Комплексное противопаразитарное средство для защиты животных

Изобретение относится к области ветеринарной паразитологии, а именно к комплексному противопаразитарному средству для плотоядных животных. Средство содержит полусинтетическое вещество класса мильбемицинов группы макроциклических лактонов - моксидектин, ацилированное производное пиразиноизохинолина - празиквантел, инсектицид системного действия группы спинозинов - спиносад и вспомогательные вещества. В качестве вспомогательных веществ средство содержит кальция стеарат, вкусовую добавку со вкусом мяса, крахмал кукурузный прежелатинизированный и лактозу. Соотношение компонентов в заявленном средстве следующее, мг/г: спиносад - 350,0-400,0, празиквантел 60,0-65,0, моксидектин - 2,0-3,0, кальция стеарат - 80,0-100,0, вкусовая добавка со вкусом мяса - 135,0-160,0, крахмал кукурузный прежелатинизированный - 36,0-38,0, лактоза - до 1 г. Осуществление изобретения позволяет расширить ассортимент высокоэффективных противопаразитарных средств широкого спектра действия для плотоядных животных, активных в отношении различных стадий развития экто- и эндопаразитов, а именно: блох, вшей, чесоточных клещей, тромбидиформных клещей, круглых гельминтов - нематод и ленточных гельминтов - цестод, паразитирующих у собак и кошек, имеющих обладающих длительным защитным действием, а также стабильных при хранении. 1 табл., 3 пр.

 

Изобретение относится к области ветеринарной паразитологии, а именно - к комплексным противопаразитарным средствам для плотоядных животных.

Более 70% россиян содержат домашних животных. Самыми яркими представителями животного мира урбанизированной территории являются домашние плотоядные - собаки и кошки. Они же относятся к так называемой группе «животные - компаньоны» практически во всех странах мира. Известно положительное влияние домашних животных на человека. С одной стороны, домашние плотоядные положительно влияют на социализацию и психическое здоровье своих владельцев, но с другой - собаки и кошки играют важную роль в передаче вирусных, бактериальных, а также паразитарных инфекций человеку. Паразитарные заболевания вызывают целый ряд нарушений нормального развития животных, которые сказываются на здоровье и продуктивности их во взрослом состоянии, а у молодых животных могут вызывать массовую гибель. Дети же, пожилые люди, а также лица с ослабленным иммунитетом особенно подвержены повышенному риску инфицирования.

Главным принципом борьбы с паразитарными болезнями является своевременное лечение зараженных животных. В настоящее время производится и является доступным широкий спектр противопаразитарных средств. Но, несмотря на это, биологическая опасность паразитозов не снижается, и проблема их распространения до сих пор остается нерешенной, т.к. заражающие животных паразиты отличаются морфологией и циклами развития, а их жизнедеятельность обеспечивается довольно разными биохимическими и физиологическими процессами. Поэтому сегодня актуальной задачей является создание и производство препаратов широкого спектра действия, а именно содержащих два и более действующих веществ, которые позволяют проводить дегельминтизацию одновременно против паразитов, принадлежащих различным таксонам.

Известно комплексное противопаразитарное средство ветеринарного назначения «НексгарД Спектра». В качестве действующих веществ препарат содержит афоксоланер и мильбемицина оксим, а также вспомогательные вещества: кукурузный крахмал, муку из соевого белка, пищевую добавку с ароматом и вкусом тушеной говядины, повидон Е1201, макрогол 400, макрогол 4000, макрогол 15 гидроксистеарат, глицерол, триглицерид средней длины цепи, моногидрат лимонной кислоты, бутилгидрокситолуол (см. например, Инструкция по применению лекарственного препарата для ветеринарного применения НексгарД Спектра для лечения и профилактики паразитарных заболеваний собак, регистрационное удостоверение - 230-3-6.16-3246№ПВИ-3-6.16/04766 от 10.06.2019, организация - разработчик Мериал, Франция)

Однако «НексгарД Спектра» предназначен только для собак. Кроме того, т.к. препарат импортный, он имеет высокую стоимость.

Известно комплексное противопаразитарное средство для животных Инспектор Квадро Табс. В качестве действующих веществ препарат содержит люфенурон, моксидектин и празиквантел а также вспомогательные вещества: лактозу, крахмал, пищевую добавку «Аромат Тирольский мясной», стеарат кальция, желатин, аэросил и комплексную пищевую добавку-краситель «Коричневый шоколад» (см., например, Инструкция по ветеринарному применению лекарственного препарата Инспектор Квадро Табс, регистрационное удостоверение 276-3-7.20-4647№ПВИ-3-720/05591 от 15.04.2020, организация - разработчик Неотерика ГмбХ, Германия).

Инспектор Квадро Табс предназначен как для собак, так и для кошек, обладает широким спектром действия, но препарат также принадлежит иностранной компании и имеет высокую стоимость.

Инспектор Квадро Табс является наиболее близким аналогом заявленного лекарственного средства.

Задачей изобретения является расширение ассортимента высокоэффективных противопаразитарных средств широкого спектра действия для плотоядных животных, активных в отношении различных стадий развития паразитов, имеющих длительный эффект и малую токсичность.

