Питательная среда плотная для культивирования бруцелл

Изобретение относится к микробиологии и биотехнологии. Питательная среда для культивирования бруцелл содержит ферментативный гидролизат желатина, ферментативный гидролизат рыбной муки, дрожжевой экстракт, натрий хлористый, глюкозу, натрий сернистокислый пиро, агар микробиологический и дистиллированную воду в заданном соотношении компонентов. Изобретение позволяет сократить сроки культивирования бруцелл. 1 табл., 3 пр.

 

Изобретение относится к микробиологии и биотехнологии, а именно к получению питательных сред для выращивания бруцелл.

Известна питательная среда-заменитель «Альбими»-агара, состав которой следующий: 20 г сухого пептона, 20 мл дрожжевой воды, 5 г химически чистого хлористого натрия, 20 г агар-агара, 1 г глюкозы, 0,1 г бисульфита натрия, 1 л дистиллированной воды (МУ 3.1.7.1189-03 «Профилактика и лабораторная диагностика бруцеллеза людей»).

Недостатком данной питательной среды является ее нестандартность, в ряде случаев непрозрачность, что мешает изучению вырастающих колоний, при ее использовании отмечается замедленный и непостоянный рост бруцелл.

Известна питательная среда для выделения и культивирования бруцелл сухая (эритрит агар), выпускаемая филиалом ФГУП «Микроген», г. Махачкала, состоящая из следующих компонентов, г/л: питательный агар сухой - 35,0; тиаминбромид - 0,005; эритрит - 0,0122; глюкоза - 1,0; натрий хлористый - 5,9; агар микробиологический - 11,2; вода дистиллированная до 1 л.

Недостатками данной среды являются возможность диссоциации изучаемых культур бруцелл при пересевах на этом агаре, а также появление колоний бруцелл диаметром 0,5-1,5 мм только через 72 ч инкубации.

Наиболее близкой к предлагаемому изобретению является питательная среда для культивирования бруцелл сухая (бруцеллагар), выпускаемая ФГУН ГНЦ ПМБ (Оболенск), содержащая, г/л: панкреатический гидролизат рыбной муки - 7,5; пептон ферментативный - 7,5; панкреатический гидролизат казеина - 10,0; стимулятор роста гемофильных микроорганизмов - 5,0; глюкозу - 2,0; дрожжевой экстракт - 3,0; натрий хлористый - 3,5; тиамина хлорид - 0,005; эритрит - 0,012; агар микробиологический - 10,0±3,0; воду дистиллированную до 1 л, совокупность существенных признаков которой наиболее близка к совокупности существенных признаков плотной питательной среды предлагаемого изобретения.

Недостатком данной среды является то, что разлитая по чашкам Петри она имеет коричневый цвет, может содержать темно-коричневые вкрапления. Высокая цветность, неудовлетворительная прозрачность наряду с малым размером колоний (0,1-0,5 мм) через 48 часов инкубации затрудняют обнаружение колоний бруцелл в указанный срок.

Целью предлагаемого изобретения является создание питательной среды, имеющей незначительную опалесценцию, слабоокрашенной, обеспечивающей через 46 часов инкубации рост лабораторных штаммов бруцелл в виде колоний размером, не менее чем в 1,5 раза превышающем размер колоний, вырастающих на используемых в настоящее время средах (среде-прототипе).

Поставленная цель достигается тем, что в качестве основного источника азотистого питания в предлагаемой среде используется ферментативный гидролизат желатина в сочетании с ферментативным гидролизатом рыбной муки, в качестве стимуляторов роста - дрожжевой экстракт и глюкоза, для поддержания изотоничности среды и окислительно-восстановительного потенциала - натрий хлористый и метабисульфит натрия соответственно, для гелеобразования - агар микробиологический, а также дистиллированную воду, при следующем соотношении ингредиентов, г/л:

Ферментативный гидролизат желатина (из расчета содержания в 1 л среды сухих веществ) 7,0-9,0
Ферментативный гидролизат рыбной муки (из расчета содержания в 1 л среды сухих веществ) 3,0-5,0
Дрожжевой экстракт 1,0-3,0
Натрий хлористый 4,0-6,0
Глюкоза 0,5-2,0
Метабисульфит натрия 0,05-0,2
Агар микробиологический 7,0-11,0
Вода дистиллированная до 1 л

В качестве исходного сырья используют желатин ГОСТ 11293-89, марка П-11, приготовленный из костной ткани и мягкого коллагенсодержащего сырья от переработки шкур крупного рогатого скота и свиней. Желатин, в отличие от других белковых продуктов, содержит повышенное количество глицина, однако в нем почти нет серосодержащих аминокислот и триптофана (Скурихин И.М., Тутельян В.А. Таблицы химического состава и калорийности российских продуктов питания: Справочник. - М.: ДеЛи принт, 2007. - 276 с.).

