Способ экспериментальной терапии гепатита


 


Владельцы патента RU 2522942:

Федеральное государственное бюджетное учреждение "Научно-исследовательский институт фармакологии" Сибирского отделения Российской академии медицинских наук (ФГБУ "НИИ фармакологии" СО РАМН) (RU)

Изобретение относится к медицине, в частности к фармакологии и гепатологии, и касается терапии гепатитов, изучаемой в эксперименте. Для этого у лабораторных животных (крыс) моделируют вирусный гепатит с помощью D-галактозамина. Лечение гепатита проводят путем однократного перорального введения иммобилизированной гиалуронидазы в дозе 25 ЕД/кг. Введение осуществляют перед моделированием, либо одновременно с началом моделирования. Способ позволяет эффективно снижать тяжесть метаболических и морфологических нарушений печени при моделировании гепатита, идентичного вирусному гепатиту у человека, на фоне снижения ксенобиотической нагрузки на организм. 1 пр., 3 табл.

 

Изобретение относится к области медицины, конкретно к фармакологии и гепато-логии, и касается способа терапии гепатитов.

Для лечения заболеваний печени используется большое количество медикаментозных и немедикаментозных способов [1, 2].

Известен способ экспериментальной терапии хронического гепатита, вызванного введением тетрахлоруглерода с помощью двукратного или курсового введения иммобилизированной гиалуронидазы [3]. Данный способ является наиболее близким к заявляемому и выбран в качестве прототипа.

Недостатком способа прототипа является его недостаточная эффективность, относительно высокая ксенобиотическая нагрузка на организм и ограниченная хроническим течением патологического процесса и его токсической этиологией область применения.

Задачей, решаемой данным изобретением, является повышение эффективности и безопасности способа, а также расширение показаний к его применению.

Поставленная задача достигается техническим решением, заключающимся в однократном пероральном введении лабораторным животным (крысы) иммобилизированной гиалуронидазы в дозе 25 ЕД/кг при моделировании вирусного гепатита с помощью D-галактозамина.

Новым в предлагаемом изобретении является однократное использование иммобилизированной гиалуронидазы в дозе 25 ЕД/кг при моделировании гепатита.

Заболевания печени и желчевыводящих путей являются весьма распространенными во всем мире и занимают одно из ведущих мест в структуре заболеваемости и смертности населения нашей страны. Опасность для здоровья и социальная значимость данной патологии печени определяют необходимость постоянной разработки новых эффективных патогенетически обоснованных методов фармакологической терапии и профилактики данных заболеваний [1, 2]. При этом в последнее время активно ведутся исследования, направленные на разработку средств для лечения различных заболеваний, в том числе заболеваний печени, путем фармакологической стимуляции эндогенных стволовых клеток (СК) организма [4, 5]. На модели хронического гепатита, вызванного курсовым введением тетрахлоруглерода, показано наличие гепатопротекторных свойств у иммобилизированной гиалуронидазы [3], определяемых ее стимулирующим действием на стволовые клетки печени и ткани-депо. При этом оптимальный технический результат достигается лишь при курсовом введении данного средства в дозах 25-50 ЕД/кг, безусловно, сопровождающемся значительной ксенобиотической нагрузкой на организм [6], и исключительно после моделирования патологии печени. Кроме того, до настоящего времени не существует данных о наличии гепатопротекторных эффектов у иммобилизированной гиалуронидазы на других моделях патологии печени, в том числе заболеваниях вирусной этиологии.

Факт однократного применения иммобилизированной гиалуронидазы перед моделированием или одновременно с началом моделирования вирусного гепатита с помощью D-галактозамина для достижения выраженных терапевтических эффектов для специалиста является неочевидным. Эксперимент показал непредсказуемые результаты.

Заявляемые существенные признаки проявили в совокупности новые свойства, не вытекающие явным образом из уровня техники в данной области. Новые признаки позволяют осуществлять эффективную терапию острого экспериментального поражения печени, моделирующего заболевание вирусной этиологии, и предлагаемое изобретение может быть использовано в медицине. Идентичной совокупности признаков не обнаружено при исследовании уровня техники по патентной и научно-медицинской литературе.

Исходя из вышеизложенного, следует считать заявляемое техническое решение соответствующим критериям: «Новизна», «Изобретательский уровень», «Промышленная применимость».

Способ осуществляют следующим образом:

Лабораторному животному (крысе) перед моделированием либо одновременно с началом моделирования вирусного гепатита с помощью D-галактозамина однократно перорально вводят иммобилизированную гиалуронидазу в дозе 25 ЕД/кг.