Поставленная задача решается тем, что комплексное противопаразитарное средство для животных, содержащее полусинтетическое вещество класса мильбемицинов группы макроциклических лактонов - моксидектин, ацилированное производное пиразиноизохинолина - празиквантел и вспомогательные вещества, согласно изобретению, дополнительно содержит инсектицид системного действия группы спинозинов - спиносад, а в качестве вспомогательных веществ - кальция стеарат, вкусовую добавку со вкусом мяса, крахмал кукурузный прежелатинизированный и лактозу при следующем соотношении компонентов, мг/г:

спиносад	350,0-400,0
празиквантел	60,0-65,0
моксидектин	2,0-3,0
кальция стеарат	80,0-100,0
вкусовая добавка со вкусом мяса	135,0-160,0
крахмал кукурузный прежелатинизированный	36,0-38,0
лактоза	до 1 г

Техническим результатом заявленного изобретения является то, что полученный препарат имеет широкий спектр противопаразитарного действия в отношении различных стадий развития экто- и эндопаразитов, а именно: блох, вшей, чесоточных клещей,, тромбидиформных клещей, круглых гельминтов - нематод и ленточных гельминтов - цестод, паразитирующих у собак и кошек, удобен в применении, нетоксичен в терапевтических дозах, обладает длительным защитным действием, стабилен при хранении.

Изобретение иллюстрируется следующими примерами выполнения, которые, однако не ограничивают объем притязаний заявителя.

Пример 1. Получение заявленного лекарственного средства.

Препарат предлагается в виде таблеток для орального применения. Данная форма лекарственного средства позволяет соблюдать его точную дозировку и удобна для применения.

В подготовленную чашу сушилки-гранулятора загружают заранее взвешенных компонентов: спиносада, празиквантела, моксидектина, кальция стеарата, вкусовой добавки со вкусом мяса, крахмала кукурузного прежелатинизированного, кальция лактозы.

Для производства таблеток для собак и кошек массой до 2,5 кг берут 75 мг спиносада, 12,5 мг празиквантела, 0,5 мг моксидектина, 18 мг кальция стеарата 29 мг вкусовой добавки со вксом мяса,, 7,5 мг крахмала кукурузного прежелатинизированного и 57,5 мг лактозы.

Для производства таблеток для собак и кошек массой от 2,5 до 5 кг берут 150 мг спиносада, 25 мг празиквантела, 1 мг моксидектина, 36 мг кальция стеарата, 58 мг вкусовой добавки со вксом мяса, 15 мг крахмала кукурузного прежелатинизированного и 115 мг лактозы.

Для производства таблеток для собак и кошек массой от 5 кг до 15 кг берут 300 мг спиносада, 50 мг празиквантела, 2 мг моксидектина, 54 мг кальция стеарата, 87 мг вкусовой добавки со вкусом мяса, 22,5 мг крахмала кукурузного прежелатинизированного и 84,5 мг лактозы.

Для производства таблеток для собак и кошек массой более 15 кг берут 900 мг спиносада, 150 мг празиквантела, 6 мг моксидектина, 162 мг кальция стеарата 260 мг вкусовой добавки со вкусом мяса, 67,5 мг крахмала кукурузного прежелатинизированного и 254,5 мг лактозы.

В качестве вкусовой добавки со вкусом мяса в составе заявленного лекарственного средства используют порошок СИ' СЕНС - регистрационный номер в реестре зарегистрированных кормовых добавок ПВИ-2-3.7/02151. Добавка улучшает вкусовую привлекательность препарата, и тем самым значительно облегчает его применение животному.

Чашу с сырьем устанавливают в сушилку-гранулятор. Задают параметры процесса: температура воздуха на входе 60°C, температура воздуха на выходе 30°C. Проводят сухое смешивание в течение 15 мин.

По истечении заданного времени сухого смешивания, включают функцию увлажнения. На сушилке-грануляторе устанавливают расход форсунок 0,3 л/мин и осуществляют процесс влажного гранулирования в течение 100 мин.

По окончании процесса влажного гранулирования, в течение 20 минут проводят сушку гранулята.

Высушенный гранулят собирают в промежуточные маркированные емкости и передают на стадию таблетирования. Параметры пресса: потребляемая мощность - 10,0 кВт, рабочее напряжение 400 В, максимальное усилие давления - 1 00k Н, максимальное усилие предварительного давления - 100 кН. Получают таблетки массой: 0,20±0,015 г - для собак и кошек массой до 2,5 кг; 0,40±0,04 г - для собак и кошек массой от 2,5 до 5 кг; 0,6±0,06 г - для собак и кошек массой от 5 до 10 кг; 1,8±0,18 г - для собак массой от 15 до 30 кг.

Результаты испытания стабильности препарата показали, что полученный состав стабилен в течение заявленного срока годности, т.к. в процессе хранения препарата в закрытой упаковке при температуре до 25°C в течение 3-х лет изменения концентрации действующих веществ не зафиксированы.

Пример 2. Доклинические исследования.

В результате проведенных доклинических исследований острой токсичности при внутрижелудочном введении заявленного лекарственного средства в максимальной дозировке - «Для собак массой более 15 кг», содержащего в 1 таблетке в качестве действующих веществ спиносад - 900 мг, празиквантел - 150 мг и моксидектин - 6 мг, установлено значения LD₅₀ для крыс-самцов составляют 370±25,5 мг/кг, для мышей-самцов - 350±75 мг/кг.