Рыбную муку по ГОСТ 2116-2000 изготавливают из рыб, морских млекопитающих, ракообразных, беспозвоночных, а также из отходов, полученных при их переработке. В ней, в зависимости от вида исходного сырья, регламентировано содержание сырого протеина (не менее 36-50%), влаги (не более 10-13%), жира (не более 10-18%), фосфора (не более 5,0-5,5%), натрия хлорида (не более 5%), кальция (не более 13%). Кормовая ценность рыбной муки обусловлена высоким содержанием полноценного по аминокислотному составу белка, витаминов группы В, микроэлементов.

Дрожжевой экстракт используют в качестве полноценного и дешевого источника факторов роста микроорганизмов, что повышает ростовые свойства предлагаемой питательной среды. Дрожжи содержат до 53% белка, 25-40% углеводов и являются богатым источником витаминов группы В, витамина Д и других факторов роста - пуриновых и пиримидиновых оснований (Поляк М.С., Сухаревич В.И., Сухаревич М.Э. Питательные среды для медицинской микробиологии. - СПб.: Элби - СПб., 2002, с. 14).

Глюкоза является легкодоступным источником углерода для обеспечения роста бруцеллезного микроба. Она также выполняет роль редуцирующего вещества, связывающего токсичные перекисные соединения.

Натрий хлористый поддерживает осмотическое давление среды на уровне, необходимом для сохранения жизнедеятельности микроорганизмов.

Натрий сернистокислый пиро регулирует окислительно-восстановительный потенциала среды и является серосодержащим веществом.

Агар микробиологический обеспечивает требуемую консистенцию препарата.

Определение сухих веществ основано на удалении влаги путем выпаривания исследуемого раствора и последующего взвешивания остатка, высушенного до постоянного веса (МУК 4.2.2316-08 «Методы контроля бактериологических питательных сред»).

Дополнительное использование в предлагаемой питательной среде в качестве белковой основы гидролизата желатина и введение в ее рецептуру натрия сернистокислого пиро является отличительным признаком и позволяет улучшить качественные показатели, а также упростить и удешевить получение среды.

Технология приготовления ферментативных гидролизатов белкового сырья

Ферментативный гидролиз белкового сырья - желатина и рыбной муки, проводят однотипно. Желатин пищевой и рыбную муку взвешивают по 0,8 кг, помещают в кастрюли эмалированные емкостью 9 л, приливают по 7,0 л холодной дистиллированной воды, перемешивают и отставляют на 1 час для набухания. Затем содержимое кастрюль нагревают до температуры 40°С, устанавливают рН 8,0-8,4 20% раствором натрия гидроокиси, добавляют 0,4 кг фарша поджелудочной железы, дважды пропущенной через мясорубку, переливают в стеклянные бутыли вместимостью 10 л. В бутыли добавляют по 80 мл хлороформа, закрывают их резиновыми пробками, перемешивают, помещают в термостатную. В течение первых 2-х часов рН гидролизатов каждые 15 мин проверяют и поддерживают в пределах 7,6-8,0. Через 2 часа от начала гидролиза проверяют и при необходимости устанавливают рН в пределах 7,6-7,8 20% раствором натрия гидроокиси, перемешивают и помещают в термостатную комнату с температурой (38±1)°С. Последующие перемешивания проводят через каждые 30-60 мин. Длительность гидролиза 1-2 сут. Об окончании гидролиза судят по достижению аминного азота 0,35-0,45% в гидролизате желатина и 0,3-0,4% в гидролизате рыбной муки.

