Способ дифференциации энтерококков кишечной микрофлоры животных

Изобретение относится к биотехнологии. Способ предусматривает забор исследуемого материала, посев его на селективные питательные среды, инкубирование посевов при заданных параметрах с последующей идентификацией выросших колоний. Из выросших колоний проводят выделение и идентификацию чистой культуры энтерококков до вида известными способами с последующим определением у выделенных энтерококков антикарнозиновой активности (АКрА). При этом энтерококки, не обладающие антикарнозиновой активностью (АКрА) или обладающие антикарнозиновой активностью (АКрА ) при уровне выраженности данного признака, равном или меньше 1,9 мг/мл, относятся к нормальной кишечной микрофлоре животных. Изобретение позволяет упростить способ и дифференцировать энтерококки кишечной микрофлоры на нормальную и патогенную микрофлору. 2 табл., 1 пр.

 

Изобретение относится к ветеринарии и может быть использовано в практической работе бактериологических лабораторий для дифференциации энтерококков кишечной микрофлоры животных на нормальную и патогенную микрофлору с целью проведения своевременных и эффективных профилактических и терапевтических мероприятий.

Энтерококки, входящие в состав нормальной микрофлоры желудочно-кишечного тракта млекопитающих, играют важную роль в обеспечении колонизационной резистентности слизистой оболочки, стимулируют местный гуморальный и клеточный иммунитет, а также участвуют в метаболических реакциях (гидролиз сахаров, синтез витаминов, деконъюгирование желчных кислот) [Бондаренко В.М., Суворов А.Н. Симбиотические энтерококки и проблемы энтерококковой оппортунистической инфекции. М.: Медицина, 2007. 30 с.].

В то же время энтерококки являются представителями группы условно-патогенных бактерий и при снижении активности факторов врожденного иммунитета кишечник может стать основным источником транслокации бактерий при эндогенной энтерококковой инфекции [Ятусевич А.И., Андросик Н.Н. Малоизученные инфекционные и инвазионные болезни домашних животных. Минск: Ураджай, 2001].

Установлено, что некоторые штаммы энтерококков, приобретя ряд факторов патогенности, могут вызывать серьезные инфекционные заболевания, тогда как другие штаммы служат необходимым компонентом нормального микробиоценоза [Красная Ю.В., Нестеров А.С., Потатуркина-Нестерова Н.И. Значение бактерий рода Enterococcus в жизнедеятельности человека. Современные проблемы науки и образования (электронный журнал). 2014. №6].

Рост инфекций, вызываемых условно-патогенными микроорганизмами, диктует необходимость поиска новых способов дифференциации нормальной микрофлоры от этиологических агентов, способных вызывать развитие патологических процессов [Бухарин О.В. Персистенция патогенных бактерий. М.: «Медицина», 1999. С. 185].

Известен способ дифференциации энтерококков, являющихся представителями нормальной микрофлоры человека, от патогенных энтерококков путем разграничения потенциально опасных штаммов по их генетическому профилю с применением полимеразной цепной реакции. При обнаружении генов, кодирующих факторы вирулентности, делают заключение о патогенности штамма энтерококка [Вершинин А.Е., Колоджиева В.В., Ермоленко Е.И., Грабовская К.Б., Климович Б.В. и др. Генетическая идентификация как способ выявления патогенных и симбиотических штаммов энтерококков. Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 2008. №5. С. 82].

Известен способ дифференциации патогенных и непатогенных энтерококков разной локализации у новорожденных детей (кишечник, пупочная культя, нижние дыхательные пути, мочевыводящие пути) с помощью математической формулы с использованием линейной дискриминантной функции, характеризующей тип штамма энтерококка.

Данный способ основан на выделении энтерококков, определении их вида и изучении у выделенных штаммов энтерококков маркеров патогенности и персистенции (гемолитической, протеолитической, фибринолитической активности, полиантибиотикорезистентности, адгезивной способности, лизоцимной и антилизоцимной активностей) [Черданцева Г.А., Билимова С.И. Характеристика биологических свойств энтерококков различного происхождения. Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 2000. №4. С. 103].

Данный способ является очень трудоемким, поскольку предполагает определение у выделенных штаммов семи биологических свойств (маркеры вирулентности и персистенции), а также определение у них антибиотикорезистентности. Кроме того, применение способа в клинической практике затруднено из-за сложности математических расчетов.

