Набор для консервации нативных эритроцитов



Набор для консервации нативных эритроцитов
Набор для консервации нативных эритроцитов

 


Владельцы патента RU 2554764:

Шавва Станислав Александрович (RU)
Минеева Наталья Витальевна (RU)

Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии, и описывает набор для консервации нативных эритроцитов, применяющихся для выявления антител к антигенам эритроцитов, состоит из двух растворов: водного раствора для кратковременного пребывания эритроцитов, содержащего 9,0-11,0 г/л глюкозы, 0,2-0,3 г/л цитрата натрия, 0,01-0,02 г/л лимонной кислоты и 0,95-1,05 г/л бычьего сывороточного альбумина, и водного раствора для хранения эритроцитов, включающего 0,2-0,4 г/л аденина, 25,0-35,0 г/л глюкозы, 6,0-8,0 г/л маннитола, 0,2-0,3 г/л цитрата натрия, 0,05-0,07 г/л лимонной кислоты и 0,95-1,05 г/л бычьего сывороточного альбумина.

Изобретение обеспечивает сохранение способности антигенов мембраны консервированных нативных эритроцитов связываться с соответствующими клинически значимыми антителами на срок не менее 2 месяцев. 2 з.п. ф-лы, 1 табл.

 

Заявляемое изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии, и может найти применение в клинических лабораториях, службе крови, а также в лабораториях судебной медицины.

В клинической диагностике консервированные эритроциты (тест-эритроциты) применяются для выявления антител к антигенам эритроцитов и установления их специфичности. Исследование антител проводится при определении группы крови перекрестным методом, при скрининге антител другой специфичности у реципиентов перед трансфузией, для диагностики гемолитической болезни новорожденных и др.

Указанная область применения предъявляет особые требования к сохранности эритроцитов. От них требуются:

- отсутствие гемолиза, который приводит к разрушению целостности эритроцитов и снижению их способности к взаимодействию с антителами;

- отсутствие веществ, фиксирующих мембрану эритроцитов, так как фиксация мембраны приводит к невозможности их использования для выявления антител методом прямой агглютинации;

- отсутствие в составе компонентов, вызывающих неспецифическую агрегацию эритроцитов;

- отсутствие образования сгустков эритроцитов при хранении, так как их присутствие мешает оценке результатов реакции агглютинацию при выявлении антител;

- сохранение в течение 2 месяцев после заготовки активности антигенов, присутствующих на эритроцитах.

Известны многочисленные консерванты, используемые для хранения нативных эритроцитов, предназначенных для трансфузий, например SAGM, Adsol (AS-1), Nutricell (AS-3), PAGGS-sorbitol, PAGGS-mannitol, MAP, Erythro-Sol и др. Каждый из этих консервантов содержит аденин и глюкозу в разных концентрациях, хлорид натрия (кроме Erythro-Sol), маннит, сорбит и/или цитрат натрия в качестве мембранных протекторов, фосфаты (кроме SAGM и Adsol). Они обеспечивают хранение нативных эритроцитов в течение 35-42 дней после заготовки, при этом допускается наличие минимального гемолиза эритроцитов и образование сгустков эритроцитов. Однако к ним не предъявляются требования сохранения активности антигенов. Активность антигенов эритроцитов при хранении консервированной донорской крови снижается, особенно антигенов систем Даффи, Кидд, Келл. В силу этого обстоятельства консерванты, используемые для хранения эритроцитов, предназначенных для трансфузий, не пригодны для сохранения тест-эритроцитов.

Известен раствор для консервации энзимированных эритроцитов, используемых в изосерологических реакциях экспресс-определения антител систем Rh, Lewis и Р, который включает аденин, инозин, лимонную кислоту, глюкозу, фосфат натрия, гидроксид натрия и дополнительно мертиолат натрия в количестве 0,10-0,15 г/л [RU 2012331, А61K 31/00, 1994]. Раствор может также включать хлорид кальция. Указанный раствор позволяет сохранить агглютинирующую активность и специфичность реакции агглютинации тест-эритроцитов в течение 2-3 недель в обычных, нестерильных условиях.