По параметрам острой пероральной токсичности, согласно общепринятой гигиенической классификации ГОСТ 12.1.007-76, препарат относится к 3 классу опасности - вещества умеренно опасные.

При исследовании субхронической токсичности при внутрижелудочном введении крысам-самцам в дозах 35 мг/кг/сутки и 3,5 мг/ кг/сутки, т.е. 1/10 и 1/100 LD₅₀, установленной при однократном введении, один раз в день на протяжении 7 дней, клинический анализ периферической крови показал, что внутрижелудочное введение максимальной дозировки заявленного препарата не оказывает отрицательного влияния на гематологические показатели периферической крови.

При исследовании влияния заявленного лекарственного средства на основные показатели метаболизма, установлено достоверное обратимое повышение активности аланиновой и аспарагиновой аминотрансферраз, щелочной фосфатазы, концентрации билирубина.

Выявлены достоверные обратимые изменения показателей функциональной активности почек: повышение креатинина, мочевины и повышение плотности мочи. Показатели, характеризующие состояние центральной нервной системы и работоспособности животных опытных групп, достоверно незначительно снижены по сравнению с контрольными. Так же было зафиксировано достоверное снижение динамики среднесуточного прироста массы животного и увеличение коэффициента массы печени у животных, получавших препарат в дозе 35 мг/кг/сутки.

При накожных аппликациях каких-либо изменений кожного покрова не выявлено, что свидетельствует об отсутствии у заявленного лекарственного средства раздражающего действия на кожу и аллергизирующего действия в тестах накожных аппликаций.

Однократная инсталляция заявленного лекарственного средства в конъюнктивальный мешок в концентрации 1% не вызывает ответную реакцию, а 5% концентрация оказала слабое раздражающее действие на слизистые оболочки глаз.

Исследования переносимости заявленного лекарственного средства целевыми животными показали, что при ежедневном его пероральном введении на протяжении 5 суток собакам и кошкам в терапевтической дозе, оно не оказывает отрицательного влияния на физиологическое состояние животных, состояние кожи, динамику массы тела, не изменяет температуру тела, морфологический состав и биохимические показатели крови.

Введение заявленного лекарственного средства собакам ежедневно в течение 5 суток в двукратно увеличенной терапевтической дозе у 20% подопытных животных - 1 из 5 животных - оказало кратковременное обратимое токсическое действие, проявившееся рвотой, шаткой походкой, учащенным сердцебиением и поверхностным дыханием. Клинические признаки отравления полностью исчезли без врачебного вмешательства через 24 часа, общеклинические показатели крови - на 10-е сутки, т.е. на 4-ые сутки после исчезновения клинических признаков, соответствовали норме, биохимические показатели крови в пределах нормы были к 30-м суткам, т.е. на 24-ый день после исчезновения клинических признаков. У 80% подопытных животных отрицательного влияния препарата на общее состояние животных и состояние кожи, динамику массы и температуры тела, а также на морфологический состав и биохимические показатели крови животных, не выявлено.

На основании результатов исследования фармакокинетики заявленного лекарственного средства установлено, что:

- действующие вещества препарата - спиносад, моксидектин, празиквантел после перорального введения препарата собакам и кошкам быстро - через 30 минут - проникают в системный кровоток;

- терапевтические концентрации и спиносада и моксидектина сохраняются в крови собак и кошек до 42 суток, а концентрации празиквантела и его активного метаболита - до 24 часов после перорального введения препарата;

- рекомендуемые способ введения и режим дозирования препарата обеспечивают длительную защиту животных от экто- и эндопаразитов собак и кошек.

Таким образом, результаты проведенных доклинических исследований позволяют сделать вывод о безопасности заявленного лекарственного средства для целевых животных - собаки, кошки - при его применении в предлагаемом режиме дозирования.

Пример 3. Изучение терапевтической эффективности заявленного лекарственного препарата.

В опытах участвовали кошки и собаки, поступившие на прием в ветеринарные учреждения за отчетный период исследования. Была проведена работа по формированию опытных и контрольных групп животных. Всего в опытах участвовали 518 собак и 501 кошка. Из них 547 животных - 272 собаки и 275 кошек - опытные группы, 472 животных - 246 собак и 226 кошек - контрольные группы.

Исследуемых животных идентифицировали и оценивали на индивидуальной основе. Всех животных обследовали. Обследование включало общее клиническое и паразитологическое исследования. На основании полученных полученных результатов в ходе выше указанных исследований, формировали группы по сходным физиологическим и терапевтических показателям.

Животных включали в исследование, если подтвержден диагноз, животным не применяли какие-либо лекарственные препараты менее, чем за один месяц до начала эксперимента, влияющее на его результаты. Все животные принадлежали частным владельцам, имели постоянный доступ к воде.

Питание собак и кошек соответствовало рациону и нормам кормления. Животных кормили промышленным регулярным кормом, соответствующим их возрасту и виду.

Заявленный препарат применяли животным однократно. При лечении генерализованных форм демодекоза и саркоптоза дачу препарата повторяли 2-3 раза с интервалом 6 недель до выздоровления, подтвержденного результатами акарологических исследований.

Для испытаний использовали опытно-промышленные образцы заявленного лекарственного средства 4 модификаций: для собак и кошек до 2,5 кг; для собак и кошек от 2,5 до 5 кг; для собак и кошек от 5 до 15 кг; для собак свыше 15 кг.

