Способ определения спиртов в биологических тканях и выделениях организма человека



Способ определения спиртов в биологических тканях и выделениях организма человека
Способ определения спиртов в биологических тканях и выделениях организма человека
Способ определения спиртов в биологических тканях и выделениях организма человека
Способ определения спиртов в биологических тканях и выделениях организма человека
Способ определения спиртов в биологических тканях и выделениях организма человека
Способ определения спиртов в биологических тканях и выделениях организма человека
Способ определения спиртов в биологических тканях и выделениях организма человека
Способ определения спиртов в биологических тканях и выделениях организма человека

 


Владельцы патента RU 2516344:

Межрегиональная общественная организация "Союз криминалистов" (RU)

Изобретение относится к интегральному анализу биологических тканей и выделений организма человека с использованием метода хромато-масс-спектрометрии (ГХ/МС). Способ может быть использован в медицине, биологии, экспертно-криминалистической, судебной и оперативно-розыскной деятельности. Заявленный способ заключается в том, что исследуемый образец помещают в герметичную емкость из инертного материала, термостатируют до температуры выше 25°С, но ниже температуры разрушения исследуемого биологического объекта. Из термостатированного образца осуществляют отбор пробы парогазовой фазы, которую исследуют хромато-масс-спектрометрически путем разделения на хроматографической колонке. Затем компоненты смеси парогазовой фазы регистрируют в виде ряда хроматографических пиков на хроматограмме и идентифицируют по времени их выхода на хроматограмме и масс-спектру. Расчет концентрации спиртов производят в соответствии с полученной хроматограммой по соответствующим площадям пиков компонентов смеси парогазовой фазы. Техническим результатом является повышение чувствительности, точности и надежности идентификации и количественного исследования, а также сохранение используемого объекта для возможных повторных или дополнительных исследований. 1 табл., 8 ил.

 

Изобретение относится к интегральному анализу биологических тканей и выделений организма человека с использованием метода хромато-масс-спектрометрии (ГХ/МС). Способ может быть использован в медицине, биологии, экспертно-криминалистической, судебной и оперативно-розыскной деятельности при установлении факта наличия спиртов в биологических тканях и выделениях человека, наличия и степени алкогольного опьянения проверяемых лиц, установлении фактических данных об отравлении фальсифицированным алкоголем и т.п.

В качестве исследуемых образцов биологических тканей и выделений организма человека могут использоваться следующие объекты: водные экстракты выдыхаемого воздуха, кровь, слюна, моча, водные экстракты дезинтегрированных органов и тканей.

Известен метод выявления неизвестных веществ в биологических жидкостях пациентов, принимавших наркотические или психотропные вещества, заключающийся в том, что готовят три пробы исследуемого образца биологической жидкости: первую - путем экстракции с перерастворением, вторую - путем кислотного гидролиза и третью - путем ферментативного гидролиза. Причем, первую пробу подвергают ГХ/МС анализу в режиме градиента температуры 15°С/мин и данные анализируют путем сравнения с базой данных, по которой выявляют признаки неизвестного вещества (НВ), а именно - спектры с m/z, совпадающими с базовыми ионами наркотического, или психотропного вещества, или метаболитов, и содержание (НВ) в пробе. Вторую пробу подвергают ГХ/МС анализу в режиме градиента температуры 25°С/мин и третью пробу подвергают ГХ/МС анализу в режиме градиента температуры 15°С/мин. При увеличении содержания НВ в последних двух пробах по сравнению с первой подвергают ГХ/МС анализу, также в режиме градиента температуры 15°С/мин, базовое наркотическое или психотропное вещество на присутствие в нем НВ и при его отсутствии в базовом веществе проверяют присутствие НВ в интактной биологической жидкости, для чего пробу ее готовят путем кислотного гидролиза и подвергают ГХ/МС анализу в режимах градиента температуры 15°С/мин и 25°С/мин. В случае обнаружения НВ в интактной биологической жидкости его квалифицируют как эндогенное, а при отсутствии признаков аликвоту первой пробы смешивают с пробой интактной биологической жидкости. При этом готовят пробу путем кислотного гидролиза смеси, подвергают пробу ГХ/МС анализу в режимах градиента температуры 15°С/мин и 25°С/мин. Далее определяют содержание НВ по результатам обоих режимов анализа и сравнивают его с содержанием НВ в первой пробе. При совпадающих значениях содержания НВ в указанных трех пробах квалифицируют НВ как новый, ранее неизвестный продукт метаболизма базового наркотического или психотропного вещества - патент RU 2419788, G01N 30/02, 2009 г.