Известен способ дифференциации клинических изолятов энтерококков, выделенных от животных, от энтерококков, являющихся представителями нормальной микрофлоры, по наличию у штаммов желатиназной активности, поскольку штаммы, продуцирующие желатиназу, обладают высокой вирулентностью [Qin X., Singh K.V., Weinstock G.M. et al. Effects of Enterococcus faecalis for genes on production of gelatinase and a serine protease and virulence. Infections Immunology. 2000. Vol. 68. P. 2579-2586].

Желатиназная активность в 1,5-2 раза чаще встречается среди клинических изолятов по сравнению со штаммами, выделенными от здоровых животных [ Т., AksAakal A., Ekull U. et al. Virulence Factors of Enterococcus faecium and Enterococcus faecalis Strains Isolated from Humans and Pets. Turkish Journal of Veterinary and Animal Sciences. 2006. Vol. 30. P. 477-482].

Известен способ дифференциации энтерококков на представителей нормальной микрофлоры кишечника и возбудителей гнойно-воспалительных заболеваний, основанный на способности энтерококков к инактивации факторов естественной резистентности макроорганизма (антилизоцимной, антикомплементарной, «антиинтерфероновой», антитромбоцитарной катионно-белковой активности) [Билимова С.И. Характеристика факторов персистенции энтерококков. Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. Приложение, 2000. №4. с. 104-105].

Однако указанный способ трудоемок для применения в условиях клинической лаборатории и больше подходит для научно-исследовательских целей из-за необходимости определения у выделенных микроорганизмов нескольких факторов персистенции (антилизоцимной, антикомплементарной, «антиинтерфероновой», антитромбоцитарной катионно-белковой активности) и предназначен для дифференциации энтерококков - представителей симбиотической микрофлоры кишечника человека от возбудителей гнойно-воспалительных заболеваний.

Технический результат, на достижение которого направлено заявляемое изобретение, заключается в возможности дифференцировать энтерококки кишечной микрофлоры животных на нормальную и патогенную микрофлору.

Для достижения указанного технического результата в заявляемом способе дифференциации энтерококков кишечной микрофлоры животных на нормальную и патогенную микрофлору проводят забор исследуемого материала, посев его на селективные питательные среды, выделение и идентификацию чистых культур энтерококков, определение у выделенных микроорганизмов антикарнозиновой активности (АКрА) и к нормальной кишечной микрофлоре животных относят штаммы энтерококков, не обладающие АКрА и обладающие АКрА при уровне выраженности данного признака, равном или меньше 1,9 мг/мл.

Новым в заявляемом способе является то, что у выделенных культур энтерококков определяют антикарнозиновую активность (АКрА), при этом к нормальной кишечной микрофлоре животных относят штаммы энтерококков, не обладающие АКрА и обладающие АКрА при уровне выраженности данного признака равном или меньше 1,9 мг/мл.

Достигаемый при осуществлении изобретения технический результат состоит в том, что заявляемый способ путем определения у энтерококков антикарнозиновой активности позволяет дифференцировать энтерококки кишечной микрофлоры животных на нормальную и патогенную микрофлору, что способствует проведению своевременных и эффективных профилактических и терапевтических мероприятий.

В результате проведенных авторами экспериментов выявлено ранее неизвестное свойство энтерококков - их антикарнозиновая активность (АКрА).

Исследование проведено на 122 штаммах энтерококков, выделенных из кишечника здоровых коров, и 113 штаммах энтерококков, выделенных из кишечника коров при дисбактериозе.

Исследуемый материал (кал) засевали на чашки со средой Entero-coccosel agar (BD, США). Посевы инкубировали в термостате при температуре 37°С в течение 24-48 часов. Выросшие колонии пересевали на скошенный агар Шэдлера, инкубировали в термостате при температуре 37°С в течение 24-48 часов и изучали морфологию микроорганизмов при окраске мазков по Граму. Чистую культуру идентифицировали до вида с помощью мультиплексной ПЦР с использованием известных праймеров (синтез праймеров осуществлен компанией «СИНТОЛ», Москва) по видоспецифическим генам, кодирующим синтез супероксиддисмутазы [Jackson C.R., Fedorka-Cray P.J., Barrett J.B. Use of a genus- and species-specific multiplex PCR for identification of enterococci. J. Clin. Microbiol. 2004. Vol. 42(8). P. 3558-3565].

E. faecium регистрировали в 27,8% случаев, E. hirae - в 24,1%; E. durans - в 22,2%; E. faecalis в 12,9%; E. flavescens в 9,3%; E. casseliflavus в 3,7% случаев.

У всех выделенных энтерококков определяли антикарнозиновую активность.

Известен способ определения антикарнозиновой активности микроорганизмов [Патент РФ №2132879, МПК C12Q 1/04, 1999]. Согласно способу антикарнозиновую активность у выделенных энтерококков определяли следующим образом.