По окончании процесса гидролиза рН гидролизатов устанавливают в пределах 4,5-4,7 18% раствором соляной кислоты, гидролизаты нагревают до кипения и кипятят в течение 1 мин, охлаждают в течение 5-10 мин и фильтруют через бумажные или полотняные фильтры. Затем гидролизаты защелачивают до рН 7,8-8,0 20% раствором гидроокиси натрия, нагревают до кипения, кипятят в течение 1-2 мин, охлаждают до 60-70°С и фильтруют через бумажные или полотняные фильтры в стеклянные бутыли вместимостью 10 л. К профильтрованным гидролизатам после их охлаждения добавляют 2% хлороформа. Бутыли герметично закрывают резиновыми пробками, перемешивают и помещают в холодовую, где хранят при температуре 2-8°С.

Питательную среду на основе ферментативных гидролизатов желатина и рыбной муки для выращивания бруцелл готовят следующим способом.

Берут ферментативные гидролизаты желатина и рыбной муки из расчета содержания сухих веществ в 1 л среды 8,0 г гидролизата желатина и 4,0 г гидролизата рыбной муки, вливают их в эмалированную кастрюлю, добавляют дрожжевой экстракт 2,0 г; натрия хлорид 5,0 г; глюкозу 1,0 г; натрий сернистокислый пиро 0,1 г; агар микробиологический 8,0 г; дистиллированную воду до 1 л, устанавливают рН в пределах 7,1-7,3 20% раствором натрия гидроокиси или 18% раствором соляной кислоты. Тщательно перемешивая, нагревают до кипения и кипятят в течение 2 мин. Фильтруют через ватно-марлевый фильтр.

Профильтрованную среду разливают по 150 или 300 мл в бутылки вместимостью 250 или 450 мл соответственно, которые укупоривают ватно-марлевыми пробками, сверху закрывают пергаментной бумагой и бумагой крафт. Стерилизуют при 1,0 атм в течение 15 мин, остужают, затем разливают в стерильные чашки Петри, просушивают в течение 30 мин и используют для посева.

Оценку ростовых свойств питательной среды плотной для культивирования бруцелл проводили путем измерения диаметра и подсчета количества выросших колоний бруцелл при посеве.

Ростовые свойства полученной среды оценивали с помощью тест-культур В.abortus 19 ВА и В.melitensis Rev I. Тест-культуры выращивали на поверхности скошенного эритрит-агара при температуре 37°С в течение (46±2) ч. Двухсуточные культуры тест-штаммов бруцелл смывали с поверхности скошенного агара 0,9% раствором натрия хлорида, доводили концентрацию микробных взвесей до 10 единиц эквивалентных 1,7×109 бруцелл в 1 мл, по оптическому стандарту мутности ОСО 42-28-85П ГИСК им. Л.А. Тарасевича, полученные микробные взвеси культур разводили сначала до концентрации 1×109 м.к./мл и затем десятикратными разведениями до 1×103 м.к./мл. В процессе разведения перенос взвеси в следующую пробирку производили стерильной пипеткой объемом 1 мл, меняя пипетку для каждого разведения.

Контроль плотных питательных сред. По 0,1 мл взвеси каждого тест-штамма В.melitensis Rev I, В.abortus 19 ВА из разведений 10-6 (100 м.к./мл) высевали на 9 чашек Петри каждого варианта предлагаемой среды и среды сравнения и равномерно распределяли покачиванием по всей поверхности. Средой сравнения служил заранее проверенный агар высокого качества (Бруцеллагар). Посевы инкубировали при температуре (37±1)°С. Учет результатов посевов проводили через 46 и 72 ч инкубации.

Пример 1. Тест-штаммы выращивали на питательной среде, содержащей, г/л: ферментативного гидролизата желатина (из расчета содержания в 1 л среды сухих веществ) 7,0; ферментативного гидролизата рыбной муки (из расчета содержания в 1 л среды сухих веществ) 3,0; дрожжевого экстракта 1,0; натрия хлорида 4,0; глюкозы 0,5; натрия сернистокислого пиро 0,05; агара микробиологического 7,0; воды дистиллированной 1 л.

Пример 2. Тест-штаммы выращивали на питательной среде, содержащей, г/л: ферментативного гидролизата желатина (из расчета содержания в 1 л среды сухих веществ) 8,0; ферментативного гидролизата рыбной муки (из расчета содержания в 1 л среды сухих веществ) 4,0; дрожжевого экстракта 2,0; натрия хлорида 5,0; глюкозы 1,0; натрия сернистокислого пиро 0,1; агара микробиологического 9,0; воды дистиллированной 1 л.

