Способ оценки суммарного показателя анеуплоидии и пролиферативной активности опухолевых клеток немелкоклеточного рака легкого и рака яичников с использованием специфического красителя днк нового поколения draq7



Способ оценки суммарного показателя анеуплоидии и пролиферативной активности опухолевых клеток немелкоклеточного рака легкого и рака яичников с использованием специфического красителя днк нового поколения draq7
Способ оценки суммарного показателя анеуплоидии и пролиферативной активности опухолевых клеток немелкоклеточного рака легкого и рака яичников с использованием специфического красителя днк нового поколения draq7
Способ оценки суммарного показателя анеуплоидии и пролиферативной активности опухолевых клеток немелкоклеточного рака легкого и рака яичников с использованием специфического красителя днк нового поколения draq7
Способ оценки суммарного показателя анеуплоидии и пролиферативной активности опухолевых клеток немелкоклеточного рака легкого и рака яичников с использованием специфического красителя днк нового поколения draq7
C12N15/00 - Получение мутаций или генная инженерия; ДНК или РНК, связанные с генной инженерией, векторы, например плазмиды или их выделение, получение или очистка; использование их хозяев (мутанты или микроорганизмы, полученные генной инженерией C12N 1/00,C12N 5/00,C12N 7/00; новые виды растений A01H; разведение растений из тканевых культур A01H 4/00; новые виды животных A01K 67/00; использование лекарственных препаратов, содержащих генетический материал, который включен в клетки живого организма, для лечения генетических заболеваний, для генной терапии A61K 48/00 пептиды вообще C07K)

Владельцы патента RU 2639251:

Федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный медицинский исследовательский центр онкологии имени Н.Н. Блохина" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБУ "НМИЦ онкологии им. Н.Н. Блохина" Минздрава России) (RU)

Изобретение относится к области медицины. Изобретение представляет собой способ оценки суммарного показателя анеуплоидии и пролиферативной активности опухолевых клеток немелкоклеточного рака легкого и рака яичников с использованием специфического красителя ДНК нового поколения DRAQ7, включающий приготовление одноклеточной суспензии из фиксированных в 4% растворе формальдегида образцов опухолей, окраску специфическим красителем ДНК DRAQ7, проведение анализа на проточном цитофлуориметре, построение гистограмм распределения клеток по интенсивности окрашивания ДНК в программе WinMDI 2.9, расстановку маркеров, отделяющих пик, соответствующий диплоидным клеткам в G0/G1 фазах клеточного цикла от анеуплоидных и клеток в М, S и G2 фазах цикла, а также суммарное число клеток, расчет интегрального показателя клеток по формуле:

I=М2/М1×100%,

где I - интегральный показатель анеуплоидии и пролиферативной активности клеток, M1 - суммарное количество опухолевых клеток, М2 - количество клеток в фазах М, S и G2 фазах цикла независимо от плоидности, при этом превышение интегральным показателем 30% указывает на неблагоприятный прогноз заболевания и резистентность опухоли к химиотерапии, значение суммарного показателя менее 30% указывает на благоприятный прогноз и чувствительность к химиотерапии. Изобретение позволяет оценить прогноз течения заболевания и чувствительность опухоли к химиотерапии. 4 ил.

 

Изобретение относится к области медицины, а именно к способам оценки плоидности и пролиферативной активности опухоли при немелкоклеточном раке легкого и раке яичников.

Плоидность опухолей является одним из важных прогностических показателей злокачественных опухолей, как и пролиферативная активность опухоли, оцениваемая по доли клеток, находящихся в S-фазе клеточного цикла.

