Оптический биосенсор необратимых ингибиторов холинэстеразы в воздухе

Изобретение относится к контролю загрязнений окружающей воздушной среды. Оптический биосенсор в воздухе включает: оптический детектор и активный компонент, состоящий из иммобилизованного флуоресцирующего комплекса холинэстеразы с обратимым ингибитором - флуорогеном, интенсивность флуоресценции которого снижается в присутствии необратимого ингибитора с образованием аналитического сигнала - снижения интенсивности флуоресценции активного компонента биосенсора. Активный компонент оптического биосенсора состоит из комплекса холинэстеразы с обратимым ингибитором - флуорогеном бромидом этидия, иммобилизованного золь-гель методом. Технический результат заключается в увеличении чувствительности оптического биосенсора к необратимым ингибиторам холинэстеразы, а также в повышении скорости формирования аналитического сигнала. 2 з.п. ф-лы, 6 ил., 2 табл.

 

Настоящее изобретение относится к области техники, предназначенной для контроля загрязнений окружающей воздушной среды фосфорорганическими ингибиторами (ФОИ) холинэстеразы, в частности, фосфорорганическими инсектицидами.

За последние годы во многих продуктах питания обнаружено превышение допустимых норм содержания инсектицидов в ряде европейских стран. Согласно статистическим данным, отравления токсичными фосфорорганическими соединениями - одна из серьезных проблем здравоохранения, являющаяся причиной ежегодной смерти в мире более 200000 человек (Masson P., Rochu D. Acta Nature. 2009. №1. P. 68). Приведенные данные послужили основанием для принятия Евросоюзом решения ограничить производство инсектицидов. Кроме того, существует вероятность реальной угрозы применения фосфорорганических отравляющих веществ (ФОВ) в террористических целях.

Высокая токсичность и кумулятивное действие многих ФОИ холинэстеразы (ХЭ) обусловливают высокие требования по чувствительности, а также к скорости формирования аналитического сигнала к техническим средствам (ТС), предназначенным для мониторинга окружающей воздушной среды на их наличие ФОИ). Так, санитарные требования к содержанию фосфорорганических отравляющих веществ (ФОВ) в атмосферном воздухе населенных пунктов составляют 10-8-10-7 мг/м3.

Технические характеристики известных к настоящему времени газосигнализаторов, предназначенных для мониторинга атмосферного воздуха на содержание фосфорорганических ингибиторов (ФОИ), не в полной мере соответствуют современным требованиям по оптимальному соотношению параметров «чувствительность - время формирования аналитического сигнала», поскольку работают в циклическом режиме. Так, например, время выдачи сигнала при настройке на определение низких концентраций ФОВ с использованием ГСА-14 предусмотрено за 2 минуты 40 с.

Следовательно, создание технического средства (ТС), соответствующего современным требованиям по мониторингу содержания ФОИ в атмосферном воздухе и своевременному оповещению населения, остается актуальной задачей.

В полевых условиях целесообразно использование для определения ФОИ наиболее простых по устройству и удобных в эксплуатации аналитических ТС типа биосенсор - устройства, состоящего из активного компонента и преобразователя аналитического сигнала в регистрируемый сигнал (световой, звуковой и т.п.).

Преимущественное использование в чрезвычайных ситуациях ТС для определения ФОИ на основе биохимического метода (БХМ) связано с его более высокой чувствительностью по сравнению с ТС, основанными на физико-химических методах. Следует отметить, что все ингибиторы холинэстеразы токсичны для человека. Важно также, что БХМ учитывает возможное проявление ФОИ потенцирующего синергизма при наличии в анализируемой пробе или воздухе ксенобиотиков.

Оптические биосенсоры (ОБС), разработанные на основе флуоресцентного метода регистрации аналитического сигнала, можно отнести к числу наиболее чувствительных и быстродействующих. Современные достижения в области оптоэлектроники позволяют с высокой чувствительностью регистрировать интенсивность флуоресценции и упростить само устройство биосенсора. Наибольшей чувствительностью к ФОИ отличаются ОБС на основе ХЭ с флуоресцентной меткой. Преимущество в простоте конструкции и эксплуатации имеют ОБС с бессубстратной аналитической системой.

Заявляемое изобретение направлено на создание оптического бессубстратного биосенсора для мониторинга окружающей воздушной среды на наличие необратимых ингибиторов ХЭ, характеризующегося высокой чувствительностью и специфичностью, на основе модификации данного фермента флуоресцентной меткой.

