление слоя материала, равного толщине лицевых отколов, а также производят объемный нагрев материала образца КВЧ-излучением и поверхностный - электронагревателем. Технический результат: обеспечение возможности воспроизведения действительной картины термомеханического действия рентгеновского излучения ядерного взрыва на образцы конструкционных материалов. 2 ил.

Использование: для испытаний образцов многослойных материалов на прочность к действию рентгеновского излучения (РИ) ядерного взрыва (ЯВ). Сущность: испытываемый образец материала устанавливают на мишень импульсомера, облучают образец потоком электронов по критерию равенства импульса давления, сообщаемого преграде из конструкционного материала действием потока электронов и рентгеновского излучения, и замеряют импульс давления. Технический результат: обеспечение возможности оценки прочности образцов конструкционных материалов в условиях, максимально приближенных к требуемым. 2 ил.

Изобретение относится к созданию структур на основе полупроводниковых нанокристаллов и органических молекул, которые могут быть использованы в качестве микрофлюидных элементов в оптоэлектронных устройствах. Способ предусматривает внедрение нанокристаллов и органических молекул в трековые поры мембран. Нанокристаллы внедряют в пристеночный слой трековых пор, а органические молекулы связывают с модифицированными или немодифицированными карбоксильными группами на внутренней поверхности трековых пор мембран. Либо молекулы связывают в комплекс с нанокристаллами, внедренными в трековые мембраны в результате последовательного пропитывания мембран растворами нанокристаллов и органических молекул при нормальных условиях. Технический результат заключается в упрощении способа, повышении пропускной способности мембран с внедренными структурами и в увеличении количества структур в полимерных трековых мембранах. 7 ил., 2 пр.

Использование: для применения в мониторинге множества параметров, таких как время, температура, время-температура, оттаивание, замораживание, микроволновое излучение, влажность, ионизирующее излучение, стерилизация и химикаты. Сущность: заключается в том, что устройство включает в себя индикатор, имеющий очень тонкий слой металла (например, полиэфирную пленку, имеющую чрезвычайно тонкий, например, толщиной около сотни ангстрем, слой алюминия), и активатор, например, реактив, такой как вода, водяной пар, кислота, основание, окисляющий агент или их прекурсоры, который способен реагировать с указанным индикатором. Этот индикатор сохраняет свою непрозрачность и металлический блеск, например, серебристо-белый цвет, зеркальную финишную обработку слоя алюминия в течение длительного времени. Активатор разрушает слой индикатора, включая и естественно сформированный слой оксида. Этот слой индикатора не имеет матрицы (связующего вещества). Как только устройство становится прозрачным, переходя от непрозрачного состояния, любые цвет, сообщение или изображение, напечатанные под ним, становятся видимыми по истечении предварительно заданного времени, делая таким образом это устройство самочитаемым. Технический результат: повышение достоверности и надежности мониторинга таких параметров, как время, температура, время-температура, оттаивание, замораживание, микроволновое излучение, влажность, ионизирующее излучение, стерилизация и химикаты. 4 н. и 21 з.п. ф-лы, 3 табл., 44 ил.

Изобретение относится к области воздухотехнического оборудования помещений здравоохранения и предназначено для контроля качества воздуха в операционном помещении. Для контроля качества воздуха в операционном помещении, где имеется операционный стол с предусмотренной на нем раневой зоной, а также с, по меньшей мере, одним инструментальным столом, в области раневой зоны или в области, в которой выносят суждения о качестве воздуха в области раневой зоны, устанавливают, по меньшей мере, одно устройство измерения параметра качества воздуха, посредством которого измеряют параметр качества воздуха. В зависимости от измеренного, по меньшей мере, одного параметра качества воздуха регулируют подводимый в операционное помещение воздух в отношении его скорости и/или количества или соответственно объема. Использование способа позволяет обеспечить такое качество подаваемого воздуха в операционном помещении, которое предотвращает или, по меньшей мере, снижает опасность причинения вреда для оперируемого лица. 11 з.п. ф-лы, 3 ил.