Анеуплоидия опухоли коррелирует с низкой выживаемостью больных тиреоидной карциномой [Pinto А.Е., Silva G., Banito A., Leite V., Soares J. Aneuploidy and high S-phase as biomarkers of poor clinical outcome in poorly differentiated and anaplastic thyroid carcinoma. Oncology Reports 2008, Vol. 20, p. 913-919], а также с агрессивностью течения заболевания и увеличивается на поздних стадиях колоректального рака и рака желудка [Risques R.-A., Moreno V., Marcuello E., Petriz J., Cancelas J. A., Sancho F.J., Torregrosa ., G., Peinado M.A. Redefining the significance of aneuploidy in the prognostic assessment of colorectal cancer. Laboratory investigation 2001, Vol. 81, № 3, p. 307; Tsujimoto H., Sugihara H., Hagiwara A., Hattori T. Amplification of growth factor receptor genes and DNA ploidy pattern in the progression of gastric cancer. Virchows Arch 1997, Vol. 31, p. 383-389]. Показатели лучшей общей и безрецидивной выживаемости выше у пациентов с диплоидными злокачественными опухолями молочной железы [Cornelisse C.J., van de Velde C.J.H, Caspers R.J.C., Moolenaar A.J., Hemans J. DNA ploidy and survival in breast cancer patients. Cytometry 1987, Vol. 8, p. 225-234]. В анеуплоидных злокачественных опухолях молочной железы достоверно повышается количество клеток, находящихся в S-фазе клеточного цикла [M.-L. Jourdan, Ferrero-Pous М., Spyratos F., Romain S., Martin P.-M., Chassevent A. Flow cytometric S-phase fraction measurement in breast carcinoma: influence of software and histogram resolution. Cytometry 2002, Vol. 48, p. 66-70]. У больных раком молочной железы с анеуплоидными опухолями вне зависимости от стадии болезни чаще проявляются рецидивы и метастазы, по сравнению с диплоидными опухолями [Николаева Т.Г. Проточная ДНК-цитометрия в прогнозировании течения опухолевого процесса при некоторых злокачественных новообразованиях человека: Автореф. дис. докт. биол. наук: 14.00.14 / Николаева Т.Г. - Москва, 2003. - 44 с.].

Низкая доля фракции клеток в S-фазе строго коррелирует с лучшей безрецидивной и общей выживаемостью больных раком молочной железы [O'Reilly S.M., Camplejohn R.S., Barnes D.M., Millis R.R., Allen D., Rubens R.D., Richards M.A. DNA index, S-phase fraction, histological grade and prognosis in breast cancer. Br.J. Cancer 1990, Vol. 61, p. 671-674]. Высокая доля фракции клеток в S-фазе в диплоидных опухолях коррелирует с высокой стадией опухолевого процесса, низкой безрецидивной выживаемостью и с низкой общей выживаемостью больных раком молочной железы [Romero Н., Schneider J., Burgos J., Bilbao J., Rodriguez-Escudero F.J. S-phase fraction identifies high-risk subgroups among DNA-diploid breast cancers. Breast Cancer Res Treat. 1996, Vol., 38, №3, p. 265-275].

Известен способ оценки плоидности опухоли и доли клеток, находящихся в S-фазе клеточного цикла, с помощью проточной цитофлуориметрии [Портной С.М. Рак молочной железы (факторы прогноза и лечение). Дисс. д.м.н. / Портной С.М. - Москва, 1997. - 306 с.].

Образец опухолевой ткани, полученный во время операции, измельчают бритвой в чашке Петри в объеме 0,5 мл профильтрованного через 0,45 мкм миллипоровый фильтр Трис-НСl-буфера (рН=7,4) или 0,9% раствора NaCl до получения клеточной суспензии. Клеточную суспензию тщательно перемешивают в течение 3 минут автоматической пипеткой до получения однородной взвеси клеток, затем фильтруют в градуированную центрифужную пробирку сначала через редкий фильтр (поры 500-600 мкм), затем через стандартный нейлоновый фильтр с диаметром пор 100-130 мкм. Далее суспензия фиксируется (если нужно отсрочить проведение исследования) или сразу после окрашивания исследуется на проточном анализаторе. Фиксацию клеток осуществляют двумя методами: к 1-1,5 мл клеточной суспензии добавляют по капле 9 мл холодной (4°С) смеси этанол-ацетон (1:1), все время тщательно пипетируя клеточную взвесь во избежание слипания клеток; по другой методике к 0,5-1,0 мл клеточной суспензии добавляют по капле 96% этанол, при этом суспензия постоянно пипетируется с помощью автоматической пипетки. Концентрация спирта в суспензии постепенно увеличивается до 70%. Пробирки плотно закрывают резиновыми пробками или пленкой Parafilm "М" и после 48-часовой фиксации при 20°С клетки могут быть подвергнуты окраске.

Окрашивание ДНК осуществляется акридиновым оранжевым либо смесью бромид этидия + митромицин.

Индекс плоидности вычисляют как соотношение интенсивности флуоресценции пика G0/G1 опухолевых клеток к интенсивности флуоресценции пика G0/G1 диплоидного стандарта. По соотношениям площадей: пика G0/G1, S-фазы и фаз G2/M вычисляется процентное распределение опухолевых клеток по фазам клеточного цикла. Сумма долей клеток, находящихся в S-фазе и фазах G2/M, обозначается как индекс пролиферативной активности.

