Способ прогнозирования задержки роста плода

Изобретение относится к медицине и касается способа прогнозирования задержки роста плода путем исследования крови, где у беременных в сроки гестации 18-22 недель в венозной крови методом количественной ПЦР определяют экспрессию, выраженную в величине пороговых циклов Ct трех плацента-специфичных микроРНК: микроРНК-103а-3р, микроРНК-26а-5р, микроРНК-125b-5р, и рассчитывают коэффициент регрессионной функции; после чего определяют р - прогностический индекс, характеризующий вероятность развития ЗРП, если величина р составляет 76,6% и более, прогнозируют развитие задержки роста плода. Изобретение обеспечивает повышение точности и специфичности прогнозирования задержки роста плода на доклинической стадии; и возможность за счет этого своевременной оптимизации тактики ведения беременности и улучшения перинатальных исходов. 3 пр.

 

Изобретение относится к области медицины, а именно к акушерству, и может быть использовано в сроки 18-22 нед. беременности для прогнозирования задержки роста плода (ЗРП).

Неослабевающий интерес к проблеме задержки роста плода со стороны акушеров-гинекологов связан с высокой перинатальной заболеваемостью и смертностью новорожденных, перенесших задержку внутриутробного развития, неблагоприятным течением адаптационного периода в первые дни жизни. Более того, известно, что внутриутробная среда, условия, в которых происходило формирование плода в течение беременности, программирует здоровье человека во взрослом возрасте, а не только в детстве, и даже оказывает влияние на будущее потомство (теория плодового программирования Баркера) (Barker DJ, 2006). Память об антенатальном стрессе может реализоваться через стойкие, необратимые изменения структуры внутренних органов, в связи с чем, у выживших новорожденных с ЗРП впоследствии повышен риск сердечно-сосудистой и эндокринной патологии; повышена подверженность инфекционным заболеваниям, выше риск инвалидизации, особенно в связи с неврологическими нарушениями (ACOG, 2013; Mendez-Figueroa Н, 2016, Leitner Y, 2007; Ojeda NB, 2008). Ранняя, доклиническая диагностика и прогнозирование развития ЗРП может позволить оптимизировать тактику ведения беременных, что поможет своевременно выявить данное осложнение и улучшить перинатальные исходы.

Актуальным представляется выявление ранних диагностических маркеров ЗРП с целью проведения своевременных лечебных мероприятий.

В медицинской и патентной литературе описан ряд способов диагностики и прогнозирования ЗРП. Скрининговым методом диагностики ЗРП является определение высоты стояния дна матки, что позволяет заподозрить отставание темпов роста плода при проведении объективного осмотра, быстро и просто, на амбулаторном акушерском приеме.

Однако данный метод нельзя назвать достоверным, поскольку на высоту стояния дна матки, помимо размеров плода, оказывает влияние количество околоплодных вод, положение и предлежание плода, конституциональные особенности беременной и множество других факторов.

Более точным считается проведение ультразвуковой фетометрии, позволяющей оценить степень, форму задержки роста плода, а также определить внутриутробное состояние плода путем допплерометрии плодово-плацентарного кровотока и диагностировать плацентарную недостаточность. Ультразвуковая диагностика ЗРП основана на сопоставлении фетометрических показателей, полученных в результате исследования, с нормативными показателями для данного срока беременности.

Однако же, отставание темпов роста плода при проведении ультразвуковой фетометрии не всегда связано именно с ЗРП, но может быть обусловлено генетически детерминированной маловесностью плода (SGA-small for gestational age), что приводит к появлению ложноположительного результата и диагностике ЗРП там, где отставание темпов роста связано с конституциональными особенностями родителей. Проведение ультразвуковой фетометрии также носит достаточно субъективный характер, размеры плода и рассчитываемая предполагаемая масса имеют погрешность до 10%, в зависимости от техники измерения, квалификации осматривающего специалиста и характеристик оборудования. При плацентарной недостаточности и ЗРП происходят изменения в допплерограммах, но они носят неспецифический характер и требуют динамического наблюдения, поскольку не всегда нарушения плодово-плацентарной гемодинамики сопровождают формирование ЗРП, и не всегда эти процессы начинаются одновременно.