Препарат применяли в минимальной терапевтической дозе 30 мг спиносада, 0,2 мг моксидектина и 5 мг празиквантела на 1 кг массы животного в соответствии с таблицей 1.

Таблица 1.

Доза использования заявленного препарата в зависимости от массы животного.

Заявленный препарат применяли животным индивидуально перорально в процессе кормления с небольшим количеством корма/лакомства или вводили принудительно на корень языка сразу после кормления.

Животным контрольных групп применяли препараты сравнения согласно инструкциям по ветеринарному применению.

Статистическую обработку полученных результатов проводили по стандартным процедурам, с помощью приложения Microsoft Excel 2010 (Microsoft Corp. USA) и пакета статистического анализа данных StatPlus 2009 professional 5.8.4 for Windows (StatSoft Inc., USA)., с использованием t-критерия Стьюдента для оценки достоверности различий между выборками для опытных и контрольных экспериментов.

Различия определяли при Р≤0,05 уровне значимости.

Исследования инсектицидной эффективности препарата при энтомозах, а именно при афаниптерозе, линогнатозе и триходектозе.

Исследования проводили на спонтанно зараженных животных, поступивших на прием в клинику для животных в параллельных группах: 1 группа - опыт - назначали исследуемый препарат согласно плана исследования, 2 - препарат сравнения. В качестве препарата сравнения при афаниптерозе собак и кошек назначали препарат Comfortis^® антипаразитарные таблетки. При линогнатозе и триходектозе собакам в качестве препарата сравнения назначали лекарственное средство Симпарика таблетки для перорального применения, кошкам накожно в область холки наносили раствор для наружного применения ИНСПЕКТОР ТОТАЛ К согласно инструкции по применению.

Подсчет насекомых и фиксацию мест поражения проводили в дни: - 1/0, 2, 7, 14, 21, 28, затем каждые 7-10 дней до появления эктопаразитов.

В дни - 1/0 животных взвешивали на калиброванных и поверенных электронных весах, проводили клинический осмотр самок на беременность с использованием УЗИ.

Число насекомых, обнаруженных на каждом подопытном животном, регистрировали и записывали отдельно. Клиническое проявление повреждений у каждого животного фиксировали в дни осмотра. Оценивали с правой и левой стороны участки тела с расчесами, участки тела с выпадением шерсти, наличие или отсутствие зуда - на протяжении 5-минутного периода. Для иллюстрации распространения повреждений кожи и процесса восстановления делали цветные фотографии каждого животного до применения препарата в дни - 1/0 и в дни 14, 28 после приема препарата, а затем каждые 7-10 дней до восстановления.

Оценку эффективности проводили по снижению числа насекомых, элиминации живых насекомых на основании их подсчета, а также исчезновению клинических признаков и симптомов заболевания по всех группах животных до применения и после применения препарата на протяжении 56 дней при афаниптерозе и 28 дней при линогнатозе и триходектозе.

Результатом успешного лечения считали отсутствие живых насекомых на животном. Также вычисляли снижение числа живых насекомых для животных всех групп в каждый день наблюдения оценки в соответствие со стандартными формулами.

Родовую и видовую принадлежность насекомых изучали по атласам - определителям. Для типирования паразитов до вида использовали микроскоп МБС-2 бинокулярный.

Оценку продолжительности защитного действия исследуемого препарата против блох проводили методом наблюдения за животными в течение двух месяцев с проведением осмотров кожного покрова через каждые 5-7 сут после обработки до фиксации на животных насекомых. Все наблюдения записывали в клиническом отчете. Длительность действия препарата определяли со дня обработки и до минимального срока фиксации блох на животном в опытной группе.

Заявленный препарат показал высокую эффективность при афаниптерозе, линогнатозе и триходектозе собак - 69 животных опытных групп - и кошек - 80 животных опытных групп. Инсектоакарицидное действие начиналось через 30 минут и достигало максимума через 24-48 часов.

Защитное действие препарата от повторного нападения блох Ctenocephalides canis и Ctenocephalides felis длилось до 8-9 недель (период наблюдения).

При введении препарата животным, которые были заражены вшами Linognathus setosus, Trichodectes canis и Felicola subrostratus, на следующий день после обработки наблюдалась 100% гибель насекомых, о чем говорило отсутствие паразитов на теле животного при осмотре.

В большинстве случаев животные переносили хорошо. Однако, у двух кошек из числа обработанных проявились побочные эффекты в виде апатии, расстройства координации. У одной из этих двух кошек также еще отмечалась гиперсаливация. Симптомы интоксикации исчезли в течение суток без ветеринарного вмешательства.

Исследования антигельминтной эффективности препарата при нематодозах.

Исследования при нематодозах проводили на спонтанно зараженных Ancylostoma caninum, Toxocara canis, Т. cati, Toxascaris leonina, Uncinaria stenocephala, Dirofilaria immitis, Dirofilaria repens собаках и кошках, которых по принципу аналогов с учетом возраста, живой массы и вида инвазии распределили в 2 группы: первой группе применяли перорально заявленный препарат, второй группе животных перорально применяли препарат сравнения - Диронет 500 таблетки для собак средних пород или МильбеПет GIGI, а кошкам, соответственно, Мильбемакс таблетки для кошек или МильбеПет GIGI.

