Способ прогнозирования плацентарной недостаточности у женщин с угрожающим выкидышем ранних сроков и привычным невынашиванием в анамнезе

Авторы патента:

G01N33/53 - иммунологический анализ, анализ биоспецифического связывания, материалы для этого (препараты для терапевтических целей, содержащие антигены или антитела,A61K; гептены вообще, см. соответствующие рубрики в классе C07; пептиды, например протеины, вообще C07K)

Владельцы патента RU 2735999:

федеральное государственное бюджетное учреждение "Ивановский научно-исследовательский институт материнства и детства имени В.Н. Городкова" Министерства здравоохранения Российской Федерации (RU)

Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству и гинекологии, и может быть использовано для прогнозирования плацентарной недостаточности у женщин с угрожающим выкидышем ранних сроков и привычным невынашиванием в анамнезе. Способ включает определение на сроке 5-12 недель гестации в сыворотке крови относительного содержания CD178+ моноцитов. При его значении 30,3% и менее прогнозируют плацентарную недостаточность во второй половине беременности. Использование изобретения позволяет с высокой степенью точности - 98,1% с ранних сроков гестации прогнозировать развитие плацентарной недостаточности во второй половине беременности. 1 табл., 3 пр.

Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству и гинекологии и позволяет прогнозировать развитие плацентарной недостаточности у женщин с угрожающим выкидышем ранних сроков и привычным невынашиванием в анамнезе.

Актуальность способа определяется как высокой распространенностью плацентарной недостаточности среди беременных, так и высоким риском и тяжестью осложнений данной патологии для матери и плода. По данным различных мировых литературных источников, плацентарная недостаточность в популяции встречается в 30-45% случаев, а среди беременных с привычным невынашиванием беременности достигает 75% (Серов В.Н. Плацентарная недостаточность // Трудный пациент.- 2005. - Т. 3, №2 - С. 17-20). Плацентарная недостаточность приводит к развитию осложнений беременности, гипотрофии и гипоксии плода, кроме этого, является одной из основных причин антенатальной гибели плода (Афанасьева Н.В., Стрижаков А.Н. Исходы беременности и родов при фетоплацентарной недостаточности различной степени тяжести // Вопросы гинекологии, акушерства и перинатологии. - 2004. - Т. 3, №2. - С. 7-13).

В связи с вышеизложенным актуальной задачей является разработка способов прогнозирования развития плацентарной недостаточности у женщин с угрожающим выкидышем ранних сроков и привычным невынашиванием в анамнезе для проведения своевременных профилактических и лечебных мероприятий с целью снижения перинатальных осложнений как для матери, так и для ребенка.

Известен способ прогнозирования плацентарной недостаточности во 2 триместре беременности (Пат. №2554827. Российская Федерация. Способ прогнозирования плацентарной недостаточности во 2 триместре беременности / Боташева Т.Л., Линде В.А., Саргсян О.Д., Ермолова Н.В., Палиева Н.В., Фролов А.А., Тян Ю.А. // Изобретения. Полезные модели. - 2015. - №18). Изобретение представляет способ прогнозирования плацентарной недостаточности во 2 триместре беременности путем иммуноферментного исследования сыворотки крови беременных, отличающийся тем, что предварительно известным методом ультразвукового исследования определяют пол плода, затем в венозной крови беременных определяют уровни ангиогенных факторов и цитокинов и если установлено повышение уровня интерлейкина-12 более 3,2 пг/мл, эпидермального фактора роста более 310 пг/мл, снижение уровня фактора роста плаценты менее 40,0 пг/мл у беременных, вынашивающих плоды мужского пола, и повышение эндотелина-1 более 0,42 пг/мл, интерлейкина-1β более 17,6 пг/мл, фактора некроза опухоли-α более 6,5 пг/мл у беременных, вынашивающих плоды женского пола, то прогнозируют у данных беременных развитие плацентарной недостаточности. Данный способ обладает рядом недостатков:

1. Необходимо предварительное проведение ультразвукового исследования для определения пола вынашиваемого плода, что в ряде случаев бывает затруднительным или невозможным;

2. Прогнозирование возможно только во 2 триместре гестации, поскольку нельзя определить пол плода методом ультразвукового исследования на ранних сроках беременности;

3. Не представлен алгоритм прогнозирования плацентарной недостаточности в случае трудности определения пола плода;

4. Затратность и трудоемкость, поскольку проводится оценка шести иммунологических показателей, что создает дополнительные трудности в интерпретации результатов.