Известен способ диагностики задержки роста плода путем анализа периферической крови, включающий выделение ДНК, проведение полимеразной цепной реакции и определение аллеля PL-All гена гликопротеина IIIa, при наличии которого диагностируют задержку внутриутробного развития плода (патент РФ №2172958, 2001).

Недостатками данного способа являются:

1. Сложность, невозможность проведения таких исследований в условиях обычных акушерских стационаров, не имеющих специального оборудования, необходимого для проведения полимеразных цепных реакций;

2. Невозможность осуществлять прогноз развития ЗРП, что затрудняет своевременное проведение лечебно-профилактических мероприятий.

Известен способ диагностики задержки роста плода путем исследования биологической жидкости беременной женщины, отличающийся тем, что у беременной в сроки 16-19 недель в амниотической жидкости методом капиллярного электрофореза определяют содержание аргинина и пролина, рассчитывают коэффициент их отношения и при величине коэффициента, равного 3,2 и выше, диагностируют задержку роста плода (патент РФ №2425379, от 27.11.2011).

Недостатками данного метода являются:

1. Инвазивность: используются околоплодные воды, взятые во втором триместре беременности, что может проводиться только высококвалифицированным специалистом, имеющим разрешение на проведение этой процедуры, согласие беременной со всеми рисками, которые несет амниоцентез.

2. Диагностика в этом сроке не позволяет осуществить превентивные меры по предотвращению данной акушерской патологии.

3. Несмотря на утверждение о специфичности метода, не указана ее величина (в %), изменение содержания аминокислот в околоплодных водах в 16-18 недель гестации обнаружено и при преэклампсии (Погорелова Т.Н., Гунько В.О., Палиева Н.В., Аллилуев И.А., Каушанская Л.В., Ларичкин А.В. Дисбаланс свободных аминокислот воколоплодных водах при преэклампсии // Акушерство и гинекология. 2019. №2. С. 60-67).

Известен способ прогнозирования задержки внутриутробного роста плода, отличающийся тем, что с ранних сроков беременности определяют относительное содержание CD3+CD16+56+-лимфоцитов, уровень С3-компонента комплемента и растворимого рецептора фактора некроза опухоли (sTNF-R) в венозной крови женщины, вычисляют прогностический индекс (PI) по формуле:

PI=-0,8911X1-0,0321X2-2,3669X3+11,0779,

где X1 - относительное содержание CD3+CD16+CD56+-лимфоцитов, %;

Х2 - концентрация С3-компонента комплемента, мг/дл;

Х3 - концентрация sTNF-R, нг/мл

и при PI менее 0 прогнозируют задержку внутриутробного роста плода во второй половине беременности, а при PI более 0 делают заключение о низком риске развития данного патологического состояния (патент РФ №2526178, от 20.08.2014).

К недостаткам данного способа можно отнести:

1. Многокомпонентность, сложный расчет, затрудняющий получение заключения о прогнозе.

2. Отсутствие сведений о точности и особенно специфичности способа, поскольку изменение многих иммунологических параметров, в том числе используемых CD+-лимфоцитов, имеет место и при преэклампсии (патент РФ №2265221, 2005).

Известен способ прогнозирования риска развития плацентарной недостаточности с синдромом задержки роста плода 2-3-ей степени у беременных, включающий забор периферической венозной крови, отличающийся тем, что после выделения ДНК проводят анализ полиморфизмов генов факторов коагуляции 20210G/A FII, 1691G/A FV, 10976G/A FVII и прогнозируют повышенный риск развития плацентарной недостаточности с синдромом задержки роста плода 2-3-ей степени у беременных в случае выявления аллеля 10976G FVII и генотипа 10976GG FVII, а низкий риск прогнозируют при наличии следующих комбинаций: генотипа 20210GG FII и аллеля 10976А FVII; аллелей 20210G FII, 10976А FVII с генотипом 1691GG FV; аллелей 20210G FII и 10976А FVII (патент РФ №2540928, от 10.02.2015).

