Способ получения подвойного материала л-2 в условиях in vitro

Авторы патента:

Батукаев Абдулмалик Абдулхамидович (RU)

A01H4/00 - Разведение растений из тканевых культур

Владельцы патента RU 2783895:

Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Чеченский государственный университет имени Ахмата Абдулхамидовича Кадырова" (RU)

Изобретение относится к области биотехнологии. Изобретение представляет собой способ получения оптимизированной питательной среды для подвойного материала (Л-2) в условиях in vitro, при котором сначала происходит черенкование пробирочных растений и высадка одноузловых черенков на агаризованную питательную среду, содержащую макро- и микроэлементы и витамины на основе прописи питательной среды Мурасиге и Скуга. Полученные побеги пересаживают на питательную среду Мурасиге Скуга с содержанием 1,7 мг/л 6 БАП, куда добавляют в качестве стимулятора роста кристаллогидрат Ca(NO₃)₂*4H₂O 220 мг/л при следующем соотношении компонентов, мг/л: нитрат аммония 825 мг/л, нитрат калия 950 мг/л, сульфат магния 185 мг/л, гидрфосфат калия 85 мг/л, борная кислота 6,2 мг/л, сульфат марганца 22,3 мг/л, хлорид кобальта 0,025 мг/л, сульфат меди 0,025 мг/л, сульфат цинка 8,6 мг/л, молибдат натрия 0,25 мг/л, раствор хелатного железа (сульфат железа 5,6 мг/л, динатриевая соль этилендиаминтетрауксусной кислоты 37,3 мг/л), иодид калия 0,83 мг/л, сахароза 15 мг/л, агар 8 мг/л, пересадку проводят через 3 недели, при размножении особое внимание уделяют стекловидности или сверховодненности тканей, при этом оптимальными условиями культивирования Л-2 являются: температура 22-26 градусов, освещенность 2500-5000 лк при 16-часовом фотопериоде. Изобретение позволяет повысить выход растений до 70%. 3 табл.

Изобретение относится к области сельского хозяйства, в частности к биотехнологии, и может быть использовано в питомниководстве для массового производства оздоровленного посадочного материала плодовых (косточковых) культур, в частности культуры Л-2.

Изобретение представляет собой способ получения оптимизированной питательной среды для подвойного материала Л-2 в условииях in vitro., при котором черенкование пробирочных растений и высадку одноузловых черенков на агаризованную питательную среду, содержащую макро - и микроэлементы и витамины на основе прописи питательной среды, Fe-хелат, агар-агар, сахарозу, при этом в питательную среду добавляют высокую концентрацию солей (Хелат - Fe 50 мг/л и Ca(NO3)2 1000 мг/л) и для растительной активности растения пересаживают в питательную среду Мурасиге Скуга с содержанием 1,7 мг 6 БАП и куда добавляют в качестве стимулятора роста кристаллогидрат Ca(NO3)2*4H2O 220 мг/л., для растительной активности растения при следующем соотношении компонентов, мг/л нитрат аммония - 825 мг/л, нитрат калия - 950 мг/л, сульфат магния - 185 мг/л, гидрфосфат калия - 85 мг/л, борная кислота - 6,2 мг/л, сульффат марганца - 22,3 мг/л, хлорид кобальта - 0,025 мг/л, сульфат меди - 0,025 мг/л, сульфат цинка - 8,6 мг/л, молибдат натрия - 0,25 мг/л, раствор хелатного железа (сульфат железа - 5,6 мг/л, динатриевая соль этилендиаминтетрауксусной кислоты - 37,3 мг/л), иодид калия - 0,83 мг/л, сахароза - 15 мг/л, агар - 8 мг/л. Пересадку проводят через 3 недели. При размножении особое внимание уделяют стекловидности или сверховодненности тканей, при этом оптимальные условия культивирования Л-2 являются: температура 22-26 градусов, освещенность 2500-5000 лк, при 16-ти часовом фотопериоде.

Наиболее близким техническим решением из известных является способ получения оздоровленных цитрусовых растений (в практике плодоводства известно применение БАВ на основе янтарной кислоты для повышения продуктивности и качества плодов черешни, вишни и сахарной свеклы. Л.А. Бадовская, Н.И. Ненько и др. (1997) успешно применяли препарат «Универсальный», состоящий из смеси янтарной кислоты, фумаровой кислот, малеиновой, и 2(5Н) - фуранона (содержание янтарной кислоты не менее 85%), посредством листовой обработки. Однако этот способ имеет следующие недостатки. Процесс приживаемости высаженных эксплантов желает оставлять лучшее - только 1/20 часть (т.е. 5%) приживаются. Приживаемость таких мелких структур также неудовлетворительна. Кроме того, все полученные растения требуют обязательного тестирования, так как до этой процедуры их фитосанитарный статус неизвестен.