Известен способ прогнозирования развития плацентарной недостаточности во второй половине беременности у женщин с угрозой невынашивания ранних сроков инфекционного генеза (Пат. №2558795. Российская Федерация. Способ прогнозирования развития плацентарной недостаточности во второй половине беременности у женщин с угрозой невынашивания ранних сроков инфекционного генеза / Малышкина А.И., Сотникова Н.Ю., Крошкина Н.В., Можаева Т.А. // Изобретения. Полезные модели. - 2015. - №22), заключающийся в том, что у женщин с угрозой невынашивания беременности инфекционного генеза в I триместре с 6 недели беременности, определяют содержание IL-18 и при его значении более 100 пг/мл прогнозируют развитие плацентарной недостаточности во второй половине беременности. Данный способ имеет следующие недостатки:

1. Данный способ применим только для женщин с угрозой прерывания инфекционного генеза;

2. Для выполнения данного способа необходимо предварительное проведение иммуноферментного анализа для оценки инфекционного статуса беременных женщин (вирус простого герпеса 1-2 типа; цитомегаловирус; Chlamydia Trachomatis; Mycoplazma Hominis; Ureaplazma Urealyticum);

3. Отсутствуют данные о возможности применения данного способа в случае обнаружения методом иммуноферментного анализа других инфекций, передаваемых половым путем.

4. Учитывая необходимость проведения иммуноферментного анализа, способ является затратным и трудоемким.

Наиболее близким к предлагаемому способу является способ прогнозирования развития плацентарной недостаточности во второй половине беременности (Пат. №2600791. Российская Федерация. Способ прогнозирования развития плацентарной недостаточности во второй половине беременности / Малышкина А.И., Сотникова Н.Ю., Крошкина Н.В., Батрак Н.В. // Изобретения. Полезные модели. - 2016. - №30). Способ заключается в том, что в сроке 5-12 недель гестации в сыворотке крови женщин определяют концентрацию DcR3 и при ее значении более 0,87 пг/мл прогнозируют развитие плацентарной недостаточности во второй половине беременности. Данный способ имеет следующие недостатки - относительно невысокие показатели точности, чувствительности и специфичности. Указанные недостатки предлагается устранить в заявляемом способе.

Заявляемый технический результат достигается тем, что в сроке 5-12 недель гестации в сыворотке крови беременных с угрожающим выкидышем ранних сроков и привычным невынашиванием в анамнезе определяют относительное содержание CD178+ моноцитов и при его значении 30,3% и менее прогнозируют плацентарную недостаточность во второй половине беременности.

Технический результат направлен на расширение арсенала прогностических средств, повышение точности, чувствительности и специфичности прогнозирования плацентарной недостаточности. Предлагаемый метод позволяет с точностью 98,1% прогнозировать развитие плацентарной недостаточности у женщин с угрожающим выкидышем ранних сроков и привычным невынашиванием в анамнезе, что дает возможность провести своевременные профилактические и лечебные мероприятия и снизить уровень перинатальной заболеваемости и смертности.

Способ осуществляется следующим образом:

1. К 3 мл гепаринизированной крови из кубитальной вены добавляют 3 мл Среды 199 и выделяют обогащенную популяцию мононуклеарных клеток стандартным методом скоростного центрифугирования при 1500 оборотов в минуту в течение 40 минут в градиенте плотности фиколл-урографина (Bourn A. Isolation of mononuclear cells and granulocytes from human blood and bone marrow // Scand. J. Clin. Invest. - 1968. - Vol.21, №97. - P. 77).

2. Суспензию мононуклеарных клеток дважды отмывают физиологическим раствором, доводят концентрацию клеток до 1×10⁶кл/мл. К 0,1 мл полученной суспензии добавляют 20 мкл моноклональных антител aHTH-CD178, конъюгированных с фикоэритрином. Клетки инкубируют в течение 30 минут при комнатной температуре в темноте, отмывают и фиксируют в 0,5 мл фиксирующего раствора CellFix™ (BDBiosciences, Belgium).

3. Определяют относительное (процентное) количество CD178+ моноцитов в моноцитарном гейте на проточном цитометре FACScanto (Becton Dickinson, USA). При его значении равном 30,3% и менее прогнозируют развитие плацентарной недостаточности во второй половине беременности.

