Способ неинвазивной диагностики эндогенного гиперкортицизма

Изобретние относится к области медицины и представляет собой способ неинвазивной диагностики эндогенного гиперкортицизма, включающий забор слюны с последующим определением концентрации кортизола и степени подавления его уровня на фоне проведения пробы с дексаметазоном, при этом слюну отбирают вечером в 23:00±30 минут, с последующим приемом 1 мг дексаметазона, через 9-10 часов проводят повторный забор слюны с определением концентрации кортизола, при этом определение кортизола осуществляют электрохемилюминисцентным методом, в случае содержания кортизола в вечерней пробе слюны <9,4 нмоль/л и в утренней пробе слюны <12,0 нмоль/л делают вывод об отсутствии эндогенного гиперкортицизма, в случае содержания кортизола в вечерней пробе слюны ≥9,4 нмоль/л и в утренней пробе слюны ≥12,0 нмоль/л делают вывод о присутствии эндогенного гиперкортицизма, в остальных случаях требуется проведение дополнительного исследования. Осуществление изобретения позволяет с достаточной точностью установить диагноз эндогенный гиперкортицизм и полностью устранить инвазивность диагностических мероприятий. 3 з.п. ф-лы, 2 ил., 4 табл., 5 пр.

 

Область техники

Изобретение относится к медицине, а именно, к эндокринологии и может быть использовано в клинической практике для диагностики эндогенного гиперкортицизма.