Исследование, проводимое известным методом, является сложным и трудоемким. Кроме того, метод является разрушающим, то есть после проведенного анализа объект не может быть использован для каких-либо иных дополнительных исследований, например ДНК, одорологических, запаховых исследований и др.

Прототипом изобретения является нитритный метод определения спиртов, заключающийся в превращении спиртов в более летучие, чем исходные спирты, алкилнитриты путем взаимодействия их с нитритом натрия в среде трихлоруксусной кислоты, и в дальнейшем - хроматографировании алкилнитритов. Разделенные на хроматографической колонке компоненты смеси последовательно поступают в детектор по теплопроводности - катарометр, сигналы которого регистрируются в виде ряда хроматографических пиков на хроматограмме. Идентификация веществ производится по времени их удержания, которое исчисляется от момента введения анализируемого вещества в колонку до появления максимума пика. Чувствительность для этилового спирта составляет - 0,01%, объемн. Расчет концентрации этилового алкоголя производят по интенсивностям пиков на хроматограмме после калибровки по методу внутреннего стандарта. Внутренним стандартом служит изопропиловый спирт (источник: «Медицинское освидетельствование для установления факта употребления алкоголя и состояния опьянения». Указание Министерства Здравоохранения СССР от 02 сентября 1988 г. №06-14/33-14. - М., Минздрав СССР, 1988 г., стр.57-59, стр.65-71 (копия прилагается), размещено в Интернете).

Недостатки способа-прототипа:

- низкая чувствительность: для этилового спирта - 0,01% объемн.;

- идентификация спиртов производится только по времени выхода на хроматограмме, что может приводить к возможности ошибки при их идентификации (например, при табакокурении или пероральном употреблении спиртосодержащих лекарственных препаратов проверяемыми лицами, наличии следов ацетона или углеводородов в окружающем воздухе и т.п.);

- способ является разрушающим, то есть после проведенного анализа объект не может быть использован для каких-либо иных исследований, например ДНК, одорологических или запаховых исследований, дополнительных исследований на наличие в них наркотических, сильнодействующих и психотропных веществ и др.

Техническая задача, решаемая изобретением, заключается в повышении чувствительности, точности и надежности идентификации и количественного исследования, а также в сохранении используемого объекта для возможных повторных или дополнительных исследований, т.е. его неразрушении.

Эта задача решена способом определения спиртов в биологических тканях и выделениях организма человека, при котором исследуемый образец помещают в герметичную емкость из инертного материала, термостатируют до температуры выше 25°С, но ниже температуры разрушения исследуемого биологического объекта, из термостатированного образца осуществляют отбор пробы парогазовой фазы, которую исследуют хромато-масс-спектрометрически путем разделения на хроматографической колонке, после чего компоненты смеси парогазовой фазы регистрируют в виде ряда хроматографических пиков на хроматограмме и идентифицируют по времени их выхода на хроматограмме и масс-спектру, а расчет концентрации спиртов производят в соответствии с полученной хроматограммой по соответствующим площадям пиков компонентов смеси парогазовой фазы.

Рассмотрим технологию способа.

В качестве образцов биологических тканей и выделений организма человека могут использоваться следующие объекты: водные экстракты выдыхаемого воздуха, кровь, слюна, моча, водные экстракты дезинтегрированных органов и тканей.

Следует отметить, что данные объекты могут изыматься как в присутствии проверяемого лица, например при установлении факта наличия и степени алкогольного опьянения проверяемых лиц, когда отбор проб не представляет каких-либо технических затруднений, так и при отсутствии проверяемого лица - по следам (микроколичествам) биологических объектов в случае обнаружения их на месте происшествия, например при бегстве лица с места дорожно-транспортного происшествия, нахождении лица в беспомощном (бессознательном) состоянии и т.д,, и т.п.

Так как общеизвестно, что все эти вышеуказанные объекты представляют собой гомогенные или гетерогенные системы, в значительных количествах содержащие воду, то в качестве модельных систем в эксперименте использовали растворы этилового спирта в дистиллированной воде с различной объемной концентрацией.

Температура термостатирования исследуемого образца зависит от температуры его разрушения (непригодности его для возможных повторных или дополнительных исследований) и при исследовании образцов разного вида, например мочи и крови, будет различаться и зависеть от свойств самого объекта исследования. Например, при исследовании крови коагуляция белков может начинаться при температуре 43-46°С, а полная коагуляция наступает в результате длительного нагревания крови до температуры 70-80°С.

