Композиции и способы для β-глюкановой иммунотерапии

Группа изобретений относится к медицине, а именно к иммунологии, и может быть использована для получения композиции для повышения иммунного ответа. Композиция для повышения иммунного ответа индивида на опухоль содержит: растворимый β-глюкановый компонент; антительный компонент, который специфично связывается с растворимым β-глюканом; и противоопухолевое антитело. В другом аспекте настоящее изобретение относится к способу повышения ответа индивида на β-глюкановую иммунотерапию. Использование данного изобретения позволяет повысить эффективность иммунотерапии у индивида на опухоль, увеличивая ответ индивида на терапию β-глюканом с противоопухолевым антителом, инициируя цитотоксичность нейтрофилов, макрофагов и естественных киллеров. 5 н. и 25 з.п. ф-лы, 11 ил., 3 пр., 1 табл.

 

Перекрестная ссылка на родственные заявки

По настоящей заявке испрашивается приоритет предварительной заявки на патент США 61/640834, поданной 01 мая 2012 года, и предварительной заявки на патент США 61/640397, поданной 30 апреля 2012 года, каждая из которых включена в настоящую заявку в качестве ссылки.

Сущность изобретения

Настоящее изобретение в одном из аспектов относится к композиции, которая содержит β-глюкановый компонент и антительный компонент, который специфично связывается с β-глюканом. В некоторых вариантах осуществления изобретения β-глюкан может быть получен из дрожжей. В некоторых вариантах осуществления изобретения β-глюкан может включать β-1,3/1,6 глюкан, такой как β(1,6)-[поли-(1,3)-D-глюкопиранозил]-поли-β(1,3)-D-глюкопираноза.

В некоторых вариантах осуществления изобретения антительный компонент может включать моноклональное антитело, которое специфично связывается с β-глюканом. В некоторых вариантах осуществления изобретения моноклональное антитело может содержать BfD I, BfD II, BfD III или BfD IV.

В некоторых вариантах осуществления изобретения β-глюкановый компонент и антительный компонент могут находиться в одном препарате. В других вариантах осуществления изобретения β-глюкановый компонент и антительный компонент могут находиться в разных препаратах.

В другом аспекте настоящее изобретение относится к способу, который в основном включает совместное введение индивиду β-глюкана и препарата антител, который специфично связывается с β-глюканом. В некоторых вариантах осуществления изобретения способ дополнительно может включать введение индивиду противоопухолевого антитела.

В другом аспекте настоящее изобретение относится к способу повышения ответа индивида на β-глюкановую иммунотерапию. В основном, способ включает совместное введение индивиду композиции, содержащей β-глюкан и препарат антител, который специфично связывается с β-глюканом. В некоторых вариантах осуществления изобретения способ дополнительно может включать идентификацию индивида, как имеющего низкий уровень связывания, и введение индивиду композиции, содержащей β-глюкан и препарат антител, который специфично связывается с β-глюканом.

В некоторых вариантах осуществления любого из этих способов β-глюкан и препарат антител могут быть введены совместно одновременно. В других вариантах осуществления любого из этих способов препарат антител может быть введен совместно в разные моменты времени. В некоторых вариантах осуществления любого из этих способов β-глюкан и препарат антител могут быть введены совместно в различные области.

В некоторых вариантах осуществления способов β-глюкан может быть получен из дрожжей. В некоторых вариантах осуществления этих способов β-глюкан может содержать β-1,3/1,6 глюкан, такой как β(1,6)-[поли-(1,3)-D-глюкопиранозил]-поли-β(1,3)-D-глюкопираноза.

В некоторых вариантах осуществления способов антительный компонент может включать моноклональное антитело, которое специфично связывается с β-глюканом, такое как BfD I, BfD II, BfD III или BfD IV.

В другом аспекте настоящее изобретение относится к способу повышения ответа индивида на β-глюкановую иммунотерапию, с применением антитела. В основном способ включает введение индивиду композиции, которая содержит часть молекулы β-глюкана, конъюгированную с антителом. В некоторых вариантах осуществления изобретения часть молекулы β-глюкана может быть конъюгирована с терапевтическим антителом, таким как, например, противоопухолевое антитело. В некоторых вариантах осуществления изобретения способ дополнительно включает идентификацию индивида, как имеющего низкий уровень связывания β-глюкана.

В некоторых вариантах осуществления изобретения часть молекулы β-глюкана может быть получена из дрожжей. В некоторых вариантах осуществления изобретения часть молекулы β-глюкана может представлять собой или быть получена из β-1,3/1,6 глюкана, такого как β(1,6)-[поли-(1,3)-D-глюкопиранозил]-поли-β(1,3)-D-глюкопираноза.

В некоторых вариантах осуществления изобретения β-глюкановая терапия может включать введение индивиду β-глюкана, антитела, которое специфично связывается с β-глюканом, и терапевтического антитела. В некоторых случаях терапевтическое антитело может включать противоопухолевое антитело.

Изложенная выше сущность настоящего изобретения не предназначена для описания каждого раскрытого варианта осуществления или каждого варианта применения настоящего изобретения. Последующее описание более подробно раскрывает настоящее изобретение на примере иллюстративных вариантов осуществления изобретения. В некоторых местах текста данной заявки описание представлено списками примеров, эти примеры могут быть использованы в различных комбинациях. В каждом случае приведенный список служит только в качестве типичной группы и не должен рассматриваться как исчерпывающий список.

Краткое описание чертежей

Фиг. 1. Данные проточной цитометрии, показывающие различное связывание β-глюкана (PGG) с полиморфоядерными лейкоцитами в цельной крови здорового человека.

Фиг. 2. Данные, показывающие различное связывание β-глюкана с нейтрофилами в цельной крови здорового человека.

Фиг. 3. Данные, показывающие различное связывание β-глюкана с моноцитами в цельной крови здорового человека.

Фиг. 4. Данные сравнения титров антител против β-глюкана у индивидов с низким уровнем связывания и высоким уровнем связывания.

Фиг. 5. Данные, показывающие, что сыворотка крови индивида с высоким уровнем связывания способна повысить связывание β-глюкана с ПМЛ, полученными от индивида с низким уровнем связывания.

Фиг. 6. Данные, показывающие, что антитела против β-глюкана способны повысить связывание β-глюкана с ПМЛ, полученными от индивида с низким уровнем связывания.

Фиг. 7. Данные, показывающие, что внутривенный иммуноглобулин способен повысить связывание β-глюкана с ПМЛ, полученными от индивида с низким уровнем связывания.

Фиг. 8. Данные, показывающие преобразование низкого уровня связывания у индивида в высокий уровень связывания путем лечения внутривенным иммуноглобулином, которое включает комбинацию β-глюкана и антител против β-глюкана.

Фиг. 9. Сравнение среднего числа дней терапии пациентов в контрольной и исследуемой группах двухгруппового, открытого, рандомизированного, многоцентрового клинического исследования.

Фиг. 10. Данные, показывающие связывание конъюгатов PGG-антитело с ПМЛ.

Фиг. 11. Данные, показывающие связывание конъюгатов PGG-ВВИГ с ПМЛ.

Подробное описание иллюстративных вариантов осуществления изобретения

В настоящем изобретении описаны способы, относящиеся к применению β-глюкана в качестве компонента иммунотерапии. Описанные в настоящем описании композиции и способы основаны на данных изучения различного связывания β-глюкана иммунными клетками в различных популяциях здоровых людей. Неожиданно было обнаружено, что индивиды с высоким уровнем связывания β-глюкана имеют более высокие титры антител против β-глюкана, по сравнению с индивидами с низким уровнем связывания. Таким образом, настоящее изобретение относится к композициям, которые включают β-глюкановый компонент и антительный компонент, который специфично связывается с β-глюканом. Настоящее изобретение также относится к способам, которые в основном включают совместное введение β-глюкана и антитела или антительного компонента, которые специфично связываются с β-глюканом, или части молекулы β-глюкана, конъюгированной с антителом или фрагментом антитела. Такие способы могут преобразовывать низкий уровень связывания у индивида в высокий уровень связывания, и таким образом увеличивать число лиц, для которых иммунотерапия, основанная на использовании β-глюкана, может оказаться эффективной.

β-Глюканы представляют собой полимеры глюкозы, полученные из различных микробиологических и растительных источников, включая, например, дрожжи, бактерии, микроскопические водоросли, водоросли, грибы, овес и ячмень. Из них β-глюканы дрожжей высоко ценятся за свои иммуномодулирующие свойства. Дрожжевые β-глюканы могут находиться в различных формах, таких как, например, дрожжи в неизменном виде, зимозан, очищенные частицы целого глюкана, солюбилизированный полисахарид зимозан или высокоочищенные растворимые β-глюканы различной молекулярной массы. Структурно дрожжевые β-глюканы состоят из глюкозных мономеров, организованных как основная цепь из молекул глюкопиранозы, связанных β-(1,3) связью, с периодическими β-(1,3) глюкопиранозными ответвлениями, связанными с основной цепью при помощи β-(1,6) гликозидных связей. Различные формы дрожжевых β-глюканов могут по-разному функционировать. На механизм, при помощи которого дрожжевые β-глюканы осуществляют свое иммуномодулирующее действие, могут оказывать влияние структурные различия между различными формами β-глюканов, такие как, например, их твердочастичная или растворимая природа, третичная структура, длина основной цепи, длина боковой цепи и частота боковых цепей. Иммуностимулирующие функции дрожжевых β-глюканов также зависят от участвующих во взаимодействии рецепторов в различных типах клеток у различных видов, которые опять же могут зависеть от структурных свойств β-глюканов.

