Колориметрический способ определения содержания

 

Ьоесовенал н т но- тех н и Зес май

63оыетека ME +

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

С воз С светских

Спеиaлиcти 3ecxиx

Ресотблии

Зависимое от авт. свидетельства №

Заявлено 11.Х1.1968 (№ 1282869/28-13) с присоединением заявки №

Приоритет,Л1ПI; G 01п 33,!02

4 ДК 663.131(088.8) Комитет оо аелам изобретений и птирытиб ори Совете Министоае

СССР

Опубликовано 08.Х11.1970. Бюллетень ¹ 1 за 1971

Дата опубликования описапия 28.1.!971

Автор изобретсиия

А. Ф. Сысоев

Всесоюзный селекционно-генетический институт

Заявитель

КОЛОРИМЕТРИЧЕСКИЙ СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СОДЕРЖАНИЯ

ЛИЗИНА В БЕЛКАХ

Предмет изобретения

Изобретение относится к способам опрсделепия содержания аминокислот в белка., в частности к колоримстричсскому способу определения содергкаиия лизи!па в белкак.

Известен способ определения содер>капия лизина в белка); из семян растешш, основанный иа реакции с нингидриповым реактивом, включающий отделение от белков свободиы.! ами110кислот. Одlгаl ко этот спосоо сло)1> eII u исдостяточио точен.

Для упрощеш!я и повышения точности анализа ииигидрииовым реактивом обрабатывают выдслепиу!о из белков, оставш1!)!Ся после удалсиия свободиык аминокислот, эпсиамииогруппу лизина. Отделение свободиыч аминокислот осуществляют обработкой 80%-иым этиловым спиртом при иагревашш до 80 С и частичиым растворением и псреосягкдснием белков сульфосалициловои кислотой. Зпсиамииогруппу лизина выделяют путем частичного растворения белков в 4%-пом растворе углекислого натрия ири температуре 80=C.

Способ определения содержания лизина, например в муке из семян кукурузы, осуществляется следующим образом.

К 30 лг тоикоизмельчеииой муки, помещеииой в цситрифу киу!О пробирку, добавляют 2 лл смеси для извлечения белков (0.2% XBOI

+0,2п))п метабисульфата цатрия+2,0% К.SO !) и настаивают 1 !ас ири частом иеремсшивашш. Затем в прооирку добавляют 0,5 лл 5%иой сульфоcал)1),илÎвoй кислоты для осяждсиия белков и цеитрифугируют смесь !О .1!!!и при 5000 01), л!!!г. Всрчнш слои осторожно слива!О Г Ii OTOp Il0!>1!33 IOT. К Осядк>> доо !вля)ОТ . .I.z

4%-ного раствора . я СОа, и пробирки помещают па 10 л!!!!! в водяную бяпю при 80=С. После этого раст)вор подкисляют двумя каплями коицсlп рировяииой муравьииой кислоты. 1)срс10 мсшивают и доб",âëÿþò 2 лл ииигидр1иового раствора. псремсшггвают и иагрсвяют 30 л!и иа водяной бане при 80 С.

Затем в пробирку дооавлягот 2 лл воды и

5 л.z !г-бутяиола. Содержимое эисргичио встря15 ива)от и отстяива!От г течение 10 л1!и. После этого 3,5 лл верх!!ег окрашеииого г> красный цвет раствора отбир ">10T в кювету электрофотоколоримстря, добавляют туда 0.5 л.г эпглового с)шрта, Ilc!)e !01)1l!113;»O.i и измеряют ai;OTIIIII

20 цшо при з ;Icïoì светофильтре против контРОЛЬИОГО Р11СТВОРЯ.

25 1. Колоримстри !еский способ опрсдслсиия соде!3жа11ия лизшьа в б)елк!1.;, например 113 семян растеи ш, основав»ый пя реакции с 11»»гз)дршювым реякп)гом, включя <»III!iI отдслсиис от

ОС ЗI.ОВ СВОГО !111>! . Я П ПОКИ С,1 )T, О> .1!! iil!Or!г!! !!! ."

30 тем, ITQ, с целью уирощс!шя и повышеш!я точ289356

Составитель М, Грановский

Корректор О. С. Зайцева

Редактор Е. С. Братчикова

Изд. № 9 Заказ 4029! 9 Тираж 480 Подписное

ЦНИИПИ Комитета по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССР

Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Типография, пр. Сапунова, 2 ности анализа, нингидриновым реактивом обрабатывают выделенную из белков, оставшихся после удаления свободных аминокислот, эпсиаминогруппу лизина.

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что отделение свободных аминокислот осуществляют обработкой 80%-ным этиловым спиртом при нагревании до 80 С, 3. Способ по п, 1, отличающийся тем, что отделение свободных аминокислот осуществляют путем частичного растворения и переосаядения белков сульфосалициловой кислотой.

4. Способ по п. 1, отличающийся тем, что эпсиаминогруппу лизина выделяют путем частичного растворения белков в 4%-ном раство-ре углекислого натрия при 80 С.