Уровень техники

Эндогенный гиперкортицизм (ЭГ) - эндокринное заболевание, обусловленное повышенной продукцией кортизола органической природы, т.е. вследствие адренокортикотропин (АКТГ)-, кортиколиберин (КРГ)- или кортизол-секретирующей опухоли различной локализации [Дедов И.И.: Клиническая нейроэндокринология, М. УП Принт. 2011. 343 стр.]. Избыточная секреция кортизола приводит к развитию осложнений со стороны углеводного обмена (нарушение толерантности к глюкозе, сахарный диабет), сердечно-сосудистой системы (артериальная гипертензия, кардиомиопатия), скелетно-мышечной системы (остеопороз, стероидная саркопения), системы гемостаза (гипо- и гиперкоагуляция), а также к развитию психических нарушений от депрессивного расстройства и неврозов до стероидного психоза. Пятилетняя выживаемость при недиагностированном ЭГ составляет 50% [Plotz CM, Knowlton AI, Ragan С. The natural history of Cushing's syndrome. Am J. Med. l952; 13:597-614], что делает эту патологию наиболее тяжелой в структуре всех эндокринных заболеваний. Среди причин ЭГ наиболее частой является доброкачественная опухоль гипофиза (80-85% случаев) - болезнь Иценко-Кушинга (БИК), более редко встречаются кортикостеромы надпочечников (10-20%) и АКТГ - эктопированный синдром (5-10%) [Nieman LK, Biller ВМ, Findling JW, Newell-Price J, Savage MO, Stewart PM, Montori VM. The Diagnosis of Cushing's Syndrome: An Endocrine Society Clinical Practice Guideline. Clin Endocrinol Metab. 2008; 93:1526-1540. doi: 10.1210/jc.2008-0125]. Распространенность БИК составляет 39,1 случаев на миллион, заболеваемость 1,2-2,4 случая на миллион [Etxabe J, Vazquez JA. Morbidity and mortality in Cushing's disease: an epidemiological approach. Clin. Endocrinol. (Oxf.). 1994; 40(4):479-484. doi: 10.1111/j.1365-2265.1994.tb02486.x.], кортикостеромы надпочечника и АКТГ - эктопированный синдром встречаются реже. При классическом варианте течения ЭГ можно наблюдать яркую и характерную клиническую картину: перераспределение подкожно-жировой клетчатки (ПЖК) с преимущественным ее отложением в области передней брюшной стенки, лунообразное лицо, избыточное отложение ПЖК в области шейного отдела позвоночника (так называемый «климактерический горбик»), образование гематом при незначительной травме и без видимой травмы, появление специфического покраснения в области щек (матронизм), и багровых стрий в области передней брюшной стенки, плеч, предплечий, а также на нижних конечностях [Nieman LK, Biller ВМ, Findling JW, Newell-Price J, Savage MO, Stewart PM, Montori VM. The Diagnosis of Cushing's Syndrome: An Endocrine Society Clinical Practice Guideline. Clin Endocrinol Metab. 2008; 93:1526-1540. doi: 10.1210/jc.2008-0125]. Несмотря на описанную яркую клиническую картину изменений внешности, далеко не всегда диагноз ЭГ устанавливается своевременно из-за неспецифичности многих симптомов, так, например, классические стрии и матронизм, по данным Российского исследования, встречаются лишь в 50% случаев преимущественно у лиц молодого возраста [Белая Ж.Е., Рожинская Л.Я., Драгунова Н.В., Дзеранова Л.К., Марова Е.И., Арапова С.Д., Молитвословова Н.Н., Зенкова Т.С., Мельниченко Г.А., Дедов И.И. "Метаболические осложнения эндогенного гиперкортицизма. Выбор пациентов для скрининга." Ж. Ожирение и Метаболизм, 2013, №1, стр. 29-34]. Среди лабораторных исследований и проб в целях диагностики ЭГ в первую очередь используются определение кортизола в слюне и в крови собранной в 23:00 с целью выявления нарушений циркадности; кортизола в сыворотке крови, взятой утром после приема 1 мг дексаметазона накануне в 23:00, а также широко распространен анализ суточной мочи на кортизол [Belaya ZE, Iljin AV, Melnichenko GA, Rozhinskaya LY, Dragunova NV, Dzeranova LK, Butrova SA, Troshina EA, Dedov II.: Diagnostic performance of late-night salivary cortisol measured by automated electrochemiluminescence immunoassay in obese and overweight patients referred to exclude Cushing's syndrome.// Endocrine, 2012, Vol.41, pp. 494-500. DOI 10.1007/sl2020-012-9658-3]. Тем не менее, диагностика ЭГ является объективно сложной для амбулаторных врачей, так как определение кортизола крови и АКТГ утром неинформативно [Мельниченко Г.А., Дедов И.И., Белая Ж.Е., Рожинская Л.Я., Вагапова Г.Р., Волкова Н.И., Григорьев А.Ю., Гринева Е.Н., Марова Е.И., Мкртумян A.M., Трунин Ю.Ю., Черебилло В.Ю. Болезнь Иценко-Кушинга: клиника, диагностика, дифференциальная диагностика, методы лечения. Ж. Проблемы Эндокринологии, 2015, Т 61, №2, 55-77, Nieman LK, Biller ВМ, Findling JW, Newell-Price J, Savage MO, Stewart PM, Montori VM. The Diagnosis of Cushing's Syndrome: An Endocrine Society Clinical Practice Guideline. Clin Endocrinol Metab. 2008; 93:1526-1540. doi: 10.1210/jc.2008-0125], сбор суточной мочи на свободный кортизол сопряжен с ошибками пациента, а определения кортизола в сыворотке крови в вечерние часы требует госпитализации больного [Марова Е.И., Арапова С.Д., Белая Ж.Е. и др. Болезнь Иценко-Кушинга: клиника, диагностика, лечение. Москва. 2012; стр 64]. Анализ слюны на свободный кортизол собранной в 23:00 доказал свою эффективность для диагностики эндогенного гиперкортицизма и вошел в американские [Nieman LK, Biller ВМ, Findling JW, Newell-Price J, Savage MO, Stewart PM, Montori VM. The Diagnosis of Cushing's Syndrome: An Endocrine Society Clinical Practice Guideline. Clin Endocrinol Metab. 2008; 93:1526-1540. doi: 10.1210/jc.2008-0125], европейские и российские клинические рекомендации [Белая Ж.Е., Рожинская Л.Я. «Болезнь Иценко-Кушинга: клиника, диагностика, дифференциальная диагностика, методы лечения» 2014 г.]. Этот метод исследования также отличается рядом технических преимуществ: пациент может выполнить сбор слюны самостоятельно, в домашних условиях, методика безболезненная, что минимизирует вероятность стресса; слюна содержит свободный, стабильный при комнатной температуре до 7 дней кортизол, что делает возможным дистанционное проведение анализа (отправление материала по почте); уровень кортизола в слюне не зависит от содержания кортизол-связывающего глобулина, что дает возможность проводить анализ в группе пациентов, принимающих заместительную гормональную/менопаузальную терапию, а также данный анализ имеет преимущество перед определением свободного кортизола в суточной моче, так как количество слюны не влияет на результат [Valassi Е, Franz Н, Brue Т, Feelders RA, Netea-Maier R,. Diagnostic tests for Cushing's syndrome differ from published guidelines: data from ERCUSYN. European Journal of Endocrinology 176:5, стр. 613-624]. Раннее для определения кортизола в слюне, собранной в 23:00, был разработан референсный интервал - 0.5-9.4 ммоль/л [Белая Ж.Е. Ранняя диагностика эндогенного гиперкортицизма. Канонический Wnt сигнальный путь и изменение костного метаболизма при глюкокортикоидном остеопорозе. Автореферат диссертации на соискание степени доктора медицинских наук, 2013, 49 стр.]. Одного теста недостаточно для установления ЭГ, поэтому рекомендуется обязательное дополнительное проведение малой пробы с дексаметазоном (которую также называют ночной подавляющий тест с дексаметазоном или пробой с 1 мг дексаметазона) или сбор суточной мочи на свободный кортизол. Малая проба с дексаметазоном (МИД) проводится следующим образом: в 23:00 пациент принимает 1 мг дексаметазона, на следующее утром в интервале 8-9 утра натощак сдает анализ крови на кортизол. Полученный уровень кортизола в крови менее 50 нмоль/л свидетельствует в пользу отсутствия эндогенного гиперкортицизма, в то время как более высокие значения кортизола в ходе МПД, напротив, расцениваются как наличие заболевания. По современным клиническим рекомендациям, в первую очередь пациенту с подозрением на ЭГ проводится исследование кортизола в слюне в 23:00 и МПД с определением кортизола в крови. До настоящего времени не существует разработанной точки разделения для проведения МПД по слюне. Разработка подобной точки разделения для кортизола в слюне, собранной утром после 1 мг дексаметазона, позволила бы сделать первый этап диагностики ЭГ полностью неинвазивным. Следует также учитывать, что существует вариабельность референтного интервала для различных методов определения кортизола как в крови, так и в слюне, особенно для масс-спектрометрии и иммуноферментного (ИФА) или электрохемилюминисцентного анализа (ЭХЛА), поэтому и точка разделения на фоне МПД, очевидно, должна различаться.