В одном из аспектов настоящее изобретение относится к композиции, которая содержит в основном β-глюкановый компонент и антительный компонент, который специфично связывается с β-глюканом.

β-Глюкановый компонент может включать любую подходящую форму β-глюкана или любую комбинацию двух или более форм β-глюкана. Подходящие β-глюканы и получение подходящих β-глюканов из их природных источников описаны, например, в публикации заявки на патент США US 2008/0103112 A1. В некоторых вариантах осуществления изобретения β-глюкан может быть получен из дрожжей, таких как, например, Saccharomyces cerevisiae. В некоторых конкретных вариантах осуществления изобретения β-глюкан может представлять собой или быть получен из β(1,6)-[поли-(1,3)-D-глюкопиранозил]-поли-β(1,3)-D-глюкопиранозы, также именуемой в настоящем описании как PGG (IMPRIME PGG, Biothera, Inc., Eagan, MN), высокоочищенной и хорошо известной формы растворимого β-глюкана, полученного из дрожжей. Кроме того, β-глюкановый компонент может включать, например, модифицированный и/или дериватизированный β-глюкан, такой как те β-глюканы, которые описаны в Международной патентной заявке PCT/US 12/36795. В других случаях β-глюкановый компонент может включать, например, твердочастичный-растворимый β-глюкан или твердочастичный-растворимый препарат β-глюкана, каждый из которых описан, например, в патенте США 7981447.

Антительный компонент композиции может включать любой препарат антител, который специфично связывается с β-глюкановым компонентом композиции. Используемый в настоящем описании термин «специфично» и его варианты означает имеющий отличающуюся или не широкую (т.е. неспецифичную) аффинность в любой степени к конкретной мишени. Таким образом, антительный компонент может включать препарат поликлональных антител (например, полученных из сыворотки крови), препарат моноклональных антител или любой фрагмент антитела, такой как Fc-фрагмент. Примеры моноклональных антител, которые специфично связываются с β-глюканом, включают, например, моноклональные антитела, идентифицированные как BfD I, BfD II, BfD III и/или BfD IV (Biothera, Inc., Eagan, MN), каждое из которых описано в патенте США 6294321.

Антитело или фрагмент антитела (например, Fc-фрагмент), конъюгированное с β-глюкановым компонентом, может представлять собой любое подходящее антитело или фрагмент антитела, которое может связываться с β-глюкановым компонентом.

β-Глюкановый компонент, антительный компонент и/или комбинация обоих компонентов могут находиться в составе композиции вместе с носителем. Используемый в описании термин «носитель» включает любой растворитель, диспергирующую среду, наполнитель, оболочку, разбавитель, антибактериальное средство и/или противогрибковое средство, изотоническое средство, средство, замедляющее всасывание, буфер, раствор-носитель, суспензию, коллоидную систему и тому подобное. Использование таких сред и/или средств для фармацевтически активных веществ хорошо известно из уровня техники. За исключением случаев, когда любые стандартные среды или средства являются несовместимыми с β-глюканом или антителом, их использование в терапевтических композициях предполагается. Дополнительные активные ингредиенты также могут быть включены в состав этих композиций.

«Фармацевтически приемлемым» считается материал, который не является нежелательным с биологической или иной точки зрения, т.е. материал может вводиться индивиду вместе с β-глюканом и/или антителом, не вызывая нежелательных биологических эффектов, или без вредного взаимодействия с любым из других компонентов фармацевтической композиции, в которой он содержится.

β-Глюкановый компонент, антительный компонент и/или комбинация обоих компонентов могут находиться в составе фармацевтической композиции. В некоторых вариантах осуществления изобретения β-глюкановый компонент композиции и антительный компонент композиции могут находиться в составе одного препарата. В других вариантах осуществления изобретения β-глюкановый компонент и антительный компонент могут находиться в составе разных препаратов. Композиция может быть изготовлена в различных и/или многих формах, приспособленных к одному или нескольким предпочтительным способам введения. Таким образом, композиция может быть введена одним или несколькими известными способами, включая, например, пероральное, парентеральное (например, внутрикожное, чрескожное, подкожное, внутримышечное, внутривенное, внутрибрюшинное и т.д.) или местное (например, интраназальное, внутрилегочное, интрамаммарное, интравагинальное, внутриматочное, внутрикожное, чрескожное, ректальное и т.д.) введение. Композиция или ее часть может быть введена на поверхность слизистой оболочки, например, путем введения, например, на слизистую оболочку носа или дыхательных путей (например, в виде спрея или аэрозоля). Композиция или ее часть также может быть введена путем длительного или замедленного высвобождения.

В целях удобства препарат может быть получен в виде лекарственной формы с отдельными единицами дозы, и может быть получен способами, хорошо известными в области фармацевтики. Способы получения композиции с фармацевтически приемлемым носителем включают стадию приведения β-глюкана и/или антитела в контакт с носителем, который содержит один или более вспомогательных ингредиентов. В основном, препарат может быть получен путем равномерного и/или непосредственного приведения активного химического соединения в контакт с жидким носителем, тонко измельченным твердым носителем или им обоими, и затем, при необходимости, формования продукта в необходимые препараты.

β-Глюкановый компонент, антительный компонент и/или комбинация обоих компонентов могут находиться в любой подходящей форме, включая без ограничений раствор, суспензию, эмульсию, спрей, аэрозоль или любую форму смеси. Композиция может вводиться в рецептуру препарата с любым фармацевтически приемлемым вспомогательным веществом, носителем или наполнителем. Например, препарат может быть получен в виде стандартной лекарственной формы для местного применения, такой как, например, крем, мазь, аэрозольный препарат, неаэрозольный спрей, гель, лосьон и тому подобное. Препарат также может включать одну или несколько добавок, в том числе такие как, например, адъювант, средство, усиливающее проникновение через кожу, краситель, ароматизатор, вкусовая добавка, увлажнитель, загуститель и тому подобное.

В другом аспекте настоящее изобретение относится к способу, который в основном включает совместное введение индивиду в эффективных количествах друг с другом β-глюкана и препарата антител, который специфично связывается с β-глюканом. Используемый в настоящем описании термин «совместное введение» относится к двум или более компонентам комбинации, вводимым так, что терапевтическое или профилактическое действие этой комбинации может быть сильнее, чем терапевтическое или профилактическое действие каждого компонента, вводимого отдельно. Два компонента могут быть совместно введены одновременно или последовательно. Одновременно вводимые компоненты могут находиться в одной или нескольких фармацевтических композициях. Последовательное совместное введение двух или более компонентов включает случаи, в которых компоненты вводятся так, чтобы оба компонента оказались одновременно биодоступными после того, как они оба были введены. Независимо от того, является ли совместное введение компонентов одновременным или последовательным, компоненты могут быть совместно введены в одну область или в различные области. Также используемый в настоящем описании термин «эффективное количество» относится к количеству β-глюкана и антитела, которое специфично связывается с β-глюканом, эффективному для повышения связывания β-глюкана с иммунными клетками, например, полиморфоядерными лейкоцитами (ПМЛ), моноцитами или нейтрофилами, или для повышения синтеза цитокинов и/или хемокинов, имеющих отношение к связыванию с β-глюканом, например, синтеза IL-8.

β-Глюкан, подходящий для применения в способах, включает один или несколько из тех β-глюканов, которые описаны как подходящие для применения в качестве β-глюканового компонента композиций, описанного выше. Также препарат антител может включать одно или несколько антител, описанных как подходящих для применения в качестве антительного компонента композиций, описанного выше.

Количество β-глюкана и антитела, эффективное для того, чтобы вызывать один или несколько из желаемых эффектов, может варьировать в зависимости от различных факторов, включая без ограничений массу тела, физическое состояние и/или возраст индивида и/или способ введения. Таким образом, абсолютное количество β-глюкана и антитела, которое специфично связывается с β-глюканом, находящееся в данной лекарственной форме с отдельными единицами дозы, может колебаться в широком диапазоне и зависит от таких факторов, как вид, возраст, масса тела и физическое состояние индивида, а также способа введения. Соответственно, практически невозможно указать универсальное количество, которое представляет собой количество β-глюкана и антитела, эффективное для всех возможных применений. Однако специалисты в данной области техники легко могут определить надлежащее количество с учетом вышеуказанных факторов.

