Набор реактивов для выделения днк


C12N15/1003 - Получение мутаций или генная инженерия; ДНК или РНК, связанные с генной инженерией, векторы, например плазмиды или их выделение, получение или очистка; использование их хозяев (мутанты или микроорганизмы, полученные генной инженерией C12N 1/00,C12N 5/00,C12N 7/00; новые виды растений A01H; разведение растений из тканевых культур A01H 4/00; новые виды животных A01K 67/00; использование лекарственных препаратов, содержащих генетический материал, который включен в клетки живого организма, для лечения генетических заболеваний, для генной терапии A61K 48/00 пептиды вообще C07K)

Владельцы патента RU 2650865:

Общество с ограниченной ответственностью "Магнэтик" (RU)

Изобретение относится к области биохимии. Предложен набор реактивов для выделения ДНК из биологических объектов. Набор включает лизирующий буферный раствор, промывочные буферные растворы №1 и №2, элюирующий буферный раствор. Лизирующий буферный раствор содержит гуанидин тиоцианат, трис гидрохлорид, тритон и сорбент, в виде суспензии из магнитных микросфер в солевом растворе. Промывочный буфер №1 содержит гуанидин тиоцианат, трис гидрохлорид и этиловый спирт. Промывочный буфер №2 содержит трис гидрохлорид, хлорид натрия и этиловый спирт. Элюирующий раствор представляет собой деионизированную воду. Изобретение обеспечивает увеличение выхода ДНК. 1 пр.

 

Изобретение относится к биохимии. Известен наиболее близкий набор реактивов для выделения ДНК [RU 2485178, С2, 20.06.2013], способ выделения ДНК из биологических объектов, заключающийся в том, что биологический объект измельчают и помещают в пробирку с лизирующим буферным раствором состава: 0,1 М Трис-HCl, 0,1 М ЭДТА, 0,1 М NaCl, 0,5% N-лаурилсаркозил Na и протеиназы K, рН 6-7, получают клеточный лизат, к лизату добавляют сорбент магнитных наночастиц, модифицированных хитозаном, перемешивают и инкубируют в течение 25-35 мин, пробирку помещают на магнитный штатив, разделяют смесь на фракции - сорбент, связанный с ДНК, и надосадочную жидкость, надосадок удаляют, а к осадку приливают элюирующий буферный раствор состава: 10 мМ Трис-HCl, рН 7,4; 100 мМ NaCl; 1 мМ ЭДТА, инкубируют, пробирки помещают на магнитный штатив, разделяют смесь на фракции - сорбент - осадок и надосадок - ДНК, растворенная в элюирующем буферном растворе, осадок удаляют, в надосадке остается ДНК-конечный продукт.

Известный набор реактивов для выделения ДНК имеет недостаток: маленький выход ДНК.

Задачей заявляемого набора для выделения ДНК является увеличение выхода ДНК.

В результате использования данного изобретения достигнут технический результат: увеличился выход ДНК до 5 раз, а именно от 200 до 500-1000 нг из 5 г исходного материала.

Технический результат достигается тем, что в качестве лизирующего буферного раствора набор содержит буфер для лизиса и связывания гуанидин тиоцианат формулы C2H6N4S-CH5N3·HSCN концентрацией 5 М, трис гидрохлорид формулы C4H11NO3·HCl концентрацией 20 мМ, тритон концентрацией 15%, в качестве промывочных растворов: промывочный буфер №1, содержащий гуанидин тиоцианат концентрацией 4 М, трис гидрохлорид концентрацией 25 мМ, этиловый спирт концентрацией 34%, в качестве сорбента - суспензию из магнитных микросфер со средним размером 1,26 мкм в солевом растворе 1 М NaCl и 0,05% NaN3, промывочный буфер №2, содержащий трис гидрохлорид концентрацией 5 мМ, натрия хлорид концентрацией 15 мМ и этиловый спирт концентрацией 80%, в качестве элюирующего раствора берут деионизированную воду.

Объясняется технический результат тем, найденные в результате экспериментов реактивы и их концентрации оказались оптимальными для максимального выхода ДНК. Кроме того, эти реактивы более доступны и дешевле, чем набор реактивов, использованный в прототипе.

Пример использования заявляемого набора реактивов.

Выделение ДНК проводится из 100 мкл контрольного образца.

1. Внести по 100 мкл образца в 1,5 или 2 мл пробирки.

2. Внести в эти же пробирки по 500 мкл буфера для лизиса и связывания ДНК, перемешать на вортексе.