1. Исследуемую культуру энтерококка выращивали на плотной питательной среде при 37°С в течение 24 часов.

2. Готовили опытную пробу: из выросшей культуры делали одномиллиардную взвесь, отбирали 0,1 мл, добавляли 1,7 мл мясопептонного бульона. Затем готовили раствор карнозина: 30 мг карнозина растворяли в 1 мл физиологического раствора и получали его концентрацию, равную 30 мг/мл. Приготовленный раствор карнозина в объеме 0,2 мл добавляли в опытную пробу, где концентрация карнозина составляла 3 мг/мл.

3. Параллельно с опытной готовили 3 контрольные пробы: а) контроль 1. К 0,2 мл раствора карнозина добавляли 0,1 мл физиологического раствора и 1,7 мл мясопептонного бульона, б) контроль 2. К 0,2 мл физиологического раствора добавляли 0,1 мл одномиллиардной взвеси испытуемой культуры и 1,7 мл мясопептонного бульона, в) контроль 3. К 0,3 мл физиологического раствора добавляли 1,7 мл мясопептонного бульона.

4. Опытную и контрольные пробы инкубировали в течение 24 часов при Т 37°С.

5. Во все пробы добавляли по 0,1 мл хлороформа и выдерживали в течение 40 минут.

6. Все пробы центрифугировали при 3000 об/мин в течение 15 минут.

7. Из опытной и контрольных проб отделяли супернатант (по 0,6 мл), добавляли к нему 1,1 мл мясопептонного бульона и 0,1 мл взвеси тест-культуры M. luteus (способ приготовления взвеси: 16-18 - часовую агаровую культуру M. luteus смывают физиологическим раствором и готовят одномиллиардную взвесь по стандарту мутности. Полученную взвесь разводят физиологическим раствором в 10 раз и используют).

8. Все пробы инкубировали 24 часа при 37°С.

9. Затем замеряли оптическую плотность взвесей опытной и контрольных проб на фотоэлектроколориметре.

10. Рассчитывали антикарнозиновую активность (АКрА) исследуемой культуры энтерококков по формуле

где С - исходная концентрация карнозина, мг/мл;

OD - оптическая плотность взвеси в опыте;

OD1 - оптическая плотность взвеси в контроле 1;

OD2 - оптическая плотность взвеси в контроле 2;

OD3 - оптическая плотность взвеси в контроле 3.

Антикарнозиновая активность выражается в мг/мл (мг инактивированного карнозина в мл культуральной среды).

Результаты исследований представлены в таблице 1.

Как видно из таблицы, у разных видов штаммов энтерококков выделенных из кишечника здоровых коров, антикарнозиновая активность определялась в 42,9%-62,5% случаев, а у 37,5%-57,1% штаммов энтерококков антикарнозиновая активность не определялась.

Тогда как штаммы энтерококков, выделенные, из кишечника коров при дисбактериозе, независимо от их вида, в 100% случаев обладали антикарнозиновой активностью.

Уровень выраженности АКрА у штаммов энтерококков, выделенных от здоровых животных, составлял от 0,1 до 1,9 мг/мл; у животных с дисбактериозом кишечника - от 2,0 мг/мл до 3,0 мг/мл.

Таким образом, авторами при изучении штаммов энтерококков, выделенных из кишечника здоровых коров и коров с дисбактериозом, установлены пороговые значения антикарнозиновой активности (АКрА), позволяющие дифференцировать энтерококки кишечной микрофлоры животных на нормальную и патогенную микрофлору.

К нормальной кишечной микрофлоре животных относят штаммы энтерококков, не обладающие АКрА и обладающие АКрА при уровне выраженности данного признака, равном или меньше 1,9 мг/мл.

Предложенный способ дифференциации энтерококков кишечной микрофлоры животных был испытан в учебном хозяйстве ФГБОУ ВПО «Оренбургский государственный аграрный университет». Эффективность дифференциации, проведенной в соответствии с заявляемым способом, составила 95%.

Способ осуществляется следующим образом:

1. Проводят забор исследуемого материала (фекалии животных) и засевают на чашки с желчно-эскулиновым агаром с азидом натрия (HiMedia, Индия).

2. Посевы инкубируют в термостате при температуре 37°С в течение 24-48 часов.

3. Изучают морфологию выросших колоний при окраске мазков по Граму и пересевают на скошенный агар, инкубируют в термостате при температуре 37°С в течение 24-48 часов.