В некоторых вариантах осуществления изобретения способ может включать введение индивиду β-глюкана в количестве, достаточном для того, чтобы обеспечить дозу, например, от примерно 100 нг/кг до примерно 50 мг/кг, хотя в некоторых вариантах осуществления изобретения способы могут выполняться путем введения β-глюкана в дозе, находящейся за пределами этого диапазона. В некоторых вариантах осуществления изобретения способ включает введение индивиду β-глюкана в количестве, достаточном для того, чтобы обеспечить дозу от примерно 10 мкг/кг до примерно 10 мг/кг, такую как, например, доза примерно 1 мг/кг, примерно 2 мг/кг, примерно 3 мг/кг, примерно 4 мг/кг, примерно 5 мг/кг, примерно 6 мг/кг, примерно 7 мг/кг, примерно 8 мг/кг, примерно 9 мг/кг или примерно 10 мг/кг. В одном конкретном варианте осуществления изобретения способ включает введение β-глюкана в количестве, достаточном для того, чтобы обеспечить дозу примерно 4 мг/кг.

В альтернативном варианте доза может быть рассчитана с использованием значения фактической массы тела, измеренного непосредственно перед началом курса лечения. Для дозировок, рассчитанных таким образом, площадь поверхности тела (м2) вычисляют непосредственно перед началом курса лечения по методу Дюбуа: м2 = (масса в кг0,425 × рост в см0,725) × 0,007184. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления изобретения способ может включать введение β-глюкана в количестве, достаточном для того, чтобы обеспечить дозу, например, от примерно 0,01 мг/м2 до примерно 10 мг/м2.

В некоторых вариантах осуществления изобретения способ может включать введение индивиду антитела, которое специфично связывается с β-глюканом, в количестве, достаточном для того, чтобы обеспечить дозу, например, от примерно 100 нг/кг до примерно 50 мг/кг, хотя в некоторых вариантах осуществления изобретения способы могут выполняться путем введения антитела в дозе, находящейся за пределами этого диапазона. В некоторых вариантах осуществления изобретения способ включает введение индивиду антитела в количестве, достаточном для того, чтобы обеспечить дозу от примерно 10 мкг/кг до примерно 5 мг/кг, например, дозу от примерно 100 мкг/кг до примерно 1 мг/кг. В некоторых вариантах осуществления изобретения антитело, которое специфично связывается с β-глюканом, может быть введено в виде внутривенного иммуноглобулина (ВВИГ), продукта крови, содержащего объединенный поливалентный IgG от многих доноров (как правило, многих сотен и даже тысяч доноров, и, таким образом, естественным образом содержащий антитела против β-глюкана). В таких вариантах осуществления изобретения ВВИГ может быть введен в дозе от примерно 0,1 г/кг до примерно 2,0 г/кг, такой как, например, 0,1 г/кг, 0,2 г/кг, 0,3 г/кг, 0,4 г/кг, 0,5 г/кг, 0,6 г/кг, 0,7 г/кг, 0,8 г/кг, 0,9 г/кг, 1,0 г/кг, 1,1 г/кг, 1,2 г/кг, 1,3 г/кг, 1,4 г/кг, 1,5 г/кг, 1,6 г/кг, 1,7 г/кг, 1,8 г/кг, 1,9 г/кг или 2,0 г/кг. В определенных вариантах осуществления изобретения ВВИГ может быть введен в дозе от примерно 0,4 г/кг до примерно 1,0 г/кг.

В альтернативном варианте доза может быть рассчитана с использованием значения фактической массы тела, измеренного непосредственно перед началом курса лечения. Для дозировок, рассчитанных таким образом, площадь поверхности тела (м2) вычисляют непосредственно перед началом курса лечения по методу Дюбуа: м2 = (масса в кг0,425 × рост в см0,725) × 0,007184. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления изобретения способ может включать введение антитела в количестве, достаточном для того, чтобы обеспечить дозу, например, от примерно 0,01 мг/м2 до примерно 10 мг/м2.

В некоторых вариантах осуществления изобретения β-глюкан и антитело могут совместно вводиться, например, от одной дозы до нескольких доз в неделю, хотя в некоторых вариантах осуществления изобретения способ может быть выполнен путем совместного введения β-глюкана и антитела с частотой, находящейся за пределами этого диапазона. В определенных вариантах осуществления изобретения β-глюкан и антитело могут вводиться с частотой от примерно одного раза в год до одного раза в неделю.

Как отмечалось выше, дрожжевые β-глюканы высоко ценятся за свои иммуномодулирующие свойства. Однако авторы настоящего изобретения обнаружили, что существуют различные популяции индивидов: одна популяция обладает относительно высокой способностью связывания β-глюкана с первоначальными иммунными клетками в цельной крови; другая популяция обладает относительно низкой способностью связывания β-глюкана с первоначальными иммунными клетками в цельной крови. Это наблюдение оказалось полностью неожиданным с точки зрения данных, полученных на мышиных моделях иммунитета и в ходе исследований с использованием изолированных иммунных клеток человека. Многие индивиды изначально обладают некоторым уровнем связывания β-глюкана с иммунными клетками, низким уровнем подверженности воздействию β-глюканов (например, Фиг. 1, «De novo»). При введении экзогенного β-глюкана, у индивидов, имеющих низкий уровень связывания, имеет место умеренное увеличение процента первоначальных иммунных клеток, связывающих β-глюкан, в то время как у индивидов, имеющих высокий уровень связывания, имеет место значительное увеличение процента первоначальных иммунных клеток, связывающих β-глюкан (Фиг. 1, «+Экзогенный PGG»). На Фиг. 1 и Фиг. 2 приведены данные, отражающие связывание β-глюкана с полиморфоядерными лейкоцитами (ПМЛ), и на Фиг. 3 (моноциты) показано, что различное связывание также имеет место в случае других популяций иммунных клеток. Кроме того, у индивидов, имеющих высокий уровень связывания, также имеет место тенденция к синтезу большего количества цитокинов и/или хемокинов, таких как, например, IL-8, MCP, MIP-1 и т.д.

Используемый в настоящем описании термин «статус индивида, имеющего высокий уровень связывания» относится к индивиду, который обладает заранее определенным процентным содержанием популяции конкретных иммунных клеток, которая связывается с экзогенно введенным β-глюканом. Популяция иммунных клеток, используемая для определения того, обладает ли индивид высоким уровнем связывания или низким уровнем связывания, может представлять собой, например, полиморфоядерные лейкоциты (ПМЛ) или моноциты. Индивид может считаться обладающим высоким уровнем связывания, если по меньшей мере 10% ПМЛ или моноцитов в образце крови этого индивида связываются с экзогенно введенным β-глюканом. Таким образом, индивид может быть индивидом, имеющим высокий уровень связывания, если по меньшей мере 10%, по меньшей мере 12%, по меньшей мере 15%, по меньшей мере 20%, по меньшей мере 15% или по меньшей мере 40% ПМЛ или моноцитов в образце крови этого индивида связываются с экзогенно введенным β-глюканом (см., например, Фиг. 2 и Фиг. 3). В некоторых случаях экзогенно введенный β-глюкан может включать PGG, находящийся в конченой концентрации от 10 мкг/мл до 100 мкг/мл. Термин «статус индивида, имеющего низкий уровень связывания» относится к индивиду, который не обладает статусом индивида, имеющего высокий уровень связывания.

Кроме того, индивиды, имеющие высокий уровень связывания, могут иметь более высокие титры антител против β-глюкана, по сравнению с индивидами с низким уровнем связывания (Фиг. 4). Как правило, титр антител против β-глюкана для индивида, имеющего высокий уровень связывания, может иметь значение по меньшей мере 25000, такое как, например, по меньшей мере 30000, по меньшей мере 35000, по меньшей мере 40000, по меньшей мере 45000, по меньшей мере 50000, по меньшей мере 55000 или по меньшей мере 60000 (см., например, Фиг. 4). Термин «титр антител против β-глюкана», как правило, относится к IgG. Однако в некоторых случаях присутствие IgM может компенсировать пониженный титр IgG, для присвоения статуса «индивид, имеющий высокий уровень связывания».

Известно, что β-глюкан связывается с лектинподобным доменом в COOH-концевой области CD11b субъединицы лейкоцитарного рецептора комплемента 3-го типа (CR3; CD11b/CD18, aMh2 интегрин, Mac-1; см. Thorton et al., J Immunol 156: 1235-46, Xia et al., J Immunol 162: 2281-90). β-Глюканы могут инициировать цитотоксичность CR3 нейтрофилов, макрофагов и естественных клеток-киллеров в отношении опухолей, опсонизированных iC3b. Двойное связывание лейкоцитарного CR3 через I-домен с лигандом iC3b и через лектинподобный домен с β-глюканом может приводить к дегрануляции и цитотоксическим ответам (Li et al., J Immunol 177: 1661-9; Tsikitis et al., J Immunol 173: 1284-91). Таким образом, можно было предположить, что индивиды с низким уровнем связывания могут иметь повышенные титры антител против β-глюкана, которые могут разрушать связь между β-глюканом и CR3.