Известен ряд биосенсоров аналогичного назначения.

Биосенсором - аналогом заявляемого изобретения является бессубстратный ОБС для мониторинга содержания ФОВ в воздухе, основанный на образовании не флуоресцирующего комплекса ацетилхолинэстеразы (АХЭ) с обратимым ингибитором - флуорофором N-метилакридином (Гайнуллина Э.Т., Еремин С.А., Рыбальченко И.В., Рыжиков С.Б., Таранченко В.Ф. Патент №2165458 РФ. Б.и., 2001, №4). При воздействии ФОИ на такой не флуоресцирующий комплекс АХЭ с флуорофором, например, диизопропилфторфосфата, интенсивность флуоресценции активного компонента увеличивается. Наблюдаемый эффект обусловлен ингибированием АХЭ, что ведет к смещению равновесия в реакционной системе в сторону диссоциации комплекса АХЭ-флуорофор, увеличению концентрации свободного обратимого ингибитора - флуорофора, и, как следствие, к увеличению интенсивности флуоресценции активного компонента. Однако обсуждаемый ОБС не отвечает современным требованиям по соотношению параметров «чувствительность - время формирования аналитического сигнала».

К биосенсорам - аналогам заявляемого изобретения следует отнести и универсальный бессубстратный ОБС, предназначенный для определения ФОИ в атмосферном воздухе (Bauer D. Patent №7449299 USA. Б.и., 2008, №7). В модификации ОБС на основе того же активного компонента предусмотрено устройство для контакта с образцом, который может содержать ФОИ.

Активный компонент данного ОБС содержит модифицированную АХЭ и включает: 1) флуорофор-донор, содержащий наночастичку со скрытой квантовой точкой, 2) АХЭ, 3) акцепторный флуорофор. Донорный и акцепторный флуорофоры связаны с АХЭ, среднее расстояние между донором и акцептором составляет ~600 нм.. Флуорофор-донор со скрытой квантовой точкой включает CdS и CdSe, а акцепторный флуорофор является производным флуоресцеина. При этом акцепторный флуорофор способен к поглощению излучения флуорофора-донора. Модифицированная по такой технологии АХЭ включена в гидрогель желатина. Технический результат данным ОБС обеспечивается мониторингом изменения структуры активного центра фермента при воздействии ФОИ путем регистрации безызлучательного резонансного переноса энергии флуоресценции донора к акцептору. Однако изменения в структуре активного центра фермента при воздействии ФОИ незначительные, что не позволяет достигнуть высокой чувствительности. Расстояние между донором и акцептором в модифицированной АХЭ активного компонента данного ОБС составляет ~200-1000 нм, что значительно больше радиуса Ферстера (200-500 нм). Предложенная модификация АХЭ не способствует достижению высокой чувствительности. Кроме того, технология изготовления активного ОБС весьма сложна.

Наиболее близким аналогом (прототипом) является ОБС на основе комплекса АХЭ с обратимым ингибитором - флуорогеном тиофлавином T (ТФ). (Антохин A.M., Андреев О.И., Гайнуллина Э.Т. Патент №2386120 РФ. Б.и., 2010, №4). ТФ одновременно является активатором фосфорилирования активного центра холинэстеразы (активатором) (Radio Z, Taylor P. Chemico-biological interac. 1999. №119-120. P. 111).

Выбор ТФ для разработки данного ОБС определялся высокой интенсивностью флуоресценции его комплекса с АХЭ эритроцитов человека, в сотни раз превосходящей интенсивность флуоресценции исходного ТФ на длине волны λ~490 нм при возбуждении излучением с λ=448 нм (Антохин A.M., Гайнуллина Э.Т., Рыжиков С.Б., Таранченко В.Ф., Яваева Д.К. Бюл. эксперим. биол. и мед. 2009. Т. 147. С. 119).

Структурная формула ТФ представлена на фиг. 1.

Технический результат данным ОБС основан на смещении равновесия в аналитической системе при воздействии необратимого ингибитора In на ацетилхолинэстеразу E в сторону образования фермент-ингибиторного комплекса EIn, что, в свою очередь, приводит к диссоциации флуоресцирующего комплекса EIf и снижению интенсивности флуоресценции активного компонента ОБС, как это представлено на фиг. 2, где: Е - АХЭ, If - флуороген-активатор, In - необратимый ингибитор.