С учетом указанного выше общеизвестного факта растворы этилового спирта в воде нагревали (термостатировали) до двух значений температуры: 25°С и 40°С соответственно.

Именно такой температурный диапазон позволяет сохранить исследуемый образец крови для использования его при каких-либо иных исследованиях, например ДНК, одорологических или запаховых исследованиях, дополнительных исследованиях на наличие в них наркотических, сильнодействующих и психотропных веществ и др.

Также, зная возможные границы концентраций эндогенного алкоголя, вырабатываемого в организме некоторых людей и алкогольного опьянения организма человека: от десятых-сотых долей промиле до 4-10 промиле, то есть от 0,01% объемн. до 1% объемн. этанола в крови, для проверки работоспособности предлагаемого способа растворы этанола в дистиллированной воде готовили в тех же концентрациях.

На практике экспериментально осуществляли это нижеследующим образом.

В стандартные стеклянные хроматографические виалы объемом 5 мл заливали растворы этанола трех концентраций: 1% объемн. 0,1% объемн. и 0,1% объемн., что соответствует концентрациям этанола в крови: 10, 1 и 0,1 промиле соответственно. Всего - 6 проб (по три - для каждой температуры). В каждом случае объем жидкой фазы составлял - 2 мл, а объем парогазовой фазы над ней - 3 мл соответственно. После этого каждую из виал сразу закрывали резиновой прокладкой-пробкой, на которую надевали специальный алюминиевый колпачок и запечатывали герметически путем его обжатия.

После этого первые три виалы термостатировали (нагревали) путем погружения их в воду с температурой 25°С на время около 15 минут, а вторые три виалы - термостатировали в аналогичных условиях до температуры 40°С.

Пробы из каждой из виал отбирали стандартным хроматографическим шприцем, объемом 10 мкл, который перед отбором проб также термостатировали до температур 25°С и 40°С соответственно, путем нагрева потоком теплого воздуха такой же температуры в сушильном шкафу в течение 15 минут. Это производилось для того, чтобы избежать потерь этанола за счет конденсации его паров из отбираемой пробы на поверхностях шприца (игла, поршень и т.д.) за счет разностей температур. Во всех случаях отбор парогазовой фазы осуществляли из свободного объема виал путем прокалывания резиновой пробки. Объем отбираемой пробы парогазовой фазы во всех случаях составлял - 10 мкл (10-6 л).

После отбора проб их раздельно сразу исследовали методом хромато-масс-спектрометрии.

Выбор метода хромато-масс-спектрометрии обусловлен следующими факторами:

- идентификация вещества в пробе парогазовой фазы одновременно по двум критериям: времени выхода на хроматограмме и его масс-спектру, что позволяет обеспечить 100% надежность идентификации спиртов на хроматограмме, даже при наличии каких-либо загрязняющих или затрудняющих идентификацию посторонних веществ в парогазовой и жидкой фазе исследуемого объекта;

- кроме этого в зависимости от условий и свойств анализируемых веществ метод хромато-масс-спектрометрии обладает высокой чувствительностью: десятые доли нг (не ниже 10-9-10-10 г) вещества в пробе.

Для получения количественных характеристик обнаруживаемого этанола в пробах парогазовой фазы предварительно определяли время выхода его на хроматограмме, характерные особенности его масс-спектра, а также зависимость его концентрации от площади пика на хроматограмме путем непосредственного исследования проб как парогазовой, так и жидкой фазы этилового спирта известной концентрации в полностью тех же условиях хроматографирования.

Исследование методом хромато-масс-спектрометрии проводилось в следующих условиях:

Хроматограф: модель «Trace GC Ultra», фирмы «Thermo Finnigan», США.

Колонка - кварцевая, капиллярная стандартная модель «ВРХ-5»:

- внутренний диаметр: 0,25 мм;

- длина: 30 м.

Неподвижная жидкая фаза:

- толщина пленки: 0,25 мкм.

Температурный режим колонки - программирование:

- начальная температура: 50°С,

- скорость подъема температуры: 10°С/мин,

- конечная температура: 300°С, выдержка - 15 мин.

Испаритель: - «splitless» (1:1); температура: 250°С.

Газ-носитель: - гелий; расход через колонку: 1 мл/мин.

Температура интерфейса: 250°С.

Объем вводимой парогазовой пробы: 10,0 мкл.