Пример 3. Тест-штаммы выращивали на питательной среде, содержащей, г/л: ферментативного гидролизата желатина (из расчета содержания в 1 л среды сухих веществ) 9,0; ферментативного гидролизата рыбной муки (из расчета содержания в 1 л среды сухих веществ) 5,0; дрожжевого экстракта 2,0; натрия хлорида 6,0; глюкозы 2,0; натрия сернистокислого пиро 0,2; агара микробиологического 11,0; воды дистиллированной 1 л.

Полученные в примерах результаты обобщены в таблице 1.

Таким образом, заявленная питательная среда для культивирования бруцелл (пример №2) является оптимальной по количеству подобранных ингредиентов, что позволяет получить достаточное количество колоний максимального размера в ранние сроки (через 46±2 ч).

Предлагаемая среда обладает более оптимальными ростовыми свойствами по сравнению с известной: при приблизительно одинаковом количестве колоний их диаметр через 46 и 72 ч инкубации на предлагаемой среде в 1,5-2 раза превышал диаметр колоний, выросших на известной среде. По показателям прозрачности и цветности предлагаемая среда также превосходит известную.

Улучшенные биологические свойства предлагаемой среды наряду с ее прозрачностью и незначительной цветностью облегчают обнаружение возбудителей бруцеллеза при бактериологических исследованиях, повышают эффективность работ, связанных с культивированием бруцелл. Среда проста в приготовлении, не содержит дефицитных и дорогостоящих компонентов.

Рентабельность среды составляет 31%.

Питательная среда плотная для культивирования бруцелл, содержащая, г/л:

ферментативный гидролизат желатина
(из расчета содержания в 1 л среды сухих веществ) 7,0-9,0
ферментативный гидролизат рыбной муки
(из расчета содержания в 1 л среды сухих веществ) 3,0-5,0
дрожжевой экстракт 1,0-3,0
натрия хлорид 4,0-6,0
глюкоза 0,5-2,0
натрий сернистокислый пиро 0,05-0,3
агар микробиологический 7,0-11,0
вода дистиллированная до 1 л



 

Похожие патенты:
Изобретение относится к биотехнологии. Штамм Lactobacillus fermentum В1-I, обладающий высокой антагонистической активностью, депонирован во Всероссийской Коллекции Промышленных Микроорганизмов под регистрационным номером ВКПМ В-10888 и может быть использован при производстве кисломолочных продуктов и пробиотических препаратов.

Штаммы spnk // 2580015
Изобретения относятся к области молекулярной генетики и касаются способов преобразования продуцирующего спиносад штамма Saccharopolyspora spinosa в штамм, продуцирующий предшественника спинеторама (варианты), и генетически модифицированной клетки-хозяина Saccharopolyspora spinosa.

Изобретение относится к биотехнологии и может применяться в молочной промышленности. Предлагается способ культивирования молочнокислых бактерий в молоке.
Изобретение относится к биотехнологии, а именно к производству биопрепаратов - пробиотиков. Способ предусматривает выделение бифидобактерий и лактобактерий из фекалий хозяина.

Группа изобретений относится к вариантам штамма молочнокислых бактерий, устойчивых к низину, и их применению для получения ферментированных молочных продуктов с пониженным пост-окислением.

Группа изобретений относится к реутерин-вырабатывающему штамму Lactobacillus brevis и его использованию. Предложен способный накапливать реутерин штамм Lactobacillus brevis CNCM I-4431.

Группа изобретений относится к биотехнологии и сельскому хозяйству. Предложены пестицидная композиция, включающая изолированный штамм Burkholderia sp.
Изобретение относится к биотехнологии. Штамм Lactobacillus helveticus депонирован во Всероссийской Коллекции Промышленных Микроорганизмов под регистрационным номером ВКПМ В-11175 и может быть использован для производства кисломолочных продуктов и пробиотических препаратов.

Изобретение относится к биотехнологии. Штамм бактерий Enterococcus faecium 18 депонирован в Государственной коллекции микроорганизмов нормальной микрофлоры ФБУН «МНИИЭМ им Г.Н.