Недостатки способа:

Данный способ требует значительных временных затрат с применением фиксации опухолевого материала - более 48 часов. Исследование же плоидности и пролиферативной активности опухоли указанным способом без фиксации малоприменим в клинической практике в связи с необходимостью исследования материала сразу же после операции, что даже при незначительном увеличении определенного времени работы с живыми клетками часто приводит к повреждению клеток.

Вследствие того, что акридиновый оранжевый и бромид этидия кроме ДНК связываются и с РНК, усложняется аналитический этап: применение ферментов, требующих тестирование их активности; увеличение количества этапов анализа и контролей. Это приводит к увеличению процента неинформативных гистограмм и неправильной диагностике анеуплоидии или высокой пролиферативной активности опухоли.

Использование нескольких красителей нуклеиновых кислот, что увеличивает количество этапов и усложняет процедуру анализа.

Существующие алгоритмы математической обработки данных результатов окрашивания ДНК не унифицированы и не позволяют получить сопоставимые межлабораторные результаты анализа фаз клеточного цикла отдельно от анеуплоидных клеток. Использование даже одной программы в разных лабораториях может привести к различному диагнозу при исследовании плоидности и пролиферативной активности одной и той же опухоли.

Расчет раздельно трех показателей по гистограмме распределения клеток по окрашиванию ДНК приводит к усложнению анализа, из-за чего значительно повышается процент ошибки определения количества клеток в разных фазах клеточного цикла и анеуплоидных клеток.

Недостатком также является отсутствие анализа показателя, включающего суммарную фракцию клеток, ассоциированных с плохим прогнозом.

Задачей изобретения является создание нового способа оценки плоидности опухоли и чувствительности к химиотерапии в ткани немелкоклеточного рака легкого и рака яичников с помощью интегрального показателя анеуплоидии и пролиферативной активности опухоли, позволяющего количественно оценивать объединенную фракцию клеток, определяющих прогноз заболевания: анеуплоидные клетки и клетки в М, S и G2 фазах клеточного цикла независимо от плоидности опухоли.

Технический результат изобретения заключается в том, что заявляемый способ позволяет оценить прогноз течения и чувствительности к химиотерапии на основе интегрального показателя - количественного анализа в опухолевой ткани суммарной фракции клеток, определяющих прогноз заболевания: анеуплоидные клетки и клетки в М, S и G2 фазах клеточного цикла, а также оценить чувствительность опухоли к химиотерапии. Способ требует небольших временных затрат - около 1,5 часов и небольшое количество манипуляций. Изначальная фиксация операционного образца только в 4% растворе формальдегида обеспечивает безошибочное проведение преданалитического этапа. В результате достигается высокий процент «информативных» гистограмм. Расчет одного показателя вместо трех упрощает анализ, делает его строго количественным и позволяет сравнивать данные разных лабораторий, что приводит к улучшению межлабораторной воспроизводимости результатов. Задача решается тем, что:

Образец опухоли фиксируют в 4% растворе формальдегида, готовят одноклеточную суспензию, окрашивают специфическим красителем ДНК нового поколения DRAQ7, проводят анализ на проточном цитофлуориметре, строят гистограммы распределения клеток по интенсивности окрашивания ДНК в программе WinMDI 2.9, расставляют маркеры, отделяющие пики диплоидных клеток в G0/G1 фазах клеточного цикла от анеуплоидных и клеток в М, S и G2 фазах цикла, делят количество анеуплоидных клеток и клеток в М, S и G2 фазах клеточного цикла на суммарное число клеток, рассчитывают суммарный показатель процента клеток, ассоциированных с неблагоприятным прогнозом. Превышение интегральным показателем 30% указывает на неблагоприятный прогноз заболевания и резистентность опухоли к химиотерапии, значение суммарного показателя менее 30% указывает на благоприятный прогноз и чувствительность опухоли к химиотерапии.

Способ осуществляется следующим образом.

Приготовление одноклеточной суспензии из операционных образцов

Образец опухолевой ткани помещали в 4% раствор формальдегида в фосфатном буфере рН=7,4. Фиксированную опухолевую ткань разрезали ножницами на мелкие кусочки объемом менее 1 мм3 в чашке Петри и добавляли в полученную кашицу раствор Версена. Затем инкубировали в течение 30 мин в термостате при t= +37°C. После инкубации содержимое чашки Петри гомогенизировали в цилиндрическом стеклянном гомогенизаторе и переносили в пробирку объемом 50 мл, доводя фосфатным буфером рН=7,4 объем жидкости до 40 мл. Далее проводили фильтрацию суспензии с помощью фильтра с диаметром пор 40 мкм, центрифугировали в течение 10 мин при 3 тыс. об/мин. Надосадочную жидкость удаляли пипеткой, а осадок ресуспендировали в 3-7 мл раствора фосфатного буфера рН=7,4. Количество клеток в полученной суспензии подсчитывали в камере Горяева.