Предлагаемый способ был изучен в экспериментах на беспородных крысах в количестве 46 штук, массой 250-300 г. Животные получены из питомника отдела экспериментального биомедицинского моделирования ФГБУ «НИИ фармакологии» СО РАМН (сертификат имеется). Для моделирования острого гепатита использовали D-галактозамин в водном растворе (Галактозамин гидрохлорид, Applichem, кат.№А6859). который вызывает острый гепатит, идентичный по морфологическим и биохимическим изменениям в печени вирусному гепатиту человека. Для этого крысам вводили D-галактозамин в дозе 300 мг/кг внутрибрюшинно в течение 3 дней [7].

У крыс: рассчитывали весовой коэффициент печени (отношение массы органа к массе животного), показатель, определяемый для интегральной оценки наличия гепатотропного влияния ксенобиотиков; проводили биохимические исследования содержания в сыворотки крови аспартат-, аланин-аминотрасфераз (АсАТ, АлАТ), биллирубина, активность щелочной фосфатазы (ЩФ); и морфологическое исследование печени [7]. Активность ферментов сыворотки крови определяли по общепринятым методам, используя полуавтоматический биохимический анализатор фирмы Cormay и стандартные наборы фирм Cormay и «Витал Диагностик» (г.Санкт-Петербург). Кровь для исследования получали через катетер, имплантированный в бедренную артерию с последующей перевязкой сосудов. На гистологических препаратах печени, окрашенных гематоксилином и эозином, подсчитывали количество гепатоцитов в состоянии некроза и фигур митозов на 1000 печеночных клеток. С помощью окулярной сетки Г.Г. Автандилова определяли относительную площадь инфильтрации печеночной паренхимы макрофагами и лейкоцитами и относительную площадь коллагеновых волокон. Для выявления РНК препараты печени окрашивали галлоцианином по Эйнарсону. Гликоген выявляли с помощью Шифф-йодной реакции по J. Mc.Manus. Количественное определение содержания в клетке указанных веществ проводили на сканирующем цитофотометре UNIVAR ("REICHERT-JUNG", Австрия) при длине волны 500 нм, фильтре №42, зондах диаметром 2 (РНК) и 3 (гликоген) мкм. У каждого животного измеряли содержание РНК и гликогена в 50 гепатоцитах. Для выявления липидов готовили криостатные срезы печени толщиной 10 мкм. Срезы фиксировали 4% кальций-формолом и окрашивали Суданом черным В. Степень жировой дистрофии оценивали в баллах [7]. Обработку результатов проводили методом вариационной статистики с использованием t-критерия Стьюдента и непараметрического U-критерия Вилкоксона-Манна-Уитни. Использовалась программа Statistica 6.0.

Пример 1.

В первый день эксперимента, обозначенный как «день 1», начинали вводить D-галактозамин, общий период наблюдения составлял 4 сут. Иммобилизированную гиалуронидазу (имГД) (ООО «Саентифик фьючер менеджмент», г.Новосибирск), представляющую собой высокоочищенную тестикулярную бычью гиалуронат-эндо-P-N-ацетилгексозаминидазу, вводили перорально по трем схемам. Первая схема предполагала введение лекарственного средства по способу прототипу: в виде курсового двукратного введения на 1 и 2 дни после введения D-галактозамина в дозе 35 ЕД/кг (доза и режим введения были определены в предварительных экспериментах как максимально эффективные). Вторая схема предполагала однократное введение иммобилизированной гиалуронидазы после первого введения D-галактозамина в дозе 25 ЕД/кг. Третья схема предполагала введение имГД на нулевой день перед началом моделирования острого гепатита. Контрольным животным по той же схеме в эквивалентном объеме вводили дистиллированную воду.

Группы животных:

1) Интактные животные. Группа 1.

2) Контрольные животные, введение D-галактозамина. Группа 2.

3) Группа с курсовым двукратным введением лекарственного средства на 1 и 2 дни после введения D-галактозамина. Группа 3.

4) Группа с однократным введением лекарственного средства в 1 день введения D-галактозамина. Группа 4.

5) Группа с предварительным введением лекарственного средства на 0 день перед введеним D-галактозамина. Группа 5.