Группа изобретений относится к области биохимии. Предложен способ контроля размножения Pseudomonas и применение дезинфицирующего средства.

Группа изобретений относится к вариантам композиции, способной увеличивать образование масляной кислоты в толстом кишечнике. Предложена неферментированная композиция, включающая по меньшей мере один злак и по меньшей мере один изолированный пробиотический штамм Lactobacillus rhamnosus. В качестве злака используют ячмень в количестве от 40 вес.% указанной композиции. Предложена также сухая неферментированная композиция, в которой в качестве злака содержится ячмень в виде пивной дробины, а по меньшей мере один изолированный штамм Lactobacillus присутствует в количестве, достаточном для обеспечения 106-1014 КОЕ/день, предпочтительно 108-1012 КОЕ/день, более предпочтительно 109-1011 КОЕ/день. Группа изобретений обеспечивает сохранение здоровой слизистой оболочки кишечника, а также усиленную барьерную функцию слизистой оболочки кишечника. 2 н. и 16 з.п. ф-лы, 1 ил., 7 табл.
Изобретение относится к области биотехнологии. Способ выращивания и разведения чайного гриба предусматривает культивирование чайного гриба в условиях аэрации при температуре 23-25°C в слабом растворе чая с растворенным в нем сахаром, выдержку в течение 5-6 дней, процеживание и слив готового напитка чайного гриба в банку-приемник в количестве 450-500 мл. Полученный напиток чайного гриба накрывают марлей и выдерживают при комнатной температуре 30-36 часов до появления на поверхности напитка слоя чайного гриба с последующим добавлением слабого раствора чая с сахаром и доведением объема до 1,5-2,0 л. Изобретение позволяет сократить сроки созревания чайного гриба. 3 пр.
Изобретение относится к биотехнологии. Штамм Lactobacillus helveticus М-16, обладающий высокой антагонистической активностью, депонирован во Всероссийской Коллекции Промышленных Микроорганизмов под регистрационным номером ВКПМ В-11176 и может быть использован при производстве кисломолочных продуктов и пробиотических препаратов. Изобретение позволяет получить более вязкий молочный сгусток. 1 пр.

Изобретение относится к медицинской микробиологии. Питательная среда для выделения Legionella pneumophila содержит автолизат селезенки КРС, агар микробиологический, уголь активированный, калия фосфат однозамещенный, калия фосфат двузамещенный, мезоинозит, L-цистеин, соль Мора, полимиксин, ванкомицин, амфотерицин и дистиллированную воду в заданном соотношении компонентов. Изобретение позволяет повысить чувствительность питательной среды к Legionella pneumophila. 3 табл., 6 пр.

Изобретение касается средства, обладающего противовирусной активностью относительно вирусов гриппа, осповакцины (ВОВ), вируса оспы мышей (ВОМ) и вируса герпеса 2-го типа (ВПГ-2) Представлено средство на основе нуклеазы бактерий рода Serratia. В качестве источника нуклеазы бактерий рода Serratia оно содержит очищенную культуральную жидкость штамма бактерий Serratia plymuthica, имеющую РНКазную активность от 109,0 до 926 ед/мл и содержание белка от 3,6 до 13,5 мг/мл. В качестве штамма бактерий Serratia plymuthica может быть использован штамм бактерий Serratia plymuthica Dg-91, или Dg-98, или Bp-868, или Az-372, депонированные в коллекции бактерий, бактериофагов и грибов Федерального бюджетного учреждения науки «Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии «Вектор» под регистрационными номерами B-1288, или B-1297, или B-1296, или B-1285 соответственно. Изобретение может быть использовано в медицине, микробиологической промышленности. 5 з.п. ф-лы, 4 табл., 22 пр.
Изобретение относится к микробиологии. Предлагается способ усиления бактериальной адгезии к вагинальным эпителиоцитам. Получают вагинальные эпителиоциты, освобождают их от сопутствующей микрофлоры, инкубируя в среде Хенкса с добавлением цефтриаксона и лизоцима. Эпителиоциты отмывают физиологическим раствором и готовят взвесь в цитратно- фосфатном буфере, смешивают с раствором фибронектина, стабилизированным буферным раствором. Инкубируют, отмывают неадсорбированный фибронектин буферным раствором. Из суточной культуры исследуемых бактерий готовят микробную взвесь и смешивают ее с эпителиоцитами, обработанными фибронектином. Об усилении адгезии бактерий к вагинальным эпителиоцитам судят по увеличению индекса и показателя адгезии в опыте по сравнению с контролем. Изобретение позволяет усилить адгезию бактерий к вагинальным эпителиоцитам. 2 табл., 1 пр.