Ранее были проведены и опубликованы исследования слюны в рамках МПД, тем не менее, в этих исследованиях использовались другие методы измерения кортизола слюны. Как было упомянуто ранее, чувствительность разных методов исследования кортизола слюны отличается и, соответственно, будут отличаться и точки разделения. В одной из работ, были исследованы уровень кортизола слюны вечером, кортизола суточной мочи, а также кортизола слюны и крови утром в ходе МПД. Кортизол слюны был измерен при помощи жидкостной хроматографии и тандем масс-спектрометрии. В исследовании участвовали 99 человек: 21 с эндогенным гиперкортицизмом, 78 с эукортицизмом. Была определена точка разделения для кортизола слюны 0,85 нмоль/л [CM Ng, ТК Lam, YC Au Yeung, СН Choi, YP Iu, CC Shek, SC Tiu. Clinical utility of late-night and post-overnight dexamethasone suppression salivary cortisone for the investigation of Cushing's syndrome. Hong Kong Med J 2017; 23:570-8, DOI: 10.12809/hkmj 176240]. Тем не менее, в данной работе не было когорты пациентов с ожирением, тогда как известно, что у пациентов с ожирением зачастую наблюдаются ложноположительные результаты МПД вследствие функционального гиперкортицизма. В другой работе также были исследованы кортизол суточной мочи, кортизол в слюне и в крови в ходе МПД. В исследовании участвовало 27 человек с синдромом Кушинга и 64 человека в группе контроля. Исследование кортизола слюны проводилось при помощи радиоиммунологического анализа, была выработана точка разделения для кортизола слюны 1,9 нмоль/л, при этом чувствительность составила 100%, специфичность 94% [Zina Barrou, Dominique Guiban, Amel Maroufi, Claudine Fournier, Marie-Annick Jean-Pierre Luton and Pierre Thomopoulos. Overnight dexamethasone suppression test: comparison of plasma and salivary cortisol measurement for the screening of Cushing's syndrome. Eur J Endocrinol January 1, 1996 134 93-96; doi: 10.1530/eje.0.1340093]. Тем не менее, и в данном исследовании не было когорты пациентов с ожирением. Существует ограничение самих методов исследования, а именно радиоиммунный анализ сопряжен с лучевой нагрузкой и, в настоящее время, редко используется, а метод масс-спектрометрии достаточно дорогостоящий. Оба метода предполагают предварительное накапливание биологических образцов для максимального использования диагностического набора. ЭХЛА проводится на автоматическом анализаторе и позволяет быстро получить результат у индивидуального пациента при определении кортизола как в крови, так и в слюне.