При морфологическом исследовании печени крыс с острым поражением печени D-галактозамином, получавших дистиллированную воду, было обнаружено нарушение балочного строения. Преобладала гидропическая (белковая) дистрофия гепатоцитов. Встречалось большое количество гепатоцитов в состоянии апоптоза различной степени выраженности от деградации ДНК до образования «классических» телец Каунсильмена, которые у человека считаются непрямыми маркерами вирусного гепатита [Серов В.В., Лапиш К., 1989]. Портальная и внутридольковая строма была диффузно инфильтрирована лимфоцитами и макрофагами с примесью нейтрофильных лейкоцитов.

Со стороны морфометрических параметров в группе 3 не выявлялось значимых отличий с группой острого гепатита, вызванного введением D-галактозамина (табл.1). В то же время в группах 4 и 5 отмечалось снижение количества апоптозных гепатоцитов, что сопровождалось снижением степени жировой инфильтрации печени в виде статистически не значимой тенденции.

Вместе с тем у крыс через 3 дня после начала введения D-галактозамином отмечалось повышение коэффициента массы печени. В сыворотке крови статистически значимо возрастала активность АлТ и АсТ, содержание билирубина, а также имелась тенденция к увеличению активности щелочной фосфатазы (табл.2). Необходимо отметить также у крыс этой группы увеличение времени тиопенталового сна, вероятно, в связи с ингибированием ферментных систем гепатоцитов, ответственных за антитоксическую функцию печени (табл.3).

При введении иммобилизированной гиалуронидазы на фоне острого D-галактозаминового гепатита весовой коэффициент печени в третьей группе животных превосходил соответствующий показатель первой группы (52,1±2,4 против 44,9±1,9), что было близко к соответствующему значению группы животных с гепатитом без фармакологической коррекции (57,9±1,8). В группах 4 и 5 изученный параметр не отличался от соответствующего значения группы «интактные животные» (группа 1). Наблюдалась также нормализация активности АлТ в группах 3, 4 и 5, АсТ - в группах 4 и 5. Время тиопенталового сна уменьшалось по сравнению с контролем (гепатит) в группе 4 и 5. В группах 3 данный показатель хоть и снижался по сравнению с контролем, но не достигал статистической значимости (табл.3).

Таким образом, иммобилизированная гиалуронидаза в условиях интоксикации D-галактозамином обладала максимально выраженным гепатопротекторным действием при ее однократном введении в самой низкой используемой дозе (25 ЕД/кг) после моделирования патологического процесса либо одновременно с началом моделирования гепатита.

Предлагаемый способ позволяет эффективно снижать тяжесть метаболических и морфологических нарушений печени при ее остром поражении, моделирующем вирусный гепатит, на фоне снижения ксенобиотической нагрузки на организм.

Цитируемая литература

1. Венгеровский А.И. Эффективность и механизм действия гепатопротекторов при экспериментальном токсическом повреждении печени: Дисс... доктора мед. наук. - Томск, 1991. - С.4-57.

2. Машковский М.Д. Лекарственные средства: в 2-х томах. Т. 1. - М.: Медицина, 1996. - 624 с.

3. Патент (RU) на изобретение №2444569 «Гепатопротекторное средство» (опубл. 10.03.2012, Бюл. №7). Авторы: Артамонов А.В., Бекарев А.А., Дыгай A.M., Жданов В.В., Зюзьков Г.Н., Удут В.В.

4. Гольдберг Е.Д., Дыгай A.M., Зюзьков Г.Н. Гипоксия и система крови. - Томск: Изд-во Том. ун-та, 2006. - 142 с.

5. Дыгай A.M., Зюзьков Г.Н. Клеточная терапия: новые подходы // Наука в России - Москва: Изд-во «Наука», 2009. - Том. 169. - №1. С.4-8.

6. Зборовский А.Б., Тюренков И.Н. Осложнения фармакотерапии. - М.: Медицина, 2003.-543 с.

7. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ / Под общей редакцией член-корр. РАМН, проф. Р.У. Хабриева - 2-изд., перераб. и доп.- М., ОАО «Издательство «Медицина», 2005. - 832 с.

