Антибиотические соединения



Антибиотические соединения
Антибиотические соединения
Антибиотические соединения
Антибиотические соединения
Антибиотические соединения
Антибиотические соединения

 


Владельцы патента RU 2536587:

ПИРАМАЛ ЭНТЕРПРАЙЗИС ЛИМИТЕД (IN)

Изобретение относится к новым соединениям формулы I и их фармацевтически приемлемым солям, их способам получения ферментацией микроорганизма, принадлежащего видам Streptomyces (PM0626271/MTCC 5447), и к фармацевтическим композициям, содержащим одно или несколько соединений формулы I в качестве активного ингредиента. Соединения формулы I применяют для лечения и предотвращения заболеваний, вызванных бактериальными инфекциями. 6 н. и 18 з.п. ф-лы, 3 ил., 6 табл., 9 пр.

 

Область изобретения

Изобретение относится к новым соединениям формулы I, характеризующимся противобактериальной активностью. Соединения могут быть получены ферментацией микроорганизма, принадлежащего видам Streptomyces (PM0626271/MTCC 5447). Данное изобретение также включает все стереоизомерные формы и все таутомерные формы соединений формулы I, а также фармацевтически приемлемые соли и их производные. Данное изобретение, кроме того, относится к способам получения новых противобактериальных соединений и к фармацевтическим композициям, содержащим одно или несколько из новых соединений в качестве активного ингредиента, и к их применению в лекарственных препаратах для лечения и предотвращения заболеваний, вызванных бактериальными инфекциями.

Предпосылки изобретения

Резкий рост распространения устойчивости к антибиотикам среди бактерий в настоящее время представляет собой серьезную угрозу для здоровья общества во всем мире. Особое беспокойство вызывают инфекции, вызванные устойчивой к метициллину Staphylococcus aureus (MRSA), устойчивой к пенициллину Streptococcus pneumoniae (PRSP), устойчивой к ванкомицину Enterococcus (VRE) (Clin. Microbiol. Infect., 2005, 11, Supplement 3: 22-28) и устойчивой к нескольким лекарственным средствам (MDR) Mycobacterium tuberculosis (Eur. Respir. J., 2002, Supplement 36, 66S-77S).

Тиострептон, антибиотик, выделенный из Streptomyces azureus, как сообщалось, является эффективным противоинфекционным лекарственным препаратом, характеризующимся общим антибиотическим спектром, подобным пенициллину, и применяется против грамположительных кокковых инфекций (патент США 2982689).

Сиомицин, содержащий серу пептидный антибиотик, выделенный из Streptomyces sioyaensis, как сообщалось, является активным против грамположительных бактерий и микобактерий с незначительной или с отсутствием активности против грамотрицательных бактерий (The Journal Of Antibiotics, 1969, 364-368).

Существует потребность в получении новых соединений, которые могут быть использованы как лекарственные средства для лечения пациентов, которые подвергаются риску инфекции или инфицированы бактериями, особенно устойчивыми к нескольким лекарственным средствам бактериями, такими как MRSA, VRE и Mycobacterium tuberculosis.

Краткое описание изобретения

Данное изобретение относится к новым соединениям формулы I.

Данное изобретение также относится к новым очищенным соединениям формулы I, выделенным из ферментационного бульона микроорганизма, принадлежащего видам Streptomyces (PM0626271/MTCC 5447).

Данное изобретение также относится ко всем стереоизомерным формам и всем таутомерным формам соединений формулы I и их фармацевтически приемлемым солям и производным.

Соединения формулы I и их изомеры, фармацевтически приемлемые соли и производные обладают противобактериальной активностью и являются применимыми для лечения или предотвращения заболеваний, вызванных бактерией, особенно устойчивой к нескольким лекарственным средствам бактерией, такой как MRSA, VRE и Mycobacterium tuberculosis.

Данное изобретение, кроме того, относится к фармацевтическим композициям, включающим одно или несколько из новых соединений формулы I, их изомера, фармацевтически приемлемой соли или производного в качестве активного ингредиента, для лечения заболеваний, вызванных бактерией, особенно устойчивой к нескольким лекарственным средствам бактерией, такой как MRSA, VRE и Mycobacterium tuberculosis.

Данное изобретение, кроме того, относится к способам получения соединений формулы I и/или их изомерам из микроорганизма, принадлежащего видам Streptomyces (PM0626271/MTCC 5447).

Краткое описание графических материалов

Фигура 1 иллюстрирует 1H ЯМР спектр (500 МГц; Instrument Bruker) соединения формулы I(a) в CDCl3:CD3OD (4:1).

Фигура 2 иллюстрирует 1H ЯМР спектр (75 МГц; Instrument Bruker) соединения формулы I(a) в CDCl3:CD3OD (4:1).

Фигура 3 иллюстрирует 1H ЯМР спектр (500 МГц; Instrument Bruker) соединения формулы I(b) в CDCl3:CD3OD (4:1).

Подробное описание изобретения

Перед описанием данного изобретения в деталях следует понимать, что данное изобретение не ограничивается конкретными вариантами осуществления. Также следует понимать, что терминология, используемая в данном документе, служит исключительно целям описания конкретных вариантов осуществления и не предназначена ограничивать.

Как используется в Описании и Формуле изобретения, формы единственного числа включают ссылки на множественное число, если в контексте не указано иное.

Если не указано иное, все технические и научные выражения, использованные в данном документе, характеризуются тем же значением, как обычно понимается специалистом в данной области, к которой принадлежит данное изобретение.

Как используется в данном документе, выражение “производное” относится к соединению, которое получено из подобного соединения, или к соединению, которое, как можно представить, происходит из другого соединения, если один атом замещается другим атомом или группой атомов.

Как используется в данном документе, выражение “стереоизомер” относится ко всем изомерам отдельных соединений, которые отличаются только ориентацией их атомов в пространстве. Выражение стереоизомер включает изомеры в зеркальном отображении (энантиомеры), смеси изомеров в зеркальном отображении (рацематы, рацемические смеси), геометрические (цис/транс или син/анти или E/Z) изомеры и изомеры соединений с более чем одним хиральным центром, которые не являются зеркальными отображениями друг друга (диастереоизомеры). Соединения данного изобретения могут иметь асимметрические центры и встречаются как рацематы, рацемические смеси, отдельные диастереоизомеры или энантиомеры или могут существовать как геометрические изомеры со всеми изомерными формами указанных соединений, являющихся включенными в данное изобретение.

Как используется в данном документе, выражение “таутомер” относится к совместному существованию двух (или более) соединений, которые отличаются друг от друга только положением одного (или более) подвижных атомов и распределением электронов, например кето-энольные и имин-энаминовые таутомеры.

Как используется в данном документе, выражение “ферментационный бульон” относится к суспензии микробной культуры в питательной среде, содержащей соединения, полученные с помощью микробов во время их роста, а также содержащей непотребленные питательные вещества.

Как используется в данном документе, выражение “мутант” относится к организму или клетке, несущим мутацию, которая является фенотипом, альтернативным дикому типу.

Как используется в данном документе, выражение “вариант” относится к отдельному организму, который узнаваемо отличается от условного стандартного типа среди этих видов.

Новые соединения формулы I структурно представлены следующей формулой:

Новые соединения формулы I(a) имеют молекулярную формулу C71H83N19O18S5 (молекулярный вес 1649,5). Новое соединение формулы I(b) имеет молекулярную формулу C71H85N19O18S5 (молекулярный вес 1651,5). Новые соединения формулы I(a) и формулы I(b) могут быть охарактеризованы одним или несколькими из их физико-химических и спектральных свойств, таких как высокоэффективная жидкостная хроматография (HPLC), масс-спектр (MS), инфракрасное излучение (IR) и спектроскопические данные ядерного магнитного резонанса (ЯМР), как обсуждается в данном документе ниже.