Раскрытие изобретения

Задачей настоящего изобретения является разработка способа неинвазивной диагностики эндогенного гиперкортицизма.

Поставленная задача решается заявляемым способом, включающим забор слюны с последующим определением концентрации кортизола и степени подавления его уровня на фоне проведения пробы с дексаметазоном, при этом слюну отбирают вечером в 23:00±30 минут, с последующим приемом 1 мг дексаметазона, через 9-10 часов проводят повторный забор слюны с определением концентрации кортизола, при этом определение кортизола осуществляют электрохемилюминисцентным методом, в случае содержания кортизола в вечерней пробе слюны менее 9,4 нмоль/л и в утренней пробе слюны после дексаметазона менее 12,0 нмоль/л делают вывод об отсутствии гиперкортицизма, в случае содержания кортизола в вечерней пробе слюны равной или более 9,4 нмоль/л и в утренней пробе слюны равной или более 12,0 нмоль/л делают вывод о присутствии гиперкортицизма, в остальных случаях требуется проведение дополнительного исследования. При этом для сбора пробы слюны рекомендуется использовать систему Salivette Sarstedt. Исследование кортизола в слюне проводят на анализаторах, пригодных для проведения электрохемилюминесцентного анализа со стандартными наборами для определения кортизола. Предпочтительно использовать автоматический анализатор Cobas е 601 фирмы F. Hoffmann-La Roche Ltd., также возможно использование автоматических анализаторов Elecsys 1010 и 2010, Cobas е411 фирмы F. Hoffmann-La Roche Ltd. Предпочтительно в качестве набора для определения кортизола использовать диагностический набор Cortisol кат. №11875116 122.

Техническим результатом заявляемого изобретения является разработка способа неинвазивной диагностики эндогенного гиперкортицизма с высокой степенью специфичности более (90%) при сохранении чувствительности, особенно для пациентов с ожирением.

Краткое описание чертежей

На фиг. 1 представлены кривые операционных характеристик для трех методов диагностики. Площади под кривыми операционных характеристик для определения кортизола в слюне в 23:00, кортизола в крови и в слюне в ходе МПД, где - МПД

кровь, - кортизол в слюне 23:00, - МПД слюна, референсная линия.

На фиг. 2 представлена общая схема диагностики эндогенного гиперкортицизма.

Осуществление изобретения

Для осуществления способа неинвазивной диагностики эндогенного гиперкортицизма, проводят забор слюны и определение кортизола в слюне пациента отобранной вечером ориентировочно в интервале 22:30-23:30. При этом за час до исследования исключались прием пищи, курение и чистка зубов, при которой возможна травматизация и кровоточивость десен. С последующим приемом дексаметазона 1 мг (2 таблетки). Через 9-10 часов пациент повторно сдает материал слюны, соблюдая вышеизложенные условия, с последующим определением концентрации кортизола (ориентировочно на следующий день в 08:00±30 мин). Определение концентрации (содержания) кортизола в слюне проводят электрохемилюминесцентным методом (ЭХЛА) на анализаторе Cobas е 601 фирмы F. Hoffmann-La Roche Ltd стандартными наборами для определения кортизола (диагностический набор Cortisol кат. №11875116 122). Или аналогичных по характеристикам (Elecsys 1010 и 2010, Cobas е411 фирмы F. Hoffmann-La Roche Ltd.). Минимальное содержание слюны, необходимое для проведения анализа - 120 мкл. Образцы подвергаются центрифугированию 5 минут при 2000 оборотов и жидкий остаток образца слюны анализируется сразу или может быть сохранен в холодильнике (в среднем +8°С) до 7 дней или может быть заморожен для отсроченного проведения теста.