Изобретение относится к биотехнологии и предназначено для получения биоразрушаемых сополимеров 3-гидроксимасляной и 4-гидроксимасляной кислот [П(3ГБ/4ГБ)], обладающих свойствами эластомеров, перспективных для различных сфер применения: в медицине, в фармакологии. Способ предусматривает культивирование природного штамма Cupriavidus eutrophus ВКПМ В-10646 или природного штамма Ralstoniaeutropha ВКПМ В8562 на ростовой среде, содержащей в качестве основного источника углерода олеиновую кислоту в сочетании с глицерином или олеиновую кислоту в сочетании с подсолнечным маслом, или глицерин в сочетании с подсолнечным маслом с добавками субстрата-предшественника с одновременным лимитированием роста бактерий по азоту и сере. В качестве субстрата-предшественника используют 1,4-бутандиол в сочетании с хлормасляной кислотой. Причем 1,4-бутандиол и хлормасляную кислоту вносят одноразово или дважды, или трижды. Изобретение позволяет получить технологичные эластичные изделия, повысить выход и снизить кристалличность сополимера со стабильными значениями молекулярной массы. 7 ил., 2 табл., 7 пр.

Изобретение относится к области биотехнологии и касается штамма риккетсий "Приморье - 25/81". Охарактеризованный штамм является представителем вида Rickettsia heilongjiangensis. Изолирован на территории РФ. Штамм является патогеном человека и депонирован во Всероссийском музее риккетсиозных культур ГУ НИИЭМ им. Н.Ф.Гамалеи под №159. Изобретение может быть использовано для идентификации риккетсий группы клещевой пятнистой лихорадки и получения диагностических препаратов. 3 пр.

Группа изобретений относится к области обработки сточных вод. Предложен способ биологической обработки сточных вод (варианты) и способ с интегрированной фиксированной пленкой активного ила для удаления аммония из сточных вод. Способ обработки включает отделение первичного ила от сточных вод с образованием первичного эффлюента, биологическую обработку сточных вод в реакторе с образованием вторичного эффлюента и вторичного ила, обработку первичного и вторичного ила. Обработка включает образование сброженного ила, обезвоживание сброженного ила для образования иловой воды, направление иловой воды в биопленочный реактор деаммонификации, выращивание биомассы, которая обогащена аммоний-окисляющими и анаммокс-бактериями, на носителях биопленки для одновременной нитрификации и денитрификации аммония. После обработки осуществляют приведение вторичного эффлюента в контакт с биомассой и использование биомассы для уменьшения концентрации аммония во вторичном эффлюенте. Далее осуществляют восстановление биомассы посредством контактирования биомассы с иловой водой и продолжение поочередного контактирования биомассы с вторичным эффлюентом и иловой водой. Изобретения обеспечивают эффективное снижение концентрации аммония в сточных водах. 6 н.з. и 19 з.п.ф-лы, 9 ил.

Предложен штамм Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus (L. bulgaricus), способный ингибировать адгезию штаммов Helicobacter pylori к эпителиальным клеткам. Штамм депонирован в CNCM под номером I-4428. Предложен также молочный продукт, способный снижать нагрузку H. pylori у индивидуума, инфицированного H. pylori, и содержащий указанный штамм L. bulgaricus. Группа изобретений обеспечивает значительное уменьшение интенсивности инфицирования H. pylori. 2 н. и 5 з.п. ф-лы, 3 ил., 1 табл., 2 пр.

Изобретение относится к микробиологии и биотехнологии. Питательная среда для культивирования бруцелл содержит ферментативный гидролизат желатина, ферментативный гидролизат рыбной муки, дрожжевой экстракт, натрий хлористый, глюкозу, натрий сернистокислый пиро, агар микробиологический и дистиллированную воду в заданном соотношении компонентов. Изобретение позволяет сократить сроки культивирования бруцелл. 1 табл., 3 пр.

Наверх