Целесообразность и эффективность проведения дегельминтизации определяли копроскопическими исследованиями. Копрологический метод, в котором используют пробы фекалий для обнаружения паразитарных элементов, например, яиц и личинок гельминтов, ооцист и цист простейших, и подсчета их числа, является наиболее распространенным. Важно не только обнаружение и идентификация паразитарных элементов, но и определение их числа. Подсчет числа яиц играет ключевую роль в мониторинге зараженности гельминтами, в определении степени загрязнения пастбищ, в эпидемиологических исследованиях или для установления эффективности антигельминтика. Использовали методику МакМастера, которая рекомендована «Всемирной ассоциацией за прогресс ветеринарной паразитологии» (WAAVP) для оценки эффективности антигельминтных препаратов у животных, а также для определения резистентности гельминтов к антигельминтикам.

После постановки диагноза зараженных животных распределяли в одну из двух групп блоками по две особи по принципу аналогов с учетом массы тела.

Для оценки эффективности лечения проводили отбор проб кала в дни 7/8, 14/15 и в день 21 после начала терапевтических мероприятий по снижению или отсутствию яиц гельминтов.

Для изучения эффективности испытуемого препарата при дирофилляриозе у собак проводили исследование периферической крови на наличие микрофилярий методом Кнотта.

Для оценки эффективности лечения при дирофиляриозе у собак проводили отбор проб венозной крови через 7 дней после дачи испытуемого препарата, а также через 1, 2, 3, 4 и 5 месяцев. Результатом успешного лечения считали отсутствие микрофилярий в крови животных.

Количество подсчитанных яиц паразитов преобразовывали в натуральный логарифм (количество +1) для вычисления среднеарифметических значений для каждой экспериментальной группы животных. Эффективность для каждой группы определяли, вычисляя процент эффективности по формуле 100×((С-Т)/С), где С - это среднее значение количества подсчитанных яиц гельминтов в день -1/0; Т - среднее значение среди леченных животных. Процент эффективности рассчитывали относительно количества подсчитанных яиц гельминтов в день -1/0. Логарифмы подсчетов яиц гельминтов экспериментальных групп животных сравнивали согласно критерию Стьюдента между первой и второй опытными группами на каждый конкретный день эксперимента, а также в экспериментальной группе относительно дня -1/0 (соответственно С - это среднее значение количества яиц подсчитанных в день -1/0; Т - это среднее значение яиц гельминтов подсчитанное в каждый конкретный день отбора проб после назначения терапевтических мероприятий.

В результате проведенных клинико-экспериментальных исследований было установлено, что однократное пероральное применение заявленного препарата в минимальной терапевтической дозе 30 мг спиносада, 0,2 мг моксидектина и 5 мг празиквантела на 1 кг массы собакам - 66 животных - и кошкам - 68 животных - опытных групп, спонтанно зараженным нематодами Ancylostoma caninum, Toxocara canis, Т. cati (Т. mystax), Toxascaris leonina, Uncinaria stenocephala, Dirofilaria immitis (микрофилярий), Dirofilaria repens (микрофилярий), показало 100% эффективность при токсокарозе, токсаскаридозе, анкилостомозе, унцинариозе и лярвальном дирофиляриозе.

Среднее количество яиц в 1 г фекалий до опыта составило (опыт /контроль): Toxocara canis - 3387,5±297,3 / 3600±332,7 у собак, Т. cati - 2193,7±229 / 2150±377,9 у кошек, Toxascaris leonina - 1125±581,8 / 1518,7±556,7 у собак и 1531,2±469,7 / 1206,2±475,4 у кошек, Uncinaria stenocephala - 993,7±440,3 / 881,2±399,9 у собак и 787,5±390,7 / 868,7±396,3 у кошек.

При всех контрольных исследованиях биопроб, взятых у животных опытных групп на 14 и 21 день после применения препарата, яйца (личинки) не были обнаружены.

Нежелательных явлений и реакций у животных в процессе опыта не зафиксировано.

Исследование антигельминтной эффективности препарата при цестодозах.

Исследования при цестодозах проводили на спонтанно зараженных Dipylidium caninum, Multiceps multiceps, Taenia hydatigena, Taenia ovis, Taenia pisiformis, Taenia taeniaeformis, Echinococcus granulosus, Alveococcus multilocularis собаках и кошках, которых по принципу аналогов с учетом возраста, живой массы и вида инвазии распределили в 2 группы: первой группе применяли заявленный препарат перорально, второй группе животных перорально применяли препарат сравнения - Диронет 500 таблетки для собак средних пород или МильбеПет GIGI, а кошкам, соответственно, Мильбемакс таблетки для кошек или МильбеПет GIGI.

Целесообразность и эффективность проведения дегельминтизации определяются копроскопическими исследованиями. Материалом для лабораторных паразитологических исследований на гельминтозы служит биологический материал - кал. Копрологические исследования проводили аналогично исследованиям при нематодозах.

После постановки диагноза зараженных животных распределяли в одну из двух групп блоками по две особи по принципу аналогов с учетом массы животного и вида паразита.

Для оценки эффективности лечения проводили отбор проб кала в дни 7/8, 14/15 и в день 21 после начала терапевтических мероприятий.

