Способ определения в кондитерских изделиях микроорганизмов, вырабатывающих липазы


 


Владельцы патента RU 2566561:

Государственное научное учреждение Научно-исследовательский институт кондитерской промышленности Российской академии сельскохозяйственных наук (ГНУ НИИКП Россельхозакадемии) (RU)

Изобретение относится к микробиологии и может быть использовано для определения микроорганизмов, вырабатывающих липазы в кондитерских изделиях. Способ определения в кондитерских изделиях микроорганизмов, вырабатывающих липазы, предусматривает отбор пробы, приготовление из пробы исходного разведения пробы и ряда десятикратных разведений с последующим высевом в две параллельные чашки Петри. Посевы заливают питательной средой, содержащей пептон, хлорид натрия, хлористый кальций, агар, жировую эмульсию и краситель спиртовой синий в заданных соотношениях компонентов и инкубируют при температуре 30±1°С в течение 48±3 ч в аэробных условиях. После инкубирования посевов производят подсчет колоний типичных микроорганизмов, вырабатывающих липолитические ферменты, к которым относят колонии, имеющие вокруг и/или под ними синее окрашивание, и/или белое помутнение среды. 1 ил.

 

Изобретение относится к пищевой промышленности, а именно к кондитерской отрасли, в частности к способам определения микроорганизмов, вырабатывающих липапзы в кондитерских изделиях.

Известен способ определения количества липолитических микроорганизмов в пищевой промышленности, в частности в молочных продуктах по MP 2.3.2.2327-08 «Методические рекомендации по организации производственного микробиологического контроля на предприятиях молочной промышленности (с атласом значимых микроорганизмов)» и метод с использованием питательной среды - Агар с трибутерином фирмы Himedia.

В соответствии с MP 2.3.2.2327-08 метод определения общего количества микроорганизмов, обладающих липолитической активностью (липолитических микроорганизмов), основан на подсчете колоний микроорганизмов, вырастающих на плотной питательной среде КМАФАнМ (ГОСТ 10444.15), залитой в чашки Петри на тонкий слой застывшего жира при 20-23°C в течение 5-6 сут и дающих зоны просветления вокруг колоний в результате разложения жира под действием липолитических ферментов.

Агар с трибутерином фирмы Himedia состоит из основы агара для липолитических микроорганизмов и трибутирина. Эта среда используется для определения и подсчета липолитических микроорганизмов в пищевых продуктах и других материалах. Посевы инкубируют при температуре 35-38°C в течение 24-48 ч. После инкубирования посевов подсчитывают количество типичных колоний, выросших на чашках Петри. Рост типичных липолитических микроорганизмов наблюдается в виде колоний, имеющих вокруг них изменение цвета и прозрачности среды.

Однако до настоящего времени применение известных в пищевой промышленности методов определения липолитических микроорганизмов не позволяет с достаточной достоверностью и точностью определять микроорганизмы, вырабатывающие липазы в кондитерских изделиях, поскольку использование известных приемов, режимов культивирования и питательных сред не позволяет выявить все микроорганизмы, вырабатывающие липазы в кондитерских изделиях - большинство микроорганизмов - типичных представителей микрофлоры кондитерских изделий не проявляют признаков роста или не образуют типичных для липолитических микроорганизмов колоний.

Технической задачей заявленного изобретения является создание способа, позволяющего визуально определить общее количество микрооорганизмов, вырабатывающих липазы в кондитерских изделиях.

Технический результат, достигаемый предлагаемым способом, заключается в том, что способ позволяет наиболее объективно и достоверно выявить количество микроорганизмов, вырабатывающих липазы в кондитерских изделиях.

Для достижения поставленной задачи способ направлен на определение в кондитерских изделиях микроорганизмов, вырабатывающих липазы, путем культивирования проб в условиях, позволяющих визуально выделить из общего количества микроорганизмов, содержащихся в кондитерских изделий, микроорганизмы, вырабатывающие липазы. Способ включает отбор пробы, приготовление исходного и ряда десятикратных разведений, высев в две параллельные чашки Петри из каждого разведения по 1 см3 и заливку питательной средой, содержащей пептон, хлорид натрия, хлористый кальций, агар, жировую эмульсию и краситель спиртовой синий, последующую инкубацию посевов при температуре (30±1)°C в течение (48±3) ч в аэробных условиях и подсчет колоний типичных микроорганизмов, к которым относят колонии, имеющие вокруг и/или под ними синее окрашивание, и/или белое помутнение среды.