Масс-спектрометр: модель «PolarisQ», фирмы «Thermo Finnigan», США.

Тип ионизации: электронный удар (70 эВ).

Детектирование: - «по полному ионному току» (SCAN-mode).

Температура ионизационной камеры: 200°С.

Диапазон масс: 32-450 а.е.м.

Система обработки данных: «Xcalibur», версия 1.4 SR1.

Расшифровка масс-спектров производилась путем сравнения как с калибровочным масс-спектром этанола, так и путем сравнения с библиотечными масс-спектрами.

При этом в обоих случаях на масс-спектрах этанола по полному ионному току (SCAN-mode) выявлены следующие основные ионы с характеристическими отношениями масса к заряду m/z (а.е.м.): 347%, 372%, 412%, 427%, 4314%, 45100%, 465%, 472% соответственно.

Способ проиллюстрирован фиг.1-8 и таблицей 1.

На фиг.1 приведен характерный вид хроматограммы и масс-спектра этанола в пробе; на фиг.2-6 - результаты хроматографирования нескольких проб при различных концентрациях этанола в парогазовой фазе; на фиг.7, 8 приведены хроматограммы, полученные по методике-прототипу и предлагаемому способу соответственно.

В результате хроматографирования проб парогазовой фазы, а также идентификации пиков этанола по времени выхода - около 1,5 минут и масс-спектрам определялись количества этанола в каждой пробе (в расчете на 10 мкл парогазовой фазы) в зависимости от температуры термостатирования и концентрации этилового спирта в водном растворе - фиг.1.

Для каждого из пиков этанола на хроматограммах рассчитывали количество этанола в пробе (нг), при этом для повышения точности и надежности результатов расчет производился не по интенсивностям (высотам) пиков, а по их площадям, как общеизвестно, прямо пропорциональным концентрации вещества в пробе.

Результаты хроматографирования всех проб и расчетов концентрации этанола в пробах парогазовой фазы для них приведены в таблице 1 и на фиг.2-6.

Таблица 1
Т, °С Концентрация этанола в растворе Площадь пика на хроматограмме, отн. ед. Расчетное количество этанола в пробе парогазовой фазы, нг
% объемн. промиле
1 25 94 940 1220545 1008,772
2 25 1 10 64029 52,919
3 25 0,1 1 21023 17,375
4 25 0,01 0,1 15184 12,549
5 40 1 10 175573 145,109
6 40 0,1 1 26413 21,830
7 40 0,01 0,1 15736 13,005

Непосредственно из приведенных в таблице 1 и на фиг.2-6 результатов исследования методом хромато-масс-спектрометрии можно сделать следующие выводы:

- количество этанола в пробах парогазовой фазы прямо пропорционально его концентрации в жидкой фазе (на фиг.2-6 для удобства приведены соответствующие уравнения прямых Y=kX+b, а также значения коэффициентов корреляции R2 (все коэффициенты корреляции близки к единице), полученные непосредственной обработкой данных по методу наименьших квадратов - МНК);

- обнаруживаемые количества этанола в пробах парогазовой фазы позволяют надежно количественно определять его в пробах биологических тканей и выделений организма человека при концентрациях значительно ниже 0,01% объемн. (менее 0,1 промиле);

- при термостатировании пробы от 25°С до 40°С количество этанола в парогазовой фазе возрастает в несколько раз, что повышает чувствительность данного способа, при отсутствии какого-либо разрушения белковых веществ в жидкой фазе проб биологических тканей и выделений организма человека.

Для иллюстрации большей чувствительности предлагаемого способа по сравнению с прототипом на фиг.7-8 приведены хроматограммы, полученные на газовом хроматографе с детектором по теплопроводности (ДТП) по методике-прототипу (фиг.7) и по предлагаемому способу (фиг.8) на оборудовании и при условиях, описанных выше, для растворов этилового спирта одной и той же концентрации - 0,01% объемн.

При сравнении интенсивности пика этилнитрита (производного этанола), обнаруженного в парогазовой пробе (на хроматограмме фиг.7 - пик со временем выхода около 1,546 мин, интенсивность 407 отн. ед.), и интенсивности и площади пика этанола в пробе парогазовой фазы (на хроматограмме фиг.8 - интенсивность около 1060 отн. ед., площадь - 15736 отн. ед.), отобранной при 40°С, которые в обоих случаях прямо пропорциональны концентрациям веществ в парогазовой фазе над растворами этанола одинаковых концентраций, можно сделать вывод о том, что предлагаемый способ определения наличия спиртов в пробах биологических тканей и выделений организма человека превосходит методику-прототип по чувствительности не менее чем в 10-20 раз.