3. Инкубировать пробирки при 60°С в течение 15 минут.

4. Внести по 10 мкл суспензии магнитных частиц. Перемешать пипетированием.

5. Инкубировать при комнатной температуре в течение 5 минут, перемешивать во время инкубирования 2-3 раза на вортексе.

6. Поместить пробирки в магнитный штатив, подождать, пока частицы полностью соберутся на стенке пробирок (2 минуты) и удалить супернатант.

7. Внести в пробирки по 350 мкл промывочного буфера №1, ресуспендировать магнитные частицы в растворе.

8. Поместить пробирки в магнитный штатив, подождать, пока частицы полностью соберутся на стенках пробирок и удалить супернатант.

9. Внести в пробирки по 350 мкл хорошо перемешанного промывочного буфера №2, перемешать на вортексе.

10. Поместить пробирки в магнитный штатив, подождать, пока частицы полностью соберутся на стенках пробирок и удалить супернатант.

11. Повторить пункты 9 и 10.

12. Поместить пробирки с приоткрытыми крышками в термостат и инкубировать при 60°С в течение 10 минут для просушки и удаления остаточного этанола.

13. Внести в пробирки по 50 мкл элюирующего буфера. Ресуспендировать частицы на вортексе.

14. Инкубировать при 60°С в течение 10 минут, во время инкубирования перемешать 2-3 раза на вортексе.

15. Поместить пробирки в магнитный штатив, подождать, пока частицы полностью соберутся на стенках пробирок.

16. Перенести супернатант, содержащий выделенную ДНК, в новую пробирку.

Таким образом, предлагаемый набор реактивов пригоден для эффективного выделения ДНК из исходного биологического материала.

Набор реактивов для выделения ДНК из биологических объектов, включающий лизирующий буферный раствор, промывочные буферные растворы №1 и №2, сорбент - магнитные частицы, элюирующий буферный раствор, отличающийся тем, что в качестве лизирующего буферного раствора используют раствор, содержащий гуанидин тиоцианат формулы C2H6N4S-CH5N3·HSCN концентрацией 5 М, трис гидрохлорид формулы C4H11NO3·HCl концентрацией 20 мМ, тритон концентрацией 15%, в качестве сорбента - суспензию из магнитных микросфер со средним размером 1,26 мкм в солевом растворе 1 М NaCl и 0,05% NaN3, в качестве промывочных растворов - промывочный буфер №1, содержащий гуанидин тиоцианат концентрацией 4 М, трис гидрохлорид концентрацией 25 мМ, этиловый спирт концентрацией 34%, промывочный буфер №2, содержащий трис гидрохлорид концентрацией 5 мМ, хлорид натрия концентрацией 15 мМ и этиловый спирт концентрацией 80%, а в качестве элюирующего раствора берут деионизированную воду.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к области биотехнологии. Предложены кольцевой двухцепочечный полинуклеотид для интеграции экзогенной нуклеиновой кислоты в геном клетки и способ интеграции экзогенной последовательности нуклеиновой кислоты в эндогенный локус клетки.

Группа изобретений относится к области биотехнологии. Предложены изолированный полинуклеотидный субстрат для каталитической нуклеиновой кислоты с ферментативной активностью и его применение, способ детектирования присутствия мишени в образце, использующий указанный субстрат, а также набор для детекции молекулы-мишени и комплект для детекции молекулы-мишени, содержащие указанный субстрат, и набор для применения в сигнальном каскаде, содержащий указанный комплект.