Результаты подсчета количества колоний пересчитывают на 1 г (см3) кондитерского изделия по ГОСТ 26670.

Количество микроорганизмов в 1 г (см3) кондитерского изделия M вычисляют по формуле M=N/m*C, где N - степень разведения навески; m - количество инокулята, внесенное на чашку Петри, см3; С - округленное среднеарифметическое значение числа колоний.

Рост микроорганизмов, вырабатывающих липазы, наблюдается в виде колоний, имеющих вокруг них и/или под ними, либо синее окрашивание, либо белое помутнение среды, вызываемое продуктами разложения жиров (рис. 1).

В результате проведенных исследований разработанный способ определения в кондитерских изделиях микроорганизмов, вырабатывающих липазы, основан на способности продуктов разложения жиров снижать прозрачность среды, вступая в реакцию с солями, и изменять окраску среды в присутствии красителя.

Инкубацию посевов ведут при температуре (30±1)°C в течение (48±3) ч в аэробных условиях. Такой температурный и временной режим установлен в результате специфики микрофлоры исследуемых образцов (кондитерские изделия). Питательная среда содержит пептон, хлорид натрия, хлористый кальций, агар, жировую эмульсию и краситель спиртовой синий, компоненты подобраны с учетом специфики микрофлоры кондитерских изделий. Количественное соотношение компонентов 10:5:0,1:20:500:0,06

Способ осуществляют следующим образом.

Проводят отбор пробы кондитерского изделия способом, согласно ГОСТ Ρ 54004-2010 «Продукты пищевые. Методы отбора проб для микробиологических испытаний». Затем 10 г пробы кондитерского изделия ассептически переносят в 100 мл стерильной воды, тщательно перемешивают и готовят исходное и ряд десятикратных разведений согласно ГОСТ 26669 так, чтобы можно было определить в продукте предполагаемое количество микроорганизмов. Из каждого соответствующего разведения по 1 см3 высевают в две параллельные чашки Петри. Посевы заливают трехкомпонентной агаризованной питательной средой, содержащей пептон, хлорид натрия, хлористый кальций, агар, жировую эмульсию и краситель спиртовой синий. Количественное соотношение компонентов 10:5:0,1:20:500:0,06. Посевы инкубируют при температуре (30±1)°C в течение (48±3) ч в аэробных условиях. После инкубирования посевов отбирают чашки Петри, на которых выросло от 15 до 300 колоний и подсчитывают количество типичных колоний, выросших на чашках Петри. Рост типичных микроорганизмов, вырабатывающих липолитические ферменты, наблюдается в виде колоний, имеющих вокруг них и/или под ними, либо синее окрашивание, либо белое помутнение среды, вызываемое продуктами разложения жиров.

Результаты подсчета количества колоний пересчитывают на 1 г (см3) кондитерского изделия. Количество микроорганизмов в 1 г (см3) кондитерского изделия Μ вычисляют по формуле M=N/m × С.

Способ определения в кондитерских изделиях микроорганизмов, вырабатывающих липазы, путем отбора пробы, приготовления исходного и ряда десятикратных разведений, высева в две параллельные чашки Петри из каждого разведения по 1 см3 и заливки питательной средой, содержащей пептон, хлорид натрия, хлористый кальций, агар, жировую эмульсию и краситель спиртовой синий, при соотношении компонентов 10:5:0,1:20:500:0,06 соответственно, последующей инкубацией посевов при температуре 30±1°C в течение 48±3 ч в аэробных условиях и подсчета колоний типичных микроорганизмов, к которым относят колонии, имеющие вокруг и/или под ними синее окрашивание, и/или белое помутнение среды.