4. Выделяют и идентифицируют чистые культуры энтерококков до вида с помощью мультиплексной ПЦР с использованием известных праймеров (синтез праймеров осуществлен компанией «СИНТОЛ», Москва) по видоспецифическим генам, кодирующим синтез супероксиддисмутазы.

5. Исследуемые культуры энтерококков выращивают на плотной питательной среде при 37°С в течение 24-48 часов.

6. Из выросших культур готовят одномиллиардную взвесь, отбирают 0,1 мл, добавляют 1,7 мл мясопептонного бульона и 0,2 мл раствора карнозина (разведение карнозина готовят таким образом, чтобы его конечная концентрция в МПБ с тест-штаммом составляла 3 мг/мл). Для осуществления способа используют L-carnosine производства фирмы «Sigma-Aldrich» (USA).

7. Параллельно с опытной готовят 3 контрольные пробы: а) контроль 1. К 0,2 мл раствора карнозина добавляют 0,1 мл физиологического раствора и 1,7 мл мясопептонного бульона, б) контроль 2. К 0,2 мл физиологического раствора добавляют 0,1 мл одномиллиардной взвеси испытуемой культуры и 1,7 мл мясопептонного бульона, в) контроль 3. К 0,3 мл физиологического раствора добавляют 1,7 мл мясопептонного бульона.

8. Опытную и контрольные пробы инкубируют в течение 24 часов при Т 37°С.

9. Во все пробы добавляют по 0,1 мл хлороформа и выдерживают в течение 40 минут, затем центрифугируют при 3000 об/мин в течение 15 минут, отделяют супернатант (по 0,6 мл), добавляют к нему 1,1 мл мясопептонного бульона и 0,1 мл взвеси тест-культуры M. luteus (способ приготовления взвеси: 16-18 - часовую агаровую культуру M. luteus смывают физиологическим раствором и готовят одномиллиардную взвесь по стандарту мутности. Полученную взвесь разводят физиологическим раствором в 10 раз и используют).

10. Опытную и контрольные пробы инкубируют 24 часа при 37°С.

11. Затем замеряют оптическую плотность взвесей опытной и контрольных проб на фотоэлектроколориметре.

11. Рассчитывают антикарнозиновую активность (АКрА) исследуемой культуры энтерококков по формуле

где С - исходная концентрация карнозина, мг/мл;

OD - оптическая плотность взвеси в опыте;

OD1 - оптическая плотность взвеси в контроле 1;

OD2 - оптическая плотность взвеси в контроле 2;

OD3 - оптическая плотность взвеси в контроле 3.

Антикарнозиновая активность выражается в мг/мл (мг инактивированного карнозина в мл культуральной среды).

12. К нормальной кишечной микрофлоре животных относят штаммы энтерококков, не обладающие АКрА и обладающие АКрА при уровне выраженности данного признака, равном или меньше 1,9 мг/мл.

Пример конкретного выполнения способа.

В целях предупреждения развития послеродового эндометрита у 4 стельных коров проведено исследование фекалий.

Исследуемый материал (фекалии животных) засевали на чашки с желчно-эскулиновым агаром с азидом натрия (HiMedia, Индия). Посевы инкубировали в термостате при температуре 37°С в течение 24-48 часов.

Изучали морфологию выросших колоний при окраске мазков по Граму. По совокупности морфологических (овоидные (яйцевидные) неподвижные клетки, несколько вытянутые в длину, расположены попарно) и тинкториальных свойств (положительные при окраске по Граму) свойств отнесли данные микроорганизмы к представителям рода Enterococcus. Колонии пересеяли на скошенный агар, инкубировали в термостате при температуре 37°С в течение 24-48 часов.

Выделяли и идентифицировали чистые культуры энтерококков до вида с помощью мультиплексной ПЦР с использованием известных праймеров (синтез праймеров осуществлен компанией «СИНТОЛ», Москва) по видоспецифическим генам, кодирующим синтез супероксиддисмутазы.

Штаммы энтерококков, выделенные от животных, были идентифицированы как Е. faecium, Е. hirae, Е. casseliflavus и Е. faecalis.

Исследуемые штаммы энтерококков выращивали на плотной питательной среде при 37°С в течение 24-48 часов.

Готовили опытные пробы: из выросших культур делали одномиллиардную взвесь, отбирали 0,1 мл, добавляли 1,7 мл мясопептонного бульона. Затем готовили раствор карнозина: 30 мг карнозина растворяли в 1 мл физиологического раствора и получали его концентрацию, равную 30 мг/мл. Приготовленный раствор карнозина в объеме 0,2 мл добавляли в опытные пробы, где концентрация карнозина составляла 3 мг/мл. Использовали L-carnosine производства фирмы «Sigma-Aldrich» (USA).