Копрологические исследования проводили аналогично исследованиям при нематодозах.

В результате проведенных клинико-экспериментальных исследований было установлено, что однократное пероральное применение заявленного препарата в минимальной терапевтической дозе 30 мг спиносада, 0,2 мг моксидектина и 5 мг празиквантела на 1 кг массы собакам - 52 животных - и кошкам - 52 животных опытных групп, спонтанно зараженных имаго цестод Dipylidium caninum, Multiceps multiceps, Taenia hydatigena, Taenia ovis, Taenia pisiformis, Taenia taeniaeformis, Echinococcus granulosus, Alveococcus multilocularis, показало высокую эффективность при дипилидиозе, тениидозах, эхинококкозе и альвеококкозе.

Среднее количество яиц в 1 г фекалий до опыта составило (опыт /контроль): Dipylidium caninum - 481,2±217 / 462,5±219,9 у собак и 375±88,6 / 343,7±97,9 у кошек, Multiceps multiceps, Taenia hydatigena, Taenia ovis, Taenia pisiformis, Taenia taeniaeformis у собак 1125±581,8 / 1518,7±556,7 и 1531,2±469,7 / 1206,2±475,4 у кошек, Echinococcus granulosus - 606,2±300,5 / 637,5±285 у собак и 375±242 / 468,7±282,7 у кошек, Alveococcus multilocularis - 364±197,9 / 381,9±172 у собак и 336,8±174,4 / 387,4±126,8 у кошек.

При всех контрольных исследованиях фекалий, полученных от животных опытных групп на 14 и 21 день после применения препарата, яйца и членики паразитов обнаружены не были.

Серьезных нежелательных реакций и осложнений у животных в процессе опыта не зафиксировано.

Исследование акарицидной эффективности препарата при саркоптозе, демодекозе и хейлетиеллезе.

Исследования проводили на спонтанно зараженных животных, поступивших на прием в ветеринарную клинику, в параллельных группах: 1 группа - назначали исследуемый препарат, 2 группа - назначали препарат сравнения. Собакам в качестве препарата-сравнения использовали таблетки для перорального применения - Симпарика, кошкам - раствор для наружного применения - ИНСПЕКТОР ТОТАЛ К Препараты сравнения применяли согласно действующим инструкциям по их ветеринарному применению.

Подсчет клещей и фиксацию мест поражения проводили в дни: -1/0, 2, 7/10, 14, 28 (±2 дня). В дни -1/0 животных взвешивали на калиброванных и поверенных электронных весах и проводили клинический осмотр самок на беременность с использованием УЗИ. В дни -2/-1 или 0 и в дни 2, 7/10, 14, 27/28 делали соскобы кожи с 5 различных участков, подозрительных на саркоптозное или демодекозное поражение. Из соскобов готовили маркированные пробы (слайды) с минеральным маслом и просматривали под микроскопом для обнаружения живых клещей. Число клещей в каждом соскобе регистрировали.

Даже при тщательно отработанной технике метод соскобов несовершенен, т.к. в образец отбирается только небольшой процент волосяных фолликулов животного, поэтому для увеличения достоверности результатов в группы отбирали по 10 животных. Единица статистики - отдельное животное.

Оценку эффективности проводили по снижению числа живых клещей, элиминации живых клещей на основании их подсчета, а также исчезновения клинических признаков и симптомов.

Результатом успешного лечения считали отсутствие живых клещей. Также вычисляли снижение числа живых клещей для животных всех групп в каждый день оценки в соответствие со стандартными формулами. В случае возможного присутствия небольшого и даже нулевого числа клещей, для расчета процентного снижения использовали среднее геометрическое значение. Расчеты основывались на средних геометрических значениях - число клещей +1. Цифру 1 вычитали из конечного результата для получения значимого среднего геометрического для каждой группы. Также проводили расчеты процентного снижения количества живых клещей с использованием среднего арифметического.

Вели описательную статистику количества живых клещей для различных дней оценки: среднее значение, ошибка среднего значения, достоверность.

Отсутствие живых клещей у животного расценивали как успешное лечение.

Кроме того, выполняли полуколичественную оценку возобновления роста шерсти, и каждому животному на различных днях оценки после лечения присваивали определенный балл. Группы сравнивали при помощи описательных методов с использованием частот и процентов: 1 балл - восстановление шерстного покрова на 0-50% участков повреждений кожи, отмеченных во время оценки до лечения; 2 балла - восстановление шерстного покрова на >50% - ≤90% участков повреждений кожи, отмеченных во время оценки до лечения; 3 балла - восстановление шерстного покрова на >90% участков повреждений кожи, отмеченных во время оценки до лечения.

Статистическую обработку полученных данных проводили с помощью критерия Стьюдента с использованием программы Microsoft Excel. Уровень значимости Р<0,05; 0,01; 0,001.

Препарат считали эффективным, если в день заключительной оценки зарегистрировано 100%-ное снижение числа живых клещей.

Регистрировали все нежелательные явления либо их отсутствие, которые были выявлены в процессе опыта и в последующий период.

В результате проведенных клинико-экспериментальных исследований было установлено, что исследуемый препарат показал высокую акарицидную эффективность при демодекозе очаговой (12 животных опытных групп) и пустулезной (5 животных опытных групп) форм и саркоптозе (10 животных опытной группы) собак.

