Способ получения

 

Союз Советских

Социалистических

Республик

Зависимое от авт. свидетельства №

Заявлено 17.VI.1970 (¹ 1450072/23-4) с присоединением заявки №

Приоритет

Опубликовано 30.111.1972. Вюллетеш № 12

Дата опубликования описания 6.V.1972

М. Кл. С 07с 167/00

С 07с 167/14

С 07с 169/34

Коптите по делаи изооретений и открытий при Совете Министров

СССР

УДК 547.689.6(088.8) Авторы изобретения

А. А. Ахрем, H. Е. Войшвилло, Л. Е, Куликова и Ю. А. Титов

Институт органической химии им. Н. Д, Зелинского

Заявитель

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ

ПРОИЗВОДНЫХ 1,2-ДЕГИДРОПРОГЕСТЕРОНА

С ДОПОЛНИТЕЛЬИЫМ КОЛЪЦОМ Е

Изобретение относится к способу получения производных 1,2 - дегидропрогестерона, обладающих ценными фармакологическими свойствами.

Известен химический синтез производных

1,2-дегидропрогестерона, включающий проведение реакций гидролиза Зр-ацетоксигру ппы, окисления образовавшейся Л" -311-оксигруппы в Л4-3-кетогруппировку и дегидрирования до

Л 4-3-гетогруппы.

По предлагаемому способу получение производных 1,2-дегидропрогестерона осуществляют в одну стадию путем окислительной микробиологической трансформации исходных

&Зр-ацетоксистероидов.

Способ получения производных 1,2-дегидропротестерона с дополнительным кольцом Е заключается в том, что Л -313-ацетоксисоединения подвергают взаимодействию с микобактериями М. globiforme, М. 1acticolum, M. mucosum, М. phlei, М. smegmatis с выделением целевого продукта известными приемами.

Пример 1. Получение Л4 -циклогексено(1, 2, 16, 17)-Л 4-прегнадиендиона-3,20 из ацетата Л"-циклогексено-(1,2, 16,17) - Л" - прегнен-3Р-ол-она-20 (1).

А. Культуру Mycobacterium globiforme 193 выращивают при 28 С 70 час в 100 мл среды, состоящей из 1 jo кукурузного экстракта и

1% гл окозы (рН 7,0). Все .процессы выращивания и трансформации проводят в конических кол бах объемом 750 мл на качалке (200 об/мин) . Полученный посевной материал

5 переносят,в 100 лтл среды того же состава в количестве 10 лтг сухой биомассы и выращивают 48 час. Затем к культуральной жидкости прибавляют физиологический раствор с 10 — M

СоСlз с таким расчетом, чтобы полученная

10 суспензия содержала до 1 г/л сухой биомассы. В 150 мл данной суспензии вносят 50 Jltc ацетата (1), растворенного в 2 л л ди.метилформамнда, Всего трансформируют в 30 колбах 1,5 г стероида при 32 С в течение 48,5 час.

15 Объединенную культуральную жидкость после окончания трансформации экстрагируют дважды (по 1 л) хлористым метиленом. Экстракт су шат над MgSO4, фильтруют или упаривают досуха. Получают 1,79 г маслообразного веще20 ства, которое фильтруют через, колонку с АlзО, под давлением азота при элюировàuèu смесью гептан — эфир. Получают 0,39 г исходного ацетата и 0,84 г продукта реакции, После кристаллизации из ацетона с гексаном выделяюг

25 аналитический образец с т. пл. 155 — 158 С.

УФ-спектр: Х„„, 246 нлт (е 15250); ИКспектр (КВг) 1690 см-1 (20-кетон), 1660, 1630, 1600 и 890 слт — < (Л 4-3-кетон) .

30 Найдено, %: С 82,37; Н 8,71 °

334216

Предмет изобретения

Составитель Г. Жукова

Тсхред 3. Тараненко

Корректор Л. Бадылама

Редактор О. Кузнецова

Заказ !046/7 Изд. № 5!8 Тираж 448 Подписное

Ц!-!ИИПИ Комитета по делам изобретений и открытий при Совете Министров ССС1Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Сапунова, 2

Типография, пр.

С25Н3202.

Вычислена, /о. С 82,37; Н 8,85.

При пересчете на превращенный стеропд выход указанного продукта реакции составляет

76 / .

В. Преврагцение полученного ацетата в

Л -3-кетостеропд способны осуществлять также мпкобактерии, прпнадлежащ!!е к видам

М. lacticolum, М. mucosum, М. phlei, М. smegmatis.