Изобретение относится к областям медицинской и молекулярной генетики, а также к генотерапии, и касается набора, включающего шесть субстратов Дайсера. Представленный набор включает шесть субстратов Дайсера, которые образуют в клетках человека шесть siРНК:5'AAAAAGCAUCAGAAAGAACCUCCAUUU 3' - А1 (7)5'AAAUGGAGGUUCUUUCUGAUGCUUUUU 3' - A1 (8)5'AGACAUAGUUAUCUAUCAAUACAUGGA 3' - A2 (9)5'UCCAUGUAUUGAUAGAUAACUAUGUCU 3' - A2 (10)5'AGGAGUAGUGGAGUCUAUGAAUAAGGA 3' - A3 (11)5'UCCUUAUUCAUAGACUCCACUACUCCU 3' - A3 (12)5'GUGUGGACUAUAGUAGGUAUAGAAUAU 3' - A4 (13)5'AUAUUCUAUACCUACUAUAGUCCACAC 3' - A4 (14)5'ACCAGGACAGACAUGGUAUGGAACAGG 3' - A5 (15)5'CCUGUUCCAUACCAUGUCUGUCCUGGU 3' - A5 (16)5'GUGCGAGAGCGUCAGUAUUAAGUGGGG 3' - A6 (17)5'CCCCACUUAAUACUGACGCUCUCGCAC 3' - A6 (18),которые при введении в клетки человека способны поражать соответствующие консервативные мишени в мРНК ВИЧ-1 (А1-А6):5'AAAAAGCATCAGAAAGAACCTCCATTT 3' - A1 (1)5'AGACATAGTTATCTATCAATACATGGA 3' - А2 (2)5'AGGAGTAGTGGAGTCTATGAATAAGGA 3' - A3 (3)5'GTGTGGACTATAGTAGGTATAGAATAT 3' - А4 (4)5'ACCAGGACAGACATGGTATGGAACAGG 3' - А5 (5)5'GTGCGAGAGCGTCAGTATTAAGTGGGG 3' - А6 (6),расположенные в доменах обратной транскриптазы (мишени А1 и А2) и интегразы (мишень A3) гена pol, в мРНК гена vpu (мишень А4), а также мРНК гена env в ее домене gp120 (мишень А5) и мРНК гена gag в домене р17 (мишень А6), и вызывать подавление продукции вируса в клетках человека.

Изобретение относится к области биохимии, в частности к способу борьбы с насекомыми, выбранными из группы, состоящей из Pseudoplusia includens, Anticarsia gemmatalis, Spodoptera frugiperda и Heliothis virescens, а также к способу борьбы с сорняками сельскохозяйственной культуры сои, который включает обработку сельскохозяйственной культуры сои гербицидом глюфосинатом.
Изобретение относится к мезомасштабной жидкостной системе, содержащей основу, содержащую камеру для образца и камеру для анализа; камера для образца содержит проницаемый для клеток фильтр, образующий отделение для внесения образца и отделение для кондиционирующей среды; камера для образца содержит впускное отверстие для образца в отделении для внесения образца; камера для анализа содержит входное отверстие и выходное отверстие; отделение для кондиционирующей среды находится в жидкостном сообщении с входным отверстием камеры для анализа через канал; при этом отделение для внесения образца находится ниже проницаемого для клеток фильтра, а отделение для кондиционирующей среды находится выше проницаемого для клеток фильтра.

Группа изобретений относится к медицине и касается средства для коррекции состояний клеток различных органов и тканей, а также собственно органов и тканей человека, связанных с количественным снижением белка альфа-2 цепи коллагена I типа, на основе генно-терапевтических субстанций с геном COL1A2, где клетки органов и тканей выбраны из фибробластов, кератоцитов, хондробластов и эпителиальных клеток роговицы глаза, органы и ткани выбраны из кожи, хрящевой ткани или мышечной ткани человека, представляющего собой по крайней мере одну генно-терапевтическую субстанцию, выбранную из группы генно-терапевтических субстанций, каждая из которых представляет собой генетическую конструкцию на основе векторной плазмиды, содержащей нативную кДНК гена COL1A2 SEQ ID No: 1 или модифицированной кДНК гена COL1A2, при этом в качестве модифицированной кДНК гена COL1A2 используют SEQ ID No: 2, или SEQ ID No: 3, или SEQ ID No: 4, или SEQ ID No: 5, или SEQ ID No: 6, или SEQ ID No: 7, или сочетание этих генетических конструкций, каждая из которых содержит также регуляторные элементы в сочетании с транспортной молекулой или без нее.

Изобретение относится к области биохимии. Описана группа изобретений, включающая конъюгат, снижающий уровень экспрессированной в печени РНК, содержащий антисмысловой LNA-олигомер и ковалентно связанную с ним конъюгатную группировку, содержащую группу, направленную на асиалогликопротеиновый рецептор и фармацевтическую композицию, содержащую вышеуказанный конъюгат в эффективном количестве.

Изобретение относится к области биохимии, в частности к молекуле рекомбинантной ДНК, указывающей на присутствие трансгенного события, где показательный образец семени, содержащего указанное трансгенное событие, депонирован в ATCC как РТА-12669.

Изобретение относится к биохимии. Описан одноцепочечный олигонуклеотид антигена, комплементарный к антисмысловой нити ДНК целевого гена, содержащий 12-24 нуклеотида, причем указанный олигонуклеотид характеризуется последовательностью, содержащей по меньшей мере три группы по меньшей мере из двух следующих друг за другом гуанинов.