Для решения поставленной задачи было проведено когортное проспективное исследование с участием 164 человек (132 женщины и 32 мужчины), из них 54 с верифицированным диагнозом эндогенный гиперкортицизм, 56 с ожирением (ИМТ более 30 кг/м²) и 54 - здоровые добровольцы. Возрастная категория от 17 лет до 77 лет (средний возраст 38,83 года, возрастная медиана составила 34 года). Общая характеристика пациентов, включенных в исследование, сведена в таблице 1.

Ж - женщины, М- мужчины

Всем пациентам было выполнено исследование кортизола слюны вечером в 23:00, при этом за час до исследования исключались прием пищи, курение и чистка зубов, при которой возможна травматизация и кровоточивость десен. Забор слюны осуществлялся при помощи системы для сбора слюны Salivette Sarstedt. После сдачи материала вечерней слюны, пациент принимал 1 мг (2 таблетки) дексаметазона. На следующий день в 08:00 пациент повторно сдавал материал слюны, соблюдая вышеизложенные условия, и венозную кровь для определения кортизола в обеих биологических жидкостях (слюне и крови). Исследование кортизола в сыворотке крови и слюне было проведено электрохемилюминесцентным методом (ЭХЛА) на анализаторе Cobas е 601 фирмы F. Hoffinann-La Roche Ltd стандартными наборами для определения кортизола (диагностический набор Cortisol кат. №11875116 122).

Референтный интервал кортизола в слюне в ходе МПД, рассчитанный по данным 54 добровольцев составил 0,5-12,7 нмоль/л (5-95 процентили). Минимальный уровень свободного кортизола в слюне, который удалось определить методом ЭХЛА - 0,5 нмоль/л (лабораторная чувствительность метода). Максимальный уровень кортизола слюны в рамках МПД у здоровых добровольцев - 29,6 ммоль/л. Максимальный уровень вечернего кортизола в слюне у здоровых добровольцев - 20,4 нмоль/л.

По результатам исследования было выполнено сравнение чувствительности и специфичности кортизола слюны в ходе МПД по сравнению с кортизолом крови и кортизолом слюны, собранной в 23:00. Данные были проанализирована при помощи статистической программы IBM SPSS Statistics 23, выполнен ROC-анализ.

При сравнении площадей под кривой операционных характеристик (AUC) были получены следующие результаты: для кортизола слюны в ходе МПД - 0,838, (95% ДИ 0,772-0,905), для кортизола в крови в ходе МПД - 0,965, (95% ДИ 0,939-0,992) и кортизола слюны, собранной в 23:00 - 0,925, (95% ДИ 0,882-0,969). Были проанализированы оптимальные точки разделения (cut-off) для кортизола в слюне в ходе МПД. Исходя из наибольшей суммы чувствительности и специфичности для разных когорт: для когорты «ожирение+ЭГ» значение кортизола в слюне в ходе МПД составило 12,1 нмоль/л (чувствительность = 60%, специфичность = 92,9%), для когорты «Контроль+ЭГ» значение составило 12,6 нмоль/л (чувствительность = 58,2%, специфичность = 96,2%), для всех когорт точка разделения составила 12,2 нмоль/л (чувствительность = 60,7%, специфичность 93,4%). Учитывая незначительную вариабельность значений точки разделения для разных когорт пациентов, для удобства, было выбрано значение 12,0 нмоль/л. На фиг. 1 представлены кривые операционных характеристик для трех методов диагностики.

При анализе полученных данных отмечена относительно невысокая чувствительность метода определения кортизола в слюне в ходе МПД при очень высокой специфичности. Определение кортизола в крови в ходе МПД наоборот характеризуется высокой чувствительностью, но низкой специфичностью. Данные о диагностических возможностях определения кортизола в слюне в ходе малой пробы с дексаметазоном сведены в таблице 2.