Задача изобретения заключается в оптимизации питательной среды для подвойного материала Л-2 в условииях in vitro для массового производства оздоровленного посадочного материала плодовых (косточковых) культур.

Поставленная задача решается следующим образом: первый этап считается завершенным после получения небольшого конгламерата побегов длиной 0,5-1,5 см. Для увеличения коэффициента размножения в первых пассажах можно не разделять на отдельные единицы, а переносить на свежую питательную среду целиком. При использовании этого приема величина коэффициента размножения резко возрастает и может достигать 40-60 за пассаж. Полученные побеги пересаживают на питательную среду Мурасиге Скуга с содержанием 1,7 мг 6 БАП и куда добавляют в качестве стимулятора роста кристаллогидрат Ca(NO3)2*4H2O 220 мг/л, при следующем соотношении компонентов, мг/л нитрат аммония - 825 мг/л, нитрат калия - 950 мг/л, сульфат магния - 185 мг/л, гидрфосфат калия - 85 мг/л, борная кислота - 6,2 мг/л, сульффат марганца - 22,3 мг/л, хлорид кобальта - 0,025 мг/л, сульфат меди - 0,025 мг/л, сульфат цинка - 8,6 мг/л, молибдат натрия - 0,25 мг/л, раствор хелатного железа (сульфат железа - 5,6 мг/л, динатриевая соль этилендиаминтетрауксусной кислоты - 37,3 мг/л), иодид калия - 0,83 мг/л, сахароза - 15 мг/л, агар - 8 мг/л. Пересадку проводят через 3 недели. При размножении особое внимание уделяют стекловидности или сверховодненности тканей, что можно определить по характерному блеску культур. Такие культуры выбраковываются, а условия культивирования (содержание агара, цитокининов, соотношение NH4, NO3, колебания температуры) корректируются. Оптимальные условия культивирования Л-2 являются: температура 22-26 градусов, освещенность 2000-5000 лк, при 16-ти часовом фотопериоде.

Сравнительный анализ питательных сред:

1. Обычная питательная среда (Мурасига и Скуга 1962 г.)

2. Модифицированная Мурасига и Скуга среда во Всероссийском научно-исследовательском институте генетики и селекции плодовых растений им. И.В. Мичурина

3. Предлагаемая питательная модифицированная среда

Способ получения подвойного материала Л-2 в условиях in vitro, включающий черенкование пробирочных растений и высадку одноузловых черенков на агаризованную питательную среду, содержащую макро- и микроэлементы и витамины на основе прописи питательной среды Мурасиге и Скуга, отличающийся тем, что полученные побеги пересаживают на питательную среду Мурасиге Скуга с содержанием 1,7 мг 6 БАП, куда добавляют в качестве стимулятора роста кристаллогидрат Ca(NO₃)₂*4H₂O 220 мг/л при следующем соотношении компонентов, мг/л: нитрат аммония 825 мг/л, нитрат калия 950 мг/л, сульфат магния 185 мг/л, гидрфосфат калия 85 мг/л, борная кислота 6,2 мг/л, сульфат марганца 22,3 мг/л, хлорид кобальта 0,025 мг/л, сульфат меди 0,025 мг/л, сульфат цинка 8,6 мг/л, молибдат натрия 0,25 мг/л, раствор хелатного железа (сульфат железа 5,6 мг/л, динатриевая соль этилендиаминтетрауксусной кислоты 37,3 мг/л), иодид калия 0,83 мг/л, сахароза 15 мг/л, агар 8 мг/л, пересадку проводят через 3 недели, при этом оптимальными условиями культивирования Л-2 являются температура 22-26 градусов, освещенность 2500-5000 лк при 16-часовом фотопериоде.

Изобретение относится к сельскохозяйственной биотехнологии. Изобретение представляет собой способ адаптации микроклонов ежевики, включающий этап адаптации, где в качестве субстрата используют торфоперлитную смесь, перед высадкой в боксы корни растений освобождают от остатков питательной среды MS, промывают в дистиллированной воде, затем промывают в растворе перманганата калия, высаживают во влажный субстрат, доводят влажность субстрата до 85% дистиллированной водой и закрывают прозрачной крышкой, при этом поддерживают температуру воздуха 22-23°С днем и 18-20°С ночью, освещение 2000-2500 люкс при продолжительности светового дня 12 часов, на третьи сутки проводят вентиляцию для снижения влажности, затем постепенно каждый день увеличивают поступление более сухого воздуха из окружающей среды в адаптационный бокс и на 7-10 сутки полностью открывают адаптационный бокс.