Окрашивание клеток специфическим красителем ДНК DRAQ7 для определения плоидности и количества клеток в М, S и G2 фазах клеточного цикла

Окрашивание проводили в 100 мкл одноклеточной суспензии с концентрацией 400 тыс. клеток/мл. Для отмывания клеток от формальдегида к суспензии клеток в пробирке для проточного цитофлуориметра добавляли фосфатный буферный раствор рН=7,4 до 3 мл. Затем центрифугировали в течение 5 мин со скоростью 3 тыс. об/мин, отбирали надосадочную жидкость, оставляя 100 мкл раствора и перемешивали пипетированием. После этого добавляли краситель ДНК DRAQ7 до конечной концентрации 5 мкМ и перемешивали встряхиванием. Инкубировали в течение 5 мин при комнатной температуре.

Измерение флуоресценции проводили на проточном цитофлуориметре при λех=633 нм, λем=755 нм и более. Число анализируемых событий - 10 тыс. Анализ гистограмм проводили с помощью программы WinMDI 2.9.

Расчет интегрального показателя анеуплоидии и пролиферативной активности опухоли

Для оценки интегрального показателя анеуплоидии и пролиферативной активности клеток проводили анализ гистограммы распределения клеток по интенсивности окрашивания опухолевых клеток специфическим красителем ДНК DRAQ7. При этом на гистограмме устанавливали маркеры, отделяющие пик, соответствующий диплоидным клеткам в G0/G1 фазах клеточного цикла от остальных - анеуплоидных и клеток в М, S и G2 фазах цикла независимо от плоидности. Это позволило разделить опухолевые клетки на две части, имеющие разное прогностическое значение, и подсчитать их количество. Путем деления количества анеуплоидных клеток и клеток в М, S и G2 фазах клеточного цикла на общее число клеток рассчитывали интегральный показатель клеток, ассоциированных с неблагоприятным прогнозом заболевания. Порог интегрального показателя принимали за 30%, так как при таком значении достигается значительное статистически достоверное разделение по прогнозу (р<0,05, по критерию Стьюдента для групп с нормальным распределением и по критерию Манна-Уитни для групп с ненормальным распределением признака).

Расчет интегрального показателя анеуплоидии и пролиферативной активности

I=M2/M1×100%,

где I - интегральный показатель анеуплоидии и пролиферативной активности клеток,

M1 - суммарное количество опухолевых клеток,

М2 - количество клеток в фазах М, S и G2 фазах цикла независимо от плоидности.

Значение порога рассчитывается с помощью статистической обработки всех полученных значений процента клеток в М, S и G2 фазах цикла независимо от плоидности и определения медианы.

Формула расчета порога интегрального показателя анеуплоидии и пролиферативной активности клеток для ряда данных, содержащих нечетное количество значений

MI=x N+1/2

где I - интегральный показатель анеуплоидии и пролиферативной активности клеток,

MI - значение порога, разделяющего низкий и высокий уровни I,

N - номер значений I в ряду, отсортированного по увеличению значений,

х N+1/2 - значение показателя интегрального показателя анеуплоидии и пролиферативной активности клеток с номером N+1/2.

Формула расчета порога интегрального показателя анеуплоидии и пролиферативной активности клеток для ряда данных, содержащих четное количество значений

MI=xN/2+x N/2+1/2

где I - интегральный показатель анеуплоидии и пролиферативной активности клеток,

MI - значение порога, разделяющего низкий и высокий уровни I,

N - номер значений I в ряду, отсортированного по увеличению значений,

х N/2 - значение показателя интегрального показателя анеуплоидии и пролиферативной активности клеток с номером N2,

х N+1/2 - значение показателя интегрального показателя анеуплоидии и пролиферативной активности клеток с номером N+1/2.

Превышение интегрального показателя 30% указывало на неблагоприятный прогноз заболевания и позволяет диагностировать опухоли, имеющие агрессивное течение (плоскоклеточный рак легкого). Значения интегрального показателя менее 30% позволяло диагностировать опухоли с более благоприятным прогнозом (аденокарциномы легкого).

Изобретение иллюстрируется фиг. 1-4.

На фиг. 1 представлено распределение всех значений интегрального показателя анеуплоидии и пролиферативной активности клеток в тканях немелкоклеточного рака легкого (НМРЛ) и рака яичников (РЯ). Горизонтальные линии отделяют минимальные и максимальные значения показателя I, а выделенное квадратом значение 30% является порогом, разделяющим низкий и высокий уровни.