По итогам анализа полученных данных (табл. 2 и 3), можно сделать вывод о возможности использования слюны в рамках малой пробы с дексаметазоном, при этом точкой разделения следует выбрать 12,0 нмоль/л. В данной работе впервые был определен референсный интервал для кортизола слюны в рамках МПД для ЭХЛА. Для диагностики ЭГ этот метод необходимо дополнять исследованием слюны на кортизол, собранной в 23:00. При дискордантных результатах слюны вечером и слюны в рамках МПД, в качестве следующего этапа диагностики ЭГ следует провести анализ на кортизол суточной мочи. Данный алгоритм диагностики ЭГ сделает ее полностью неинвазивной и удобной для амбулаторных врачей. Количественные характеристики диагностических возможности комбинации двух неинвазивных тестов сведены в Таблице 4. Таким образом, для однонаправленной комбинации двух неинвазивных тестов определения кортизола в слюне с целью выявления пациентов с ЭГ среди пациентов с ожирением чувствительность составляет 86.1% (95%ДИ 71.3-93.9), специфичность 91.7% (95%ДИ 80.5-96.7); с общим количеством дискордантных результатов - 25, то есть 22.7% из 110 обследованных с ожирением и клинической картиной ЭГ будут нуждаться в проведении дополнительного исследования. Эти данные позволяют рекомендовать комбинацию двух неинвазивных тестов в качестве метода скрининга среди пациентов с ожирением и подозрением на ЭГ.

Исходя из полученных результатов, предлагается ввести в клиническую практику новый, полностью неинвазивный, алгоритм диагностики ЭГ (фиг. 2).

Ниже представлено более детальное описание заявляемого способа, которое не ограничивает объем притязаний заявляемого изобретения, а демонстрирует возможность осуществления изобретения с достижением заявляемого технического результата.

Клинический пример №1

У пациентки Э. 34 лет, с морбидным ожирением (ИМТ 44 кг/м²) проводилось исключение ЭГ. Было выполнено исследование вечерней слюны (в 23:00) на кортизол - 2,23 нмоль/л (менее 9,4 нмоль/л), исследование кортизола слюны в рамках МПД - 2,1 нмоль/л (менее 12,0 нмоль/л, проба положительна). Результаты данной комбинации исследований полностью исключают ЭГ. Тем не менее, при исследовании кортизола крови в ходе МПД у данной пациентки отсутствует подавление кортизола ниже 50 нмоль/л (1700 нмоль/л). В качестве дополнительного исследования выполнен сбор суточной мочи на кортизол (264,5 нмоль/сут), что полностью исключает ЭГ. Таким образом, при классической комбинации методов первичной диагностики ЭГ (исследований кортизола слюны в 23:00 и крови в ходе МПД) у пациентки Э. полученные дискордантные данные не позволяют исключить ЭГ и вынуждают клинициста проводить дополнительный диагностический поиск (исследование суточной мочи на кортизол, исследование кортизола крови в 23:00). Тогда как при изначальной комбинации исследований кортизола слюны, собранной в 23:00 и кортизола слюны в ходе МПД, диагноз ЭГ исключается сразу и не приводит к дополнительным расходам на уточняющие методы исследования, ускоряет диагностику ЭГ и минимизируется дискомфорт пациента за счет полностью неинвазивных диагностических исследований.

Клинический пример №2

У пациентки М., 70 лет, с ожирением II степени (ИМТ 37 кг/м²), проводилось исключение ЭГ. Результаты проведенных исследований: кортизол слюны, собранной в 23:00 - 4,0 нмоль/л (менее 9,4 нмоль/л), кортизол слюны в ходе МПД - 11,3 нмоль/л (менее 12,0 нмоль/л), кортизол крови в ходе МПД - 314 нмоль/л (при норме менее 50 нмоль/л), кортизол суточной мочи - 130,5 нмоль/сут (60-413 нмоль/сут). Таким образом, наблюдается дискордантность результатов при классической комбинации исследований кортизола слюны в 23:00 и кортизола крови в ходе МПД, что привело к необходимости в проведении дополнительных исследований (сбор суточной мочи на кортизол). Тогда как при комбинации исследований кортизола слюны в 23:00 и кортизола слюны в ходе МПД диагноз ЭГ исключается сразу.