Недостатком указанного раствора, кроме короткого времени сохранения способности давать специфическую реакцию гемагглютинации, является тот факт, что при обработке эритроцитов энзимами разрушаются некоторые антигены эритроцитов, например антигены системы Келл, что приводит к невозможности выявить антитела к этим антигенам. Энзимированные эритроциты длительного хранения не рекомендованы к использованию международными требованиями, что ограничивает область их применения методиками специального назначения, для которых они могут быть приготовлены непосредственно перед исследованием.

Наиболее близким по совокупности существенных признаков к заявляемому способу является консервирующий раствор для нативных эритроцитов, стандартных по всем клинически значимым эритроцитарным изосерологическим системам [RU 2049466, А61K 31/18, 1995]. Раствор содержит аденин, инозин, глюкозу, лимонную кислоту, гидроксид натрия и фосфат натрия. Кроме этих компонентов консервирующий раствор содержит также пенициллин и стрептомицин в количестве по 5,0-10,0 г/л, что, по данным заявителя, расширяет спектр сохраняемых эритроцитарных антигенов и удлиняет срок сохранности полноценной эритроцитарной панели. Нативные эритроциты помещаются в указанный консервирующий раствор после отмывки физиологическим раствором, то есть 0,9%-ным водным раствором хлористого натрия

Однако у больных и у доноров в крови могут уже присутствовать антитела к пенициллину, что вызывает взаимодействие консервированных эритроцитов с сыворотками и приводит к ложноположительному результату при исследовании антител к эритроцитам. Стрептомицин имеет узкий спектр действия на бактерии и малоэффективен. По нашим данным эритроциты, обработанные консервантом указанного состава, довольно быстро подвергаются бактериальному загрязнению, что не позволяет сохранить их диагностические качества на достаточно продолжительный срок.

Технический результат, на достижение которого направлено заявляемое изобретение, заключается в получении нативных эритроцитов, сохраняющих не менее 2 месяцев способность антигенов мембраны связываться с соответствующими клинически значимыми антителами.

Указанный результат достигается тем, что предлагается набор для консервации нативных эритроцитов, применяющихся для выявления антител к антигенам эритроцитов, включающий аденин, глюкозу и лимонную кислоту, состоящий из двух растворов: водного раствора для кратковременного пребывания эритроцитов, содержащего глюкозу, цитрат натрия, лимонную кислоту и бычий сывороточный альбумин при следующем соотношении компонентов (в г/л):

глюкоза 9,0-11,0
цитрат натрия 0,2-0,3
лимонная кислота 0,01-0,02
бычий сывороточный альбумин 0,95-1,05

и водного раствора для хранения эритроцитов, включающего дополнительно маннитол, цитрат натрия и бычий сывороточный альбумин при следующем соотношении компонентов (в г/л):

аденин 0,2-0,4
глюкоза 25,0-35,0
маннитол 6,0-8,0
цитрат натрия 0,2-0,3
лимонная кислота 0,05-0,07
бычий сывороточный альбумин 0,95-1,05
раствор для хранения эритроцитов может дополнительно включать бисептол в количестве 0,02-0,05 г/л
раствор для хранения эритроцитов может также дополнительно включать дифлюкан в количестве 0,01-0,03 г/л

Все компоненты растворов выпускаются промышленностью.

Бисептол - смесь сульфаметоксазола и триметоприма, - вводят в раствор для хранения как комбинированное антибактериальное средство для предотвращения бактериального роста.

Дифлюкан, в котором активным компонентом является флуконазол, вводится как противокандидозное средство.

РН обоих растворов поддерживается в пределах значений 6,5-7,2 с помощью фосфатного солевого буфера.

Раствор для кратковременного пребывания эритроцитов используется для отмывания последних от плазмы вместо физиологического раствора; отмывка в растворе для кратковременного пребывания консервирует состояние эритроцитов, что позволяет предотвратить разрушение эритроцитов и устранить возможную адсорбцию белков на эритроциты; устранение адсорбции белков предотвращает неспецифическую реакцию антигенов при взаимодействии с антителами. Отмытые указанным раствором эритроциты затем хранят в растворе для хранения эритроцитов.