Новизна заявляемого способа заключается в том, что впервые предлагается прогнозировать развитие плацентарной недостаточности у беременных с угрожающим выкидышем ранних сроков и привычным невынашиванием в анамнезе, по определению содержания CD178+ моноцитов в периферической венозной крови.

Система CD95-CD178 является одним из наиболее важных индукторов апоптоза и нарушения экспрессии одной из этих молекул может быть достаточно, чтобы повлиять на процессы апоптоза трофобласта и поставить под угрозу процесс имплантации или помешать развитию беременности. Известно, что CD 178 экспрессируется моноцитами, макрофагами, Т-лимфоцитами, стромой эндометрия, а CD95 в основном экспрессируется зрелыми Т-лимфоцитами, а также в небольшом количестве трофобластом (Fas and Fas-L genotype and expression in patients with recurrent pregnancy loss / P.C.A. Banzato, S. Daher, E. Traina et al. // Reprod. Sci. - 2013. - Vol.20, №9. - P. 1111-1115).

За счет взаимодействия CD95, экспрессируемого клетками трофобласта, и CD 178 - клетками стромы эндометрия происходит апоптоз стромальных клеток, что способствует имплантации плодного яйца (Fas Lon decidual macrophages mediates trophoblast apoptosis: A potential cause of recurrent miscarriage / J. Ding, T. Yin, N. Yan et al. // International Journal of Molecular Medicine. - 2019. - Vol. 43, №6. - P. 2376-2386). Кроме того моноциты/макрофаги, экспрессирующие CD178, индуцируют апоптоз эндотелиальных и гладкомышечных клеток спиральных артерий матки, экспрессирующих CD95, что обеспечивает инвазию вневорсинчатого трофобласта в мышечный слой спиральных артерий матки с последующим расширением этих сосудов и обеспечением достаточного кровотока в плаценте, независимо от влияния сосудосуживающих факторов (Lnc RNAMEG3 in hi bits trophoblast invasion and trophoblast-mediated VSMC loss in uterine spiral artery remodeling / H. Tao, X. Liu, X. Liu et al. // Mol. Reprod. Dev. - 2019. - Vol. 86, №6. - P. 686-695).

Снижение экспрессии CD178 моноцитами в периферической крови при угрожающем выкидыше ранних сроков может являться одним из факторов, приводящих к нарушению апоптоза, следствием которого является нарушение процессов инвазии трофобласта, трансформации спиральных артерий, что может обусловливать развитие плацентарной недостаточности у женщин с привычным невынашиванием в анамнезе.

Использование предлагаемого способа позволяет с высокой степенью точности (98,1%) с ранних сроков гестации прогнозировать развитие плацентарной недостаточности во второй половине беременности.

Отличительными признаками заявленного способа являются: определяют относительное содержание CD178 +моноцитов и при его значении равном и менее 30,3% прогнозируют развитие плацентарной недостаточности.

Сущность заявляемого способа поясняется следующими примерами:

Пример 1. Пациентка И., 34 года, беременность четвертая, желанная, наступила самостоятельно, во втором браке. В анамнезе два ранних самопроизвольных выкидыша, одна неразвивающаяся беременность ранних сроков. В сроке 6 недель беременности госпитализирована в гинекологическое отделение с жалобами на тянущие боли внизу живота. При влагалищном исследовании наружные половые органы развиты правильно, влагалище узкое, шейка матки конической формы, длиной до 4 см, наружный зев сомкнут, тело матки чуть больше нормы, округлой формы, плотное, подвижное, безболезненное, выделения слизистые.

Диагноз: Беременность 6 недель. Угрожающий выкидыш. Привычное невынашивание беременности.

До назначения сохраняющей терапии было проведено обследование по заявляемому способу: относительное содержание CD178+ моноцитов составило 27,7%.

Заключение: прогноз - развитие плацентарной недостаточности.

Проводилась сохраняющая терапия с положительным эффектом.

В сроке 27 недель гестации по результатам ультразвукового и допплерометрического исследования выявлена задержка роста плода I степени, нарушение маточно-плацентарного кровообращения I А степени.

Диагноз: Беременность 27 недель. Фетоплацентарная недостаточность. Задержка роста плода I степени. Привычное невынашивание беременности.

Прогноз по заявляемому способу подтвердился.