Способ микроклонального размножения гречихи in vitro // 2783357

Изобретение относится к области биотехнологии. Предлагаемый способ микроклонального размножения гречихи in vitro включает культивирование микроклонов на питательной среде, содержащей макро- и микроэлементы по прописи Мурасиге-Скуга, 20 г/л сахарозы и 6 г/л агар-агара.

Способ адаптации микроклонов стевии stevia rebaudiana bertoni к условиям ex vitro // 2783192

Изобретение относится к области биотехнологии. Изобретение представляет собой способ адаптации микроклонов стевии Stevia rebaudiana Bertoni к условиям ex vitro.

Способ получения безвирусного, генетически однородного посадочного материала батата (ipomoea batatas l.) in vitro // 2783183

Изобретение относится к области биотехнологии. Изобретение представляет собой способ получения растений-регенерантов из микрочеренков батата in vitro, относится к области сельского хозяйства и биотехнологии, предназначено для культивирования in vitro микрочеренков растений батата и может быть использовано для массового получения безвирусного, генетически однородного, высококачественного посадочного материала ценных сортов батата.

Способ стерилизации семян и почек кедра ливанского (cedrus libani) // 2781290

Изобретение относится к области биотехнологии. Изобретение представляет собой способ микроклонального размножения кедра ливанского (Cedrus libani), заключающийся в выдерживании семян и почек кедра ливанского перед их вводом в культуру in vitro в размягчителе тканей, который представлен водным раствором (3%) трихлоруксусной кислоты (CCl3COOH), с экспозицией в растворе ТХУ 5 минут и последующим отмыванием в дистиллированной воде 10 минут.

Способ стерилизации эксплантов березы in vitro с использованием наночастиц оксида меди // 2780830

Изобретение относится к области биотехнологий, в частности к культивированию тканей и органов растений, и может быть использовано в сельском и лесном хозяйстве для получения качественного посадочного материала. Способ стерилизации эксплантов березы in vitro с использованием наночастиц оксида меди осуществляют следующим образом.

Способ получения микрорастений подвоя косточковых культур (пк ск 1) // 2779139

Изобретение относится к области биотехнологии. Изобретение представляет собой способ получения микрорастений подвоя косточковых культур (ПК СК 1), включающий их размножение в условиях in vitro, где на этапе укоренения используется питательная безгормональная среда, содержащая аммоний азотнокислый, калий азотнокислый, магний сернокислый, калий фосфорнокислый, кальций хлористый, борную кислоту, марганец сернокислый, цинк сернокислый, калий йодистый, натрий молибденовокислый, медь сернокислую, кобальт хлористый, сахарозу, тиамин хлорид, пиридоксин хлорид, никотиновую кислоту, агар-агар и воду, в качестве источника железа используется Fe-EDDHA.

Способ клонального микроразмножения in vitro сортового хмеля // 2777200

Изобретение относится к области биотехнологии. Изобретение представляет собой способ клонального микроразмножения in vitro сортового хмеля, включающий стерилизацию двухпочковых черенков с последующим культивированием на питательной среде, размножение побегов, их укоренение с последующей адаптацией к условиям ex vitro.

Способ выращивания растительного сырья ириса сибирского (iris sibirica l.) с заданным содержанием экстрактивных веществ // 2773523

Изобретение относится к области биотехнологии и может быть использовано для индустриального производства высокоценного сырья с целью получения лекарств, биологически активных добавок, функциональных пищевых продуктов, лечебно-профилактической косметики и индивидуальных биологически активных веществ. Изобретение представляет собой способ получения растительного сырья ириса сибирского (Iris sibirica L.) клональным микроразмножением и выращиванием в условиях гидропоники с заданным содержанием экстрактивных веществ, включающий введение эксплантов в культуру in vitro, культивирование на питательной среде MS для получения регенерантов, их размножение и укоренение, согласно изобретению культивирование проводят на трехъярусной универсальной аэропонной установке, заполненной питательным раствором по прописи Мурасиге-Скуга с концентрацией макро-, микросолей, кальция хлористого и хелата железа с добавлением 10,0 мкМ БАП + 1,0 мкМ НУК + 0,1 мкМ ИМК для получения сырья с содержанием экстрактивных веществ 15,5±0,5% на абсолютно сухое сырье (на а.с.с.) и флавоноидов 6,9±0,9% на а.с.с., или 5,0 мкМ БАП для получения сырья с содержанием гидроксикоричных кислот 5,19±0,09% на а.с.с.

Способ получения стерильных проростков семян мачка желтого // 2773121

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к культивированию тканей и органов растений, и может быть использовано для получения каллусной и суспензионной ткани, как источника растительного сырья для фармацевтической и косметической промышленности, в садоводстве для получения оздоровленного посадочного материала, повышения эффективности клонального микроразмножения, селекционной практике для выведения новых сортов растений.