Кукурузно-глюкозную среду (состав приведен выше) разливают по 100 мл в конические колбы объемом 750 мл, стерилизуют 30 мин при давлении 0,5 атм и засевают 7-суточными культурами указанных микобактерий, выращенных на сусле-агаре с МПА (1:1). После

70 час роста культуральную жидкость каждого штамма разбавляют в 2 раза стерильной водой, разливают в две колбы и,вносят ацетат, растворенный в метаноле. Появление Л 4-3-кетопроизводного через 24 час трансформации устанавливают методом тонкослойной хроматографии на окиси алюминия путем сравнения величины Р7 с заведомым образцом.

Пример 2. Получение циклогексано(1,2 ; 16,17) — Л 4 - прегнадиендиона - 3,20 из ацетата ци клогексано — (!,2 ; 16, 17) - прегненЗр-ол-она-20, М, globiforme 193 выращивают аналогично примеру 1, но для приготовления трансформирующей суспензии берут более молодые клетки в возрасте 23 час. 30 мг стероида вносят в

2 мл диметилформамида на 150 мл суспензии, содержащей 1,7 г/л сухой биомассы. В 30 колбах трансформируют 0,9 г стероида в течение

48 час при 32 С. Объединенную культуральную жидкость экстрагируют 3 раза (по 1 л) хлороформом. Экстракт сушат MgSO4 и упаривают. Получают остаток 1,78 г, который разделяют на колонке с SION при элюировании смесью гептан — эфир. Получают 0,3 г исходного ацетата, 0,075 г Л -3-кетопроизводного и 0 35 г целевого продукта. После кристаллизации из ацетона с гексаном получают аналитический образец с т. пл. 163 †1 С.

УФ-спектр Х „; 250 нм (е 15500); ИКспектр (KBr) 1690, 1670, 1630, 1610 и 890 см — <.

Найдено, /о. С 81,82; Н 9,35.

СззНз !Оа.

Вычислено, % . С 81,92; Н 9,35.

Выход Л 4-3-кетопроизводного в пер еече ге на превращенный стероид составляет 59 /о. .Пример 3. Получение 5 -метил-Л"-циклогексено - (1,2, 16,17) - Л 4-прегнадиендиона-3,20 из ацетата 5 -метил-Л"-циклогексено(1,2 ; 16, 17) - Л" — прегнен-Зр-ол-она-20.

Аналогично примеру 1 трансформируют

1,5 г ацетата с культурой М. globiforme 193 в возрасте 46 час. После экстракции и упаривания растворителя получают 2,2 г маслообразного продукта, который хроматографируют на колонке с ЯОз в системе петролейный эфир (70 — 100 С) — эфир, Выделяют 0,14 г исходного ацетата, 0,07 г Л4-3-кетопроизводного, 0,6 г Л "-3-кетопроизводного и 0,83 г смеси сильно полярных соединений. После кристаллизации из ацетона с гексаном получают аналитический образец с т. пл. 147 — 158 С.

УФ-спектр Х„, 245 нм (и 15840); ИКспектр (КВг) 1700, 1670, 1630, 1610 и

890 см->.

Найдено, /о. С 82,56; Н 9,20.

С26Н 3402.

Вычислено, /о. С 82,49; Н 9,05.

Выход указанного соединения при пересчете на превращенный ацетат равен 44 /о.

Пример 4. Получение 3 -метил-Л4 - циклогексено — (1,2 ; 16, 17) - Л 4 - прегнадиендиона - 3,20 из ацетата 3 -метил-Ла -циклогексено(1,2, 16, 17) - Л" - прегнен - 3() - ол - она - 20.

Аналогично примеру 1 трансформируют с культурой М. globiforme 193 в возрасте 42 час

1,75 г ацетата,в течение 5 час. После экстракции культуральной жидкости и отработки экстракта получают маслообр азный продукт, который храматографируют на колонке с

SiO2 в системе гептан — эфир. Выделяют

0,74 г исходного стероида, 0,03 г Л"-3-кетопроизводного и 0,6 г Л -Ç-кетопроизводного, кристаллизацией которого из ацетона с гексаном получают аналитический образец с т. пл.

228 †2 С.

УФ-спектр Хмакс 247 нм (в 16660); ИКспектр (КВг) 1700, 1600, 1620, 1600 и 910 см — .

Найдено, /о. С 82,51; Н 9,04.

С26НЗ40з.

Вычислено, %. С 82,49; Н 9,05.

Выход полученного стероида составляет

62 /о, считая на превращенный субстрат, Способ получения производных 1,2-дегидропрогестерона с дополнительным кольцом Е, отличающийся тем, что &Зр-а цетоксисоединения подвергают взаимодействию с микробактериями М. globiforme, M. Iacticolum, М. mucosum, М. phlei, М. smegmatis с выделением целевого продукта известными приемами.