Была выяснена структура новых соединений формулы I(a) и формулы I(b), и ее полная характеристика выполнена с помощью HPLC, MS с высоким разрешением (HRMS), IR и спектроскопических данных ЯМР. Соединения формулы I(a) и формулы I(b) являются новыми антибиотиками, активными против бактерии, особенно устойчивой к нескольким лекарственным средствам бактерии, такой как MRSA, VRE и Mycobacterium tuberculosis. Соединения формулы I(a) и формулы I(b) характеризуются не представленными ранее структурами.

Микроорганизмом, который может быть использован для получения соединений формулы I(a) и формулы I(b), является штамм видов Streptomyces (PM0626271/MTCC 5447), далее в данном документе называется культурой № PM0626271, выделенной из образца почвы, собранного из Оазиса Ширмахера в Антарктической области.

Данное изобретение, кроме того, представляет способы получения соединений формулы I(a) и формулы I(b) из культуры №PM0626271, включающие стадии: культивирования культуры №PM0626271 в аэробных условиях с погружением в питательной среде, содержащей один или несколько источников углерода и один или несколько источников азота, и необязательно питательные неорганические соли и/или следовые элементы; выделения соединений формулы I(a) и формулы I(b) из ферментационного бульона; и очистки соединений формулы I(a) и формулы I(b) с использованием процедур очистки, обычно используемых в соответствующей области.

Предварительная идентификация культуры №PM0626271, которая продуцирует соединения формулы I(a) и формулы I(b), выполнялась путем исследования морфологии ее колонии, обследованиями влажных препаратов и реакцией окрашивания по Граму. Микроскопические исследования штамма выделенной культуры №PM0626271 выполнялись на агаре для выделения актиномицетов (AS-AIA; подробности приведены в разделе Примеры), содержащем 1,5% агара, и наблюдения делались в дни 1, 2 и 3 инкубации при 25°C.

Рост на AS-AIA, содержащей 1,5% агара, проявился в виде колоний диаметром 1 мм с белой споруляцией, скудным желтоватым субстратным мицелием, слегка приподнятым видом, без диффундирующего пигмента и темно-коричневым цветом обратной стороны. При фазовоконтрастной световой микроскопии при 400-кратном увеличении наблюдаются волнистые сплетения тонкого мицелия с верхушками споруляции. Они являются грамположительными. Свободные споры являются неподвижными. По наблюдаемой морфологии этот организм классифицируется как член семейства Streptomycetes.

Культура №PM0626271 депонировалась в Коллекции типовых микробиологических культур (MTCC), Institute of Microbial Technology, Sector 39-A, Chandigarh -160 036, India, признанной Всемирной организацией интеллектуальной собственности (WIPO) как Международный депозитарный полномочный орган (IDA), и получила инвентарный номер MTCC 5447.

В дополнение к отдельному микроорганизму, описанному в данном документе, следует понимать, что мутанты, такие как полученные с помощью применения химических или физических мутагенов, включающих рентгеновские лучи, ультрафиолетовое излучение и т.д., и организмы, чья организация генома была модифицирована методами молекулярной биологии, также могут быть культивированы для получения соединений формулы I(a) и формулы I(b).

Скрининг по применимым мутантам и вариантам, которые могут продуцировать соединения по данному изобретению, может быть подтвержден с помощью HPLC и/или определением биологической активности активных соединений, накопленных в ферментационном бульоне, например, путем тестирования соединений на противобактериальную активность.

Среда и/или питательная среда, используемая для выделения и культивирования культуры №PM0626271, которая продуцирует соединения формулы I(a) и формулы I(b), предпочтительно содержит источники углерода, азота и питательных неорганических солей. Источниками углерода являются, например, одно или несколько из крахмала, глюкозы, сахарозы, декстрина, фруктозы, мелассы, глицерина, лактозы или галактозы. Предпочтительными источниками углерода являются растворимые крахмал и глюкоза. Источниками азота являются, например, одно или несколько из соевой муки, арахисовой муки, дрожжевого экстракта, говяжьего экстракта, пептона, экстракта солода, жидкого кукурузного экстракта, желатина или казаминовых кислот. Предпочтительными источниками азота являются пептон и дрожжевой экстракт. Питательными неорганическими солями являются, например, одно или несколько из натрия хлорида, калия хлорида, кальция хлорида, магния хлорида, железа хлорида, стронция хлорида, кобальта хлорида, калия бромида, натрия фторида, натрия кислого фосфата, калия кислого фосфата, дикалия кислого фосфата, магния фосфата, кальция карбоната, натрия бикарбоната, натрия силиката, аммония нитрата, калия нитрата, двухвалентного железа сульфата, натрия сульфата, аммония сульфата, магния сульфата, железа цитрата, борной кислоты или раствора солей в следовых концентрациях. Предпочтительными являются кальция карбонат, натрия хлорид и магния хлорид.

Поддержание культуры №PM0626271 может быть выполнено при температуре, варьирующей от 22°C до 36°C, и pH от около 7,5 до 8,0. Обычно культура №PM0626271 поддерживается при 25°C-27°C и pH от около 7,4 до 7,8. Хорошо растущие культуры могут храниться в холодильнике при 4°C-8°C.

Культивирование высеянной культуры №PM0626271 может быть выполнено при температуре, варьирующей от 25°C до 36°C, и pH от около 7,5 до 8,0 в течение от 66 часов до 75 часов при от 200 rpm (оборотов в минуту) до 280 rpm. Обычно высеянная культура №PM0626271 культивируется при 29°C-31°C и pH от около 7,4 до 7,8 в течение 72 часов при 230 rpm - 250 rpm.

Получение соединений формулы I(a) и формулы I(b) может быть выполнено культивированием культуры №PM0626271 ферментацией при температуре, варьирующей от 26°C до 36°C, и pH около 6,5-8,5 в течение от 24 часов до 96 часов при 60 rpm - 140 rpm и аэрации от 100 литров в минуту до 200 литров в минуту. Обычно культура №PM0626271 культивируется при 30°C-32°C и pH 7,4-7,8 в течение от 40 часов до 96 часов при 90 rpm и аэрации 110 литров в минуту.

Получение соединений формулы I(a) и формулы I(b) может быть выполнено культивированием культуры №PM0626271 в применимом питательном бульоне при условиях, описанных в данном документе, предпочтительно в аэробных условиях с погружением, например, во встряхиваемых колбах, а также в лабораторных ферментерах. Развитие ферментации и получение соединений формулы I(a) и формулы I(b) могут быть выявлены высокоэффективной жидкостной хроматографией (HPLC) и измерением биоактивности ферментационного бульона по стафилококковым и/или энтерококковым видам известным методом анализа микробной диффузии в агар. Предпочтительной культурой является Staphylococcus aureus E710, которая является штаммом, устойчивым к метициллину, β-лактамному антибиотику, что подтверждается в литературе, и Enterococcus faecium R2 (VRE), которая устойчива к ванкомицину. В полученном в результате ферментационном бульоне соединения формулы I(a) и формулы I(b) присутствуют в культуральном фильтрате, а также в клеточной массе, и могут быть выделенными с использованием известных методик разделения, таких как экстракция растворителями и колоночная хроматография. Таким образом, соединения формулы I(a) и формулы I(b) могут быть извлечены из культурального фильтрата экстракцией при pH от около 5 до 9 несмешивающимся с водой растворителем, таким как петролейный эфир, дихлорметан, хлороформ, этилацетат, диэтиловый эфир или бутанол, или путем хроматографии с гидрофобным взаимодействием с использованием полимерных смол, таких как "Diaion HP-20®" (Mitsubishi Chemical Industries Limited, Япония), "Amberlite XAD®" (Rohm и Haas Industries U.S.A.), активированного угля, или путем ионо-обменной хроматографии при pH 5-9. Активный материал может быть извлечен из клеточной массы экстракцией смешивающимся с водой растворителем, таким как метанол, ацетон, ацетонитрил, н-пропанол или изопропанол, или несмешивающимся с водой растворителем, таким как петролейный эфир, дихлорметан, хлороформ, этилацетат или бутанол. Еще одним вариантом является экстрагирование цельного бульона растворителем, выбранным из петролейного эфира, дихлорметана, хлороформа, этилацетата, метанола, ацетона, ацетонитрила, н-пропанола, изопропанола или бутанола. Обычно активный материал экстрагируется этилацетатом из цельного бульона. Концентрирование и лиофилизация экстрактов дает активный неочищенный материал.