Также необходимо отметить, что при использовании в качестве аналитической системы ГХ-МС иного оборудования, например хроматографа типа Agilent-6890 (производство фирмы «Agilent», США), с более селективной (чем использованная) по отношению к спиртам хроматографической колонкой и хромато-масс-спектрометром с квадрупольным анализатором типа Agilent-5973N, позволяющим в режиме детектирования по выбранным ионам (SIMM-mode) повысить чувствительность обнаружения спиртов еще примерно в 10 раз (в нашем случае использовался масс-детектор с конструкцией типа «ионная ловушка», не дающий практического повышения чувствительности в SIMM-mode по сравнению со SCAN-mode), чувствительность предлагаемого способа может быть выше, по сравнению с протитипом, в 10-100 раз и более.

Таким образом, предлагаемый способ определения спиртов в биологических тканях и выделениях организма человека превосходит известную методику-протитип по чувствительности, позволяет исключить возможную ошибку при идентификации спиртов и является неразрушающим, то есть после проведенного анализа объект может быть использован для каких-либо иных повторных или дополнительных исследований.

Способ определения спиртов в биологических тканях и выделениях организма человека, при котором исследуемый образец помещают в герметичную емкость из инертного материала, термостатируют до температуры выше 25°С, но ниже температуры разрушения исследуемого биологического образца, из термостатированного образца осуществляют отбор пробы парогазовой фазы, которую исследуют хромато-масс-спектрометрически путем разделения на хроматографической колонке, после чего компоненты смеси парогазовой фазы регистрируют в виде ряда хроматографических пиков на хроматограмме и идентифицируют по времени их выхода на хроматограмме и масс-спектру, а расчет концентрации спиртов производят в соответствии с полученной хроматограммой по соответствующим площадям пиков компонентов смеси парогазовой фазы.



 

Похожие патенты:
Изобретение относится к области аналитической химии и может быть использовано для одновременного определения содержания диэтиленгликоля и метанола в природных, поверхностных, подземных, сточных и технологических водах.

Изобретение относится к инструментальной аналитической химии, в частности к определению стабильных изотопов в пищевых продуктах. .
Изобретение относится к области аналитической химии и может быть использовано для одновременного определения содержания ионов переходных металлов Fe(III), Fe(II), Cu, Pb, Zn, Ni, Co, Cd, Mn в природных, поверхностных, сточных, подземных водах и водных вытяжках засоленных почв.

Изобретение относится к способу получения перфторированного производного сложного эфира посредством химической реакции, где указанная реакция представляет собой реакцию фторирования служащего сырьем исходного соединения, реакцию химического превращения фрагмента перфторированного производного сложного эфира с получением другого перфторированного производного сложного эфира или реакцию взаимодействия карбоновой кислоты со спиртом при условии, что по меньшей мере один из реагентов - карбоновая кислота или спирт - представляет собой перфторированное соединение, причем указанное перфторированное производное сложного эфира представляет собой соединение, в состав которого входит фрагмент приведенной ниже формулы 1 и имеет температуру кипения самое большее 400°С, согласно которому время проведения упомянутой химической реакции является достаточным для того, чтобы выход перфторированного производного сложного эфира достиг заранее заданного значения, и при этом указанный выход перфторированного производного сложного эфира определяют посредством газовой хроматографии с использованием неполярной колонки.

Изобретение относится к устройствам аналитического приборостроения и может быть использовано в качестве хроматографического устройства в нефтеперерабатывающей, нефтехимической и других областях для измерения содержания микропримесей.

Изобретение относится к области хроматографического анализа и предназначено для определения ширины, высоты и площади хроматографического пика. .

Изобретение относится к газовому анализу. .

Изобретение относится к газовой и жидкостной хроматографии. .