Пример 2. Пациентка Е., 23 года, беременность пятая, желанная, наступила самостоятельно, в первом браке. В анамнезе два самопроизвольных выкидыша, две неразвивающиеся беременности в ранние сроки. В сроке 11 недель беременности госпитализирована в гинекологическое отделение с жалобами на тянущие боли внизу живота, кровянистые выделения из половых путей. При влагалищном исследовании наружные половые органы развиты правильно, влагалище узкое, шейка матки конической формы, длиной до 4 см, наружный зев сомкнут, тело матки увеличено до 11 недель беременности, округлой формы, плотное, подвижное, безболезненное, выделения кровянистые скудные.

Биохимический и ультразвуковой скрининг - без патологии.

Диагноз: Беременность 11 недель. Угрожающий выкидыш. Привычное невынашивание беременности.

Проведено обследование по заявляемому способу: относительное содержание CD178+ моноцитов составило 38,2%.

Заключение: прогноз - отсутствие плацентарной недостаточности.

Проводилась сохраняющая терапия с положительным эффектом. Биохимический и ультразвуковой скрининг в установленные сроки - без патологии.

В сроке 39 недель произошли первые своевременные роды через естественные родовые пути плодом женского пола длиной 53 см, массой 3800 г. Оценка по шкале Апгар составила 8/9 баллов.

Прогноз по заявляемому способу подтвердился.

Пример 3. Пациентка М., 25 лет, беременность четвертая, желанная, наступила самостоятельно, в первом браке. В анамнезе три неразвивающиеся беременности в ранние сроки. В сроке 10 недель беременности госпитализирована в гинекологическое отделение с жалобами на тянущие боли внизу живота. При влагалищном исследовании наружные половые органы развиты правильно, влагалище узкое, шейка матки конической формы, длиной до 4 см, наружный зев сомкнут, тело матки увеличено до 10 недель беременности, округлой формы, плотное, подвижное, безболезненное, выделения слизистые.

Диагноз: Беременность 10 недель. Угрожающий выкидыш. Привычное невынашивание беременности.

Проведено обследование по заявляемому способу: относительное содержание CD178+ моноцитов составило 30,3%.

Заключение: прогноз - развитие плацентарной недостаточности.

Проводилась сохраняющая терапия с положительным эффектом.

В сроке 32 недели гестации по результатам ультразвукового и допплерометрического исследования выявлена задержка роста плода I степени, нарушение маточно-плацентарного кровообращения II степени.

Диагноз: Беременность 32 недели. Фетоплацентарная недостаточность. Задержка роста плода I степени. Привычное невынашивание беременности.

Прогноз по заявляемому способу подтвердился.

Указанным способом обследовано 54 женщины, результаты исследований приведены в таблице 1.

Преимущества заявляемого способа:

1. Высокая точность - 98,1%, чувствительность - 100%) и специфичность - 97%.

2. Хорошая воспроизводимость метода.

3. Простота и доступность выполнения методики.

4. Простота в интерпретации результатов обследования.

5. Способ может быть использован как скрининговый для отнесения женщины в группу риска по развитию плацентарной недостаточности для своевременного назначения профилактических и лечебных мероприятий с целью снижения перинатальных осложнений как для матери, так и для ребенка.

Способ прогнозирования плацентарной недостаточности во второй половине беременности у женщин с угрожающим выкидышем и привычным невынашиванием в анамнезе путем иммунологического исследования сыворотки крови в сроке 5-12 недель гестации, отличающийся тем, что определяют относительное содержание CD178+ моноцитов и при его значениях, равных 30,3% и менее, прогнозируют развитие плацентарной недостаточности.

Изобретение относится к области медицины, в частности к лабораторной диагностике онкологических заболеваний, и представляет собой набор реагентов для выявления маркера эпителиальных карцином СА-62 в сыворотке крови пациентов для ранней диагностики рака, выявления рецидивов и мониторинга лечения эпителиальных опухолей человека методом иммунохимического анализа, обладающего более высокой чувствительностью и специфичностью, отличной от всех имеющихся в настоящее время сывороточных маркеров, и включающий в себя планшет с иммобилизованными антителами к раковому антигену СА-62, представляющими собой моноклональные антитела класса IgM, направленные против N-гликозидного эпитопа гликопротеина СА-62, конъюгат «СА-62-Акридин», стандартные калибраторы СА-62 в диапазоне измерений от 10 до 30000 Ед/мл, включающий или не включающий положительный контроль СА-62, рабочий буферный раствор, рН от 2,0 до 8,0, содержащий Твин-80.