Интенсивность флуоресценции ОБС - прототипа при воздействии инсектицидов (~50 нМ) диэтил(3,5,6-трихлорпиридин-2-ил)фосфата или дихлофоса снижается на 50% относительно исходной интенсивности флуоресценции ОБС. ОБС характеризуется высокой скоростью формирования аналитического сигнала за 10-15 с.

Конструкция оптической части ОБС представлена на фиг. 3 в виде блок-схемы, на которой: 1 - лазерный источник света, 2 - модулятор, 3 - активный компонент, 4 - фильтр, 5 - линза, 6 - фотоприемник, 7 - синхронный усилитель, 8 - регистрирующее устройство.

Наличие в оптической части ОБС лазерного источника света для возбуждения активного компонента, модулятора и синхронного усилителя позволяет увеличить чувствительность ОБС в целом.

Приведенные данные позволяют прогнозировать высокую чувствительность ОБС к ФОИ на основе обратимого ингибитора флуорогена - активатора, образующего с ХЭ флуоресцирующий комплекс с высоким квантовым выходом, а также высокую скорость формирования аналитического сигнала, учитывая огромную скорость образования комплекса фермента с необратимым ингибитором.

Недостатком данного ОБС является невысокая стабильность его работы при наличии в окружающей воздушной среде различных примесей, что обусловлено вхождением в состав аналитического реагента комплекса АХЭ с флуорогеном ТФ. ТФ относится к группе индикаторов типа "молекулярный ротор", на компланарность его структуры, а, следовательно, на интенсивность его флуоресценции влияет целый ряд факторов (температура, наличие в окружающем воздухе кислых и основных паров и других примесей). ТФ образует флуоресцирующие комплексы только с АХЭ.

Важно отметить: полоса флуоресценции ТФ и его комплекса с АХЭ совпадают (λ=490 нм), что снижает специфичность анализа.

Предлагаемое решение авторами заявляемого изобретения направлено на увеличение специфичности и чувствительности ОБС - прототипа к необратимым ингибиторам ХЭ, а также стабильности работы во времени. Технический результат достигается путем использования авторами в качестве аналитического реагента активного компонента ОБС комплекса бутирилхолинэстеразы (БХЭ) с обратимым ингибитором-флурогеном 3,8-диамино-5-этил-6-фенилфенантридиум бромидом (бромидом этидия), являющимся одновременно активатором фосфорилирования холинэстеразы. Формула бромида этидия представлена на фиг. 4.

Бромид этидия имеет ряд преимуществ, по сравнению с известными флуорогенами, образующими флуоресцирующие комплексы с ХЭ:

1) его полоса флуоресценции находится в красной области спектра (λмакс ~610 нм при возбуждении излучением с λ=470 нм), удаленной от полос флуоресценции триптофана и других ароматических аминокислот, что вносит вклад в повышение специфичности анализа;

2) образует интенсивно флуоресцирующие комплексы не только с АХЭ эритроцитов человека, но и с АХЭ эритроцитов быка, БХЭ человека и лошади, а также с пропионилхолинэстеразой зрительных ганглиев кальмара;

3) в составе комплекса с холинэстеразой флуоресцирует в условиях (pH, температура), оптимальных для ее ингибирования фосфорорганическими ингибиторами;

4) отсутствует концентрационное тушение флуоресценции бромида этидия и его комплексов с холинэстеразой в исследованном интервале концентраций реагентов;

5) образует с холинэстеразами комплексы, спектры поглощения (фиг. 5) и флуоресценции (фиг. 6) которых отличаются от соответствующих спектров самого бромида этидия, что обеспечивает прямой метод определения фосфорорганических ингибиторов ХЭ, в том числе ФОВ и существенно повышает специфичность анализа.

На фиг. 5 представлены спектры поглощения бромида этидия и его комплекса с БХЭ лошади: 9 - бромида этидия (7.5 мкМ), 10 - комплекса бромид этидия с БХЭ лошади (0.50 Е/мл).

Важной особенностью бромида этидия является образование с холинэстеразами комплексов, полосы флуоресценции которых отличаются от соответствующих полос самого бромида этидия (фиг. 6), что открывает перспективу использования для регистрации аналитического сигнала метода резонансного переноса энергии флуоресценции - одного из самых чувствительных методов измерения интенсивности флуоресценции (Higgins В. Chemical and biological sensor controls. The world of electronics, 2005. P. 1.