Однако авторы настоящего изобретения обнаружили прямо противоположное. Индивиды с высоким уровнем связывания, имеют более высокие титры антител против β-глюкана, по сравнению с индивидами с низким уровнем связывания (Фиг. 4). Таким образом, повышенные титры антител против β-глюкана связаны с повышенным связыванием β-глюкана с CR3 на иммунных клетках.

Кроме того, эффект является передаваемым. Сыворотка крови индивида с высоким уровнем связывания способна повысить связывание β-глюкана с иммунными клетками (например, ПМЛ), полученными от индивида с низким уровнем связывания (Фиг. 5). Увеличение количества моноклональных антител против β-глюкана также способно повысить связывание β-глюкана с иммунными клетками (например, ПМЛ) в сыворотке крови, полученной от индивида с низким уровнем связывания (Фиг. 6). Кроме того, внутривенный иммуноглобулин (ВВИГ), продукт крови, содержащий объединенный поливалентный IgG от многих доноров (как правило, многих сотен и даже тысяч доноров) и имеющий высокий естественный титр антител против β-глюкана, также способен повысить связывание β-глюкана с иммунными клетками (например, ПМЛ) в сыворотке крови, полученной от индивида с низким уровнем связывания (Фиг. 7).

Эффект также был показан in vivo. У индивида с рецидивным метастатическим колоректальным раком имел место низкий уровень связывания после пяти циклов терапии, которая включала введение β-глюкана. Индивид имел связывание β-глюкана с ПМЛ и моноцитами <5% и титр антител против β-глюкана внизу 10% от кривой распределения для здоровых индивидов (от 1:1600 до 1:3200). Индивид несколько раз получал внутривенный иммуноглобулин (ВВИГ) в количестве от 0,4 г/кг до 1 г/кг. Образцы до и после лечения получали до и после второго введения. На Фиг. 8 показано, что индивид обладал низкой способностью связывания β-глюкана с ПМЛ и моноцитами по данным, полученным от образцов, взятых перед лечением (Фиг. 8, Перед введением Цикл 7), но имел значительное повышение способности связывания β-глюкана по данным, полученным от образцов, взятых после лечения ВВИГ (Фиг. 8, После введения Цикл 7). В образцах, полученных после лечения, титр антител против β-глюкана индивида также повысился до 1:25600, что свидетельствует о передаче антител против β-глюкана при лечении ВВИГ.

Кроме того, в двухгрупповом, открытом, рандомизированном, многоцентровом клиническом исследовании 795 индивидов с рецидивным/прогрессирующим колоректальным раком после по меньшей мере двух ранее полученных химиотерапевтических курсов лечения разделили на контрольную группу и исследуемую группу. Индивиды в контрольной группе получали лечение цетуксимабом. Индивиды в исследуемой группе получали лечение цетуксимабом + 4 мг/кг PGG β-глюкана. На Фиг. 9 показано, что индивиды, получавшие β-глюкан, как часть своей иммунотерапии, находились на лечении в течение более длительного среднего периода времени по сравнению с индивидами, получавшими только цетуксимаб, эффект был наиболее выражен у индивидов, имеющих высокий уровень связывания. В этом контексте продолжительность лечения является показателем успешности терапии, так как более длительное время лечения свидетельствует о положительном терапевтическом результате, в то время как более короткое время лечения свидетельствует о неблагоприятном исходе. Таким образом, существуют клинические последствия статуса индивида, имеющего высокий уровень связывания, по сравнению со статусом индивида, имеющего низкий уровень связывания.

Таким образом, в другом аспекте настоящее изобретение относится к иммунотерапии, которая включает введение индивиду β-глюкана, вводимого совместно с антителом, которое специфично связывается с β-глюканом, и дополнительно противоопухолевого антитела. Используемый в настоящем описании термин «противоопухолевое антитело» относится к антителу, которое специфично связывается с опухолевыми клетками, независимо от того образуют ли эти опухолевые клетки солидную опухоль или включают лейкемические клетки или клетки лимфомы. β-Глюкан и антитело, которое специфично связывается с β-глюканом, могут быть введены так, как подробно описано выше. Противоопухолевое антитело может представлять собой любое подходящее противоопухолевое антитело, вводимое в соответствии с указаниями производителя или медицинского работника. В этом контексте совместное введение β-глюкана и препарата антител может повысить эффективность иммунотерапии. Например, было показано, что PGG β-глюкан обладает преклинической активностью против различных типов злокачественных новообразований, когда вводится в комбинации с противоопухолевыми моноклональными антителами (mAb). Примеры типов злокачественных новообразований и связанных с ними противоопухолевых mAb включают, например, Т-клеточную лимфому (анти-MUC1, анти-GD2), неходжкинскую лимфому (ритуксимаб), хроническую лимфоцитарную лейкемию (ритуксимаб), карциному легкого (анти-MUC1), аденокарциному молочной железы (анти-MMTV), карциному яичника (бевацизумаб), немелкоклеточную карциному легкого (бевацизумаб, цетуксимаб), колоректальный рак (цетуксимаб) и карциному поджелудочной железы (цетуксимаб, анти-MUC1). У некоторых индивидов иммуностимулирующее действие PGG β-глюкана может быть усилено при помощи совместного введения антитела, которое специфично связывается с β-глюканом.

Аналогичное преобразование низкого уровня связывания у индивида в высокий уровень связывания может быть осуществлено путем введения индивиду композиции, которая содержит часть молекулы β-глюкана, конъюгированную с любым антителом или частью антитела. На Фиг. 10 приведены данные, иллюстрирующие, что относительно низкое связывание PGG с ПМЛ в цельной крови (Imp Ref, второе изображение) изменяется на высокое связывание путем конъюгации PGG или с BTH1704 (анти-MUC1, патент США 6204366, Biothera, Inc, Eagan, MN, третье изображение) или с ERBITUX (Eli Lilly and Co., Indianapolis, IN, четвертое изображение) противоопухолевыми антителами. На Фиг. 11 также показано, что относительно низкое связывание PGG с ПМЛ в цельной крови (Imp Ref, второе изображение) изменяется на высокое связывание путем конъюгации PGG с внутривенным иммуноглобулином (ВВИГ, Biolegend, San Diego, CA).

Таким образом, в другом аспекте настоящее изобретение относится к иммунотерапии, которая включает введение индивиду композиции, которая содержит часть молекулы β-глюкана, конъюгированную с антителом, терапевтическим антителом, противоопухолевым антителом или фрагментом антитела, таким как Fc-фрагмент антитела. Модифицированные и/или дериватизированные PGG, включая PGG конъюгаты части молекулы PGG и антитела, описаны в Международной патентной заявке PCT/US12/36795, которые также могут быть использованы в конъюгатах с фрагментами антител. Часть молекулы PGG может представлять собой или быть получена из β-1,3/1,6 глюкана. В этом контексте термин «получена из» означает, что конъюгат обязательно может быть получен путем создания ковалентной связи, которая замещает один или несколько атомов PGG β-глюкана. Используемый в настоящем описании термин «полученный из β-1,3/1,6 глюкана» относится к части PGG β-глюкана, которая остается частью конъюгата после замещения одного или нескольких атомов PGG с образованием ковалентной связи конъюгата.

Терапевтическое антитело может представлять собой любое терапевтическое антитело, способное объединяться с β-глюканом для иммунотерапии. Таким образом, терапевтическое антитело также может включать любое из противоопухолевых антител, описанных выше в связи с другими аспектами настоящего изобретения, для проведения иммунотерапии против различных форм злокачественных новообразований.

Используемый в настоящем описании термин «и/или» означает один или все из перечисленных элементов или комбинацию любых двух или более из перечисленных элементов; термин «содержит» и его варианты не имеет ограничивающего значения, когда эти термины появляются в описании и формуле изобретения; если не указано иное, то единственное число существительных и термин «по меньшей мере один» используются взаимозаменяемо и означают один или более чем один; и указание числовых диапазонов при помощи их крайних значений включает все числа, находящиеся в пределах этого диапазона (например, диапазон от 1 до 5 включает 1, 1,5, 2, 2,75, 3, 3,80, 4, 5 и т.д.).

В предшествующем описании конкретные варианты осуществления изобретения для ясности могут быть описаны по отдельности. Если иное явно не указано, то признаки конкретного варианта осуществления изобретения являются несовместимыми с признаками другого варианта осуществления изобретения, определенные варианты осуществления изобретения могут включать комбинацию совместимых признаков, описанных в настоящем описании в связи с одним или несколькими вариантами осуществления изобретения.

Для любого раскрытого в настоящем описании способа, включающего отдельные стадии, стадии могут быть выполнены в любой возможной последовательности, и, при необходимости, любая комбинация двух или более стадий может быть выполнена одновременно.