К недостаткам этого способа можно отнести следующие:

1. Методическая сложность: выделение ДНК и анализ нескольких генов факторов коагуляции. Для их изучения необходима современная генетическая лаборатория.

2. Не проведены аналогичные аналитические исследования у женщин с плацентарной недостаточностью без формирования синдрома ЗРП. В то же время, такое осложнение гестации наблюдается довольно часто. Необходимо исключить в этом случае выявление аллеля 10976G FVII и генотипа 10976GG FVII, чтобы доказать роль в этих реакциях именно ЗРП.

Известен способ прогнозирования задержки роста плода у женщин с плацентарной недостаточностью путем исследования биологической жидкости беременной женщины, отличающийся тем, что в венозной крови женщин в I триместре беременности определяют уровень плацентарного белка РР13 и при снижении его уровня до 5,34 пг/мл и менее прогнозируют развитие задержки роста плода на фоне плацентарной недостаточности на последующих этапах беременности (патент РФ №2614692, от 28.03.2017).

Однако несмотря на высокую чувствительность, предполагается недостаточная специфичность метода: наибольшее число научных публикаций свидетельствуют об ассоциации снижения РР13 в 1 триместре с преэклампсией (Romero R. et al. First-trimester maternal serum PP13 in the risk assessment for preeclampsia. Am J Obstet Gynecol. 2008 Aug; 199(2): 122. el - 122. ell; Nicolaides KH. et al. A novel approach to first-trimester screening for early pre-eclampsia combining serum PP-13 and Doppler ultrasound. Ultrasound Obstet Gynecol. 2006 Jan;27(l):13-7; RanjeetaGadde, Dayanand CD, Sheela SR. Placental protein 13 - an important biological protein in preeclampsia. JCircBiomark. 2018 Jan-Dec; 7: 1849454418786159). Авторы патента не исключили влияние преэклампсии на результаты исследования - возможно, снижение РР13 у обследованных пациенток было вызвано именно преэклампсией, а не задержкой роста плода. В связи с этим можно говорить о низкой специфичности прогнозирования, основанного на определении только этого фактора.

Известен способ прогнозирования риска формирования суб- и декомпенсированной плацентарной недостаточности с исходом в синдром задержки роста плода на основе генетических особенностей энергетического обмена матери путем исследования уровня липопротеинов низкой плотности (ЛПНП), холестерина и проведения молекулярно-генетического исследования, при сочетании снижения уровня ЛПНП, холестерина и патологических полиморфизмов генов PPARD(-87C>T), PPARGC 1A(S482G G>A) и AMPD(Q12X G>A) у матери вычисляют прогностический индекс D по формуле:

D=0,19*Х1+0,39*Х2-0,71*Х3-1,04*Х4-0,68*Х5-1,86, где

D - прогностический индекс,

X1 - уровень холестерина в ммоль/л в крови у женщины,

Х2 - уровень липопротеинов низкой плотности (ЛПНП) в ммоль/л в крови женщины,

Х3 - наличие у женщины генотипов, содержащих вариантный аллель -87_Т полиморфного ДНК-локуса PPARD(-87C>T) в гомо- и гетерозиготном состоянии: если есть - 1, если нет - 0,

Х4 - наличие у женщины генотипов, содержащих вариантный аллель S482 А полиморфного ДНК-локуса PPARGC 1 A(S482G G>A) в гомо- и гетерозиготном состоянии: если есть - 1, если нет - 0,

Х5 - наличие у женщины генотипов, содержащих вариантный аллель Q12X_A полиморфного ДНК-локуса AMPD(Q12X G>A) в гомо- и гетерозиготном состоянии: если есть - 1, если нет - 0,

- 1,86-CONST,

при значении D<0 делают заключение о высоком риске развития суб- и декомпенсированной плацентарной недостаточности с исходом в синдром задержки роста плода, а при значении D>0 делают заключение о низком риске развития суб- и декомпенсированной плацентарной недостаточности с исходом в синдром задержки роста (патент РФ №2677335, от 16.01.2019). К недостаткам данного способа можно отнести:

1. Низкий уровень специфичности решения: изменение данных показателей может наблюдаться у женщин с ожирением, нарушением липидного обмена, атеросклерозом.