На фиг. 6 представлены спектры флуоресценции при возбуждении λ=470 нм: 11 - бромида этидия (0.6 мкмоль/л), 12 и 10 - комплексов бромида этидия с БХЭ лошади (0.36 Е/мл и 0,50 Е/мл, соответственно)

Зависимость интенсивности флуоресценции от активности БХЭ при возбуждении длиной волны , соответствующей длине волны поглощения бромида этидия, носит сложный характер. В определенном интервале относительно низкой активности фермента (фиг. 6) имеет место повышение интенсивности флуоресценции на длине волны ~610 нм, что обусловлено резонансным переносом энергии флуоресценции комплекса бромида этидия с БХЭ с длины волны 550 нм, на длину волны ~610 нм, соответствующую полосе флуоресценции бромида этидия. При этом зависимость интенсивность флуоресценции на длине волны ~610 нм по мере увеличения активности БХЭ в интервале 0,20 Е/мл - 0,45 Е/мл при исследованном соотношении реагентов носит линейный характер. После добавления фермента к раствору бромида этидия увеличение интенсивности флуоресценции на длине волны ~610 нм регистрируется в пределах 10 с, при этом зарегистрированная интенсивность флуоресценции остается стабильной более 30 мин. В присутствии ФОИ, в частности фосфорорганического инсектицида параоксона, интенсивность флуоресценции на длине волны 610 нм снижается в пределах 10-15 с.

Дальнейшее повышение активности БХЭ ведет к появлению новой полосы флуоресценции на длине волны ~550 нм, соответствующей полосе флуоресценции комплекса бромида этидия с БХЭ, и постепенному снижению интенсивности флуоресценции на длине волны ~610 нм. Наблюдаемый эффект обусловлен уменьшением концентрации свободного бромида этидия по мере связывания в комплекс с БХЭ, что ведет к снижению интенсивности флуоресценции на длине волны ~610 нм и появлению новой полосы флуоресценции на длине волны 550 нм.

Зависимость интенсивности флуоресценции комплекса бромида этидия с БХЭ при λ ~550 нм по мере увеличения активности фермента (x) в исследованном интервале активности фермента (0.5-2,0. Е/мл) имеет линейный характер:

При воздействии фосфорорганического инсектицида параоксона интенсивность флуоресценции Iфл системы бромид этидия - БХЭ на длине волны 550 нм снижается в течение 10-15 с. Зависимость интенсивности флуоресценции системы бромид этидия - БХЭ от концентрации параоксона (x) в исследованном интервале концентраций носит линейный характер и может быть представлена в виде:

На основе приведенных выше данных авторами заявляемого изобретения разработан флуоресцентный ОБС для мониторинга окружающего воздуха на содержание необратимых ингибиторов ХЭ, характеризующийся высокой чувствительностью и быстродействием. Активный компонент ОБС представляет собой комплекс бромида этидия с БХЭ лошади, иммобилизованный золь-гель методом, размещенный на нейтральной полимерной пленке.

Технический результат предлагаемым ОБС достигается аналогично техническому результату ОБС - прототипа и также может быть представлен схемой на фиг. 2.

Исследования показали, что данный активный компонент в присутствии параоксона дает устойчивый сигнал за 10-15 с. В предлагаемым ОБС реализован прямой метод определения ФОИ, в том числе ФОВ, что существенно повышает специфичность определения.

Скорость формирования аналитического сигнала (в виде тушения флуоресценции) прямо пропорциональна концентрации необратимого ингибитора In, значению константы скорости образования фермент-ингибиторного комплекса EIn, концентрации комплекса EIf и значению его константы диссоциации.

Конструкция оптической части предлагаемого ОБС идентична конструкции оптической части ОБС - прототипа, представленной на фиг. 3 виде блок-схемы.

Пример 1. Изготовление активного компонента

Реагенты. Тетраэтоксисилан (TEOS) и бромид этидия фирмы Sigma. Бутирилхолинэстераза - фирмы «Биомед» (Россия).

Иммобилизация. Раствор геля был приготовлен перемешиванием 4,5 мл TEOS, 1,4 мл бидистиллята и 0,10 мл 0,1 М НС1 в стеклянном сосуде 5 часов до прозрачного состояния и оставлен на ночь при комнатной температуре.