Настоящее изобретение иллюстрируется следующими примерами. Следует понимать, что конкретные примеры, материалы, количества и методики должны интерпретироваться в широком смысле в соответствии с объемом и сущностью настоящего изобретения, как предусмотрено настоящей заявкой.

Примеры

Пример 1

Материалы

Imprime PGG (Biothera, Inc., Eagan, MN) представлял собой не содержащий консервантов препарат β-глюкана, полученный в концентрации 1 мг/мл в 0,8% растворе хлорида натрия и 0,2% растворе однозамещенного цитрата натрия со значением pH 6,4. Это химическое соединение хранили при температуре 4-8°C до момента использования.

Получение образцов

Цельная кровь. Свежую цельную кровь (ЦК) получали от здоровых добровольцев, которые давали информированное согласие перед взятием у них крови (Комиссия по медицинской этике, Новая Англия, май 2007). Кровь собирали в пробирки Vacutainer®, содержащие 158 единиц по фармакопеи США лиофилизированного гепарина натрия (BD Biosciences; San Jose, CA).

Сыворотка и плазма крови. Из цельной крови получали сыворотку или плазму крови путем сбора крови в пробирки Vacutainer® (BD Biosciences; San Jose, CA), которые представляли собой или пробирки для отделения сыворотки (красный верх) или пробирки с гепарином натрия (зеленый верх). Пробирки хорошо перемешивали, инкубировали при комнатной температуре в течение 30 минут и затем центрифугировали при 2000 об./мин (~1150 × g) в течение 10 минут. Затем супернатант (или сыворотку или плазму) переносили в свежую поликарбонатную коническую пробирку для хранения.

Метод анти-β-глюкан твердофазного ИФА

Предварительный метод твердофазного ИФА, модифицированный из метода анализа с использованием антител обезьяны против β-глюкана (Noss et al., 2012 Int. Arch. Allergy Immunol., 157: 98-108), использовали для проверки образцов сыворотки крови человека. Универсальные планшеты для связывания Costar покрывали 50 мкл β-глюкана в виде 1 мкг/мл очищенного β-глюкана, разведенного в очищенной воде, и инкубировали при температуре 37°C в течение 30 минут. Покрытый планшет подвергали затем воздействию высокоинтенсивного ультрафиолетового света при >1500 мкВт/см2 в течение пяти минут при комнатной температуре и помещали в печь с принудительной подачей воздуха при температуре 50°C до высыхания перед вторым воздействием ультрафиолетового света при >1500 мкВт/см2 в течение пяти минут при комнатной температуре. Затем планшет блокировали 0,5% раствором бычьего сывороточного альбумина в течение >30 минут перед промывкой промывочным буфером (фосфатно-солевой буфер (ФСБ) с 0,05% Твин-20). Образцы сыворотки крови человека разбавляли в промывочном буфере, добавленном в планшет, и затем делали серию разведений в промывочном буфере в планшете. Исследуемые образцы, разбавленные в соотношении 1:400 переносили при помощи пипетки на аналитический планшет с семью дополнительными последовательными двукратными разведениями (разведениями сыворотки крови от 1:400 до 1:12800). Образцы инкубировали при комнатной температуре в течение 30 минут, чтобы дать возможность IgG человека связаться с β-глюкановым антигеном, связанным с планшетом. После инкубации лунки промывали промывочным буфером, и меченное ферментом вторичное антитело (пероксидаза хрена, конъюгированная с аффинно очищенным козьим IgG, специфичным в отношении Fc-гамма фрагмента IgG человека) инкубировали в лунках для связывания его с IgG человека, связанным с β-глюкановым антигеном. Вторичное антитело инкубировали в течение 30 минут перед промывкой промывочным буфером. После полного удаления из лунок промывочного буфера, субстрат пероксидазы инкубировали в лунках, и формирование цвета останавливали ~1M фосфорной кислотой после пяти минут формирования цвета. Оптическую плотность (ОП) при 450 нм измеряли при помощи аппарата для чтения титрационных микропланшетов.

Определение титра антитела против β-глюкана

Значения ОП, полученные в результате повторных измерений лунок, усредняли и вычитали среднее значение фона образца. Самое большое разведение, имеющее значение ОП больше или равное 0,100 после вычитания из него значения фона, считали титром образца и выражали в виде обратной величины этого разведения. Для определения надежности анализа определяли значения стандартизированной контрольной сыворотки и строили контрольную кривую для каждого анализируемого планшета. Например, считали, что исследуемый образец, который имеет значение ОП после вычитания из него значения фона равное 0,100, при разведении 1:12800, имеет титр 12800. Когда образцы измеряли несколько раз, и среднее значение их титров находилось между последовательными двукратными разведениями от разведения 1:400, ближайшее наименьшее значение двукратного разведения рассматривали в качестве их титров. Например, исследование сыворотки крови, полученной от одного донора за четыре раза взятия крови и измеренной в пяти отдельных анализах, дало среднее значение титра 28160; титром этого образца считали 25600.

Калибровочная кривая анализа. Значение 160 условных единиц на мл (УЕ/мл) было установлено для стандарта антител против β-глюкана человека. Таким образом, разведение 1:400 при анализе дало значение 400 мУЕ/мл, это была самая высокая точка на калибровочной кривой разведений. Дополнительные последовательные двукратные разведения были приготовлены на аналитическом планшете. Контроли анализа разбавляли в соотношении 1:100 в промывочном буфере ИФА для измерения. Кроме того, независимо готовили два разведения каждого контрольного уровня для параллельного измерения на каждом планшете.

Статистический анализ. Путем построения графика зависимости скорректированной с учетом фона оптической плотности от стандартной концентрации в мУЕ/мл получали стандартную калибровочную кривую. Используя программное обеспечение для ИФА, осуществляли четырехпараметрическую подгонку калибровочной кривой доза-эффект, чтобы определить неизвестные значения для образцов, контролей и тест-сыворотки. Аналитические значения функции, находящиеся между верхней и нижней точками перегиба калибровочной кривой (линейная часть) использовали для определения экспериментальных значений образцов. Для вычисления коэффициента вариации (%КВ) среднее квадратичное отклонение набора значений делили на среднее значение для того же набора значений, и результат умножали на 100.

Связывание PGG с клетками цельной крови (ЦК)

Сто микролитров ЦК, полученной от здоровых доноров, распределяли по полистироловым пробиркам для клеточного сортера с активацией флуоресценции (КСАФ) объемом 5 мл. Эти образцы ЦК стимулировали или Imprime PGG (10 мкг/мл или 100 мкг/мл) или цитратным буфером (контрольная пробирка). Пробирки для КСАФ, содержащие образцы, слабо закрывали соответствующими крышками и инкубировали в течение 30 минут в течение двух часов при температуре 37°C во влажной камере (5% CO2).

Таблица 1
Коктейль антител, использованный для окрашивания образцов цельной крови
Антитело Компания; Клон # Разведение или Конечная концентрация Для идентификации:
Анти-CD15 Biolegend; W6D3 0,2 мкг/мл нейтрофилы
Анти-CD19 Biolegend; HIB19 0,63 мкг/мл B-клетки
Анти-CD14 Biolegend; HCD14 5 мкг/мл моноциты
Анти-CD14 Biolegend; Tük4 1:50 моноциты
Анти-CD3 Biolegend; HIT3a 0,25 мкг/мл T-клетки
Анти-CD45 Biolegend; HI30 0,25 мкг/мл гемопоэтические клетки кроме эритроцитов и тромбоцитов
Козье F(ab')2 против IgM мыши Jackson Immunolab 5 мкг/мл антитело против β-глюкана мыши

В продолжение инкубации с антителом против β-глюкана BfD IV клетки инкубировали с коктейлем антител, который содержал вторичное антитело для распознавания BfD IV, а также антитела для распознавания различных маркеров клеточной поверхности.

После инкубации все образцы промывали путем добавления 2 мл 1× фосфатно-солевого буфера Дульбекко (ДФСБ) и центрифугировали при 1500-1700 об./мин при температуре 4°C в течение пяти минут. После двух циклов промывки и отсасывания жидкости, 5 мкл антитела против β-глюкана BfD IV (~100 мкг/мл) смешивали в каждой пробирке и инкубировали при комнатной температуре в течение 30 минут. Это первичное антитело дважды промывали 1× ДФСБ как описано выше, добавляли коктейль антител, содержащий вторичное антитело, а также антитела, специфичные в отношении маркеров клеточной поверхности (Таблица 1), и инкубировали в течение 30 минут при комнатной температуре в темноте. Для лизиса эритроцитов в каждый образец добавляли 2 мл 1× лизирующего раствора BD (BD Biosciences; San Jose, CA) и осторожно перемешивали на вортексе. После инкубации в течение одного часа при комнатной температуре образцы центрифугировали при 1500-1700 об./мин при температуре 4°C в течение пяти минут. Лизирующий раствор BD отсасывали, и клетки промывали один раз 1× ДФСБ и жидкость отсасывали как описано выше. Для фиксации в каждый образец добавляли 300-400 мкл 1% параформальдегида. Образцы анализировали на проточном цитометре LSR II (BD Biosciences; San Jose, CA) в течение 20 часов фиксации. Данные анализировали при помощи программного обеспечения FlowJo (Tree Star, Ashland, OR).