К 28 дню исследования среднее процентное снижение числа живых клещей Demodex canis в опытной (заявленный препарат) группе достигло 91,07%, в контрольной (Симпарика) - 91,03%. Частота успешного лечения по результатам элиминации клещей в опытной группе составила 0,6, в контрольной - 0,5. Восстановление шерстяного покрова (средний балл) в опытной группе был 2,2 балла, в контрольной 2,5. Рецидивов и носительства не выявлено.

К 28 дню исследования среднее процентное снижение числа живых клещей Sarcoptes canis в опытной (заявленный препарат) и контрольной (Симпарика) группе составило соответственно 90 и 85. Частота успешного лечения по результатам элиминации клещей в опытной и контрольной группах составила 0,7 и 0,6. Восстановление шерстяного покрова (средний балл) в опытной и контрольной группах составил 2,4.

Нежелательных явлений и побочных реакций в процессе опыта в опытных и контрольных группах животных не зафиксировано.

В результате проведенных клинико-экспериментальных исследований было установлено, что испытуемый препарат также показал высокую акарицидную эффективность при хейлетиеллезе собак (10 животных опытной группы) и кошек (10 животных опытной группы).

Среднее процентное снижение числа живых клещей Cheyletiella yasguri в опытной группе составили 100%. Частота успешного лечения по результатам элиминации клещей в опытной группе составили 1. Эффективность успешного лечения по результатам элиминации клещей в опытной группе составила 1. Эффективность успешного лечения на основании клинических симптомов в опытной группе составили 100%. Частота успешного лечения на основании клинических симптомов в опытной группе составили 1. Восстановление шерстяного покрова (средний балл) в опытной группе составил 3.

Исследование акарицидной эффективности заявленного препарата при иксодидозах.

Острую акарицидную эффективность изучали на спонтанно зараженных животных, поступивших на прием в клинику для животных.

Исследования проводили в параллельных группах: 1 группа - опыт назначали исследуемый препарат,, 2 - препарат сравнения. Собакам в качестве препарата сравнения назначали лекарственное средство Симпарика таблетки для перорального применения, кошкам накожно в область холки наносили раствор для наружного применения ИНСПЕКТОР ТОТАЛ К. Препараты сравнения использовали согласно инструкциям по их применению.

В первый день отмечали вид и пол животного, фиксировали наличие клещей, место прикрепления, состояние, фотофиксировали. После применения препаратов в течение 48 часов животных осматривали каждый час и фиксировали состояние клещей, отпадение, время отпадения от начала применения препарата, гибель.

Итоговая эффективность представляет среднюю величину от значений всех животных группы.

Для оценки остаточной акарицидной эффективности исследуемых препаратов проводили наблюдения за животными в течение 1-2 мес. Животных выгуливали в местах обитания клещей с проведением осмотров кожного покрова через 5-7 сут после обработки до фиксации на животных присосавшихся иксодовых клещей, которые не погибали в течение 48 часов. Все наблюдения фиксировали. Длительность акарицидного действия определяли со дня обработки и до минимального срока фиксации присосавшегося клеща на животном в опытной группе.

Заявленный препарат показал высокую эффективность при иксодидозе, вызванном паразитированием Dermacentor pictus, у собак (29 животных опытных групп) и кошек (17 животных опытных групп) при однократной даче в минимальной терапевтической дозе 30 мг спиносада, 0,2 мг моксидектина и 5 мг празиквантела на 1 кг массы животного. Акарицидное действие начиналось через 30 минут и достигало максимума через 24-48 часа во всех подопытных группах.

Защитное действие препарата от повторного нападения иксодовых клещей у собак составило 6 недель при акарицидной активности 100% и 7 недель при акарицидной активности 74,5%. Защитное действие препарата от повторного нападения иксодовых клещей у кошек составило 7 недель при акарицидной активности 100% и 8 недель при акарицидной активности 72,2%. В среднем время отпадения клещей в опытной группе составило 1,05 ч.; время гибели клещей - 0,7 ч. при действии препарата.

Исследование акарицидной эффективности препарата при отодектозе/нотоэдрозе.

Исследования проводили на спонтанно зараженных животных, поступивших на прием в клинику для животных в параллельных группах: 1 группа - заявленный препарат, 2 - препарат сравнения. Собакам в качестве препарата сравнения назначали лекарственное средство Симпарика таблетки для перорального применения, кошкам накожно в область холки наносили раствор для наружного применения ИНСПЕКТОР ТОТАЛ К согласно инструкциям по их применению.

Клинический осмотр всех животных проводили в дни: -2, 7/10, 14 и 28. В течение 4 часов после обработки животных осматривали каждый час для обнаружения возможных нежелательных явлений. Осмотр и отоскопию для подтверждения диагноза и учета эффективности обработки проводили в дни -2, 7/10, 14 и 28. Все результаты фиксировали. Отоскопия носит качественный характер, и наличие или отсутствие живых клещей (взрослых или незрелых) регистрировали по следующей схеме: 0=0 живых клещей; 1=1-4 живых клеща; 2=5-10 живых клещей; 3 = более 10 клещей.