2. Данный способ также ограничен в применении ввиду сложности и длительности его выполнения.

Наиболее близким к заявленному техническому решению является способ прогнозирования ЗРП путем определения в сыворотке крови беременной содержания инсулиноподобного фактора роста (ИФР) и сосудисто-эндотелиального фактора роста (СЭФР) (патент РФ №2246733, 2005). При величине коэффициента отношения этих белков, равном 28,5 и ниже, диагностируют задержку развития плода. Данное изобретение принято нами за прототип.

Недостатками данного технического решения являются: 1. Низкий уровень специфичности прогноза: изменение данных показателей может наблюдаться, например, при развитии преэклампсии или угрозе преждевременных родов (А.В. Орлов и соавт.// Росс, вестник акуш. и гин. -2005. - №3. С. 7-9).

2. Метод трудоемок и длителен по времени его выполнения. Указанные недостатки устраняются в заявляемом техническом решении.

Задачей заявляемого изобретения является повышение точности и специфичности прогнозирования задержки роста плода для выделения беременных группы риска по формированию данной патологии.

Данная задача решается за счет того, что у беременных в сроки гестации 18-22 недель в венозной крови методом количественной ПЦР определяют экспрессию, выраженную в величине пороговых циклов Ct -трех плацента-специфичных микроРНК: микроРНК-103а-3р, микроРНК-26а-5р и микроРНК-125b-5р, рассчитывают коэффициент регрессионной функции

z=-7,1-0,027*X_miR103+0,263*X_miR26-0,001*X_miR125, где

X_miR103=Ct микроРНК-103а-3р,

X_miR26=Ct микроРНК-26а-5р,

X_miR125=Ct микроРНК-125b-5p;

после чего определяют р - прогностический индекс, характеризующий вероятность наличия ЗРП, который рассчитывают по формуле: 100%, если величина р составляет 76,6% и более, прогнозируют развитие задержки развития плода.

Техническим результатом, обеспечиваемым приведенной совокупностью признаков, является повышение точности и специфичности прогнозирования задержки роста плода на доклинической стадии, когда признаки патологии еще не проявлены клинически; и возможность за счет этого своевременной оптимизации тактики ведения беременности и улучшения перинатальных исходов.

Эпигенетическая регуляция, включающая в себя микроРНК, влияет на все без исключения процессы, происходящие в организме, именно поэтому микроРНК обладает высоким прогностическим потенциалом.

Так как во многих случаях задержка роста плода обусловлена плацентарной недостаточностью, то логично предположить, что те микроРНК, которые специфичны для плаценты, могут играть ключевую роль в развитии данного осложнения беременности, нарушая биологические процессы, необходимые для нормального развития и функционирования плаценты (https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/20393554/). Плацента-специфичные микроРНК впервые были выделены в 2007 году методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) в режиме реального времени (https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/21093846; https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/21079238).

Они принимают участие в огромном числе необходимых функций, включая обеспечение иммунологической толерантности и ангиогенеза (https://journals.plos.org/plosone/article?id=10.1371/journal.pone.0003148).

В настоящее время известно более 500 микроРНК, связанных с формированием и функционированием плаценты (https://www.hindawi.com/journals/bmri/2015/294954/). Изменение экспрессии микроРНК в трофобластах может быть ассоциировано с развитием плацентарной недостаточности и обусловленных ей осложнений беременности, таких как задержка развития плода (https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/21079238).

Нами установлены прогностические параметры развития данной акушерской патологии беременности по расчету диагностического индекса, основанного на определении в периферической венозной крови уровня экспрессиимикроРНК-125b-5р, микроРНК-26а-5р и микроРНК-103а-3р. Из изначально проанализированных нами 16 микроРНК, выявлено снижение экспрессии микроРНК-125b-5р, микроРНК-26а-5р и микроРНК-103а-3р в крови беременных с задержкой роста плода по сравнению с группой контроля.

Таким образом, полученные нами результаты позволили судить об изменении уровня экспрессии микроРНК-125b-5р, микроРНК-26а-5р и микроРНК-103а-3р у беременных с ЗРП по сравнению с женщинами, чья беременность протекает без осложнений и разработать метод прогнозирования данной патологии у беременных, начиная с 18-22 недель гестации.