Пример 2

Материалы

Imprime PGG (Biothera, Inc., Eagan, MN) представлял собой не содержащий консервантов препарат β-глюкана, полученный в концентрации 1 мг/мл в 0,8% растворе хлорида натрия и 0,2% растворе однозамещенного цитрата натрия со значением pH 6,4. Это химическое соединение хранили при температуре 4-8°C до момента использования.

Анализ связывания цельной крови (ЦК)

Свежую ЦК получали от здоровых добровольцев, которые давали информированное согласие перед взятием у них крови (Комиссия по медицинской этике, Новая Англия. Протокол сдачи крови No. 07-124). Кровь собирали в пробирку Vacutainer®, содержащую 158 единиц по фармакопеи США лиофилизированного гепарина натрия (BD Biosciences; San Jose, CA). Сыворотку крови собирали в пробирку Vacutainer®, содержащую активатор сгустка на основе тромбина (BD Biosciences; San Jose, CA). Приблизительно через 20 минут после сбора пробирку центрифугировали при 2000 об./мин в течение 10 минут при комнатной температуре. Сыворотку крови отбирали из этой пробирки и хранили при температуре 4°C в течение 8 часов или при температуре -80°C для использования после 8 часов.

Анализ связывания цельной крови проводили путем инкубации образцов цельной крови с Imprime PGG в течение 30 минут или двух часов при температуре 37°C во влажной камере. После промывки 1× фосфатно-солевым буфером Дульбекко (ДФСБ) добавляли мышиное антитело против β-глюкана BfDIV и инкубировали с ЦК в течение 30 минут при комнатной температуре. После нескольких циклов промывки добавляли коктейль антител, включающий козье анти-мышиное детекторное антитело и антитела, специфичные в отношении молекул клеточной поверхности, и инкубировали при комнатной температуре в темноте в течение 30 минут. Эритроциты лизировали лизирующим раствором BD, и образцы ресуспендировали в 1% параформальдегиде. Образцы анализировали на проточном цитометре, и полученные данные анализировали при помощи программного обеспечения FlowJo (Ashland, OR).

Перекрестные исследования ЦК и сыворотки крови

Для перекрестных исследований сыворотки крови цельную кровь центрифугировали при 1200 об./мин в течение 10 минут и удаляли плазму крови. Клетки крови промывали 1-2 раза 1× ДФСБ для удаления остатков плазмы. 50 мкл сыворотки крови добавляли и смешивали перед добавлением Imprime.

Для инкубации с анти-β-глюкан IgG (BioSupplies, Австралия) лиофилизированное антитело ресуспендировали в концентрации 1 мг/мл в 1× ДФСБ и хранили при температуре -80°C или 4°C в качестве исходного раствора. Перед добавлением образцов крови исходный раствор разбавляли в соотношении 1:10, чтобы получить концентрацию 100 мкг/мл, и 10 мкл этого раствора добавляли к 100 мкл крови. Для инкубации с ВВИГ, 10% ВВИГ (100 мг/мл) (PRIVIGEN, CSL Behrling, King of Prussia, PA) добавляли в образец цельной крови при указанных конечных концентрациях.

Пример 3

Свежую цельную кровь получали от здоровых добровольцев, которые давали информированное согласие перед взятием у них крови. Кровь собирали в пробирки Vacutainer®, содержащие 158 единиц по фармакопеи США лиофилизированного гепарина натрия (BD Biosciences; San Jose, CA). 100 мкл цельной крови, полученной от здоровых доноров, распределяли по полистироловым пробиркам для КСАФ объемом 5 мл. Образцы стимулировали или контрольным наполнителем или контрольным стандартным PGG или конъюгатом PGG-Muc1 (Imp-BTH1704), конъюгатом PGG-Erbitux (10 мкг/мл) или конъюгатом PGG-ВВИГ. Конъюгаты PGG с противоопухолевым антителом получали, как описано в Международной патентной заявке PCT/US12/36795.

Пробирки, содержащие образцы, слабо закрывали парафильмом и инкубировали в течение 30 минут при температуре 37°C во влажной камере (5% CO2). После инкубации все образцы дважды промывали 2 мл 1× ДФСБ и центрифугировали при 1500-1700 об./мин при температуре 4°C в течение пяти минут. После отсасывания жидкости, 5 мкл антитела против β-глюкана BfD IV (Biothera, Inc., Eagan, MN; патент США 6294321) смешивали в каждой пробирке и инкубировали при комнатной температуре в течение 30 минут. Это антитело дважды промывали, добавляли коктейль антител, содержащий вторичное антитело FITC-конъюгированный козий анти-мышиный IgM (Southern Biotech; Birmingham, AL), а также антитела, специфичные в отношении маркеров клеточной поверхности CD15, CD14, CD19, CD3 и CD45 (Biolegend, San Diego, CA), и инкубировали в течение 30 минут при комнатной температуре в темноте. Для лизиса эритроцитов в каждый образец добавляли 2 мл 1x лизирующего раствора BD (BD Biosciences; San Jose, CA) и осторожно на вортексе. После инкубации при комнатной температуре в течение 30 минут образцы центрифугировали, как описано выше, и осадок промывали 2 мл 1× ДФСБ. Клетки смешивали с 300 мкл 1% параформальдегида и анализировали на проточном цитометре LSR II (BD Biosciences; San Jose, CA). Полученные данные анализировали при помощи программного обеспечения FlowJo (Tree Star, Ashland, OR). Клетки оценивали по их способности связываться с PGG путем сравнения средней интенсивности флуоресценции (СИФ) клеток, окрашенных BfD IV, и процента BfD IV-позитивных клеток по отношению к проценту этих клеток в обработанной наполнителем контрольной группе.

Примеры вариантов осуществления изобретения

Вариант осуществления изобретения 1. Композиция, содержащая:

растворимый β-глюкановый компонент; и

антительный компонент, который специфично связывается с растворимым β-глюканом.

Вариант осуществления изобретения 2. Композиция в соответствии с Вариантом осуществления изобретения 1, в которой растворимый β-глюкан получен из дрожжей.

Вариант осуществления изобретения 3. Композиция в соответствии с Вариантом осуществления изобретения 1 или Вариантом осуществления изобретения 2, в которой растворимый β-глюкан содержит β-1,3/1,6 глюкан.

Вариант осуществления изобретения 4. Композиция в соответствии с любым предшествующим Вариантом осуществления изобретения, в которой растворимый β-глюкан содержит β(1,6)-[поли-(1,3)-D-глюкопиранозил]-поли-β(1,3)-D-глюкопиранозу.

Вариант осуществления изобретения 5. Композиция в соответствии с любым предшествующим Вариантом осуществления изобретения, в которой антительный компонент содержит моноклональное антитело, которое специфично связывается с растворимым β-глюканом.

Вариант осуществления изобретения 6. Композиция в соответствии с Вариантом осуществления изобретения 5, в которой моноклональное антитело содержит BfD I, BfD II, BfD III или BfD IV.

Вариант осуществления изобретения 7. Композиция в соответствии с любым предшествующим Вариантом осуществления изобретения, в которой растворимым β-глюкановый компонент и антительный компонент находятся в одном препарате.

Вариант осуществления изобретения 8. Композиция в соответствии с любым предшествующим Вариантом осуществления изобретения, в которой растворимым β-глюкановый компонент и антительный компонент находятся в разных препаратах.

Вариант осуществления изобретения 9. Композиция в соответствии с любым предшествующим Вариантом осуществления изобретения, которая дополнительно содержит противоопухолевое антитело.

Вариант осуществления изобретения 10. Способ, включающий совместное введение индивиду растворимого β-глюкана и препарата антител или антительного компонента, который специфично связывается с растворимым β-глюканом.

Вариант осуществления изобретения 11. Способ повышения ответа индивида на иммунотерапию растворимым β-глюканом, способ включает совместное введение индивиду композиции, содержащей растворимый β-глюкан и препарат антител, который специфично связывается с растворимым β-глюканом.

Вариант осуществления изобретения 12. Способ в соответствии с Вариантом осуществления изобретения 11, который дополнительно включает идентификацию индивида, как имеющего низкий уровень связывания β-глюкана.

Вариант осуществления изобретения 13. Способ в соответствии с любым из Вариантов осуществления изобретения 10-12, в котором растворимый β-глюкан и препарат антител вводятся совместно одновременно.

Вариант осуществления изобретения 14. Способ в соответствии с любым из Вариантов осуществления изобретения 10-12, в котором растворимый β-глюкан и препарат антител вводятся совместно в разные моменты времени.