На фиг. 2 (А-Г) представлены гистограммы распределения интенсивности окрашивания ДНК. На фиг. 2 (А-Г) по оси абсцисс - интенсивность окрашивания ДНК, по оси ординат - количество клеток. Фигурной скобкой выделены клетки, составляющие интегральный показатель анеуплоидных клеток и клеток в М, S и G2 фазах цикла независимо от плоидности. На фиг. 2 (А-Б) - пример оценки интегрального показателя в немелкоклеточном раке легкого, на фиг. 2 (В-Г) - в раке яичников. Маркер M1 - общее количество клеток, М2 количество клеток, составляющих интегральный показатель, который рассчитывается путем деления М2 на M1. На фиг. 2 (А) интегральный показатель I=62%; на фиг. 2 (Б) интегральный показатель I=20%; на фиг. 2 (В) интегральный показатель I=76%; на фиг. 2 (Г) интегральный показатель I=23%.

На фиг. 3 представлена частота встречаемости низкого значения интегрального показателя анеуплоидии и пролиферативной активности опухоли (значение показателя менее 30%) в чувствительных (1) и резистентных (2) к терапии, включающей карбоплатин и паклитаксел, случаев серозной аденокарциномы рака яичников. На фиг. 3 по оси абсцисс - группы больных раком яичников чувствительных (1) n=30 и резистентных (2) n=30 к терапии, включающей карбоплатин и паклитаксел, по оси ординат - частота встречаемости низкого (значение показателя менее 30%) значения интегрального показателя анеуплоидии и пролиферативной активности опухоли. Показано, что в группе чувствительных опухолей процент низких значений интегрального показателя значительно превышает значение этого параметра в группе резистентных опухолей (90,0% и 30,0% соответственно, р=0,01).

На фиг. 4 представлена частота встречаемости низкого значения интегрального показателя анеуплоидии и пролиферативной активности опухоли (значение показателя менее 30%) в различных по прогнозу типах немелкоклеточного рака легкого - аденокарциноме и плоскоклеточном раке. На фиг. 4 по оси абсцисс - гистологические типы рака легкого: аденокарцинома (1) n=30 и плоскоклеточный рак (2) n=30; по оси ординат - процент встречаемости низкого (значение показателя менее 30%) значения интегрального показателя анеуплоидии и пролиферативной активности опухоли. Показано, что низкие значения интегрального показателя значительно чаще встречаются в аденокарциноме (70,0%) по сравнению с плоскоклеточным раком легкого (10,0%) с достоверностью р=0,02.

Способ оценки суммарного показателя анеуплоидии и пролиферативной активности опухолевых клеток немелкоклеточного рака легкого и рака яичников с использованием специфического красителя ДНК нового поколения DRAQ7, включающий приготовление одноклеточной суспензии из фиксированных в 4% растворе формальдегида образцов опухолей, окраску специфическим красителем ДНК DRAQ7, проведение анализа на проточном цитофлуориметре, построение гистограмм распределения клеток по интенсивности окрашивания ДНК в программе WinMDI 2.9, расстановку маркеров, отделяющих пик, соответствующий диплоидным клеткам в G0/G1 фазах клеточного цикла от анеуплоидных и клеток в М, S и G2 фазах цикла, а также суммарное число клеток, расчет интегрального показателя клеток по формуле:

I=М2/М1×100%,

где I - интегральный показатель анеуплоидии и пролиферативной активности клеток,

M1 - суммарное количество опухолевых клеток,

М2 - количество клеток в фазах М, S и G2 фазах цикла независимо от плоидности, при этом превышение интегральным показателем 30% указывает на неблагоприятный прогноз заболевания и резистентность опухоли к химиотерапии, значение суммарного показателя менее 30% указывает на благоприятный прогноз и чувствительность к химиотерапии.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к области медицины. Предложен способ выявления опухолеспецифичных мишеней в гистологических срезах тканей больных раком легкого человека, включающий инкубацию образца ткани рака легкого человека с дрожжевой РНК и инкубацию с растворами аптамеров, меченых различными флуоресцентными метками в фосфатном буфере, содержащем Са2+ и Mg2+.

Изобретение относится к биотехнологии, генетической инженерии, в частности к генетически модифицированным животным семейства мышиных, а именно к мышам и крысам, которые экспрессируют IL-6 человека и дополнительно могут экспрессировать гуманизированный IL-6Rα.