Для классификации пациенток по степени риска наличия ЗРП методом бинарной логистической регрессии была построена прогностическая модель на основании результатов определения экспрессии наиболееинформативного сочетания плацента-специфичных микроРНК-125b-5р, микроРНК-26а-5р и микроРНК-103а-3р в периферической венозной крови беременных. Экспрессия данных микроРНК определялась в Ct (от англ. Threshold cycle -пороговый цикл) - это значение количества циклов реакции, при котором кривая амплификации и прямая порога чувствительности прибора пересекаются.

Вероятность развития ЗРП описывается следующим регрессионным уравнением:

в котором z=-7,1-0,027*X_miR103+0,263*X_miR26-0,001*X_miR125 (1) где р - прогностический индекс, характеризующий вероятность наличия ЗРП, е - число Эйлера, математическая константа (≈2,718), z - коэффициент регрессионной функции, X_miR103=Ct микроРНК-103а-3р, X_miR26=Ct микроРНК-26а-5р, X_miR125=Ct микроРНК-125b-5p, где Ct - это значение количества циклов реакции микроРНК, при котором кривая амплификации и прямая порога чувствительности прибора пересекаются.

Полученная регрессионная модель (1) является статистически значимой (р=0,001). Исходя из значения коэффициента детерминации Найджелкерка, данная модель учитывает 70,1% факторов, определяющих вероятность развития ЗРП. Чувствительность данной модели составила 85,2%, специфичность - 33,3%, точность способа - 72,2%.

С целью повышения диагностической эффективности модели, нами была произведена корректировка порога классификации, исходя из результатов анализа ROC-кривой. Площадь под ROC-кривой (AUC) соответствующей взаимосвязи наличия задержки роста плода и значения регрессионной функции составила 0,856±0,064 с 95% ДИ: 0,731-0,98.

Пороговое значение функции (1) в точке cut-off составляло 76,6. Значения функции, равные или превышающие данное значение, соответствовали прогнозу развития ЗРП. Выбрано значение отсечения прогностического индекса, равное 76,6%, что позволило увеличить точность способа до 83,3%; чувствительность составила 81,5%, специфичность -88,9%.

Таким образом, принадлежность пациентов к группе высокого или низкого риска развития ЗРП определялась исходя из рассчитанных значений диагностической регрессионной функции: при значении прогностического индекса более 76,6%>беременная относилась к группе высокого риска развития ЗРП, при значении функции менее 76,6% -к группе низкого риска.

Заявляемый способ применим в отношении беременных начиная с 18-22 недель гестации (после завершения формирования плаценты), поскольку основан на определении именно плацента-специфичных микроРНК. При получении значения диагностического индекса более 76,6% делают заключение о высоком риске развития задержки роста плода за счет формирования суб- и декомпенсированной плацентарной недостаточности.

Заявленным способом обследовано 100 беременных в сроки 18-22 недели, у которых проведено исследование заявленным методом. У 67 беременных значение прогностического индекса было равно или более 76,6%, т.е. беременная относилась к группе высокого риска развития задержки роста плода. Таким образом, заявляемый способ позволяет своевременно выделять беременных группы риска по формированию данной патологии. У 33 беременных значение прогностического индекса составило менее 76,6%, т.е. они относились к группе низкого риска по развитию ЗРП. Полученные данные обработаны с помощью программы IBM SPSS Statistics 23.