Параллельно с опытными готовили по 3 контрольные пробы: а) контроль 1. К 0,2 мл раствора карнозина добавляли 0,1 мл физиологического раствора и 1,7 мл мясопептонного бульона, б) контроль 2. К 0,2 мл физиологического раствора добавляли 0,1 мл одномиллиардной взвеси испытуемой культуры и 1,7 мл мясопептонного бульона, в) контроль 3. К 0,3 мл физиологического раствора добавляли 1,7 мл мясопептонного бульона.

Опытные и контрольные пробы инкубировали в течение 24 часов при Т 37°С. Во все пробы добавляли по 0,1 мл хлороформа и выдерживали в течение 40 минут, затем центрифугировали при 3000 об/мин в течение 15 минут, отделяли супернатант (по 0,6 мл), добавляли к нему 1,1 мл мясопептонного бульона и 0,1 мл взвеси тест-культуры M. luteus (способ приготовления взвеси: 16-18 - часовую агаровую культуру M. luteus смывали физиологическим раствором и готовили одномиллиардную взвесь по стандарту мутности. Полученную взвесь разводили физиологическим раствором в 10 раз и использовали).

Опытные и контрольные пробы инкубировали 24 часа при 37°С.

Затем замеряли оптическую плотность взвесей опытных и контрольных проб на фотоэлектроколориметре. Полученные данные представлены в таблице 2.

Рассчитывали антикарнозиновую активность (АКрА) штамма энтерококка Е. faecium:

где 3 - исходная концентрация карнозина, мг/мл;

0,185 - оптическая плотность взвеси в опыте;

0,095 - оптическая плотность взвеси в контроле 1;

0,198 - оптическая плотность взвеси в контроле 2;

0,118 - оптическая плотность взвеси в контроле 3;

1,3 - антикарнозиновая активность (АКрА) штамма энтерококка Е. faecium, мг/мл.

Рассчитывали антикарнозиновую активность (АКрА) штамма энтерококка Е. hirae:

где 3 - исходная концентрация карнозина, мг/мл;

0,202 - оптическая плотность взвеси в опыте;

0,095 - оптическая плотность взвеси в контроле 1;

0,211 - оптическая плотность взвеси в контроле 2;

0,118 - оптическая плотность взвеси в контроле 3;

1,8 - антикарнозиновая активность (АКрА) штамма энтерококка Е. hirae: мг/гл.

Рассчитывали антикарнозиновую активность (АКрА) штамма энтерококка Е. casseliflavus:

где 3 - исходная концентрация карнозина, мг/мл;

0,155 - оптическая плотность взвеси в опыте;

0,095 - оптическая плотность взвеси в контроле 1;

0,178 - оптическая плотность взвеси в контроле 2;

0,118 - оптическая плотность взвеси в контроле 3;

0 - штамм энтерококка Е. casseliflavus не обладает антикарнозиновой активностью (АКрА).

Рассчитывали антикарнозиновую активность (АКрА) штамма энтерококка Е. faecalis:

где 3 - исходная концентрация карнозина, мг/мл;

0,177 - оптическая плотность взвеси в опыте;

0,095 - оптическая плотность взвеси в контроле 1;

0,183 - оптическая плотность взвеси в контроле 2;

0,118 - оптическая плотность взвеси в контроле 3;

2,2 - антикарнозиновая активность (АКрА) штамма энтерококка Е. faecalis, мг/гл.

Таким образом у двух животных были выделены штаммы энтерококков Е. faecium и Е. hirae, обладающие АКрА с уровнем выраженности 1,3 мг/мл и 1,8 мг/мл соответственно.

От третьего животного был высеян штамм энтерококка Е. casseliflavus, не обладающий антикарнозиновой активностью.

От четвертого животного был высеян штамм энтерококка Е. faecalis, обладающий антикарнозиновой активностью с уровнем выраженности 2,2 мг/мл.

Согласно заявляемому способу к нормальной кишечной микрофлоре животных относят штаммы энтерококков, не обладающие АКрА и обладающие АКрА при уровне выраженности данного признака, равном или меньше 1,9 мг/мл.

Таким образом был сделан вывод о том, что три штамма энтерококков Е. faecium, Е. hirae и Е. casseliflavus относятся к нормальной микрофлоре кишечника. Дальнейшее наблюдение за животными подтвердило правильность проведенной дифференциации выделенных штаммов энтерококков.