Группа изобретений относится к области биотехнологии. Предложены нуклеиновая кислота, кодирующая терапевтический белок или антитело, структуру «стебель-петля» гистонов, и последовательность поли(А) или сигнал полиаденилирования, набор и фармацевтическая композиция, содержащие одну или более указанную нуклеиновую кислоту, для использования в генной терапии, а также способ повышения экспрессии кодируемого белка и применение указанных нуклеиновой кислоты, набора или композиции для повышения экспрессии кодируемого белка.

Изобретение относится к области молекулярной биологии и касается генетической конструкции для осуществления способа генетического контроля экзоцитоза. Представленная конструкция имеет последовательность SEQ ID NO:4 и получена с использованием лентивирусного вектора на основе ВИЧ-1 модифицированного последовательностями, кодирующими пост-транскрипционный регуляторный элемент вируса гепатита сурка (WPRE), генетически кодируемый кальциевый индикатор (GCaMP3) и клеточно-специфический промотор глиального фибриллярного кислого белка (GFAP).

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к аптамеру, специфически связывающемуся с фактором роста нервов (NGF), и может быть использовано в медицине как противовоспалительное или обезболивающее средство.

Изобретение относится к области биотехнологии и рыбоводства и касается способа получения ДНК из яйцеклеток рыб. Представленный способ включает пробоподготовку и выделение ДНК.

Изобретение относится к области биохимии, в частности к способу получения безмаркерных трансгенных растений каланхоэ перистого, экспрессирующих ген цекропина Р1. Изобретение обеспечивает получение и тестирование безмаркерных растений каланхоэ с повышенными антибиотическими свойствами за короткий промежуток времени для использования в фармакологии и медицине.

Изобретение относится к области биотехнологии и медицины. Описан способ химической модификации антитромбинового аптамера и к получения нового антитромбинового аптамера, обладающего антикоагулянтными свойствами и пролонгированной антитромботической активностью.

Изобретение относится к биохимии. Описана двухцепочечная рибонуклеиновая кислота (дцРНК) для ингибирования экспрессии гена АРОС3, где указанная дцРНК содержит (а) смысловую цепь, состоящую из нуклеотидной последовательности GcuuAAAAGGGAcAGuAuudTsdT, и антисмысловую цепь, состоящую из нуклеотидной последовательности AAuACUGUCCCUUUuAAGCdTsdT; (b) смысловую цепь, состоящую из нуклеотидной последовательности GCUUAAAAGGGACAGUAUUdTsdT, и антисмысловую цепь, состоящую из нуклеотидной последовательности AAUACUGUCCCUUUUAAGCdTsdT, (c) смысловую цепь, состоящую из нуклеотидной последовательности GfcUfuAfaAfaGfgGfaCfaGfuAfuUfdTsdT, и антисмысловую цепь, состоящую из нуклеотидной последовательности aAfuAfcUfgUfcCfcUfuUfuAfaGfcdTsdT, или (d) смысловую цепь, состоящую из нуклеотидной последовательности GcuuAAAAGGGAcAGuAuudTsdT, и антисмысловую цепь, состоящую из нуклеотидной последовательности AAuACuGUCCCuuuuAagcdTsdT, где нуклеотиды, обозначенные строчными буквами, представляют собой 2'-О-метилнуклеотиды; Gf, Af, Uf и Cf представляют собой 2'-фторнуклеотиды; и s представляет собой фосфоротиоатную связь.

Изобретение относится к области биохимии и генетики растений. Предлагается способ молекулярно-генетической идентификации растений ивы на основе микросателлитных (SSR) маркеров, который включает в себя выделение ДНК из исследуемых образцов, проведение ПЦР, электрофоретическое разделение продуктов амплификации ДНК, документирование результатов ПЦР, определение длин амплифицированных фрагментов ДНК путем сравнения со стандартами молекулярной массы, получение таблицы многолокусных генотипов по микросателлитным локусам и сравнение полученных генотипов с генотипами исходных растений.

Изобретение относится к области биохимии, в частности к ДНК-конструкции для увеличения экспрессии гетерологичной транскрибируемой полинуклеотидной молекулы, а также к растительной клетке, растению, части трансгенного растения и трансгенному семени, ее содержащим. Также раскрыта трансгенная кассета для увеличения экспрессии гетерологичной транскрибируемой полинуклеотидной молекулы, содержащая вышеуказанную ДНК-конструкцию. Изобретение также относится к способу получения товарного продукта из вышеуказанного трансгенного растения или его части, а также к способу экспрессии транскрибируемой полинуклеотидной молекулы, включающему получение вышеуказанного трансгенного растения. Изобретение позволяет эффективно увеличить экспрессию гетерологичной транскрибируемой полинуклеотидной молекулы в клетке растения. 8 н. и 11 з.п. ф-лы, 2 ил., 4 табл., 3 пр.