 

Похожие патенты:

Способ дифференциации возбудителей чумы и псевдотуберкулеза по N-ацетил-β-D-глюкозаминидазной активности предусматривает получение суспензии агаровой культуры исследуемых бактерий в концентрации (1-5)×109 м.к., подготовку синтетического субстрата, в качестве которого используют 4-метилумбеллиферил-N-ацетил-β-D-глюкозаминид в количестве 50 мкМ.

Изобретение относится к области биотехнологии и касается применения штамма Rickettsia sibirca subsp. sibirica.

Изобретение относится к области биотехнологии и касается применения штамма Rickettsia slovaca. Представлено применение штамма Rickettsia slovaca "Карпунино-19/69", депонированного во Всероссийском музее риккетсиозных культур ФГБУ НИИЭМ им.

Представленное изобретение относится к области биотехнологии и касается способа обнаружения провируса лейкоза крупного рогатого скота. Охарактеризованный способ включает выявление фрагмента LTR (Long Terminal Repeat) - последовательности провируса лейкоза.

Группа изобретений относится к области лизиса клеток. Предложен способ избирательного лизиса животных клеток, а также прибор для обнаружения микроорганизмов.

Изобретения относятся к области медицинской микробиологии и касаются способа дифференциации токсигенных генетически измененных штаммов V.cholerae биовара Эль Тор и тест-системы.

Изобретение относится к медицинской микробиологии. Может быть использовано для культивирования и идентификации урогенитальных микоплазм, в частности Mycoplasma hominis.
Группа изобретений относится к биотехнологии. Варианты питательной среды для селективного накопления энтеробактерий содержат панкреатический гидролизат рыбной муки, либо пептон мясной, либо панкреатический гидролизат рыбной муки и пептон мясной (в соотношении 1:1), желчь очищенную модифицированную (ЖОМ), натрий хлористый, глюкозу, калий фосфорнокислый однозамещенный и бриллиантовый зеленый в заданном соотношении.
Изобретение касается набора олигонуклеотидных праймеров и зондов для идентификации и субтипирования ДНК бактерии Pasteurella multocida серотипов А, B, D, E, F методом ПЦР в режиме реального времени.

Изобретение касается набора флуоресцентно-меченых олигонуклеотидных зондов для типирования штаммов Burkholderia mallei. Входящие в состав набора зонды имеют структуру «шпильки» с флуорофором и гасителем флуоресценции на концах и обладают комплементарностью к продуктам реакции амплификации с праймерами.
Изобретение относится к пищевой микробиологии, в частности к получению питательной среды для определения в кондитерских изделиях, микроорганизмов, вырабатывающих липазы.

Группа изобретений относится к биотехнологии. Предложены способ получения лизогликолипида, способ биоконверсии гликолипидов и способ получения пищевого продукта.
Группа изобретений относится к биотехнологии и пищевой промышленности. Предложен способ получения биокатализатора для переэтерификации жиров.

Изобретение относится к области биотехнологии. Предложены варианты способа получения сложных метиловых эфиров жирных кислот (биодизеля) в микроводной системе, не содержащей растворителей.

Изобретение относится к биотехнологии, а именно к рекомбинантной плазмидной ДНК, кодирующей ферментативно-активную часть полипептида липазы, белка пищеварительного тракта пчелиной огневки длиной в 504 аминокислотных остатков.

Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой штамм бактерий Bacillus licheniformis ВКПМ В-11302 - продуцент термостабильной липазы. При ферментации полученного штамма в 3 л лабораторном ферментере активность фермента в культуральной жидкости достигает уровня 500 ЕД/мл.
Изобретение относится к биотехнологии и медицине и может быть использовано для получения препаратов-пребиотиков. .
Изобретение относится к области биохимии. .

Изобретение относится к области биохимии. .
Изобретение относится к области биохимии. .

Способ дифференциации возбудителей чумы и псевдотуберкулеза по N-ацетил-β-D-глюкозаминидазной активности предусматривает получение суспензии агаровой культуры исследуемых бактерий в концентрации (1-5)×109 м.к., подготовку синтетического субстрата, в качестве которого используют 4-метилумбеллиферил-N-ацетил-β-D-глюкозаминид в количестве 50 мкМ.
Наверх