Для получения активного компонента 3 мкл полученного прозрачного раствора геля и 10 мкл фосфатного буфера (pH 8) тщательно перемешивают (раствор №1). Затем 30 мкл раствора фермента в буфере (100 Е/мл) смешивают с 3 мкл раствора бромида этидия (0,02 мг/мл). Полученный таким образом раствор комплекса бромида этидия с бутирилхолинэстеразой добавляют к 3 мкл раствора №1 при очень интенсивном перемешивании. Смесь заливают в формочку диаметром 10 мм и толщиной 1 мм и оставляют на 5 дней в холодильнике при 4°C.

Пример 2. Результаты определения параоксона активным компонентом биосенсора прототипа и предлагаемого биосенсора на длине волны 610 нм.

Из представленных в таблице данных следует, что чувствительность к параоксону предложенного оптического биосенсора существенно выше, чем прототипа.

Таким образом, использование в качестве активного компонента биосенсора активного компонента, состоящего из иммобилизованного флуоресцирующего комплекса бутирилхолинэстеразы с обратимым ингибитором - флуорогеном бромидом этидия позволяет сконструировать ОБС, более специфичный и чувствительный к необратимым ингибиторам холинэстеразы, по равнению с ОБС прототипом.

Авторы полагают, что успешное использование достижений в области нанотехнологий при создании уникальных конструкционных материалов, полупроводников, датчиков обнаружения химических веществ, компьютеров, производительность которых на несколько порядков выше, чем у существующих, открывает перспективу модификации предлагаемого авторами биосенсора для индивидуального назначения (Антипов В.Б., Завьялова Н.В., Ефременко Е.Н., Ковтун В.А., Носичков СП., Антипов А.Б., Завьялов В.В. Доклады академии военных наук. 2016. №4 (68). С 82-89).

В таблице 2 сопоставлены существенные отличительные признаки ОБС прототипа и предлагаемого ОБС.

Литература

1. Антохин A.M., Гайнуллина Э.Т., Рыжиков С.Б., Таранченко В.Ф., Яваева Д.К. Бюл. эксперим. биол. и мед. 2009. Т. 147. С. 119.

2. Гайнуллина Э.Т., Еремин С.А., Рыбальченко И.В., Рыжиков С.Б., Таранченко В.Ф. Патент №2165458 РФ. Б.и., 2001, №4.

3. Антипов В.Б., Завьялова Н.В., Ефременко Е.Н., Ковтун В.А., Носичков С.П., Антипов А.Б., Завьялов В.В. Доклады академии военных наук. 2016. №4 (68). С 82-89.

4. Bauer D. Patent №7449299 USA. Б.и., 2008, №7.

5. Higgins В. Chemical and biological sensor controls. The world of electronics, 2005. P. 1.

6. Masson P., Rochu D. Acta Nature. 2009. №1. P. 68.

7. Radio Z, Taylor P. // Chemico-biological interac. 1999. №119-120. P. 111.

1. Оптический биосенсор необратимых ингибиторов холинэстеразы в воздухе, включающий оптический детектор и активный компонент, состоящий из иммобилизованного флуоресцирующего комплекса холинэстеразы с обратимым ингибитором - флуорогеном, интенсивность флуоресценции которого снижается в присутствии необратимого ингибитора с образованием аналитического сигнала - снижения интенсивности флуоресценции активного компонента биосенсора, отличающийся тем, что активный компонент состоит из комплекса холинэстеразы с обратимым ингибитором - флуорогеном бромидом этидия, иммобилизованного золь-гель методом.

2. Оптический биосенсор по п. 1, отличающийся тем, что в качестве аналитического реагента активного компонента могут быть использованы флуоресцирующие комплексы бромида этидия и с бутирилхолинэстеразой, и с ацетилхолинэстеразой.

3. Оптический биосенсор по пп. 1 и 2, отличающийся тем, что использование в качестве аналитического реагента комплекса бромида этидия с холинэстеразой, полоса флуоресценции которого отличается от полосы флуоресценции самого бромида этидия, позволяет повысить и специфичность, и чувствительность определения необратимого ингибитора холинэстеразы благодаря использованию для регистрации аналитического сигнала биосенсора метода резонансного переноса энергии флуоресценции.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к области биохимии, в частности к способу обнаружения присутствия гена aad-12 в трансгенном растении сои, содержащем событие pDAB4472-1606. Также раскрыт набор для использования в указанном способе обнаружения присутствия или отсутствия гена aad-12 в геноме растения сои.

Изобретение относится к области обнаружения микроконцентраций веществ в газовой среде, в частности к детектированию молекул взрывчатых веществ (нитросоединений) в воздухе.