Изобретение относится к области биотехнологии. Предложена тест-система, содержащая синтетические олигонуклеотидные праймеры, представляющие собой нуклеотидные последовательности SEQ ID NO:1-192 и определяющие 64 однонуклеотидных полиморфных маркера Х-хромосомы. Указанная совокупность маркеров обладает достаточной информативностью для проведения генетической экспертизы на территории Российской Федерации и состоит из двух групп маркеров, способных к мультиплексированию. Предложенная тест-система позволяет эффективно использовать ее в сложных случаях при экспертизе на родство в криминалистической и судебно-медицинской идентификационной практике.

Изобретения касаются способа диагностики болезни Альцгеймера или умеренного когнитивного нарушения (MCI) у субъекта и набора для осуществления указанной диагностики. Представленный способ включает определение уровня по меньшей мере одной микроРНК, выбранной из группы, состоящей из miR-15b, miR-191, miR-142-3р, Let-7g, Let-7d и их комбинаций, в образце крови, плазмы или сыворотки, взятом у субъекта. Отклонение уровня указанной по меньшей мере одной микроРНК от уровня у здорового субъекта, определенное по отношению к соответствующему контролю, указывает на то, что субъект страдает болезнью Альцгеймера или MCI. Набор для диагностики включает два или более агентов, селективно детектирующих присутствие по меньшей мере двух микроРНК, выбранных из группы, состоящей из miR-191, miR-15b, miR-142-3р, Let-7g, Let-7d, miR-301a и miR-545 в образце. Изобретения могут быть использованы для точной диагностики болезни Альцгеймера и MCI у субъекта. 2 н. и 33 з.п. ф-лы, 3 ил., 11 табл., 3 пр.

Изобретение относится к области биохимии. Описан способ диагностики полиморфизма SMC2, ассоциированного с гаплотипом фертильности НН3 крупного рогатого скота. Способ включает однопробирочную аллелеспецифическую амплификацию (STAS PCR) фрагментов гена SMC2, и отличается тем, что продукты амплификации аллелей Т и С в позиции 95410507 (сборка генома UMD 3.1) в экзоне 24 гена структурного поддержания хромосом SMC2 различаются по длине; идентификация генотипов животных осуществляется по результатам электрофореза продуктов STAS PCR в агарозном геле. Изобретение расширяет арсенал средств, позволяющих диагностировать полиморфизм SMC2. 2 ил, 1 пр.

Изобретение относится к области биохимии, в частности к способу введения молекулы чужеродной ДНК в предварительно определенный сайт в геноме трансгенной растительной клетки путем индукции разрыва двухцепочечной ДНК посредством введения не встречающейся в природе одноцепочечной мегануклеазы или пары не встречающихся в природе мегануклеаз, а также к применению вышеуказанного способа для получения клетки растения или для получения растения. Также раскрыто применение не встречающейся в природе мегануклеазы или пары не встречающейся в природе мегануклеаз для введения разрыва двухцепочечной ДНК в кодирующую область bar в геноме трансгенной растительной клетки. Изобретение позволяет эффективно вводить молекулу чужеродной ДНК в геном растительной клетки. 6 н. и 13 з.п. ф-лы, 5 ил., 1 табл., 5 пр.

Изобретение относится к области биохимии и генетики. Заявлен способ выявления структурных перестроек генома опухолевых клеток (химерных генов), определяющих выбор терапии и прогноз при острых лейкозах у детей, с помощью ОТ-ПЦР с последующей гибридизацией с олигонуклеотидным биологическим микрочипом (биочипом). Изобретение позволяет выявлять 22 известных химерных гена. Выявление этих транслокаций в опухолевых клетках костного мозга пациентов является стандартом современной диагностики лейкозов и используется в большинстве современных протоколов для разделения пациентов на группы риска и выбора терапии, включая лекарственную терапию высокими дозами цитостатических препаратов и/или трансплантацию костного мозга. 2 з.п. ф-лы, 2 ил., 3 табл., 4 пр.