Соединения формулы I(a) и формулы I(b) по данному изобретению могут быть извлечены из неочищенного материала фракционированием с использованием какой-либо из следующих методик: нормально-фазовая хроматография (с использованием оксида алюминия или силикагеля в качестве стационарной фазы; элюентов, таких как петролейный эфир, этилацетат, дихлорметан, ацетон, хлороформ, метанол или их комбинации); обращенно-фазовая хроматография (с использованием обращенно-фазового силикагеля, такого как диметилоктадецилсилильный силикагель (RP-18) или диметилоктилсилильный силикагель (RP-8) в качестве стационарной фазы; и элюентов, таких как вода, буферы [например, фосфатный, ацетатный, цитратный (pH 2-8)], и органических растворителей (например, метанола, ацетонитрила, ацетона, тетрагидрофурана или комбинаций этих растворителей); гель-проникающая хроматография (с использованием смол, таких как Sephadex LH-20® (Pharmacia Chemical Industries, Швеция), TSKgel® Toyopearl HW (TosoHaas, Tosoh Corporation, Япония) в растворителях, таких как метанол, хлороформ, ацетон, этилацетат или их комбинации, или Sephadex® G-10 и G-25 в воде); или противоточная хроматография (с использованием двухфазной элюентной системы, полученной из двух или более растворителей, таких как вода, метанол, этанол, изопропанол, н-пропанол, тетрагидрофуран, ацетон, ацетонитрил, метиленхлорид, хлороформ, этилацетат, петролейный эфир, бензол и толуол). Эти методики могут быть использованы многократно, отдельно или в комбинации. Типичным методом является хроматография на нормальной фазе с использованием силикагеля.

Соединения формулы I(a) и формулы I(b) и их стереоизомеры могут быть преобразованы в их фармацевтически приемлемые соли и производные, все из которых рассматриваются данным изобретением.

Соли соединений могут быть получены стандартными процедурами, известными специалисту в данной области, например соли, подобные хлористоводородным, и сульфатные соли, могут быть получены обработкой соединений формулы I(a) и формулы I(b) и их изомеров соответствующей кислотой, например хлористоводородной кислотой, серной кислотой.

Соединения формулы I(a) и формулы I(b) характеризуются противобактериальной активностью к широкому диапазону бактериальных штаммов. Соединения формулы I(a) и формулы I(b) также характеризуются противомикобактериальной активностью к MDR штаммам Mycobacterium tuberculosis, таким как M. tuberculosis H37Rv; клиническому изоляту M. tuberculosis - устойчивому к S (стрептомицин), H (изониазид или изоникотинилгидразин), R (рифампицин) и E (этамбутол); и клиническому изоляту M. tuberculosis - чувствительному к S, H, R и E.

Одно или несколько из соединений формулы I(a) и формулы I(b), их стереоизомеров и их фармацевтически приемлемых солей, отдельно или вместе, могут быть введены животным, таким как млекопитающие, включая людей, в качестве фармацевтических средств и в форме фармацевтических композиций. Одно или несколько из соединений формулы I(a) и формулы I(b), их стереоизомеров и их фармацевтически приемлемых солей, отдельно или вместе, могут быть введены профилактически пациенту с риском быть инфицированным бактериальной инфекцией. Пациентом может быть кто-либо, кто может быть подвергнут бактериям в медицинском учреждении, в таком как больница или другое учреждение, где могут присутствовать бактерии.

Следовательно, данное изобретение также относится к соединениям формулы I(a) и формулы I(b), их стереоизомерам и их фармацевтически приемлемым солям для применения в качестве фармацевтических средств и к применению соединений формулы I(a) и формулы I(b), их стереоизомеров и их фармацевтически приемлемых солей для изготовления медицинских препаратов, характеризующихся противобактериальной активностью.

Кроме того, данное изобретение относится к фармацевтическим композициям, которые содержат эффективное количество одного или нескольких соединений формулы I(a) и формулы I(b) и/или их стереоизомеров, и/или одного или нескольких из их фармацевтически приемлемых солей и/или производных, вместе по меньшей мере с одним фармацевтически приемлемым наполнителем или носителем, применимым для предотвращения или лечения бактериальных инфекций.

Эффективное количество соединений формулы I(a) и формулы I(b) или их стереоизомеров, или их фармацевтически приемлемых солей, или их производных в качестве активного ингредиента в фармацевтических препаратах обычно составляет от около 0,01 мг до 1000 мг.

Данное изобретение также относится к способу лечения или предотвращения бактериальной инфекции, включающей введение млекопитающему, нуждающемуся в этом, эффективного количества одного или нескольких из соединений формулы I(a) и формулы I(b), и/или их стереоизомеров, и/или одной или нескольких фармацевтически приемлемых солей.

Данное изобретение также относится к способам изготовления медицинского препарата, содержащего одно или несколько из соединений формулы I(a) и формулы I(b), и/или стереоизомеров, и/или одной или нескольких их фармацевтически приемлемых солей, для лечения или предотвращения заболеваний, вызванных бактериальными инфекциями.

Соединения по данному изобретению особенно применимы в качестве противобактериальных средств. Данное изобретение, следовательно, относится к применению одного или нескольких из соединений формулы I(a) и формулы I(b) и/или стереоизомеров, и/или одной или нескольких фармацевтически приемлемых солей, и/или их производных, для изготовления медицинского препарата для предотвращения или лечения заболеваний, вызванных бактериальными инфекциями.

Бактериальные инфекции, для лечения которых используются соединения по данному изобретению, могут быть вызваны бактерией, принадлежащей к видам Staphylococcus, Streptococcus, Enterococcus, Bacillus или Mycobacterium. Бактерия, принадлежащая к видам Staphylococcus, может быть устойчивой к метициллину или ванкомицину. Бактерия, принадлежащая к энтерококковым видам, может быть устойчивой к ванкомицину. Бактерия, принадлежащая к видам Mycobacterium, может быть устойчивой к нескольким лекарственным средствам.

Выражение “вида Staphylococcus” относится к грамположительным бактериям, которые под микроскопом выглядят подобно гроздям винограда и как большие, круглые, золотисто-желтые колонии, часто с β-гемолизом, когда выращиваются в чашках с кровяным агаром. Виды Staphylococus включают Staphylococcus aureus.

Выражение “виды Streptococcus” относится к роду сферических грамположительных бактерий и члену типа Firmicutes. Стрептококки являются молочнокислыми бактериями. Виды Streptococcus включают бактерии, такие как S. hemolyticus, S. mitis, S. salivarius, S. pneumoniae. Виды Streptococcus отвечают за инфекционные заболевания, такие как менингит, бактериальная пневмония, эндокардит, рожистое воспаление и некротизирующий фасцит (“плотоядные” бактериальные инфекции).

Выражение “виды Enterococcus” относится к роду молочнокислых бактерий типа Firmicutes. Они представляют собой грамположительные кокки, которые часто встречаются парами (диплококки, например Diplococcus pneumoniae). Энтерококки являются факультативными анаэробными организмами.

Выражение “виды Bacillus” относится к большому числу разнообразных, палочковидных грамположительных бактерий, которые являются подвижными благодаря перитрихиальным жгутикам, и аэробными, такими как B. anthracis, B. subtilis, или анаэробными, такими как Clostridium spp., например C. difficile. Эти бациллы принадлежат типу Firmicutes.