Изобретение относится к генной инженерии, биотехнологии и иммунобиологии. Описан способ получения рекомбинантного белка склеростина позвоночного животного.

Представлены полинуклеотидная библиотека для получения спаренных последовательностей антител, способ получения представляющего интерес полинуклеотида и способ анализа и использования данных секвенирования.

Изобретение относится к биохимии. Описано антитело для снижения концентрации антигена в плазме, содержащее антигенсвязывающий домен и FcRn-связывающий домен человека, активность связывания антигена которого отличается в двух различных условиях концентрации кальция и является более низкой в условиях низкой концентрации кальция, чем в условиях высокой концентрации кальция, где низкая концентрация кальция представляет собой концентрацию ионизированного кальция от 0,1 до 30 мкМ, а высокая концентрация кальция представляет собой концентрацию ионизированного кальция от 100 мкМ до 10 мМ, где указанное антитело содержит по крайней мере четыре аминокислоты, выбранные из группы, включающей аминокислоты в положениях 30, 31, 32, 50 и 92 в соответствии с нумерацией по Kabat в легкой цепи, которые обладают хелатирующей активностью в отношении металла.

Группа изобретений относится к области биохимии. Предложено устройство, комплект и способ отбора и доставки образца биологического вещества.

Изобретение относится к области биохимии. Предложена сорбционная композитная мембрана и биосепарирующее устройство для выделения ДНК.

Изобретение относится к области биохимии, в частности к гуманизированному антителу, которое связывается с эпитопом С3 компонента комплемента человека. Также раскрыты ДНК, кодирующая указанное антитело, экспрессионный вектор, для экспрессии указанного антитела, а также штамм клеток яичников китайского хомячка, который продуцирует указанное антитело.

Изобретение относится к области биохимии. Предложено устройство для выделения нуклеиновых кислот.

Предложен способ идентификации предполагаемого жизненно важного гена, необходимого для жизнеспособности в условиях роста в присутствии антибиотика, который кодирует мишень для антибиотика в бактерии.

Изобретение относится к области биохимии. Заявлен способ молекулярно-генетического внутривидового типирования токсигенных штаммов Vibrio cholerae O1 Eltor.

Изобретение относится к области биотехнологии и касается способа приготовления геномных библиотек ограниченных выборок локусов из деградированной ДНК. Способ включает проведение гидролиза геномной ДНК эндонуклеазой рестрикции, формирующей фрагменты с 5'-липким концом, и частичное тупление концов полимеразной реакцией в присутствии неполного набора дезоксирибонуклеозидтрифосфатов.

Настоящее изобретение относится к области биотехнологии и касается способа выделения антилиганда, представляющего собой антитело или его антигенсвязывающий вариант, производное или фрагмент, каркасную молекулу со сконструированными вариабельными поверхностями; рецептор или фермент, к дифференциально-экспрессирующемуся целевому лиганду.

Группа изобретений относится к области биохимии. Предложены композиции для сбора и хранения ДНК или ДНК-содержащих биологических следов (варианты), а также средство для пропитки гигроскопичных материалов-носителей и осуществления смывов ДНК-содержащих биологических следов, наложений или ДНК с целью их хранения и/или транспортировки, где данное средство представляет собой вышеуказанные композиции. Причём композиции включают 1-40 мΜ Трис (гидроксиметил) аминометан, 0,05-1% об. Твин 20, 0,05-1% об. Тритон Х-100, 1-200 мМ K2SO4, 1-200 мМ KCl, 0,01-0,5 мМ ЭДТА, 1-20% глицерин, 0,01-0,4% NaN3 и воду. Изобретения обеспечивают стабильность ДНК биологических образцов в широком диапазоне температур в течение длительных периодов времени. 5 н. и 21 з.п. ф-лы, ил.,0 табл., 6 пр.

Изобретение относится к области биохимии. Предложен набор реактивов для выделения ДНК из биологических объектов. Набор включает лизирующий буферный раствор, промывочные буферные растворы №1 и №2, элюирующий буферный раствор. Лизирующий буферный раствор содержит гуанидин тиоцианат, трис гидрохлорид, тритон и сорбент, в виде суспензии из магнитных микросфер в солевом растворе. Промывочный буфер №1 содержит гуанидин тиоцианат, трис гидрохлорид и этиловый спирт. Промывочный буфер №2 содержит трис гидрохлорид, хлорид натрия и этиловый спирт. Элюирующий раствор представляет собой деионизированную воду. Изобретение обеспечивает увеличение выхода ДНК. 1 пр.

Наверх