Таблица 1
Влияние иммобилизированной гиалуронидазы на морфометрические показатели печени крыс с острым поражением печени D-галактозамином, (X±m)
Группа животных Степень жировой инфильтрации, баллы Количество апоптозных гепа-тоцитов, % Относительная площадь инфильтрации, % Митотический индекс, % РНК усл. ед. опт.плотн. Гликоген усл. ед. опт плотн
2 3,00±0,45 10,14±0,8* 9,00±0,71 0,20±0,04 0,16±0,01 0,21±0,01
3 2,44±0,17 10,06±0,75* 8,60±1,08 0,24±0,07 0,16±0,01 0,22±0,01
4 2,16±0,12 2,04±0,10# 8,60±0,51 0,38±0,08 0,16±0,01 0,22±0,01
5 2,08±0,10 3,76±0,10# 8,40±0,75 0,28±0,04 0,16±0,01 0,22±0,01

* - достоверность различий при сравнении с группой «интактные животные» (группа 1) при р<0,05.

# - достоверность различий при сравнении с группой 2 при р<0,05.

Таблица 2
Влияние иммобилизированной гиалуронидазы на биохимические показатели сыворотки крови крыс с острым поражением печени D-галактозамином, (X±m)
Груп Весовой АсТ АлТ Коэффициент Щелочная Общий
па коэффициент (мккат/л) (мккат/л) Де Ритиса фосфа- билирубин
живот печени таза (мкмоль/л)
ных (Е/Л)
1 44,9±1,9 0,51±0,02 0,52±0,02 0,99±0,04 136,8±16,0 4,50±1,06
2 57,9±1,8* 0,61±0,03* 0,72±0,04* 0,88±0,09 170,5±23,7 9,86±1,34*
3 52,1±2,4* 0,54±0,03 0,60±0,03 * 0,90±0,04 146,5±20,2 7,62±1,32
4 48,3±2,7 0,48±0,02# 0,51±0,04# 0,95±0,08 162,4±11,4 4,50±0,70
5 49,5±3,1 0,53±0,03# 0,57±0,03# 0,99±0,06 165,6±12,5 5,97±0,84

* - достоверность различий при сравнении с группой «интактные животные» (группа 1) при р<0,05.

# - достоверность различий при сравнении с группой 2 при р≤0,05.

Таблица 3
Влияние иммобилизированной гиалуронидазы на время тиопенталового сна крыс с острым поражением печени D-галактозамином
(мин, Х±ш)
Группа 1 Группа 2 Группа 3 Группа 4 Группа 5
44,50±1,34 57,90±3,68* 51,70±2,50* 49,00±1,46*# 51,60±1,93*#

* - достоверность различий при сравнении с группой «интактные животные» (группа 1) при р≤0,05.

# - достоверность различий при сравнении с группой 2 при р≤0,05.

Способ терапии острого гепатита, индуцированного в эксперименте введением D-галактозамина, путем однократного перорального введения животному иммобилизированной гиалуронидазы в дозе 25 ЕД/кг перед моделированием, либо одновременно с началом моделирования.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к области медицинской и ветеринарной травматологии, хирургии и касается лечения различных травм кости, в частности переломов и трещин. Для этого фиксируют фрагменты поврежденной кости гипсовой повязкой или бинтом из полимерного материала.

Изобретение относится к биомедицине, в частности к исследованию выносливости и поведения подопытных животных, и может быть использовано при разработке и исследовании новых медицинских средств.

Изобретение относится к экспериментальной медицине. Устройство содержит стартовый и рабочие отсеки, оснащенные кормушками для подачи жидкой пищи.
Изобретение относится к экспериментальной фармакологии и хирургии и может быть использовано для коррекции ишемии скелетной мышцы. Для этого крысам с ишемией мышц голени, моделируемой на вторые сутки эксперимента, внутрижелудочно вводят ресвератрол в суточной дозе 2,0 мг/кг, каждые 46 часов первые 7 суток эксперимента.

Изобретение относится к области медицины и биологии, а именно к проктологии, и может быть использовано для создания модели энкопреза. За неделю до операции по созданию энкопреза животным выпаивают в сутки не менее 40 мл раствора папаверина - 1 мл 2%-ного раствора папаверина в 100 мл физиологического раствора.
Изобретение относится к области медицины и ветеринарии и предназначено для повышения устойчивости организма к острой гипоксии в эксперименте. В первый, третий и пятый день тренировки лабораторному животному вводят амтизол в дозе 25 мг/кг.
Изобретение относится к экспериментальной медицине и может быть использовано как способ моделирования первичного склерозирующего холангита. Для этого крысе вводят пикрилсульфоновую кислоту в просвет проксимального отдела слепой кишки в дозе 0,07-0,15 мг/кг и в сигмовидную кишку в дозе 0,02-0,05 мг/кг.
Изобретение относится к экспериментальной медицине и касается разработки способов лечения невынашивания беременности и других заболеваний матки, связанных с несостоятельностью эндометрия.
Изобретение относится к судебной медицине и может быть использовано для определения давности наступления смерти по морфологическим изменениям гнилостно измененных спаек.
Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной фармакологии, и может быть использовано для коррекции ишемии в условиях редуцированного кровообращения.