Выражение “виды Mycobacterium” относится к грамположительным, неподвижным, плеоморфным палочкам, родственным актиномицетам. Туберкулез у людей вызывается Mycobacterium tuberculosis. MDR-TB (возбудитель туберкулеза, устойчивый к нескольким лекарственным средствам) очерчивает штаммы возбудителей туберкулеза, которые устойчивы по меньшей мере к двум TB лекарственным средствам первой линии, изониазиду и рифампицину.

Соединения по данному изобретению могут быть введены перорально, назально, местно, парентерально, например подкожно, внутримышечно, внутривенно, или другими путями введения.

Фармацевтические композиции, которые содержат одно или несколько из соединений формулы I(a) и формулы I(b), или их стереоизомера, или фармацевтически приемлемой соли, или производного, необязательно с другим фармацевтически приемлемым наполнителем или носителем, могут быть получены смешиванием активных соединений с одним или несколькими фармацевтически приемлемыми наполнителями и/или носителями, такими как увлажняющие средства, солюбилизаторы, такие как поверхностно-активные вещества, среды, средства, регулирующие тоничность, заполнители, красители, средства, маскирующие вкус, смазки, дезинтегранты, разбавители, связующие средства, пластификаторы, эмульгаторы, мазевые основы, смягчающие средства, загустители, полимеры, жиры, масла, совместные растворители, средства для комплексообразования или буферные вещества, и превращением смеси в приемлемую фармацевтическую форму, такую как, например, таблетки, покрытые таблетки, капсулы, гранулы, порошки, кремы, мази, гели, сироп, эмульсии, суспензии или растворы, приемлемые для инъекции, используемой для парентерального введения.

Примерами наполнителей и/или носителей, которые могут быть упомянуты, являются кремофор, полоксамер, бензалкония хлорид, натрия лаурил сульфат, декстроза, глицерин, магния стеарат, полиэтиленгликоль, крахмал, декстрин, лактоза, целлюлоза, карбоксиметилцеллюза натрия, тальк, агар-агар, минеральное масло, животное масло, растительное масло, органические и минеральные воски, парафин, гели, пропиленгликоль, бензиловый спирт, диметилацетамид, этанол, полигликоли, твин 80, солютол HS 15, вода и солевой раствор. Также возможно введение активных веществ самих по себе, без сред или разбавителей, в приемлемой форме, например в капсулах.

Как принято, галенов состав и способ введения, а также диапазон дозировок, которые применимы в определенном случае, зависят от видов, подлежащих лечению, и от картины соответствующего состояния или заболевания и могут быть оптимизированы с использованием способов, известных в данной области. В среднем суточная доза активного соединения у пациента составляет от 0,0005 мг до 50 мг на кг, обычно от 0,001 мг до 20 мг на кг.

Далее представлены в качестве иллюстрации примеры данного изобретения, которые не предназначены ограничивать его объем.

Пример 1

Выделение культуры №PM0626271 из почвы, собранной в Антарктической области

а) Композиция среды выделения

Модифицированный агар с искусственной морской водой: пептона 1,5 г, дрожжевого экстракта 0,5 г, железа хлорида 0,007 г, 1,0 л воды (750 мл искусственной морской воды+250 мл деминерализованной воды), порошка агара 15,0 г, конечное pH (при 25°C) 7,4-7,8.

Композиция искусственной морской воды: натрия хлорида 24,6 г, калия хлорида 0,67 г, кальция хлорида·2H2O 1,36 г, магния сульфата·7H2O 6,29 г, магния хлорида·6H2O 4,66 г, натрия бикарбоната 0,18 г, деминерализованной воды 1,0 л, конечный pH (при 25°C) 7,8-8,2.

b) Процедура

В области Оазиса Ширмахера в Антарктической области собирали почву поверхностного слоя и хранили при -20°C в течение экспедиции до Piramal Life Sciences Limited, Goregaon, Мумбаи, Индия. Образец хранили при от -20°C до -22°C, а затем размораживали до комнатной температуры (25+2°C) для выделения микробов. Почвенный образец (~1 г) суспендировали в 25 мл стерильной воды с 1% пептона в 100 мл стерилизованной колбе. Колбу встряхивали в течение 30 секунд. Серийные разведения до 10-5 получали в стерильной воде с 1% пептона. 100 мкл 10-5 разведения распределяли по поверхности модифицированного агара с искусственной морской водой. Чашку инкубировали при комнатной температуре (25±2°C) до тех пор, пока не наблюдались колонии. После инкубации в течение одного с половиной месяца колонию, которая появлялась на этой среде, высевали штрихами на чашки Петри, содержащие агар для выделения актиномицетов [Hi Media], приготовленный в 75% искусственной морской воде [AccumixTm] (AS-AIA). Изолят очищали и обеспечивали культурой с идентификационным номером PM0626271. Таким образом, выделяли культуру №PM0626271 из растущих микроорганизмов как отдельный изолят.

Пример 2

Очистка культуры №PM0626271

a) Композиция среды для очистки (агар для выделения актиномицетов, агарифицированный 1,5% агар-агаром)

Глицерина 5,0 мл, натрия казеината 2,0 г, L-аспарагина 0,1 г, натрия пропионата 4,0 г, дикалия фосфата 0,5 г, магния сульфата 0,1 г, двухвалентного железа сульфата 0,001 г, 1,0 л воды (750 мл искусственной морской воды+250 мл деминерализованной воды), порошка агара 15,0 г, конечный pH (при 25°C) 7,4-7,8.

Композиция искусственной морской воды: натрия хлорида 24,6 г, калия хлорида 0,67 г, кальция хлорида·2H2O, 1,36 г, магния сульфата·7H2O 6,29 г, магния хлорида·6H2O 4,66 г, натрия бикарбоната 0,18 г, деминерализованной воды 1,0 л, конечный pH (при 25°C) 7,8-8,2.

b) Процедура

Культуру №PM0626271 высевали штрихами в чашку Петри с агаром для выделения актиномицетов (содержащим 75% солей искусственной морской воды). Чашку Петри инкубировали в течение 10 дней при 25°C. Одну из выделенных колоний из чашки Петри переносили на свежие “косяки” агара для выделения актиномицетов, приготовленного на 75% искусственной морской воде. “Косяки” инкубировали в течение 10 дней при 25°C.

Пример 3

Поддержание штамма-продуцента - культуры №PM0626271

a) Композиция среды (агар для выделения актиномицетов)

Глицерина 5,0 мл, натрия казеината 2,0 г, L-аспарагина 0,1 г, натрия пропионата 4,0 г, дикалия фосфата 0,5 г, магния сульфата 0,1 г, двухвалентного железа сульфата 0,001 г, 1,0 л воды (750 мл искусственной морской воды+250 мл деминерализованной воды), порошка агара 15,0 г, конечный pH (при 25°C) 7,4-7,8.

Композиция искусственной морской воды: натрия хлорида 24,6 g, калия хлорида 0,67 г, кальция хлорида·2H2O 1,36 г, магния сульфата·7H2O 6,29 г, магния хлорида·6H2O 4,66 г, натрия бикарбоната 0,18 г, деминерализованной воды 1,0 л, конечный pH (при 25°C) 7,8-8,2.

b) После растворения ингредиентов путем нагревания полученный раствор распределяли в аналитические пробирки и стерилизовали при 121°C в течение 30 минут. Аналитические пробирки охлаждали и оставляли затвердевать в наклонном положении. На агаровые “косяки” высевали штрихами растущую культуру №PM0626271 проволочной петлей и инкубировали при 27°C - 29°C, до появления хорошего роста. Хорошо выросшие культуры хранили в холодильнике при 4°C - 8°C.