Разделение консервирования на две части способствует лучшему отмыванию и более продолжительному сохранению эритроцитов.

Для проверки консервирующих свойств заявляемого набора была определена активность антигенов непосредственно после заготовки эритроцитов и через 2 месяца хранения в заявляемом консерванте.

Исследование проведено на 32 образцах сыворотки и плазмы, содержащей антитела к антигенам эритроцитов. Эритроциты взаимодействовали с антисыворотками, содержащими антитела к антигенам, присутствующим на тест-эритроцитах: эритроциты А взаимодействовали с сыворотками, содержащими анти-А антитела, и не взаимодействовали с сыворотками анти-В. Эритроциты В взаимодействовали с сыворотками, содержащими анти-В антитела и не взаимодействовали с сыворотками анти-А. Эритроциты 0 ccDEEК-взаимодействовали с сыворотками, содержащими анти-с,-0,-Е, антитела и не взаимодействовали с сыворотками анти-С,-е,-К. Эритроциты О CCDeeK-взаимодействовали с сыворотками, содержащими анти-С,-0,-е антитела, и не взаимодействовали с сыворотками анти-с,-Е,-К. Тест-эритроциты cdeK+ взаимодействовали с сыворотками, содержащими анти-с,-е,-К антитела, и не взаимодействовали с сыворотками анти-0,-С,-Е.

Результаты испытаний представлены в таблице.

При хранении нативных эритроцитов в заявляемом составе не наблюдалось гемолиза эритроцитов и образования сгустков.

Как видно из таблицы, специфичность и активность антигенов эритроцитов в предложенном консерванте сохранялись в течение двух месяцев хранения, что делало их пригодными для использования при определении антител к антигенам эритроцитов. Все это позволяло получить достоверный результат при исследовании антител.

1. Набор для консервации нативных эритроцитов, применяющихся для выявления антител к антигенам эритроцитов, включающий аденин, глюкозу и лимонную кислоту, отличающийся тем, что он состоит из двух растворов: водного раствора для кратковременного пребывания эритроцитов, содержащего глюкозу, цитрат натрия, лимонную кислоту и бычий сывороточный альбумин при следующем соотношении компонентов (в г/л):

глюкоза 9,0-11,0
цитрат натрия 0,2-0,3
лимонная кислота 0,01-0,02
бычий сывороточный альбумин 0,95-1,05

и водного раствора для хранения эритроцитов, включающего дополнительно маннитол, цитрат натрия и бычий сывороточный альбумин при следующем соотношении компонентов (в г/л):
аденин 0,2-0,4
глюкоза 25,0-35,0
маннитол 6,0-8,0
цитрат натрия 0,2-0,3
лимонная кислота 0,05-0,07
бычий сывороточный альбумин 0,95-1,05

2. Набор по п. 1, отличающийся тем, что водный раствор для хранения эритроцитов может дополнительно включать бисептол в количестве 0,02-0,05 г/л.

3. Набор по п. 1, отличающийся тем, что водный раствор для хранения эритроцитов может дополнительно включать дифлюкан в количестве 0,01-0,03 г/л.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к фармацевтической промышленности и медицине, а именно к производству лекарственных препаратов для лечения кислотозависимых заболеваний, таких как язвенная болезнь желудка и двенадцатиперстной кишки, гастроэзофагеальная рефлюксная болезнь (ГЭРБ).