Группа изобретений относится к области биотехнологии. Предложены нуклеиновая кислота, кодирующая белок, являющийся патогенным антигеном, структуру "стебель-петля" гистонов и последовательность поли(А) или сигнал полиаденилирования, набор и фармацевтическая композиция, содержащие одну или более указанную нуклеиновую кислоту, для лечения инфекционного заболевания, а также способ повышения экспрессии кодируемого белка и применение указанных нуклеиновой кислоты, набора или композиции для повышения экспрессии кодируемого белка. Строение предложенной нуклеиновой кислоты, заключающееся в комбинации элементов последовательности поли(А) или сигнала полиаденилирования совместно со структурой "стебель-петля" гистонов, обеспечивает повышение экспрессии белка значительно выше уровня, наблюдаемого при использовании указанных элементов отдельно. Предложенная группа изобретений может быть использована в медицине при лечении инфекционных заболеваний. 6 н. и 20 з.п. ф-лы, 24 ил., 15 табл., 11 пр.

Изобретение относится к области биохимии, в частности к трансгенному растению сои, обладающему устойчивостью к глифосату и изоксафлютолу. Также раскрыты трансгенное семя указанного растения, молекула нуклеиновой кислоты, геномная ДНК сои, продукт из сои, набор, пара праймеров и пара специфичных зондов для идентификации одновременного присутствия генов устойчивости к указанным гербицидам. Раскрыты способ получения продукта из сои, способы борьбы с сорняками на поле, где растение сои устойчиво к глифосату и изоксафлютолу, способ защиты указанных растений сои, способ получения указанного растения сои, способы идентификации одновременного присутствия генов устойчивости к указанным гербицидам, способ скрининга семени на одновременное присутствие генов устойчивости к указанным гербицидам, способ обнаружения присутствия одновременно генов устойчивости к указанным гербицидам. Изобретение позволяет придать устойчивость растению сои к глифосату и изоксафлютолу. 21 н. и 11 з.п. ф-лы, 3 ил., 1 табл., 5 пр.

Изобретение относится к области биохимии, в частности к синтетическому двунаправленному промоторному полинуклеотиду для повышения экспрессии гетерологичных белков в растительной клетке, а также к синтетическому полинуклеотиду для экспрессии двух гетерологичных белков в растительной клетке. Также раскрыт способ получения трансгенной растительной клетки, экспрессирующей два гетерологичных белка с использованием вышеуказанного синтетического полинуклеотида. Изобретение также относится к растительной клетке для экспрессии гетерологичного белка, содержащей вышеуказанный полинуклеотид, а также к растению, ее содержащему. Изобретение позволяет эффективно осуществлять экспрессию гетерологичных белков в растительной клетке. 5 н. и 2 з.п. ф-лы, 51 ил., 12 табл., 19 пр.

Изобретение относится к области биохимии, в частности к выделенному полинуклеотиду для борьбы с западным кукурузным жуком (WCR), вектору, клетке, растению, семени растения, его содержащим, а также к способу снижения популяции насекомого-вредителя WCR с его использованием. Также раскрыты молекула дцРНК для борьбы с WCR, а также способ уменьшения популяции насекомого-вредителя WCR с ее использованием. Изобретение также относится к способу повышения выхода урожая кукурузы, зараженного WCR, способу получения трансгенной растительной клетки и растения, устойчивого к WCR, с использованием вышеуказанного полинуклеотида. Изобретение позволяет эффективно бороться с западным кукурузным жуком. 11 н. и 14 з.п. ф-лы, 5 ил., 19 табл., 15 пр.

Изобретение относится к области медицины. Изобретение представляет собой способ оценки суммарного показателя анеуплоидии и пролиферативной активности опухолевых клеток немелкоклеточного рака легкого и рака яичников с использованием специфического красителя ДНК нового поколения DRAQ7, включающий приготовление одноклеточной суспензии из фиксированных в 4 растворе формальдегида образцов опухолей, окраску специфическим красителем ДНК DRAQ7, проведение анализа на проточном цитофлуориметре, построение гистограмм распределения клеток по интенсивности окрашивания ДНК в программе WinMDI 2.9, расстановку маркеров, отделяющих пик, соответствующий диплоидным клеткам в G0G1 фазах клеточного цикла от анеуплоидных и клеток в М, S и G2 фазах цикла, а также суммарное число клеток, расчет интегрального показателя клеток по формуле:IМ2М1×100,где I - интегральный показатель анеуплоидии и пролиферативной активности клеток, M1 - суммарное количество опухолевых клеток, М2 - количество клеток в фазах М, S и G2 фазах цикла независимо от плоидности, при этом превышение интегральным показателем 30 указывает на неблагоприятный прогноз заболевания и резистентность опухоли к химиотерапии, значение суммарного показателя менее 30 указывает на благоприятный прогноз и чувствительность к химиотерапии. Изобретение позволяет оценить прогноз течения заболевания и чувствительность опухоли к химиотерапии. 4 ил.

Наверх