Клинический пример №3

У пациентки К., 56 лет проводилось исключение ЭГ. Данные проведенного обследования: кортизол слюны, собранной в 23:00 - 8,8 нмоль/л (менее 9,4 нмоль/л), кортизол слюны в ходе МПД - 6,6 нмоль/л (менее 12,0 нмоль/л), кортизол крови в ходе МПД - 110,7 нмоль/л (при норме менее 50 нмоль/л), кортизол суточной мочи - 101,0 нмоль/сут (60-413 нмоль/сут). В данном случае в очередной раз наблюдается преимущество комбинации исследований кортизола слюны в 23:00 и кортизола слюны в ходе МПД перед классической комбинацией с исследованием крови в рамках МПД, так как в первом случае нет дискордантности результатов исследований и диагноз ЭГ исключается сразу.

Клинический пример №4

Пациентка И. (45 лет) находилась в отделении нейроэндокринологии и остеопатии ФГБУ НМИЦ Эндокринологии МЗ РФ с диагнозом «Пролактин-секретирующая аденома гипофиза». Также у пациентки имелось Ожирение II степени (ИМТ 36,6 кг/м²). В целях исключения смешанной секреции аденомы гипофиза у пациентки с ожирением было проведено гормональное исследование: кортизол слюны, собранной в 23:00 - 2,75 нмоль/л, кортизол крови утром в ходе МПД - 28,47 нмоль/л, кортизол слюны утром в ходе МПД - 0,5 нмоль/л. Полученные данные однозначно исключают ЭГ.

Клинический пример №5

Пациентка М. (39 лет) находилась в отделении нейроэндокринологии и остеопатий по поводу подозрения на Болезнь Иценко-Кушинга (АКТГ-зависимый ЭГ). Для подтверждения диагноза было проведено гормональное исследование: кортизол слюны, собранной в 23:00 - 11,33 нмоль/л, кортизол крови утром в ходе МПД - 540 нмоль/л, кортизол слюны утром в ходе МПД - 12,98 нмоль/л. Результаты проведенных исследований подтвердили наличие ЭГ, по результатам МРТ гипофиза выявлена аденома размерами 7.5×9×8.5 мм, пациентке было рекомендовано нейрохирургиченское лечение Болезни Иценко-Кушинга.

Во всех приведенных клинических случаях наблюдается преимущество исследования слюны на кортизол в ходе МПД перед исследованием крови на кортизол в ходе МПД. Данные преимущества связаны, в первую очередь, с высокой специфичностью исследования слюны на кортизол в рамках МПД (92,5%, тогда как специфичность исследования крови на кортизол в рамках МПД 80%). Необходимо обратить внимание на факт включения пациентов с ожирением, то есть с клиническими проявлениями функционального гиперкортицизма.

1. Способ неинвазивной диагностики эндогенного гиперкортицизма, включающий забор слюны с последующим определением концентрации кортизола и степени подавления его уровня на фоне проведения пробы с дексаметазоном, при этом слюну отбирают вечером в 23:00±30 минут, с последующим приемом 1 мг дексаметазона, через 9-10 часов проводят повторный забор слюны с определением концентрации кортизола, при этом определение кортизола осуществляют электрохемилюминисцентным методом, в случае содержания кортизола в вечерней пробе слюны <9,4 нмоль/л и в утренней пробе слюны <12,0 нмоль/л делают вывод об отсутствии эндогенного гиперкортицизма, в случае содержания кортизола в вечерней пробе слюны ≥9,4 нмоль/л и в утренней пробе слюны ≥12,0 нмоль/л делают вывод о присутствии эндогенного гиперкортицизма, в остальных случаях требуется проведение дополнительного исследования.

2. Способ по п. 1, характеризующийся тем, что забор слюны осуществляют при помощи системы для сбора слюны Salivette Sarstedt.

3. Способ по п. 1, характеризующийся тем, что исследование кортизола в слюне измеряют на автоматическом анализаторе со стандартными наборами для определения кортизола.

4. Способ по п. 3, характеризующийся тем, что в качестве набора для определения кортизола используют диагностический набор Cortisol.