Группа изобретений относится к медицине и касается фармацевтической композиции, содержащей суспензию, которая включает смесь гидрофобной среды и твердой формы, где твердая форма содержит терапевтически эффективное количество октреотида и, по меньшей мере, одну соль жирной кислоты со средней длиной цепи, имеющей длину цепи от 6 до 14 атомов углерода, и полимер, формирующий матрицу, выбранный из декстрана и поливинилпирролидона (PVP), причем соль жирной кислоты со средней длиной цепи присутствует в композиции в количестве 10% по массе или более.
Изобретение относится к области фармацевтики и медицины и касается фармацевтической композиции, обладающей ГАМК-ергической активностью, содержащей 4[(4'-никотиноиламино)бутироиламино]бутановую кислоту, никотиноил гамма-аминомаслянную кислоту, кальциевую соль гомопантотеновой кислоты, тиамин хлорид (витамин В1), рибофлавин (витамин В2), пиридоксин (витамин В6), никотиновую кислоту (витамин В3), никотинамид (витамин В3*), кальция пантотенат (витамин В5), фолиевую кислоту (витамин В9), цианкобаламин (витамин В12) и в качестве вспомогательных веществ тальк, стеарат кальция, стеарат магния, гранулят крахмально-сахарный, или микрокристаллическую целлюлозу, или лактозу, где витамин В1 присутствует в виде двойного гранулята с поливинилпирролидоном и крахмально-сахарным клейстером.
Изобретение относится к препарату с противовоспалительным, бактерицидным, фунгицидным и миотоническим действием. Указанный препарат включает 7,0 - 9,0 мас.% высушенной густой фракции продукта сухой возгонки лещины, 0,025 - 0,033 мас.% анаприлина гидрохлорида, 36,0 - 38,0 мас.% натрия гидрокарбоната, 24,5 - 25,5 мас.% борной кислоты, 12,0 - 16,0 мас.% фталевой кислоты, 5,5 - 7,5 мас.% натрия карбоксиметилцеллюлозы, 0,8 - 1,0 мас.% додецилсульфата натрия, 0,45 - 0,55 мас.% стеарата кальция и 5,5 - 10,8 мас.% глюкозы.
Изобретение относится к фармацевтической композиции в твердой лекарственной форме, обладающей вирусотропной и иммуногенной активностью. Указанная композиция включает в качестве субстанции активного начала глутарилгистамин в количестве 18,0 - 75,0 мас.%, а в качестве вспомогательных веществ - целлюлозу микрокристаллическую в количестве 18,0 - 71,0 мас.%, кроскармеллозу натрия в количестве 0,25 - 1,0 мас.%, кремния диоксид коллоидный в количестве 0,5 - 2,0 мас.%, кальция стеарат в количестве 0,5 - 2,0 мас.% и лактозы моногидрат.
Изобретение относится к чрескожно всасывающемуся препарату, имеющему основу и адгезивный слой, который помещен на основу и который содержит адгезивный агент и лекарственный компонент.
Изобретение относится к области медицины и представляет собой жидкую лекарственную форму кальциевой соли гопантеновой кислоты, обладающую ноотропной активностью, содержащую эффективное количество кальциевой соли гопантеновой кислоты и вспомогательные вещества, при этом она представляет собой капли и в качестве вспомогательных веществ содержит бензойную кислоту, сахаринат натрия, ароматизатор апельсиновый, соляную 1М, Трилон Б и воду.
Изобретение относится к области медицины, в частности к фармацевтической промышленности, и описывает лекарственную форму клопидогрела, выполненную в виде твердой желатиновой капсулы.

Изобретение относится к области химико-фармацевтической промышленности, в частности к созданию аэрозольной композиции, используемой для введения лекарственных средств с помощью ингаляции.

Изобретение относится к области химико-фармацевтической промышленности, в частности к созданию аэрозольной композиции, используемой для введения лекарственных средств с помощью ингаляции.
Изобретение относится к медицине. Описана лекарственная форма для чресслизистого перорального введения, по меньшей мере, одного действующего вещества антиспазмадического и/или анальгетического действия, содержащая упомянутое действующее вещество в форме основания и/или в форме соли, водно-спиртовой раствор, крепостью, по меньшей мере, 35° спирта по массе, причем упомянутое действующее вещество присутствует в водно-спиртовом растворе в состоянии стабильного и полного растворения.