Изобретение относится к соединению формулы II, способам получения соединения формулы I и формулы II, фармацевтической композиции и вариантам применения для лечения воспаления и/или поражения печени.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к способу получения средства, обладающего гепатопротекторным действием. Способ получения средства, обладающего гепатопротекторным действием, путем экстракции измельченных столбиков с рыльцами кукурузы спиртом этиловым методом многоступенчатого противоточного экстрагирования с законченным циклом в батарее из 5 диффузоров, дополнительно экстрагируют отработанное сырье в 4 и 5 диффузорах используемым экстрагентом, после чего сливают и пропускают через 5 диффузор, выдерживают, далее отжимают отработанное сырье, затем объединенное извлечение отстаивают, очищенное извлечение сгущают под вакуумом, высушивают в вакуум-сушильном шкафу до получения сухого экстракта и измельчают, при определенных условиях.
Изобретение относится к области ветеринарии и предназначено для лечения острого гепатоза у кошек. Способ включает введение животным в положении на спине дополнительно к общему курсу лечения в течение 5-7 дней 0,5% раствора новокаина в зависимости от возраста в дозе 1,0-2,0 мл на кг живой массы тела с добавлением 1,0 г цефазолина в область круглой связки печени, введение раствора новокаина с цефазолином.
Изобретение относится к медицине, а именно к хирургии и реаниматологии, и может быть использовано для профилактики внутрипеченочной портальной гипертензии (ВПГ) в остаточной ткани печени у больных после резекции печени (РП) различного объема.
Изобретение относится к медицине, а именно к физиотерапии и гастроэнтерологии. Способ включает лечебное питание, внутренний прием минеральной воды по 100-150 мл, 3 раза в день и воздействие физическим фактором.
Изобретение относится к медицине, а именно к гастроэнтерологии, и может быть использовано для лечения больных желчекаменной болезнью первой стадии. Для этого вводят препарат Мукофальк по 1 пакетику 3 раза в день, длительность приема - 22-24 недели.
Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к композиции, обладающей противовирусной активностью (варианты). Композиция, обладающая противовирусной активностью, включающая глицирризинат аммония, β-циклодекстрин, эмульгатор, консервант, лизоцим, полимерный носитель, регулятор pH, воду деминерализованную, при определенном соотношении компонентов.
Изобретение относится к фармацевтической промышленности, в частности к композиции, обладающей гепатопротекторными и иммуностимулирующими свойствами. Композиция, обладающая гепатопротекторными и иммуностимулирующими свойствами, содержит окисленный декстран с молекулярной массой 40-70 кДа, компонент из растительного сырья, выбранный из группы: сухой экстракт плодов расторопши пятнистой, сухой экстракт из травы солянки холмовой, сухой экстракт из травы эхинацеи пурпурной, а также микрокристаллическую целлюлозу в качестве физиологически приемлемого наполнителя, взятые в определенном количестве.
Изобретение относится к области медицины и клеточных технологий. Предложен клеточный продукт, содержащий популяцию протоковых стволовых клеток подчелюстной слюнной железы, характеризующихся фенотипом CD49f+/EpCAM+ и после обработки вальпроевой кислотой в концентрации 0,1-40 мМ и культивирования в коллагеновом геле меняющих профиль экспрессии на 1AAT+/PEPCK+/G6P+/TDO+/CYP Р4503А13+, а также приобретающих способность синтезировать мочевину и альбумин.
Изобретение относится к медицине, а именно к эндохирургии и анестезиологии, и может быть использовано при эндохирургическом лечении больных с синдромом желчной гипертензии, осложненным острым билиарным панкреатитом.

Изобретение относится к ветеринарии и может быть использовано в комплексной терапии эндометритов у собак. Для этого на фоне лимфотропных инъекций энзапроста F (простагландина F2α) и антибиотика в половинных суточных дозах в подкожную клетчатку в проекции паховых колец проводят курс лимфостимулирующих инъекций, заключающихся во введении в толщу межостистой связки позвоночника на уровне L2-L6 1 мл на 5 кг веса животного смеси, состоящей из 32 ЕД лидазы, 500 тыс.
Наверх