А выделенный штамм энтерококка Е. faecalis является патогенным и может вызвать послеродовой эндометрит. Животное отнесено к группе риска по развитию инфекционно-воспалительного заболевания и ему назначен бактериофаг энтерококковый жидкий, что предотвратило развитие заболевания.

Таким образом, использование заявляемого способа позволяет дифференцировать энтерококки кишечной микрофлоры животных на нормальную и патогенную микрофлору, что способствует проведению своевременных и эффективных профилактических и терапевтических мероприятий.

Способ дифференциации энтерококков кишечной микрофлоры животных на нормальную и патогенную микрофлору, заключающийся в том, что проводят забор исследуемого материала, посев его на селективные питательные среды, выделение и идентификацию чистых культур энтерококков, определение у выделенных микроорганизмов антикарнозиновой активности (АКрА) и к нормальной кишечной микрофлоре животных относят штаммы энтерококков, не обладающие АКрА и обладающие АКрА при уровне выраженности данного признака, равном или меньше 1,9 мг/мл.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к медицинской микробиологии. Описан способ идентификации подвидов возбудителя туляремии Francisella tularensis subsp.

Группа изобретений относится к определению уровней активности бактерий в легких пациентов. Группа изобретений раскрывает способ предсказания усиления уровня бактериальной активности Pseudomonas aeruginosa в легких пациента, а также способ определения эффективности лечения антибиотиком бактериальной инфекции легких, вызванной Pseudomonas aeruginosa, в которых осуществляется измерение уровней маркеров процесса захвата железа бактериями (например, сидерофоров) и уровней секретированных бактериальных белков с течением времени.

Предложен способ первичной идентификации микобактерий комплекса М. tuberculosis от нетуберкулезных микобактерий.

Изобретение относится к области микробиологии. Способ обнаружения кластера микроорганизмов на поверхности предусматривает этапы, на которых: а) определяют топографическое представление упомянутой поверхности; b) обнаруживают на топографическом представлении, по меньшей мере, один контур, ограничивающий область, которая может соответствовать скоплению биологических частиц.

Настоящее изобретение относится к области микробиологии и касается способа определения таких характеристик, как типирование, потенциальная устойчивость по меньшей мере к одному антимикробному средству и фактора вирулентности, по меньшей мере, одного микроорганизма из образца.

Изобретение относится к клинической микробиологии и может быть использовано при определении эффективных мер лечения хронических инфекционных заболеваний кожи и слизистых оболочек человека.

Изобретение относится к санитарной микробиологии. Дифференциально-диагностическая питательная среда содержит аланин, натрия хлорид и дистиллированную воду в заданных соотношениях компонентов.

Изобретение относится к области медицинской микробиологии и касается способа дифференциации токсигенных и атоксигенных штаммов холерных вибрионов О1 серогруппы по ингибирующей активности.

Изобретение относится к фармацевтике и микробиологии. Способ определения микробиологической чистоты фармацевтической субстанции предусматривает подготовку образца фармацевтической субстанции путем разбавления его в триптиказо-соевом бульоне или среде №8.

Изобретение относится к фармацевтике и микробиологии. Способ определения микробиологической чистоты лекарственных средств предусматривает подготовку образца лекарственного средства путем разбавления его в триптиказо-соевом бульоне или среде №8.
Изобретение относится к биотехнологии. Способ предусматривает следующее. Собранную мокроту подвергают быстрому замораживанию при температуре от -20 до -25°С без применения консервантов и хранят при данной температуре от 16 до 24 часов. Размораживают при комнатной температуре и обрабатывают 4% раствором едкого натрия, содержащим N-ацетил-L-цистеин в течение 20-25 минут. Добавляют натрий фосфатный буфер 1 М и центрифугируют при 3000-3100 g в течение 20-25 минут. Декантируют образец с отделением осадка. К осадку при перемешивании добавляют оксид железа в конечной концентрации 0,04 М в натрий фосфатном буфере 1 М, рН 6,8 и производят посев на питательную среду Левенштейна-Йенсена. Изобретение позволяет сократить сроки получения положительных результатов посевов на плотной питательной среде.

Изобретение относится к области микробиологии и медицины. Способ представлен диагностикой состояния микробиоты кишечника на фоне эрадикационной терапии Helicobacter pylori, заключающейся в установлении нуклеотидных последовательностей отдельных микроорганизмов микробиоты кишечника пациента по бактериальному гену 16S рРНК, на основании которых рассчитывают состав, количество видов и индекс разнообразия Шеннона H микробного сообщества до, в процессе и после эрадикации. Изобретение позволяет диагностировать состояние микробиоты пациента, прогнозировать риск возникновения кишечных расстройств и определять курс корректирующей терапии, направленной на восстановление нормальной кишечной микрофлоры исходя из количества и состава видов микроорганизмов, индекса разнообразия H. 1 табл., 3 пр.