Способ дифференциальной диагностики цервикальной интраэпителиальной неоплазии iii степени и микроинвазивного рака шейки матки, ассоциированных с вирусом папилломы человека // 2735660

Изобретение относится к способу дифференциальной диагностики цервикальной интраэпителиальной неоплазии III степени и микроинвазивного рака шейки матки (стадия IA1 по FIGO), ассоциированных с вирусом папилломы человека и может быть использовано в медицине.

Способ оценки имплантационного потенциала эндометрия при эндометриоз-ассоциированном бесплодии // 2734840

Изобретение относится к медицине, а именно к патоморфологии, гинекологии и репродуктологии, и может быть использовано для оценки имплантационного потенциала эндометрия при эндометриоз-ассоциированном бесплодии.

Способ прогнозирования транслокации бактерий при хроническом эхинококкозе // 2734820

Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано для прогнозирования транслокации бактерий при хроническом эхиноккозе. Для этого определяют иммунологические показатели крови, напряженность клеточного и гуморального иммунитета и при снижении уровня показателя до операции по сравнению с контролем общих Т-лимфоцитов с 1301 до 1065,5, Т-хелперов с 842 до 673, Т-супрессоров с 349 до 238, В-лимфоцитов с 485 до 217 и при повышении уровня показателей до операции по сравнению с контролем IgE с 28,6 до 54,2, IgG с 800 до 5868, IgM с 60 до 278,7, IgA с 90 до 425,2, SIgA с 266,8 до 551,4 прогнозируют транслокацию бактерий при хроническом эхинококкозе.

Способы отбора t-клеточной линии и ее донора для адоптивной клеточной терапии // 2734784

Данное изобретение относится к иммунологии. Предложен способ отбора аллогенной Т-клеточной линии, предусматривающий отбор Т-клеточной линии с применением репрезентации, которая идентифицирует множество HLA аллелей и описывает признаки относительных активностей Т-клеточных линий, каждая из которых распознает эпитоп антигена злокачественной опухоли и ограничена различными вариантами HLA аллелей или комбинациями HLA аллелей, причем в репрезентации каждый идентифицированный HLA аллель или комбинация HLA аллелей связаны с соответствующим признаком относительной активности Т-клеточной линии, ограниченной HLA аллелем или комбинацией HLA аллелей.

Способ определения концентрации аналита в растворе с помощью функционализированных наночастиц и динамического рассеяния света // 2734713

Изобретение относится к области химического анализа жидкостей оптическими методами. Раскрыт способ определения концентрации аналита в растворе, содержащий следующие этапы: добавляют в исходный раствор определяемого аналита конъюгаты на основе наночастиц, функционализированных антителами к определяемому аналиту, инкубируют смесь в течение 3-5 минут при комнатной температуре, определяют средний гидродинамический радиус конъюгатов в полученной смеси методом динамического рассеяния света, определяют концентрацию аналита в исходном растворе, используя градуировочный график, по полученному на предыдущем этапе гидродинамическому радиусу.

Материал для обнаружения антигенов ротавирусной инфекции // 2734465

Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике ротавирусной инфекции человека. Материал для обнаружения антигенов ротавирусной инфекции человека методом иммунологического анализа представляет собой суспензию, полученную растворением в 0,1 мл физиологического раствора высушенных мазков кала, при этом высушенные мазки кала получают следующим образом: суспендируют в пробирке 0,05 г пробы в случае твердого кала или 50 мкл в случае жидких испражнений с 0,5 мл буферного раствора, ждут осаждения крупных частиц на дно пробирки, из пробирки дозатором берут 50 мкл пробы, переносят на предметное стекло и делают мазок шириной 15 мм, длиной 20 мм, мазки высушивают в горизонтальном положении при комнатной температуре в течение 35-40 минут и хранят при комнатной температуре в течение 2 месяцев.

Материал для обнаружения антигенов ротавирусной инфекции // 2734465

Способ определения направленности течения хронического профессионального бронхита // 2733866

Изобретение относится к области медицины, в частности к профессиональной патологии и пульмонологии. Предложен способ определения направленности течения профессионального хронического бронхита.