Изобретение относится к медицине, а именно к пульмонологии, и может быть использовано для раннего индивидуального прогнозирования развития осложнений при лечении внебольничной пневмонии.

Изобретение относится к медицине и касается способа быстрого количественного определения специфической активности лиофилизированной БЦЖ-вакцины, включающего реконструкцию лиофилизированной вакцины, удаление внеклеточного АТФ с использованием апиразы, экстракцию внутриклеточного АТФ, определение содержания внутриклеточного АТФ биолюминесцентным методом и расчет специфической активности.

Изобретение относится к области нанотехнологий, а также может быть использовано в биологии, медицине, гетерогенном катализе. Способ определения концентрации адсорбатов наночастиц (НЧ) серебра на поверхности нанопористого кремнезема включает приготовление раствора исследуемого вещества, извлечение исследуемого вещества из раствора сорбентом, измерение интенсивности флуоресценции органолюминофора в присутствии исследуемого вещества, определение неизвестной поверхностной концентрации исследуемого вещества по градуировочному графику, где в качестве сорбента используют немодифицированный кремнезем, в качестве адсорбата - монодисперсные наночастицы серебра и молекулы органолюминофора - Родамина 6Ж, интенсивность флуоресценции измеряют при возбуждении на плазмонной длине волны 420 нм, измерение проводят при комнатной температуре.

Изобретение относится к новым производным ряда 2,4,5-тризамещенных тиазолов, а именно к 3-[2-[N′-(2-гидрокси-5-хлорбензилиден)гидразино]-4-(2,5-диметилтиофен-3-ил)тиазол-5-ил]хромен-2-ону формулы I.

Изобретение относится к области лабораторной диагностики и касается способа биохемилюминесцентной оценки токсичности рубцовой жидкости in vitro. Представленный способ включает измерение интенсивности свечения бактерий штамма E.

Предложен способ определения антиоксидантной активности вещества, предусматривающий приготовление контрольных проб, содержащих буферный раствор и биолюминесцентный сенсор, определения исходной интенсивности биолюминесценции.

Изобретение относится к способам анализа и устройствам, пригодным для детектирования электрохемилюминесценции. Изобретение применимо, в особенности, для быстрой количественной диагностики при децентрализованном анализе, когда требуются особенно дешевые материалы для электродов, ячейки, одноразовые диагностические чипы и кассеты.

Изобретение относится к экологии, в частности к экспресс-определению фальсификации бутилированных питьевых вод из подземных источников (скважин) и загрязнения питьевой, бутилированной и природной воды.

Изобретение относится к области контроля загрязнений окружающей среды, в частности, фосфорорганическими инсектицидами и карбаматами. .

Изобретение относится к измерениям или испытаниям, использующим фермент холинэстеразу, конкретно к измерению концентрации веществ антихолинэстеразного действия (АХД), например фторангидрида O-изопропилового эфира метилфосфоновой кислоты (ИМФК), путем определения остаточной ферментативной активности.
Изобретение относится к области контроля загрязнения окружающей среды, в частности, фосфорорганическими отравляющими веществами, инсектицидами, карбаматами и токсинами сине-зеленых водорослей.

Изобретение относится к области иммунологии и может быть использовано в охране окружающей среды. .

Изобретение относится к контролю загрязнений окружающей среды. .

Изобретение относится к области аналитической химии, касается разработки простейших средств обнаружения пестицидов и может быть использовано для производства индивидуальных средств контроля за содержанием пестицидов в воде, пищевых продуктах, воздухе и пробах почвы.

Изобретение относится к контролю загрязнений окружающей воздушной среды. Оптический биосенсор в воздухе включает: оптический детектор и активный компонент, состоящий из иммобилизованного флуоресцирующего комплекса холинэстеразы с обратимым ингибитором - флуорогеном, интенсивность флуоресценции которого снижается в присутствии необратимого ингибитора с образованием аналитического сигнала - снижения интенсивности флуоресценции активного компонента биосенсора. Активный компонент оптического биосенсора состоит из комплекса холинэстеразы с обратимым ингибитором - флуорогеном бромидом этидия, иммобилизованного золь-гель методом. Технический результат заключается в увеличении чувствительности оптического биосенсора к необратимым ингибиторам холинэстеразы, а также в повышении скорости формирования аналитического сигнала. 2 з.п. ф-лы, 6 ил., 2 табл.

Наверх