Вариант осуществления изобретения 15. Способ в соответствии с любым из Вариантов осуществления изобретения 10-12, в котором растворимый β-глюкан и препарат антител вводятся совместно в различные области.

Вариант осуществления изобретения 16. Способ в соответствии с любым из Вариантов осуществления изобретения 10-15, в котором растворимый β-глюкан получен из дрожжей.

Вариант осуществления изобретения 17. Способ в соответствии с любым из Вариантов осуществления изобретения 10-16, в котором растворимый β-глюкан содержит β-1,3/1,6 глюкан.

Вариант осуществления изобретения 18. Способ в соответствии с любым из Вариантов осуществления изобретения 10-17, в котором растворимый β-глюкан содержит β(1,6)-[поли-(1,3)-D-глюкопиранозил]-поли-β(1,3)-D-глюкопиранозу.

Вариант осуществления изобретения 19. Способ в соответствии с любым из Вариантов осуществления изобретения 10-18, в котором антительный компонент содержит моноклональное антитело, которое специфично связывается с β-глюканом.

Вариант осуществления изобретения 20. Способ в соответствии с Вариантом осуществления изобретения 19, в котором моноклональное антитело содержит BfD I, BfD II, BfD III или BfD IV.

Вариант осуществления изобретения 21. Способ повышения ответа индивида на иммунотерапию растворимым β-глюканом, способ включает введение индивиду композиции, которая содержит часть молекулы растворимого β-глюкана, конъюгированную с антителом или фрагментом антитела.

Вариант осуществления изобретения 22. Способ в соответствии с Вариантом осуществления изобретения 21, который дополнительно включает идентификацию индивида, как имеющего низкий уровень связывания растворимого β-глюкана.

Вариант осуществления изобретения 23. Способ в соответствии с Вариантом осуществления изобретения 21 или Вариантом осуществления изобретения 22, в котором часть молекулы растворимого β-глюкана получена из дрожжей.

Вариант осуществления изобретения 24. Способ в соответствии с Вариантами осуществления изобретения 21-23, в котором часть молекулы растворимого β-глюкана содержит или получена из β-1,3/1,6 глюкана.

Вариант осуществления изобретения 25. Способ в соответствии с любым из Вариантов осуществления изобретения 21-24, в котором часть молекулы растворимого β-глюкана содержит или получена из β(1,6)-[поли-(1,3)-D-глюкопиранозил]-поли-β(1,3)-D-глюкопиранозы.

Вариант осуществления изобретения 26. Способ в соответствии с любым из Вариантов осуществления изобретения 21-25, в котором антитело включает терапевтическое антитело.

Вариант осуществления изобретения 27. Способ в соответствии с любым из Вариантов осуществления изобретения 21-26, который дополнительно включает введение противоопухолевого антитела.

Вариант осуществления изобретения 28. Способ в соответствии с Вариантом осуществления изобретения 27, в котором противоопухолевое антитело специфично связывается с лейкемическими клетками или клетками лимфомы.

Вариант осуществления изобретения 29. Способ в соответствии с Вариантом осуществления изобретения 27, в котором противоопухолевое антитело связывается с клетками солидной опухоли.

Вариант осуществления изобретения 30. Способ лечения опухоли, включающий совместное введение имеющему опухоль индивиду композиции, которая содержит:

растворимый β-глюкан;

препарат антител, который специфично связывается с растворимым β-глюканом; и

препарат противоопухолевого антитела.

Вариант осуществления изобретения 31. Способ в соответствии с Вариантом осуществления изобретения 30, который дополнительно включает идентификацию индивида, как имеющего низкий уровень связывания растворимого β-глюкана.

Полное раскрытие всех патентов, патентных заявок и публикаций и материалов, доступных в электронной форме, (включая, например, нуклеотидные последовательности, зарегистрированные, например, в GenBank и RefSeq, и аминокислотные последовательности, зарегистрированные, например, в SwissProt, PIR, PRF, PDB, и трансляции аннотированных кодирующих областей в GenBank и RefSeq), упомянутые в настоящем изобретении, включены в описание в качестве ссылки в полном объеме. В случае любых разночтений между раскрытием настоящей заявки и раскрытием любого документа, включенного в описание в качестве ссылки, раскрытие настоящей заявки имеет преимущественную силу. Предыдущее подробное описание и примеры были приведены только для ясности понимания, и они не предполагают никаких излишних ограничений. Настоящее изобретение не ограничено конкретными вариантами осуществления, приведенными и описанными в нем, варианты, очевидные для специалиста в данной области техники, будут включены в настоящее изобретение, определенное формулой изобретения.

Если не указано иное, то все числа, выражающие количества компонентов, молекулярные массы и тому подобное, используемые в описании и формуле изобретения, следует понимать как модифицированные во всех случаях термином «примерно». Соответственно, наоборот, если не указано иное, то числовые параметры, указанные в описании и формуле изобретения, являются приблизительными, и они могут изменяться в зависимости от необходимых свойств, которые должны быть получены при помощи настоящего изобретения. По меньшей мере не пытаясь ограничить принцип эквивалентов объема формулы изобретения, каждый числовой параметр следует рассматривать по меньшей мере как число приведенных значащих цифр и с применением стандартных правил округления.

Несмотря на то, что числовые диапазоны и параметры, устанавливающие широкий объем изобретения, являются приблизительными, числовые значения, приведенные в конкретных примерах, указаны настолько точно, насколько это возможно. Однако все числовые значения изначально содержат диапазон, неизбежно возникающий в результате погрешности, имеющей место при их измерении.

Все заголовки приводятся для удобства читателя и не должны использоваться для ограничения смыслового содержания текста, следующего за заголовком, если это специально не указано.

1. Композиция для повышения иммунного ответа индивида на опухоль, причем композиция содержит:

растворимый β-глюкановый компонент;

антительный компонент, который специфично связывается с растворимым β-глюканом; и

противоопухолевое антитело.

2. Композиция по п. 1, в которой растворимый β-глюкан получен из дрожжей.

3. Композиция по п. 1 или 2, в которой растворимый β-глюкан содержит β-1,3/1,6 глюкан.

4. Композиция по п. 1 или 2, в которой растворимый β-глюкан содержит β(1,6)-[поли-(1,3)-D-глюкопиранозил]-поли-β(1,3)-D-глюкопиранозу.

5. Композиция по п. 1 или 2, в которой антительный компонент содержит моноклональное антитело, которое специфично связывается с растворимым β-глюканом.

6. Композиция по по п. 5, в которой моноклональное антитело содержит BfD I, BfD II, BfD III или BfD IV.

7. Композиция по п. 1 или 2, в которой растворимый β-глюкановый компонент и антительный компонент находятся в одном составе.

8. Композиция по п. 1 или 2, в которой растворимый β-глюкановый компонент и антительный компонент находятся в разных составах.

9. Способ повышения иммунного ответа индивида на опухоль, причем способ включает введение индивиду композиции по п. 1.

10. Способ повышения ответа индивида на иммунотерапию растворимым β-глюканом, способ включает введение индивиду растворимого β-глюкана и препарата антител, который специфично связывается с растворимым β-глюканом.

11. Способ по п. 10, который дополнительно включает идентификацию индивида как имеющего низкий уровень связывания β-глюкана.

12. Способ по любому из пп. 9-11, в котором растворимый β-глюкан и препарат антител вводятся одновременно.

13. Способ по любому из пп. 9-11, в котором растворимый β-глюкан и препарат антител вводятся в разные моменты времени.

14. Способ по любому из пп. 9-11, в котором растворимый β-глюкан и препарат антител вводятся в различные области.

15. Способ по любому из пп. 9-11, в котором растворимый β-глюкан получен из дрожжей.

16. Способ по любому из пп. 9-11, в котором растворимый β-глюкан содержит β-1,3/1,6 глюкан.

17. Способ по любому из пп. 9-11, в котором растворимый β-глюкан содержит β(1,6)-[поли-(1,3)-D-глюкопиранозил]-поли-β(1,3)-D-глюкопиранозу.

18. Способ по любому из пп. 9-11, в котором антительный компонент содержит моноклональное антитело, которое специфично связывается с β-глюканом.

19. Способ по п. 18, в котором моноклональное антитело содержит BfD I, BfD II, BfD III или BfD IV.

20. Способ повышения ответа индивида на иммунотерапию растворимым β-глюканом, способ включает введение индивиду композиции, которая содержит часть молекулы растворимого β-глюкана, конъюгированную с антителом или фрагментом антитела.

21. Способ по п. 20, который дополнительно включает идентификацию индивида, как имеющего низкий уровень связывания растворимого β-глюкана.

22. Способ по п. 20 или 21, в котором часть молекулы растворимого β-глюкана получена из дрожжей.

23. Способ по п. 20 или 21, в котором часть молекулы растворимого β-глюкана содержит или получена из β-1,3/1,6 глюкана.