Подробное описание способа и примеры его клинического выполнения

Способ осуществляют следующим образом. У беременных в сроке 18-22 недель гестации натощак, в утренние часы, осуществляют забор периферической венозной крови. Кровь для исследования в количестве 3 мл набирают в пробирку со стабилизатором РНК Tempus™ Blood RNA фирмы «Applied Biosystems» (США). Полученную пробирку с кровью используют для выделения тотальной РНК при помощи набора реагентов Gene JET Stabilized and Fresh Whole Blood RNA Kit фирмы «Thermo Scientific)), (США) с последующей нормализацией концентрации и дальнейшим определением количества miR-125b-5p, miR-26a-5p и miR-103a-3p методом количественной ПЦР на амплификаторе CFX-96 фирмы «BioRad» (США). Определяемые показатели Ct - это значение количества циклов реакции микроРНК, при котором кривая амплификации и прямая порога чувствительности прибора пересекаются. При этом X_miR103=Ct микроРНК-103а-3р, X_miR26=Ct микроРНК-26а-5р, X_miR125=Ct микроРНК-125b-5p подставляются в формулу для расчета z - коэффициента регрессионной функции:

z=-7,1-0,027*X_miR103+0,263*X_miR26-0,001*X_miR125, после чего определяется р - прогностический индекс, характеризующий вероятность наличия ЗРП, который рассчитывается по формуле:

Если величина р составляет 76,6% и более, устанавливают высокую вероятность развития ЗРП в последующие сроки беременности.

Это позволяет своевременно выделять беременных группы риска по формированию данной патологии и провести необходимый комплекс лечебно-профилактических мероприятий, что будет способствовать снижению риска перинатальной смертности и заболеваемости, и уменьшению экономических затрат на лечение и выхаживание недоношенных новорожденных.

Работоспособность заявляемого способа подтверждается следующими клиническими примерами:

Пример 1.

Беременная П-ова в сроке 18 недель гестации была обследована по заявляемому способу в Перинатальном центре. При лабораторном исследовании периферической венозной крови получены следующие показатели экспрессии микроРНК:

X_miR103=Ct микроРНК-103а-3р=43,2; X_miR26=Ct микроРНК-26а-5р=45,0; X_miR125=Ct микроРНК-125b-5p=38,68.

z=-7,1-0,027*43,2+0,263*45,0-0,001*38,68=3,53.

Значение прогностического индекса составило: р - 1 / (1+е-^3,53)*100%=97,2%. Данное значение превышает 76,6%, что, согласно заявляемому способу, свидетельствует о необходимости данную пациентку отнести в группу высокого риска развития ЗРП.

В сроки 31 нед была госпитализирована с поликлинического приема ГБУ РО Перинатального центра в отделение патологии беременности с жалобами на снижение двигательной активности плода (менее 5 шевелений в сутки в течение последних двух дней). Диагноз при поступлении: Беременность 31 неделя 5 дней. ФПН, субкомпенсация. ЗРП. Хронический гастрит, ремиссия. Варикозная болезнь вен нижних конечностей, хроническая венозная недостаточность 0-1 ст.

Женщина была госпитализирована в стационар, наблюдалась и получала терапию в соответствии со стандартом оказания медицинской помощи, по данным ультразвукового исследования выявлена задержка роста плода I ст. по асимметричному типу с нарушением фето-плацентарной гемодинамики.

Беременность завершилась преждевременными оперативными родами в сроке гестации 33 недели 4 дня и рождением живого недоношенногоребенка с массой тела 1850 г, длиной 43 см, с оценкой по шкале Апгар 7/7 баллов. Диагноз новорожденного: недоношенность, задержка внутриутробного развития плода по гипотрофическому типу.

Пример 2.

Беременная Х-ян находилась на амбулаторном обследовании в ГБУ РО Перинатальном центре с диагнозом: Беременность 21 неделя 2 дня. Отягощенный акушерско-гинекологический анамнез (ОАГА) -1 неразвивающаяся беременность. Хронический фарингит, ремиссия. Ожирение 1 ст.

При лабораторном исследовании периферической венозной крови получены следующие показатели экспрессии микроРНК: X_miR103=Ct микроРНК-103а-3р=34,61; X_miR26=Ct микроРНК-26а-5р=35,72; X_miR125=Ct микроРНК-125b-5p=36,03.

z=-7,1-0,027*34,61+0,263*35,72-0,001*36,03=1,32. Значение прогностического индекса составило: р=1 / (1+е^-1,32) * 100%=78,9%.