Изобретение относится к медицине, конкретно к имплантируемому устройству, включающему биологически совместимый, биологически разлагаемый полимер, смешанный с TMC278 (рилпивирин) и с одним или несколькими усиливающими высвобождение агентами, выбранными из группы, состоящей из полоксамеров, полисорбатов и сочетания диметилсульфоксида (ДМСО) и поли(винилпирролидона) (ПВП).
Группа изобретений относится к медицине и касается композиции, обладающей действием на центральную нервную систему, в виде раствора, содержащей в своем составе глицин, глицерин, консервант, воду.
Изобретение относится к фармацевтической промышленности и представляет собой стабильную композиция для лечения поражений, связанных с герпес-вирусными инфекциями, в форме, выбранной из кремов и гелей, содержащих трихлоруксусную кислоту в низкой концентрации, при этом количество трихлоруксусной кислоты составляет менее чем 6% (мас./мас.) массы крема или геля.

Изобретение относится к области фармацевтики и пищевой промышленности. Изобретение представляет биологически активный состав в форме ородисперсной таблетки, характеризующийся тем, что содержит дегидроэпиандростерон (DHEA) в качестве активного компонента и инертные наполнители: маннитол, сорбитол, мальтитол, кросповидон, коповидон, скользящее вещество, интенсивный подсластитель и ароматизатор при определенном соотношении компонентов.

Группа изобретений относится к медицине. Описан трансдермально абсорбируемый состав, полученный посредством растворения донепезила в адгезивной основе пластыря, которая содержит гидрофобный полимер и усилитель абсорбции.
Изобретение относится к чрескожно всасывающемуся препарату, имеющему основу и адгезивный слой, который помещен на основу и который содержит адгезивный агент и лекарственный компонент.
Объектом изобретения является способ и фармацевтическая композиция в форме водно-спиртового раствора на основе этанола крепостью 30-600 и 40-70% воды, в котором стабильно и полно растворено по меньшей мере одно гипогликемизирующее действующее вещество, для его применения введением через слизистую ротовой полости в качестве лекарственного средства при точном лечении постпрандиальной гипергликемии диабета II типа у человека или у животного, причем в этой композиции водно-спиртовой раствор имеет объем менее 2 мл, в котором стабильно и полно растворено количество, меньшее или равное 250 мг указанного действующего вещества, а гипогликемизирующее действующее вещество выбрано из липофильных или амфифильных действующих веществ, таких как гликлазид, глиниды, инкретины и глифины.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности и представляет собой способ получения лекарственного средства на основе полипренилфосфатов и бета-ситостерина, заключающийся в предварительном смешивании полипренилфосфатов и сорбита в ступке, размер которой соответствует суммарному объему смешиваемых веществ, при этом между стенкой и/или дном ступки и вводимыми полипренилфосфатами находится слой сорбита, полученную при смешивании смесь полипренилфосфатов в сорбите гомогенизируют, при этом в гомогенизатор добавляют сорбит, сухую смесь полипренилфосфатов в сорбите в соотношении 1:8 и бета-ситостерин, и гомогенизация производится в течение 10 минут в импульсном режиме, причем гомогенизацию осуществляют при скорости вращения 500-700 об/мин в течение 4 минут, 1000-1200 об/мин в течение 2 минут и затем со скоростью 500-600 об/мин в течение 4 минут, при этом при изменении скорости вращения делают перерыв 20 минут, причем после каждой остановки процесса производится интенсивное встряхивание чаши со смесью, после чего полученный порошок просеивают через сито с размером ячейки 20 мкм и, если масса отсева составляет менее 0,1% от массы загруженных ингредиентов, процесс гомогенизации заканчивают.

Группа изобретений относится к коагломератам кристаллического маннита и гранулированного крахмала, способам получения и применению коагломератов. Коагломераты кристаллического маннита и гранулированного крахмала в соотношении маннит/крахмал от 99,5/0,5 до 50/50 имеют способность к таблетированию от 200 Н до 450 Н, степень текучести от 3 до 15 секунд и среднеобъемный диаметр D4,3 частиц по результатам лазерной гранулометрии от 60 до 500 мкм.

Изобретение относится к медицине и представляет собой способ получения терапевтического радиоконъюгата специфически связывающегося вещества с короткоживущим радиоизотопом для доставки в патологические области.
Наверх