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к фосфолипидному флуоресцентному зонду, и может быть использовано в медицине. Указанный фосфолипидный флуоресцентный зонд, характеризующийся следующим названием 1-[13-(4,4-дифтор-1,3,5,7-тетраметил-4-бора-3а,4а-диаза-s-индацен-8-ил)тридеканоил]-2-(10-{[(2-гидроксинафтил-1)азофенил-4]азофенил-4}деканоил)-sn-глицеро-3-фосфохолин, используют в составе тест-системы для определения активности фосфолипазы А2 группы IIA (секФЛА2(IIA)) в сыворотке крови, которая также содержит везикулярную фосфолипидную матрицу для включения зонда, состоящую из фосфатидилхолина, лизофосфатидилхолина и фосфатидилглицерина, буферный раствор и фосфолипазу А2 пчелиного яда в качестве стандарта. Изобретение позволяет достоверно определять активность секФЛА2(IIA)в сыворотке крови человека в клинических условиях. 2 н.п. ф-лы, 5 ил., 5 пр.

Изобретение относится к способу и системе автоматизированного контроля процессов в первичных и вторичных отстойниках или отстойниках-илоуплотнителях очистных сооружений объектов водоотведения жилищно-коммунального хозяйства. Технический результат заключается в повышении эффективности автоматизированного контроля отстойников сточных вод. Система содержит совокупность первичных преобразователей емкостного типа для измерения электрической емкости (диэлектрической проницаемости) и электрического сопротивления (удельной электропроводности), а также температуры, размещаемых на подвижном оборудовании, расположенном внутри отстойника, совокупность вторичных преобразователей, соединенных с первичными преобразователями, подающих на первичные преобразователи сигналы воздействия заданных частоты и амплитуды и получающих ответные мгновенные значение напряжения и тока первичных преобразователей для последующей обработки, программируемое устройство или автоматизированное рабочее место контроля, подключенное к вторичным преобразователям по проводному или беспроводному каналу связи, с функциями сбора, обработки и хранения информации, включая контроль динамики изменения измеренных значений диэлектрической проницаемости и удельной электропроводности во времени или относительно конструкции отстойника и формирование итогового прогноза уровня или свойств для осадка или ила. 2 н. и 10 з.п. ф-лы, 1 ил.

Изобретение относится к области физической и коллоидной химии, нанотехнологиям микродвигателей, а также к другим областям для проведения анализа и характеристики материалов. Для визуального установления движения и определения траектории движения образовавшихся объектов в виде частиц в способе визуализации самоорганизации и движения объектов дисперсных частиц используют объект-препарат с нанесенной на него ограничительной замкнутой линии с помеченным центром. Далее в помеченном центре ограничительной окружности размещают шаблон, в который помещают дисперсный материал. Затем в ограничительную окружность вносят изучаемую жидкость в количестве, обеспечивающем слой жидкости над изучаемым материалом. Далее подводят к его центру капилляр, содержащий поверхностно-активное вещество, включают видеокамеру на фиксирование изменений поверхности, опускают капилляр до соприкосновения с поверхностью, видеокамеру выключают после завершения процесса перемещения самоорганизующихся объектов. Техническим результатом является визуальное установление движения и определения траектории движения образовавшихся объектов в виде частиц. 8 ил.

Изобретение относится к ветеринарии и может быть использовано для мониторинга эструса и овуляции животных и планирования предпочтительного времени оплодотворения. Для этого предоставляют датчик стоячего положения, расположенный относительно животного так, чтобы обнаруживать стоячее положение животного. Затем собирают данные от датчика стоячего положения, которые содержат данные, относящиеся к общему времени, в течение которого животное стоит. Затем определяют время эструса и овуляции животного путем вычисления начального момента изменений и пика на основе изменений в соотношении времени стояния. Планируют предпочтительное время оплодотворения животного, с помощью указания рабочему предпочтительного времени оплодотворения, предоставляемого на средстве индикации данных. При этом средство индикации данных обеспечивает удобную временную зону оплодотворения и предпочтительное время оплодотворения в рамках временной зоны овуляции. После чего предоставляют данные, указывающие фактическое время оплодотворения. И в случае неудачи оплодотворения предоставляют указания о том, находится ли фактическое время оплодотворения, произошедшего в указанное предпочтительное время оплодотворения, в рамках временной зоны овуляции. Изобретение позволяет определить предпочтительное время оплодотворения животного в пределах удобной временной зоны, а также определить болезнь или слабость животного. 5 з.п.ф-лы, 11 ил.

Изобретение относится к медицине и касается способа выделения фракций аутоантител класса IgG к иммунорегуляторному цитокину TNF из сыворотки крови человека с использованием комплекса процедур аффинной хроматографии и процедуры магнитной сепарации, проводимой с использованием магнитных частиц, покрытых стрептавидином, и поликлональных антител к TNF, меченых биотином. Изобретение обеспечивает получение чистых фракций аутоантител к TNF класса IgG. 1 табл.

Наверх