Пример 4

Ферментация культуры №PM0626271 во встряхиваемых колбах

a) Композиция среды для посева [AS-274 (1)]

Глюкозы 15 г, жидкого кукурузного экстракта 5 г, пептона 7,5 г, дрожжевого экстракта 7,5 г, кальция карбоната 2,0 г, натрия хлорида 5,0 г, объем, полученный из 750 мл искусственной морской воды и 250 мл деминерализованной воды.

b) Вышеупомянутую среду распределяли в 40 мл количествах в колбы Эрленмейера емкостью 500 мл и автоклавировали при 121°C в течение 30 минут. Колбы охлаждали до комнатной температуры (25±2°C) и каждую колбу инокулировали петлей для посева хорошо растущим на “косяке” продуцирующим штаммом (культура №PM0626271) и встряхивали на ротационном шейкере в течение 72 часов при 230 rpm - 250 rpm при 30°C (±1°C) для получения культуры для посева.

c) Композиция среды для получения [AS 36P (1)]

Растворимого крахмала 20 г, глюкозы 15 г, дрожжевого экстракта 2 г, пептона 3 г, кальция карбоната 2 г, аммония сульфата 0,5 г, жидкого кукурузного экстракта 2 г, натрия хлорида 2 г, магния фосфата 5 г, кобальта хлорида 1 мл/л из исходного раствора 1 г/л, раствора солей в следовых концентрациях 1 мл/л, объем доведен до 1 л с использованием 75% искусственный морской воды и 25% деминерализованной воды.

d) 40 мл среды для получения в колбах Эрленмейера емкостью 500 мл автоклавировали при 121°C в течение 30 минут, охлаждали до 29°C - 30°C и засевали 5% (объем/объем) культуры для посева, упомянутой в Примере 4b.

e) Параметры ферментации

Колбы для получения инкубировали на шейкере при 29°C и 220 rpm в течение 96 часов. Содержимое колб для получения собирали и цельный бульон из каждой колбы со средой экстрагировали равным объемом метанола при условии встряхивания в течение одного часа при 29°C и центрифугировали при 3500 rpm в течение получаса. Супернатант использовали для анализа диффузии противобактериальных соединений в агар для мониторинга активности.

Получение соединений формулы I(a) и формулы I(b) в ферментационном бульоне определяли путем анализа биоактивности по отношению к S. aureus E710 (штамм MRSA) и/или Enterococcus faecium R2 (VRE) с использованием метода диффузии в агар. pH собранного ферментационного бульона составлял 7,0-8,0. Ферментационный бульон собирали и цельный бульон использовали для выделения и очистки соединений формулы I(a) и формулы I(b).

Пример 5

Получение культуры для посева во встряхиваемых колбах для ферментации

a) Композиция среды [AS-274 (1)]

Глюкозы 15 г, жидкого кукурузного экстракта 5 г, пептона 7,5 г, дрожжевого экстракта 7,5 г, кальция карбоната 2,0 г, натрия хлорида 5,0 г, объем, полученный из 750 мл искусственной морской воды и 250 мл деминерализованной воды.

b) Вышеупомянутую среду распределяли в 200 мл количествах в колбы Эрленмейера емкостью 1000 мл и автоклавировали при 121°C в течение 30 минут. Колбы охлаждали до комнатной температуры (25±2°C), каждую колбу инокулировали петлей для посева хорошо растущим на “косяке” продуцирующим штаммом (культура №PM0626271) и встряхивали на ротационном шейкере в течение 70-74 часов при 230 rpm - 250 rpm при 29°C - 30°C для получения культуры для посева.

Пример 6

Культивирование культуры №PM0626271 в ферментере

a) Композиция среды для получения

Искусственной морской воды (соли искусственной морской воды 28,32 г) (75%), растворимого крахмала 20 г, глюкозы 15 г, дрожжевого экстракта 2 г, пептона 3 г, кальция карбоната 2 г, аммония сульфата 0,05 г, жидкого кукурузного экстракта 2 г, натрия хлорида 2 г, магния фосфата 5 г, кобальта хлорида (деминерализованной воды 1,0 л с 1 г кобальта хлорида) 1 мл/л, раствора солей в следовых концентрациях (меди сульфата 7 г, двухвалентного железа сульфата 1 г, магния хлорида 8 г, цинка сульфата 2 г, деминерализованной воды 1,0 л) 1 мл/л, деминерализованной воды 1,0 л, pH 6,5-7,5 (перед стерилизацией).

b) 100 л среды для получения в 150 л ферментере вместе с 30 мл десмофена в качестве противовспенивающего средства стерилизовали in situ в течение 30 минут при 121°C, охлаждали до 29°C - 30°C и засевали 2,5 л - 3,5 л культуры для засева, полученной выше (Пример 5).

c) Параметры ферментации

Ферментацию выполняли при температуре 29°C - 30°C с перемешиванием при 100 rpm, аэрацией 60 литров в минуту и собирали через 70 часов - 74 часа. Получение соединений формулы I(a) и формулы I(b) в ферментационном бульоне определяли качественно путем анализа биоактивности по отношению к S. aureus E710 (штамм MRSA) и/или Enterococcus faecium R2 (VRE) с использованием метода диффузии в агар. pH собранного ферментационного бульона составлял 7,5-8,0. После сбора цельный бульон подвергали экстракции растворителями.

Пример 7

Выделение и очистка соединений формулы I(a) и формулы I(b)

Цельный бульон (партия 10 л) экстрагировали с использованием этилацетата (1:1). Разделяли органический и водный слои. Органический слой обрабатывали с выпариванием растворителя для получения неочищенного этилацетатного экстракта (1,5 г). Неочищенный экстракт далее обрабатывали флэш-хроматографией (силикагель, 30 г, растворитель: ступенчатый градиент метанола/хлороформа, поток: 15 мл/минута). Активное соединение элюировали 1% метанолом - 5% метанолом в хлороформе, который концентрировали для получения получистого соединения (250 мг). Дальнейшую очистку выполняли повторной нормально-фазовой препаративной HPLC.

Условия препаративной HPLC

Колонка Eurospher оксид кремния (10 µ, 20x250 мм)
Элюент метанол:хлороформ (5:95)
Скорость потока 20 мл/минута
Выявление (УФ) 245 нм
Время удерживания соединение формулы I(a) (5-6 минут),
соединение формулы I(b) (8-10 минут)

Чистоту фракции проверяли биоанализом по отношению к E. faecium R2 и/или S. aureus 3066, и/или аналитической HPLC. Элюаты, содержащие соединения формулы I(a) и формулы I(b), объединяли и концентрировали при пониженном давлении для удаления растворителя с получением соединения формулы I(a) (40 мг) и соединения формулы I(b) (3 мг).

Условия аналитической HPLC

Колонка Eurospher RP-18 (3 µ, 4,6x125 мм)
Система растворителя градиент (от 0% ацетонитрила до 100% за 15 минут по отношению к воде с последующими 100% ацетонитрила в течение 5 минут)
Скорость потока 1 мл/минута
Выявление (УФ) 245 нм
Время удерживания соединение формулы I(a) (12-13 минут), а соединение формулы I(b) (11-12 минут)

A. Физические и спектральные свойства соединения формулы I(a)

Внешний вид белый порошок
Точка плавления 240°C (разложения)
Растворимость растворимый в хлороформе, этилацетате, метаноле и нерастворимый в воде
MS [HR-ESI(+) MS)] масса/заряд 1650,4858 (M+H)
Молекулярный вес 1649,5
Молекулярная формула C71H83N19O18S5
IR (KBr) 3386, 2927, 1648, 1507, 1206, 756, 666 см-1
1H ЯМР см. Таблицу 1 и Фигуру 1
13C ЯМР см. Таблицу 2 и Фигуру 2