Изобретение относится к области биотехнологии. Представлено применение штамма Rickettsia raoultii «23/95-Еланда» генотипа DnS28, депонированного во Всероссийском музее риккетсиозных культур ФГБУ НИИЭМ им. Н.Ф. Гамалеи под номером 135, для разработки препаратов для диагностики риккетсиоза, вызываемого Rickettsia raoultii генотип DnS28. Штамм R. raoultii «23/95-Еланда» активно размножается на культуре клеток Vero и Help-2 и может использоваться в качестве продуцента диагностических препаратов для идентификации риккетсий группы клещевой пятнистой лихорадки. Изобретение обеспечивает оптимизацию лабораторной диагностики риккетсиозов. 4 пр.

Изобретение относится к способу высокоэффективного отбора микроорганизма, имеющего антагонистическую активность против грибкового или бактериального патогена растений. Способ включает предоставление мультитестовой платформы, содержащей по меньшей мере 90 камер и предоставление по меньшей мере 90 микробных образцов. При этом указанная мультитестовая платформа содержит одну или более твердых микробных ростовых сред, содержащих диспергированную популяцию указанного грибкового или бактериального патогена растений, формирующую клеточный слой на поверхности твердой микробной ростовой среды или смешанную с указанной твердой микробной ростовой средой и инкорпорированную в указанную твердую микробную ростовую среду перед застыванием среды. Осуществляют отдельное приведение каждого из указанного множества микробных образцов в одновременный физический контакт с указанной диспергированной популяцией грибкового или бактериального патогена растений. Осуществляют со-культивирование указанных микробных образцов с указанной диспергированной популяцией грибкового или бактериального патогена растений для оценки ответа указанного грибкового или бактериального патогена на каждый из указанных микробных образцов путем определения наличия зоны подавления роста, указывающей на антагонистическую активность против грибкового или бактериального патогена. Отбирают один или более микробных образцов, содержащих указанный микроорганизм, имеющий антагонистическую активность против указанного грибкового или бактериального патогена. Изобретение позволяет осуществить быструю идентификацию микроорганизма, имеющего антагонистическую активность против грибкового или бактериального патогена растений. 16 з.п. ф-лы, 1 табл., 8 пр.

Изобретение относится к биотехнологии. Способ выявления микобактерий с поверхностей предусматривает сбор исследуемого материала с поверхности смоченным физиологическим раствором тампоном и обработку его дезинфицирующим средством «Септустин» в виде 1%-ного водного раствора. При этом «Септустин» смешивают с суспензией исследуемого материала в соотношении 1:4 в течение 30 мин. Причем в общую экспозицию входят 15 мин центрифугирования при 3000 об/мин. Исследуемый материал центрифугируют в течение 15 мин при 3000 об/мин и осадок двукратно отмывают физиологическим раствором с помощью центрифугирования при том же режиме. Из осадка проводят посевы на плотную питательную среду при температурном и временном оптимуме с последующим выделением колоний и их идентификацией. Изобретение позволяет повысить точность лабораторных исследований и сократить сроки исследований. 12 табл., 6 пр.

Изобретение относится к биотехнологии. Предложен способ идентификации микроводорослей. Способ включает воздействие методом лазерной индуцированной флуоресценции на образец пробы анализируемой среды в термокамере с последующим измерением спектра флуоресцентного излучения при изменении температуры в диапазоне 5-80°С. Измеренные температурные зависимости спектров флуоресценции пигментов клеток микроводоросли в указанном диапазоне температур сравнивают с соответствующими зависимостями для известных микроводорослей и определяют вид водоросли. Способ обеспечивает идентификацию микроводорослей с возможностью автоматизации процесса измерения. 4 ил., 2 табл., 4 пр.

Изобретение относится к санитарной и клинической микробиологии и может быть использовано для селективного обнаружения патогенных маннитположительных стафилококков в пищевых продуктах, клиническом материале и других объектах. Питательная среда содержит панкреатический гидролизат казеина неглубокой степени расщепления, пептон мясной, дрожжевой экстракт, калий фосфорнокислый двузамещенный, натрий хлористый, маннит, литий хлористый, глицин, феноловый красный, 2%-ный раствор теллурита калия и агар в заданном соотношении компонентов. Изобретение позволяет повысить чувствительность питательной среды в отношении маннитположительных стафилококков. 2 табл., 5 пр.