Также оценивали наличие или отсутствие крошковидных корок/серы в ушной раковине, и при наличии выполняли оценку по следующей схеме: 0 = крошковидные корки/сера отсутствуют; 1 = небольшое число крошковидных корок/серы; 2 = умеренное число крошковидных корок/серы; 3 = большое число крошковидных корок/серы.

Первичной конечной точкой эффективности являлось число живых клещей в группах, получавших опытные препараты, на 28-е сутки по сравнению с числом в контрольной группе..

Эффективность препарата вычисляли для каждой группы животных. Для расчета в случае, если регистрировали небольшое или нулевое число клещей, использовали среднее геометрическое, а не среднее арифметическое значение. Расчеты основаны на среднегеометрических значениях (число клещей+1). Вели описательную статистику) количества живых клещей для различных дней оценки: среднее значение, ошибка среднего значения, достоверность

В результате проведенных клинико-экспериментальных исследований установлено, что исследуемый препарат показал высокую акарицидную эффективность при отодектозе собак (19 животных опытных групп) и кошек (29 животных опытных групп).

При поражении животных клещами Otodectes cynotis терапевтический эффект наступал между 8 и 14 днем. Наблюдалось полное исчезновение клинических признаков, а именно зуда и крошковидных корок. Также наметилась тенденция набирания животными массы теда.

Среднее процентное снижение числа живых клещей в опытной и контрольной группе составили 100%. Частота успешного лечения по результатам элиминации клещей в опытной и контрольной группе составили 1. Эффективность успешного лечения по результатам элиминации клещей в опытной и контрольной группе составили 1. Эффективность успешного лечения на основании клинических симптомов в опытной группе составила 100%, в контрольной - 90%.

В результате проведенных клинико-экспериментальных исследований также установлено, что исследуемый препарат показал высокую акарицидную эффективность при нотоэдрозе кошек (19 животных опытных групп).

К 28 дню исследований в соскобах от животных опытной группы клещей Notoedres cati обнаружено не было. Наблюдалось полное исчезновение таких клинических признаков, как зуд и дерматит. У 87,5% животных опытной группы полностью восстановился шерстяной покров, наметилась тенденция восстановления животными массы тела

Среднее процентное снижение числа живых клещей в опытной группе составило 100%. Частота успешного лечения по результатам элиминации клещей в опытной группе составили 1. Эффективность успешного лечения по результатам элиминации клещей в опытной группе составили 1. Эффективность успешного лечения на основании клинических симптомов в опытной группе составила 87,5%.

Проведенные испытания заявленного препарата показали, что при снижении концентрации указанных в его составе ингредиентов ниже минимальных их значений, достоверно снижаются эффективность лечения и стабильность заявленного лекарственного средства, а повышение концентрации указанных в его составе ингредиентов выше максимальных их значений, приводит к снижению безопасности заявленного лекарственного средства для целевых животных.

Таким образом, на основании результатов проведенных доклинических и клинических исследований заявленного комплексного противопаразитарного средства, возможно сделать вывод о том, что оно:

- имеет широкий спектр противопаразитарного действия в отношении различных стадий развития экто- и эндопаразитов: блох (Ctenocephalides canis, Ctenocephalides felis), иксодовых клещей (Ixodes ricinus, Ixodes persulcatus, Ixodes scapularis, Rhipicephalus sanguineus, Dermacentor reticulatus, Dermacentor silvarum, Dermacentor marginatus, Dermacentor variabilis, Amblyomma americanum, Haemaphysalis flava, Haemaphysalis campanulata), вшей (Linognathus setosus, Trichodectes canis, Felicola subrostratus), чесоточных клещей (Sarcoptes canis, Notoedres cati, Otodectos cynotis), тромбидиформных клещей (Demodex canis, Cheyletiella yasguri), круглых гельминтов - нематод (Ancylostoma caninum, Toxocara canis, T. cati (T. mystax), Toxascaris leonina, Trichuris vulpis, Uncinaria stenocephala, Thelazia callipaeda, Angiostrongylus vasorum, Aelurostrongylus abstrusus, Crenosoma vulpis, Dirofilaria immitis (микрофилярий), Dirofilaria repens (микрофилярий)) и ленточных гельминтов - цестод (Dipylidium caninum, Multiceps multiceps, Taenia hydatigena, Taenia ovis, Taenia pisiformis, Taenia taeniaeformis, Echinococcus granulosus, Alveococcus multilocularis), паразитирующих у собак и кошек;

- удобно в применении;

- нетоксично в терапевтических дозах;

- обладает длительным защитным действием;

- стабильно при хранении.

Комплексное противопаразитарное средство для животных, содержащее полусинтетическое вещество класса мильбемицинов группы макроциклических лактонов - моксидектин, ацилированное производное пиразиноизохинолина - празиквантел и вспомогательные вещества, отличающееся тем, что дополнительно содержит инсектицид системного действия группы спинозинов - спиносад, а в качестве вспомогательных веществ - кальция стеарат, вкусовую добавку со вкусом мяса, крахмал кукурузный прежелатинизированный и лактозу, при следующем соотношении компонентов, мг/г:

спиносад	350,0-400,0
празиквантел	60,0-65,0
моксидектин	2,0-3,0
кальция стеарат	80,0-100,0
вкусовая добавка со вкусом мяса	135,0-160,0
крахмал кукурузный прежелатинизированный	36,0-38,0
лактоза	до 1 г