B. Физические и спектральные свойства соединения формулы I(b)

Внешний вид белый порошок
Растворимость растворимый в хлороформе, этилацетате, метаноле и нерастворимый в воде
MS [HR-ESI(+) MS)] м/з 1674,4787 (M+Na)
Молекулярный вес 1651,50
Молекулярная формула C71H85N19O18S5
1H ЯМР см. Таблицу 3 и Фигуру 3

Таблица 1

1H ЯМР соединения формулы I(a) в CDCl3:CD3OD (4:1) при 500 МГц

Пик δ Пик δ Пик δ
1 0,7(d, 3H) 18 3,67(d, 1H) 35 6,91(s, 1H)
2 0,74(d, 3H) 19 3,7(q, 1H) 36 6,94(s, 1H)
3 0,95(d, 3H) 20 4,33(d, 1H) 37 7,2(s, 1H)
4 1,04(s, 3H) 21 4,33(d, 1H) 38 7,43(s, 1H)
5 1,08(d, 3H) 22 4,62((q, 1H) 39 7,45(s, 1H)
6 1,2(d, 3H) 23 4,86(dd, 1H) 40 7,65(s, 1H)
7 1,28(d, 3H) 24 5,19 (s, 1H) 41 7,87(s, 1H)
8 1,34(d, 3H) 25 5,19(s, 1H),
5,67 (s, 1H)
42 8,05(s, 1H)
9 1,37(m, 1H) 26 5,2(t, 1H) 43 8,17(s, 1H)
10 1,5(d, 3H) 27 5,6(d, 1H) 44 8,2 (s, 1H)
11 1,6(d, 3H) 28 5,62(s, 1H), 6,44(s, 1H) 45 8,5 (s, 1H)
12 2,1(m, 1H) 29 5,65(d, 2H) 46 8,67 (s, 1H)
13 2,2 (m, 1H) 30 5,72(s, 1H), 6,61(s, 1H) 47 8,99 (s, 2H)
14 2,2(m, 1H)
3,99(m, 1H)
31 6,1(q, 1H) 48 9,72 (s, 1H)
15 2,8(d, 1H) 32 6,25(m, 1H) 49 9,8 (s, 1H)
16 3,05(t, 1H) 3,5(t, 1H) 33 6,28(d, 2H)
17 3,49(d, 2H) 34 6,8(d, 1H)

Таблица 2

13C ЯМР соединения формулы I(a) в CDCl3:CD3OD (4:1) при 75 МГц

Сигнал δ Сигнал δ Сигнал δ
1 12,11 25 64,45 49 144,61
2 13,74 26 64,73 50 148,17
3 14,1 27 65,69 51 148,45
4 14,8 28 65,95 52 151,89
5 16,48 29 70,27 53 152,76
6 17,11 30 77,1 54 155,45
7 17,27 31 101,45 55 157,9
8 17,55 32 101,45 56 159,0
9 20,9 33 102,6 57 160,04
10 23,13 34 116,52 58 160,36
11 27,56 35 120,63 59 161,01
12 27,56 36 121,59 60 163,75
13 29,04 37 123,28 61 164,46
14 33,24 38 123,87 62 164,5
15 46,17 39 123,87 63 166,6
16 50,14 40 125,48 64 167,13
17 51,3 41 126,03 65 167,95
18 53,91 42 126,69 66 168,47
19 53,91 43 128,24 67 168,67
20 55,8 44 130,34 68 170,35
21 57,32 45 130,98 69 170,35
22 58,8 46 131,14 70 171,63
23 62,42 47 132,39 71 172,0
24 62,73 48 141,85

Таблица 3

1H ЯМР соединения формулы I(b) в CDCl3:CD3OD (4:1) при 500 МГц

Пик δ Пик δ Пик δ
1 0,88(d, 3H) 23 4,59(t, 1H) 45 7,80(s, 1H)
2 0,95(d, 3H) 24 4,61(dd, 1H) 46 8,05(s, 1H)
3 0,99(d, 3H) 25 4,74(t, 1H) 47 8,11(s, 1H)
4 1,0(m, 1H) 26 4,95(t, 1H) 48 8,14(s, 1H)
5 1,16(s, 3H) 27 5,19(s, 1H), 5,78(s, 1H) 49 8,26(s, 1H)
6 1,18(d, 3H) 28 5,19(s, 1H) 50 8,52(t, 1H)
7 1,32(d, 3H) 29 5,3(d, 1H) 51 8,65(d, 1H)
8 1,35(d, 3H) 30 5,52(s, 1H), 6,65(s, 1H) 52 9,2(s, 1H)
9 1,43(d, 3H) 31 5,65(s, 1H) 53 9,87(s, 1H)
10 1,5(d, 3H) 32 5,72(d, 1H) 54 9,92(s, 1H)
11 1,61(d, 3H) 33 5,8(d, 1H)
12 1,72(d, 3H) 34 6,1(q, 1H)
13 2,02(m, 1H) 35 6,34(m, 1H)
14 2,28(m, 1H) 36 6,36(d, 1H)
15 2,8(d, 1H) 37 6,73(d, 1H)
16 3,17(t, 1H) 3,69(t, 1H) 38 6,91(d, 1H)
17 3,43(d, 1H) 39 6,94(s, 1H)
18 3,46(d, 1H) 40 7,14(s, 1H)
19 3,58(d, 1H) 41 7,3(s, 1H)
20 3,8(q, 2H) 42 7,46(s, 1H)
21 4,06(m, 1H) 43 7,54(d 1H)
22 4,45(d, 1H) 44 7,65(d, 1H)

Биологическая оценка соединений формулы I(a) и формулы I(b)

In-vitro анализы

Пример 8

Эффективность in-vitro устанавливали путем определений минимальной ингибирующей концентрации (MIC) соединений формулы I(a) и формулы I(b) по отношению к бактериальным штаммам с использованием метода макроразведений бульона согласно указаниям Национального комитета клинических лабораторных стандартов (2000) (Methods for Dilution Antimicrobial Susceptibility Tests for Bacteria that Grow Aerobically-Fifth Edition: Approved Standard M7-A5. NCCLS, Уэйн, Пенсильвания, США). Бульон Мюллера-Хинтона использовали как питательную среду для анализа, если не указывалось иное. PM181104 (PCT публикация №WO2007119201) использовали как известный стандарт во всех in-vitro экспериментах. Для приготовления исходного раствора соединения формулы I(a) и формулы I(b) растворяли в хлороформе (5% всего необходимого объема) и разбавляли с использованием метанола (95% всего необходимого объема).

Результаты

Полученные результаты показаны в Таблице 4 и Таблице 5 и демонстрируют, что соединения формулы I(a) и формулы I(b) характеризуются применимостью для лечения бактериальных инфекций.