Изобретение относится к медицине, а именно к хирургии, медицинской токсикологии, микробиологии, биологии, и касается способа оценки эффективности фаготерапии при лечении инфекционных заболеваний. Способ включает забор исследуемого биологического материала, введение раствора коммерческого бактериофага в исследуемый биологический материал и определение эффективности взаимодействия коммерческого бактериофага с патогенными микроорганизмами в исследуемом биологическом материале. Перед проведением хирургического вмешательства осуществляют идентификацию патогенных микроорганизмов в области планируемого хирургического вмешательства. Определяют концентрацию (титр) бактериофага к патогенным микроорганизмам в исследуемом биологическом материале. Вводят первую дозу раствора коммерческого бактериофага сразу после выполнения хирургического вмешательства. Через 18-24 часов после введения первой дозы раствора коммерческого бактериофага производят забор исследуемого биологического материала и определяют концентрацию (титр) бактериофага в исследуемом биологическом материале. При установлении титра не менее 106 БОЕ/мл делают вывод об эффективном воздействии раствора коммерческого бактериофага на целевой патогенный микроорганизм. Через 18-24 часов после введения первой дозы раствора коммерческого бактериофага вводят вторую дозу раствора коммерческого бактериофага, через 18-24 часов после введения второй дозы раствора коммерческого бактериофага вводят третью дозу раствора коммерческого бактериофага. На 4-5 сутки после хирургического вмешательства выполняют забор исследуемого биологического материала и производят оценку эффективности путем сравнения бактериофага, содержащегося в исследуемом биологическом материале с раствором коммерческого бактериофага. При установлении тождественности литической активности не менее первых двух десятикратных разведений раствора коммерческого бактериофага, используемого для лечения пациента с бактериофагом, находящимся в исследуемом биологическом материале от пациента, делают вывод об эффективности фаготерапии и продолжают вводить раствор коммерческого бактериофага до полной элиминации патогенных микроорганизмов. Способ позволяет осуществлять качественный и количественный контроль присутствия бактериофагов, что приводит к более точной трактовке полученных результатов; позволяет отслеживать концентрацию бактериофагов в условиях in vitro и в условиях in vivo. Предусматривает идентификацию этиологически значимого возбудителя инфекционного процесса до проведения хирургического вмешательства, что позволяет сразу произвести подбор этиотропного штамма бактериофага. Позволяет оценить эффективность фаготерапии в процессе ее проведения, это позволяет установить активность бактериофага в ране и тем самым повысить оценку эффективности фаготерапии. Как следствие, повышается качество процесса лечения, уменьшается риск возникновения рецидива инфекции. 2 табл.
Изобретение относится к биотехнологии и клинической микробиологии. Предложен способ определения чувствительности микроорганизмов полости рта в биопленке к антимикробным средствам. Способ включает культивирование гнойного отделяемого из очага гнойного воспаления челюстно-лицевой области в лунках планшета в жидкой питательной среде с предварительно внесенными антибиотиками в условиях анаэробиоза и движения жидкости. Результат оценивают по характерным признакам формирования биопленки, считая наличие биопленки признаком устойчивости к антибактериальному препарату в данной концентрации. Способ позволяет определить чувствительность микроорганизма в составе биопленки к антибиотикам без выделения чистых культур. 2 пр.
Изобретение относится к микробиологии. Питательная среда для культивирования и выращивания биомассы чумного микроба вакцинного штамма Y. pestis EV содержит в качестве питательной основы ферментативный гидролизат кукурузного экстракта сгущенный, натрий хлористый, натрий фосфорнокислый 2-замещенный 12-водный, соль Мора, агар микробиологический и питьевую воду в заданных соотношениях ингредиентов. Изобретение позволяет повысить выход биомассы вакцинного штамма чумного микроба ЕВ. 3 пр.

Изобретение относится к биотехнологии. Способ предусматривает забор исследуемого материала, посев его на селективные питательные среды, инкубирование посевов при заданных параметрах с последующей идентификацией выросших колоний. Из выросших колоний проводят выделение и идентификацию чистой культуры энтерококков до вида известными способами с последующим определением у выделенных энтерококков антикарнозиновой активности. При этом энтерококки, не обладающие антикарнозиновой активностью или обладающие антикарнозиновой активностью при уровне выраженности данного признака, равном или меньше 1,9 мгмл, относятся к нормальной кишечной микрофлоре животных. Изобретение позволяет упростить способ и дифференцировать энтерококки кишечной микрофлоры на нормальную и патогенную микрофлору. 2 табл., 1 пр.

Наверх