Данное значение превышает 76,6%, что, согласно заявляемому способу, свидетельствует о необходимости эту пациентку отнести в группу высокого риска наличия ЗРП. Беременной была проведена корректировка плана ультразвукового и допплерометрического контроля, что позволило своевременно обнаружить задержку роста плода I ст. по асимметричному типу и «критические» нарушения фето-плацентарной гемодинамики (нулевой диастолический кровоток в артерии пуповины). В связи с этим в сроке беременности 28 недель было выполнено экстренное оперативное родоразрешение. Родился живой недоношенный ребенок массой 840 г, длиной 33 см, с оценкой по шкале Апгар 6/7 баллов. Ребенок переведен в отделение реанимации и интенсивной терапии новорожденных с последующей реабилитацией в отделении патологии новорожденных^ Ребенок выписан домой на 61-е сутки.

Пример 3.

Пациентка 3-ева находилась на амбулаторном обследовании в ГБУ РО Перинатальном центре. Диагноз: Беременность 20 недель 3 дня. ОАГА (хронический аднексит). Дефицит массы тела.

При лабораторном исследовании периферической венозной крови получены следующие показатели экспрессии микроРНК:

X_miR103=Ct микроРНК-103а-3р=30,08; X_miR26=Ct микроРНК-26а-5р=24,99; X_miR125=Ct микроРНК-125b-5p=36,28.

z=-7,1-0,027*30,08+0,263*24,99-0,001*36,28=-1,38

Значение регрессионной функции составило: р=1 / (1+е^1,38)*100%=20,1%. Данное значение менее 76,6%, что согласно заявляемому способу свидетельствует об отсутствии у этой беременной риска наличия ЗРП.

При дальнейшем наблюдении, по данным ультразвуковых и допплерометрических исследований в течение беременности состояние плаценты и плода оценивалось как нормальное, соответствующее сроку гестации, беременность завершилась срочными родами через естественные родовые пути в сроке 39-40 недель и рождением живого доношенного мальчика с массой тела 3100 г, ростом 50 см, оценкой по шкале Апгар 8/9 баллов. Диагноз ребенка при рождении: здоров.

Заявленный способ позволяет получить надежные результаты и является более эффективным по сравнению с известными, обладая рядом преимуществ:

1. Способ специфичен - он позволяет прогнозировать риск формирования задержки роста плода с использованием анализа экспрессии плацента-специфичных микроРНК, являющихся ключевыми эпигенетическими регуляторами гестационного процесса и вовлеченных в патогенез данного осложнения беременности, что делает его высоко специфическим методом.

2. Способ высокочувствителен, дает возможность прогнозирования определения ЗРП на доклинической стадии, своевременно выделять беременных группы риска по формированию данной патологии, что позволяет осуществить превентивные мероприятие, направленные на профилактику данного патологического состояния.

3. Способ является малоинвазивным, поскольку диагностика осуществляется по результатам исследования периферической крови.

Заявляемый способ прогнозирования задержки роста плода позволяет на основании высокочувствительных современных лабораторных маркеров своевременно осуществить необходимый комплекс лечебно-профилактических мероприятий, что будет способствовать снижению риска перинатальной смертности и заболеваемости, и уменьшению экономических затрат на лечение и выхаживание недоношенных новорожденных.

Апробация заявляемого изобретения проведена на достаточном по объему клиническом материале, что подтвердило работоспособность метода и возможность его применения в широкой клинической практике.

Способ прогнозирования задержки роста плода путем исследования крови, отличающийся тем, что у беременных в сроки гестации 18-22 недель в венозной крови методом количественной ПЦР определяют экспрессию, выраженную в величине пороговых циклов Ct трех плацента-специфичных микроРНК: микроРНК-103а-3р, микроРНК-26а-5р, микроРНК-125b-5р, и рассчитывают коэффициент регрессионной функции

z=-7,1-0,027*X_miR103+0,263*X_miR26-0,001*X_miR125, где

X_miR103=Ct микроРНК-103а-3р,

X_miR26=Ct микроРНК-26а-5р,

X_miR125=Ct микроРНК-125b-5p,

после чего определяют р - прогностический индекс, характеризующий вероятность развития ЗРП, который рассчитывают по формуле: 100%, если величина р составляет 76,6% и более, прогнозируют развитие задержки роста плода.