Изобретение относится к регистраторам для хроматографов. .
Изобретение относится к области прогнозирования процессов старения синтетических полимерных материалов (СПМ) в зависимости от продолжительности их эксплуатации или хранения. Анализ летучих органических соединений (ЛОС), мигрирующих из СПМ, проводят путем активного отбора проб на сорбент, с последующей термической десорбцией и газохроматографическим анализом. Прогнозирование процессов старения материалов и оценку токсичности газовыделения проводят по динамике качественного и количественного состава компонентов газовыделения в исходном состоянии СПМ и в процессе искусственного климатического термовлажностного старения. Анализ динамики суммарного газовыделения (ΣT) из каждого материала проводят для всех веществ, мигрирующих из исследованных СПМ. Оценку изменения токсичности и прогнозирование процессов старения материалов проводят по разработанным показателям суммарного газовыделения (ΣT) и по гигиеническому показателю Р=(ΣTисх/ΣTn)/V, где Tисх и Tn - показатели токсичности газовыделения каждого вещества в исходном и состаренном состояниях соответственно, а ΣТисх и ΣTn - суммарный показатель токсичности газовыделения всех входящих в состав образца СПМ в исходном и состаренном состояниях, V - длительность старения (год, месяц). Изобретение позволяет достигать высокой точности метода детектирования количественного и качественного состава ЛОС в газовыделении в процессе старения материалов и воспроизводимости результатов анализа. 3 табл.

Изобретение относится к высокочувствительному способу определения количества глицирризина, глицирретиновой кислоты и их фармакологически приемлемых солей, присутствующих в плазме крови человека. Высокочувствительный способ определения количества глицирризина, глицирретиновой кислоты и их фармакологически приемлемых солей характеризуется тем, что смесь плазмы крови человека с метанолом или раствором аммиачной воды с определенной концентрацией вводят в твердую фазу, обладающую обращенно-фазовой распределительной функцией и функцией анионного обмена, затем промывают твердую фазу очищающей жидкостью, представляющей собой однокомпонентную жидкость или жидкую смесь, по меньшей мере, двух компонентов, выбранных из группы, включающей воду, щелочь, спирт и ацетонитрил. Далее проводят элюирование из твердой фазы кислым спиртом, выбранным из муравьиной кислоты-метанола или муравьиной кислоты-этанола, после чего проводят стадию количественного определения глицирризина, глицирретиновой кислоты и их фармакологически приемлемых солей методом ЖХ-МС или ЖХ-МС/МС. Высокочувствительный способ позволяет обнаружить и количественно определить глицирризин, глицирретиновую кислоту и их фармакологически приемлемые соли в плазме крови человека. 4 ил., 17 табл., 7 пр.

Данное изобретение имеет отношение к автоматизированному анализу пластовых флюидов, таких как газированная (находящаяся под давлением) сырая нефть. Анализ образца пластового флюида включает в себя разделение образца пластового флюида на поток газообразной фазы и поток жидкой фазы. Также включает определение состава потока газообразной фазы, измерение параметра потока жидкой фазы и определение объема компонентов потока жидкой фазы по меньшей мере частично на основании измеренного параметра потока жидкой фазы. Система для анализа образца пластового флюида включает в себя мерный сосуд (126), выполненный с возможностью принимать образец пластового флюида, фазоразделитель (128), выполненный с возможностью принимать образец пластового флюида из мерного сосуда (126) и разделять образец пластового флюида на поток газообразной фазы и поток жидкой фазы. Также система включает газовый хроматограф (134), выполненный с возможностью принимать поток газообразной фазы из фазоразделителя (128), и расходомер жидкости (138), выполненный с возможностью обнаруживать границу раздела, содержащую по меньшей мере один компонент потока жидкой фазы. Техническим результатом является автоматизация анализа образца пластового флюида, такого как образец пластового флюида, находящегося под давлением, например, газированной нефти. 2 н. и 12 з.п. ф-лы, 3 ил.

Изобретения относятся к области молекулярной биологии и касаются рекомбинантной ДНК pA4, рекомбинантной плазмидной ДНК pQE 30-А4, штамма Esherichia coli M15-A4, рекомбинантного полипептида А4, обладающего способностью селективно связывать человеческий сывороточный альбумин (ЧСА), аффинного сорбента, содержащего такой полипептид, аффинного комбинированного сорбента и способов последовательного удаления ЧСА и IgG из сыворотки крови. Охарактеризованный аффинный комбинированный сорбент получен смешением аффинного сорбента, содержащего указанный рекомбинантный полипептид А4, и аналогичного аффинного сорбента, в котором в качестве лиганда использован известный рекомбинантный IgG-связывающий полипептид. Представленные изобретения могут быть использованы в медицинской практике для освобождения сыворотки крови от двух белков, альбумина (ЧСА) и иммуноглобулина G (IgG), находящихся в ней в высоких концентрациях. Удаление двух мажорных белков из сыворотки крови позволит определить другие белки, присутствующие в сыворотке в более низких концентрациях. 8 н.п. ф-лы, 9 ил., 7 пр., 1 табл.
Наверх