24. Способ по п. 20 или 21, в котором часть молекулы растворимого β-глюкана содержит или получена из β(1,6)-[поли-(1,3)-D-глюкопиранозил]-поли-β(1,3)-D-глюкопиранозы.

25. Способ по п. 20 или 21, в котором антитело содержит терапевтическое антитело.

26. Способ по п. 20 или 21, который дополнительно включает введение противоопухолевого антитела.

27. Способ по п. 26, в котором противоопухолевое антитело специфично связывается с лейкемическими клетками или клетками лимфомы.

28. Способ по п. 26, в котором противоопухолевое антитело связывается с клетками солидной опухоли.

29. Способ лечения опухоли, включающий введение имеющему опухоль индивиду композиции, которая содержит:

растворимый β-глюкан;

препарат антител, который специфично связывается с растворимым β-глюканом; и

препарат противоопухолевого антитела.

30. Способ по п. 29, который дополнительно включает идентификацию индивида как имеющего низкий уровень связывания растворимого β-глюкана.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к области биохимии. Изобретение представляет собой фрагмент ингибитора циклин-зависимой киназы p16INK4a, способный индуцировать иммунный ответ против p16INK4a , молекулу нуклеиновой кислоты, вектор, содержащий молекулу нуклеиновой кислоты, вирусный вектор, а также их применение.

Предложенная группа изобретений относится к области медицины. Предложена композиция, содержащая самореплицирующуюся молекулу РНК, кодирующую антиген, в комплексе с частицей катионной эмульсии «масло-в-воде», где частица содержит масляное ядро и катионный липид и где средний диаметр частиц эмульсии составляет приблизительно от 80 до 180 нм.

Изобретение относится к пищевой и фармацевтической промышленности, где может быть использовано для создания биологически активных лечебно-профилактических композиций, содержащих сухие и жидкие экстракты лекарственных растений, функциональных продуктов питания, повышающих иммунобиологическую резистентность организма и оказывающих гепатопротекторное действие.

Изобретение относится к области ветеринарии и предназначено для повышения неспецифической резистентности организма свиней. Смешивают 90 мас.ч.

Изобретение относится к области ветеринарии и предназначено для активизации неспецифической резистентности организма крупного рогатого скота. Смешивают 90 мас.

Изобретение относится к ветеринарной фармации, а именно к препарату для профилактики и лечения свободнорадикальной патологии у животных, содержащему 3,0-5,0 мас.% фенил-трет-бутилнитрона, 1,0-2,0 мас.% β-каротина, 7,5-10,5 мас.% 2,6-дитретбутил-4-нонилфенола, 10,0-15,0 мас.% 2,4,6,8-тетраметил-2,4,6,8-тетраазабицикло-(3,3,0)-октадиселенона-3,7, 5,0-9,0 мас.% солютола HS15, 0,2-0,4 мас.% поливинилпирролидона и воды для инъекций (остальное).

Изобретение относится к области биотехнологии. Изобретение представляет собой способ получения биологически активных веществ в клеточной культуре болиголова пятнистого (Conium maculatum L), включающий культивирование на питательной среде МС каллусной культуры болиголова пятнистого в присутствии 6-бензиламинопурина в течение 30 суток, сбор биомассы и выделение биологически активных веществ, отличающийся тем, что культивирование ведут при 26±1°С, влажности 70%, в темноте, 6-бензиламинопурин вводят в питательную среду при концентрации 1 - 0,1 мг/л совместно с 2,4-дихлорфеноксиуксусной кислотой при концентрации в диапазоне 1 - 0,5 мг/л или совместно с α-нафтилуксусной кислотой при концентрации в диапазоне 3 - 0,5 мг/л, а биологически активные вещества выделяют путем кислого и щелочного хлороформного извлечения.

Изобретение относится к области медицины, а именно к педиатрии, и может быть использовано для лечения и профилактики хронических воспалительных заболеваний носоглотки (ХВЗН) у детей 4-10 лет, проживающих в зоне влияния промышленных предприятий в условиях загрязнения атмосферного воздуха бензолом и формальдегидом.
Группа изобретений относится к медицине и касается мультивалентной иммуногенной композиции, содержащей 13 различных конъюгатов полисахарид-белок вместе с физиологически приемлемой средой, где каждый из конъюгатов полисахарид-белок содержит капсульный полисахарид от отдельного серотипа Streptococcus pneumoniae, конъюгированный с белком-носителем CRM197, и капсульные полисахариды получены от 12 серотипов, выбранных из группы, состоящей из 1, 3, 4, 5, 6А, 6B, 7F, 9V, 14, 18С, 19А, 19F и 23F, и серотипа 22F или 33F.

Изобретение относится к области ветеринарии и предназначено для профилактики иммунодефицита, повышения иммунобиологической реактивности и воспроизводительной функции у телок в период наступления физиологической зрелости.

Представлены способ получения антитела, способ получения фармацевтического препарата, содержащего антитело, полученного указанным способом, молекула нуклеиновой кислоты, применение вектора, содержащего такую молекулу нуклеиновой кислоты, и применение клетки, в которую искусственно ввели указанные молекулу нуклеиновой кислоты или вектор в способе получения антитела.

Изобретение относится к области биохимии. Предложено выделенное антитело или его функциональная часть, способное специфически связывать респираторно-синцитиальный вирус (РСВ).

Изобретение относится к области биохимии. Предложено антитело к рецептору эпидермального фактора роста 2 (HER2) человека, а также включающие указанное антитело фармацевтические композиции, предназначенные для профилактики и лечения злокачественной опухоли и для индуцирования апоптоза.

Настоящая группа изобретений относится к биотехнологии и медицине. Предложены связывающая молекула, специфически связывающаяся с двумя различными эпитопами на HER2, и способ ее получения, а также кодирующая ее молекула нуклеиновой кислоты, экспрессирующий вектор, включающий эту молекулу нуклеиновой кислоты, клетка-хозяин для экспрессии связывающей молекулы, трансформированная экспрессирующим вектором, и фармацевтическая композиция для лечения рака, включающая связывающую молекулу, или молекулу нуклеиновой кислоты ее кодирующую, или экспрессирующий вектор.

Изобретение относится к области биохимии. Заявлено антитело, специфически связывающееся с PTK7 (протеинтирозинкиназа 7) человека, а также конъюгат указанного антитела с цитотоксическим агентом.

Изобретение относится к области биохимии. Заявлены связывающие белки, представляющие собой иммуноглобулины с двойными вариабельными доменами, которые связывают IL-1α и IL-1β.

Данное изобретение относится к иммунологии. Предложено антитело, связывающее кластерин, и его антигенсвязывающий фрагмент.

Группа изобретений относится к биотехнологии, а именно к получению иммуноглобулиновой композиции со сниженным уровнем тромбогенных агентов. Способы включают фракционирование плазмы крови по Кону и/или по Кистлеру-Ничманну с получением содержащего иммуноглобулин раствора.
Группа изобретений относится к области фармацевтики и медицины и касается гипотонических фармацевтических составов низкой вязкости, содержащих концентрированное PRO 140 моноклональное антитело в количестве от 100 до 200 мг/мл, регулятор тоничности в виде соли, выбранной из хлорида натрия, глюконата натрия или лактата натрия, в количестве от 90 до 95 мМ и буферный раствор.

Изобретение относится к области биохимии. Заявлено применение антитела, специфичного к CD19, в синергетической комбинации с бендамустином для лечения неходжкинской лимфомы, хронического лимфоцитарного лейкоза и/или острого лимфобластного лейкоза.

Изобретение относится к области иммунологии, и может быть использовано в медицине. Получен слитый белок, имеющий (a) домен связывания с АПК или домен связывания с рецептором CD91, расположенный на N-конце слитого белка, (b) транслокационный пептид длиной от 34 до 112 аминокислотных остатков, расположенный на С-конце домена связывания с АПК или домена связывания с рецептором CD91; (c) антиген патогена; (d) сигнал ядерного экспорта и (e) последовательность, обеспечивающую удержание в эндоплазматическом ретикулуме, расположенную на С-конце слитого белка, где сигнал ядерного экспорта находится между антигеном и последовательностью, обеспечивающей удержание в эндоплазматическом ретикулуме, или между транслокационным пептидом и антигеном.

Группа изобретений относится к медицине, а именно к иммунологии, и может быть использована для получения композиции для повышения иммунного ответа. Композиция для повышения иммунного ответа индивида на опухоль содержит: растворимый β-глюкановый компонент; антительный компонент, который специфично связывается с растворимым β-глюканом; и противоопухолевое антитело. В другом аспекте настоящее изобретение относится к способу повышения ответа индивида на β-глюкановую иммунотерапию. Использование данного изобретения позволяет повысить эффективность иммунотерапии у индивида на опухоль, увеличивая ответ индивида на терапию β-глюканом с противоопухолевым антителом, инициируя цитотоксичность нейтрофилов, макрофагов и естественных киллеров. 5 н. и 25 з.п. ф-лы, 11 ил., 3 пр., 1 табл.

Наверх