Таблица 4. MIC соединения формулы I(a) по отношению к бактериальным штаммам

Анализируемый организм MIC (мкг/мл) Анализируемый организм MIC (мкг/мл)
S. aureus C1 MRSA 2 0,25 S. aureus E712, MRSA ErythroR, 59 0,25
S. aureus C1 MRSA 3 0,25 S. aureus 503, MRSA, 62 >1
S. aureus C1 MRSA 5 0,25 S. aureus SG 511, MRSA, 63 1
S. aureus C1 MRSA 7 0,125 S. aureus 789, MRSA, 64 >1
S. aureus C1 MRSA 8 0,25 S. aureus 209 P, MSSA 0,063
S. aureus C1 MRSA 9 0,25 S. epidermidis 823, TeichoR, 230 0,25
S. aureus C1 MRSA 10 0,25 S. epidermidis 6098, ErythroR, 233 >1
S. aureus C1 MRSA 13 0,25 S. epidermidis 6729 II W, ErythroR, 236 0,125
S. aureus C1 MRSA 16 0,25 S. epidermidis 2361 W, 246 0,25
S. aureus C1 MRSA 17 0,125 S. epidermidis 4264 I (1) W, 247 0,125
S. aureus C1 MRSA 20 0,125 S. epidermidis Pat 01 IV, 251 0,25
S. aureus C1 MRSA 21 0,125 E. faecium C1 VRE 26 0,25
S. aureus C1 MRSA 22 0,25 E. faecium C1 VRE 27 0,25
S. aureus C1 MRSA 23 0,016 E. faecium C1 VRE 28 0,125
S. aureus C1 MRSA 24 0,25 E. faecium C1 VRE 31 0,5
S. aureus C1 MRSA 25 0,15 E. faecium C1 VRE 33 0,125
S. aureus KEM MRSA 1 0,25 E. faecium C1 VRE 34 0,25
S. aureus KEM MRSA 2 0,25 E. faecium KEM VRE 1 0,25
S. aureus KEM MRSA 3 0,25 E. faecium KEM VRE 2 0,5
S. aureus KEM MRSA 4 0,125 E. faecium KEM VRE 3 0,25
S. aureus KEM MRSA 5 0,125 E. faecium KEM VRE 4 0,5
S. aureus MRSA 3 lilavati 0,125 E. faecium KEM VRE 5 0,25
S. aureus Misk MRSA 35 0,125 E. faecium R-2 (VRE) 0,25
S. aureus Misk MRSA 37 0,125 Enterococcus faecium, VSE (322) 0,125
S. aureus Misk MRSA 38 0,125 Bacillus cereus (121) 0,031
S. aureus E710, MRSA 0,125 Bacillus subtilis ATCC 6633 (123) 0,031
S. aureus ATCC 33591, MRSA 0,125 Bacillus megaterium FH1127 (124) 0,125

Таблица 5. MIC соединений формулы I(a) и формулы I(b) по отношению к бактериальным штаммам

Анализируемая культура Минимальная ингибирующая концентрация (мкг/мл)
Соединение формулы I(a) Соединение формулы I(b)
E. faecium, R-2 (VRE) 0,125 2
S. aureus E710, (MRSA) 0,125 2
S. aureus 209P (MSSA) 0,064-0,125 0,25-0,5

Аббревиатурами, использованными в Таблице 4 и Таблице 5, являются

S: Staphylococcus;

E: Энтерококки.

Пример 9

Оценка противомикобактериальной активности

Анализ выполняли, как сообщалось, в J. Clin. Microbiol., 1999, 37, 1144.

50 мкл бактериальной (как упоминалось в Таблице 6) суспензии, эквивалентной стандарту MacFarlands №2 (что соответствует>5x107 КОЕ/мл) (Remel, Lenexa, Kan.) добавляли к 400 мкл G7H9 с и без соединений формулы I(a) и формулы I(b) (анализированные при 0,5 мкг/мл, 5 мкг/мл и 10 мкг/мл) и инкубировали в течение 72 часов при 37°C. После инкубации во все сосуды добавляли 50 мкл фага репортера люциферазы с высоким титром (phAE 129) и 40 мкл 0,1 M кальция хлорида (CaCl2), и эту систему инкубировали в течение 4 часов при 37°C. После инкубации брали по 100 мкл смеси из каждого сосуда в кювету люминометра и добавляли равное количество рабочего раствора D-люциферина (0,3 мM в 0,05 M натрия-цитратном буфере, pH 4,5). Относительные световые единицы (RLU) измеряли через 10 секунд интеграции в люминометре (Monolight 2010).

Для каждого образца записывали считывания в повторностях и вычисляли среднее. Снижение процентного соотношения в RLU вычисляли для каждого анализируемого образца и сравнивали с контролем. Эксперимент повторяли, если средняя RLU контроля была меньше 1000. Критерием активности является противомикобактериальная активность, показанная пятидесяти процентным снижением RLU в присутствии соединения по сравнению с контролем, несодержащим соединение.

Таблица 6: Противомикобактериальная активность соединений формулы I(a) и формулы I(b)

Штамм Соединения % снижения RLU
0,5 мг/мл 5 мг/мл 10 мг/мл
M. tuberculosis H37Rv Соединение формулы I(a) 36,36 77,17 83,76
Соединение формулы I(b) 28,87 54,83 76,73
Клинический изолят: устойчивый к S, H, R и E Соединение формулы I(a) 20,88 78,11 88,42
Соединение формулы I(b) 5,67 70,9 83,74

Заключение: Соединения формулы I(a) и формулы I(b) являются активными по отношению к стандартному штамму TB (H37 RV) и штамму MDR Mycobacterium tuberculosis [устойчивому к 4 стандартным антибиотикам: S (стрептомицину), H (изониазиду или изоникотинил гидразину), R (рифампицину) и E (этамбутолу)].

1. Соединение, выбранное из соединения формулы I(a) или соединения формулы I(b):


или их фармацевтически приемлемой соли.

2. Соединение по п.1, где соединение выделено из ферментационного бульона микроорганизма, принадлежащего видам Streptomyces (PM0626271/MTCC 5447).

3. Соединение формулы I(a) по п.1, где указанное соединение характеризуется:
(a) молекулярным весом 1649,5,
(b) молекулярной формулой C71H83N19O18S5,
(c) 1H ЯМР спектром, как показано на Фигуре 1, и
(d) 13C ЯМР спектром, как показано на Фигуре 2.

4. Соединение формулы I(b) по п.1, где указанное соединение характеризуется:
(a) молекулярным весом 1651,5,
(b) молекулярной формулой C71H85N19O18S5, и
(c) 1H ЯМР спектром, как показано на Фигуре 3.

5. Способ получения соединения формулы I(a) и соединения формулы I(b) по п.1 или их фармацевтической соли, при котором культивируют микроорганизм видов Streptomyces (PM0626271/MTCC 5447) в аэробных условиях с погружением в питательной среде, содержащей источники углерода и азота, для получения соединения формулы I(a) и соединения формулы I(b) в ферментационном бульоне.

6. Способ по п.5, при котором дополнительно
(a) выделяют соединение формулы I(a) и соединение формулы I(b) из ферментационного бульона, полученного после культивирования микроорганизма видов Streptomyces (PM0626271/MTCC 5447); и
(b) очищают соединение формулы I(a) и соединение формулы I(b).

7. Способ по п.6, дополнительно включающий стадию, на которой превращают соединение формулы I(a), или соединение формулы I(b), или оба в их фармацевтически приемлемую соль.

8. Фармацевтическая композиция для предотвращения или лечения бактериальной инфекции, включающая эффективное количество соединения формулы I(a) или соединения формулы I(b) по п.1 и по меньшей мере один фармацевтически приемлемый наполнитель или носитель.

9. Фармацевтическая композиция по п.8, где фармацевтическая композиция имеет форму таблетки, покрытой таблетки, капсулы, гранулы, порошка, крема, мази, геля, эмульсии, суспензии или раствора для инъекции.

10. Фармацевтическая композиция по п.8, где бактериальная инфекция вызывается бактерией, принадлежащей видам Staphylococcus, Streptococcus, Enterococcus, Bacillus или Mycobacterium.

11. Фармацевтическая композиция по п.10, где бактерия, принадлежащая видам Staphylococcus, является устойчивой к метициллину, устойчивой к ванкомицину или к обоим.

12. Фармацевтическая композиция по п.10, где бактерия, принадлежащая к видам энтерококков, является устойчивой к ванкомицину.

13. Фармацевтическая композиция по п.10, где бактерия, принадлежащая к видам Mycobacterium, является устойчивой к нескольким лекарственным средствам.

14. Применение соединения формулы I(a) или соединения формулы I(b) по п.1 для предотвращения или лечения бактериальной инфекции.

15. Применение по п.14, где бактериальная инфекция вызывается бактерией, принадлежащей видам Staphylococcus, Streptococcus, энтерококковых, Bacillus или Mycobacterium.

16. Применение по п.15, где бактерия, принадлежащая к видам Staphylococcus, является устойчивой к метициллину, устойчивой к ванкомицину или к обоим.

17. Применение по п.15, где бактерия, принадлежащая к видам энтерококковых, является устойчивой к ванкомицину.

18. Применение по п.15, где бактерия, принадлежащая к видам Mycobacterium, является устойчивой к нескольким лекарственным средствам.

19. Применение соединения формулы I(a) или соединения формулы I(b) по п.1 для изготовления лекарственного препарата для предотвращения или лечения заболеваний, вызванных бактериальной инфекцией.

20. Способ лечения или предотвращения бактериальной инфекции, при котором вводят млекопитающему, нуждающемуся в этом, эффективное количество соединения формулы I(a) и соединения формулы I(b) по п.1.

21. Способ по п.20, где бактериальная инфекция вызывается бактерией, принадлежащей видам Staphylococcus, Streptococcus, энтерококковых, Bacillus или Mycobacterium.

22. Способ по п.21, где бактерия, принадлежащая к видам Staphylococcus, является устойчивой к метициллину, устойчивой к ванкомицину или к обоим.

23. Способ по п.21, где бактерия, принадлежащая к видам энтерококковых, является устойчивой к ванкомицину.

24. Способ по п.21, где бактерия, принадлежащая к видам Mycobacterium, является устойчивой к нескольким лекарственным средствам.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к способу определения и количественной оценки необычно модифицированных гликанов, который может использоваться при анализе гликанов. Предложенный способ включает стадии: a) обеспечения препарата гликана, содержащего необычно модифицированные гликаны, выбранные из группы, содержащей сульфатированные гликаны, фосфорилированные гликаны, полиацетилированные сиалированные гликаны и их комбинации, где указанные необычно модифицированные гликаны являются отрицательно заряженными, и где препарат гликана получен путем выделения гликанов и сиаловых кислот из терапевтической композиции гликопротеина, где сиаловые кислоты выделяют путем воздействия на терапевтическую композицию гликопротеина по меньшей мере одного агента, который расщепляет остатки сиаловых кислот, в условиях, обеспечивающих расщепление сиаловых кислот; b) подвергания препарата гликана хроматографическому методу разделения, который разделяет гликаны на основании отношения заряда к массе, посредством чего происходит разделение указанных необычно модифицированных гликанов; и c) количественного определения, по меньшей мере, одного отделенного необычно модифицированного гликана, используя, по меньшей мере, один стандарт количественной оценки.

Изобретение относится к области иммунологии. .

Изобретение относится к микробиологии и биохимии, в частности к выделению биологически активных соединений - антибиотиков для борьбы с микроскопическими водорослями.

Изобретение относится к биотехнологии, конкретно к получению гормонов, и может быть использовано в разведении беспозвоночных. .

Изобретение относится к области биохимии, в частности к способам и устройствам для получения окрашивающих веществ, и может быть использовано в пищевой и косметической промышленности, а также при проведении различного рода биологических исследований.

Изобретение относится к области биотехнологии и может быть использовано для получения биогенного поверхностно-активного вещества сурфактина, обладающего множественной биологической активностью.

Изобретение относится к медицине и касается гуманизированных антител, которые распознают веротоксин II, и продуцирующей их линии клеток. .

Изобретение относится к способу получения циклоспорина А высокой чистоты путем очистки сырого продукта, содержащего циклоспориновый комплекс, путем многоступенчатой хроматографии на силикагеле при высокой загрузке колонны от 10 до 52%, с использованием в качестве элюента смеси толуола с ацетоном в количестве от 10 до 30 об.% или толуола с этилацетатом в количестве от 10 до 35 об.%, циклоспорина А высокой чистоты с содержанием в нем циклоспорина L, U и D менее 0,05% и содержанием в нем циклоспорина В и С < 0,02 об.%, промышленного способа очистки циклоспорина А от сырого продукта, содержащего циклоспориновый комплекс.

Изобретение относится к RGD-содержащим циклическим пептидомиметикам; конъюгатам указанных пептидомиметиков и функциональной группы, выбранной из флуоресцентных зондов, фотосенсибилизаторов, хелатирующих агентов или цитотоксических агентов; и фармацевтическим композициям, содержащим эти конъюгаты.

Изобретение относится к соединениям формулы (I) и их фармацевтически приемлемым солям, которые применяют для изготовления лекарства для лечения или профилактики состояния, при котором полезно ингибирование карбоксипептидазы U.
Изобретение относится к области первичных и вторичных бактериальных инфекций кожи и представляет собой способ изготовления крема, содержащего фусидовую кислоту, включающий стадию использования фусидата натрия в качестве исходного активного ингредиента и превращения указанного фусидата натрия in situ в фусидовую кислоту в не содержащей кислорода среде путем медленного добавления кислоты в кремовую основу, содержащую консервант, кислоту, совместный растворитель, эмульгатор, воскообразный продукт и воду.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности и представляет собой дерматологический крем, предназначенный для местного лечения бактериальных инфекций кожи и для заживления связанных с ними ран, содержащий фрамицетина сульфат и биополимер, включенные в кремовую основу, которая содержит по крайней мере одно вещество из каждой следующей группы: консервант; первичный и вторичный эмульгатор, выбранные из группы, содержащей кетостеариловый спирт, кетомакрогол 1000, полисорбат-80 и Span-80; парафин в качестве воскообразного продукта; совместный растворитель, выбранный из группы, включающей пропиленгликоль, гексиленгликоль и полиэтиленгликоль-400; азотную кислоту или молочную кислоту и воду, а указанный биополимер предпочтительно является хитозаном.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности и представляет собой крем для лечения инфекции кожи, содержащий фусидовую кислоту, которая образуется in situ в не содержащей кислорода среде с использованием фусидата натрия, при этом указанный крем содержит фусидовую кислоту, образованную in situ путем превращения фусидата натрия при медленном добавлении кислоты, с размером частиц активного вещества от 2,33 мкм до 16,3 мкм и кремовую основу, содержащую по меньшей мере один ингредиент каждого типа: первичный и вторичный эмульгаторы, выбранные из группы, содержащей кетостеариловый спирт, кетомакрогол-1000, полисорбат-80 и Span-80, парафин в качестве воскообразного продукта, совместный растворитель, выбранный из группы, включающий пропиленгликоль, гексиленгликоль, полиэтиленгликоль-400, азотную кислоту или молочную кислоту и воду.

Группа изобретений относится к медицине и касается пневмококковой вакцины, содержащей сахарид из серотипов 4, 6B, 9V, 14, 18C, 19F и 23F, по отдельности конъюгированный с CRM197, и по меньшей мере один агонист Toll-подобного рецептора-9 (TLR-9) в качестве адъюванта, где указанный агонист Toll-подобного рецептора-9 представляет собой CpG-олигонуклеотид.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности и представляет собой антимикробное средство для профилактики имплант-ассоциированной инфекции, содержащее гентамицина сульфат 0,96 г, диоксидин 1,0 г, среднемолекулярный коллидон медицинский (молекулярной массой 30000D) 10,0 г, воду дистиллированную до 100,0 мл.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, в частности к средству, обладающему противовоспалительным, жаропонижающим и антимикробным действием. Средство, обладающее противовоспалительным, жаропонижающим и антимикробным действием, представляющее собой сухой экстракт листьев и цветков аврана лекарственного, полученный путем измельчения их, экстракции спиртом 96% на водяной бане до кипения и кипячения, выпаривания, разведения выпаренного остатка сначала дистиллированной водой, затем добавления хлороформа, охлаждения до комнатной температуры и центрифугирования, с последующим отделением водной фракции и высушиванием ее, при определенных условиях.

Изобретение относится к области медицины и представляет собой композицию, обладающую антиоксидантной и антибактериальной активностью, включающую аскорбат лития, отличающуюся тем, что дополнительно содержит бензоат лития при следующем соотношении компонентов, мас.%: аскорбат лития - 50; бензоат лития - 50.
Наверх