Способ получения jbhomaccbf

 

, i

*,I ((,ill,isa

ОПИСА

ИЗОБРЕТЕНИЯ

357749

Союз Советских

Социвпистических

Республик

К ПАТЕНТУ

Зависимый от патента №

M. Кл. С 12b 1/08

Заявлено 22Х!!.1970 (№ 1461271/28-13)

Приоритет ОЗ.Ш.1970, № 45-18563, Япония

Комитет по делам изобретений и открытий при Совете Министров

СССР

Опубликовано 31.Х.1972. Бюллетень № 33

УДК 663.143.14 (088,8) Дата опубликования описания 06.П1.1973

Авторы изобретения

Иностранцы

Киеси Ватанабе, Хирохиса Яно, Кендзи Сузуки, Йосимацу Меката и Хадзиме Кавахарада (Япония) Иностранная фирма

«Канегафучи Кагаку Когио Кабусики Кайся» (Япония) Заявитель

AOCOli ЙОЛУЧБНИЯ БИОМАССЬ1

Изобретение относится к микробиологической промышленности, точнее к способу получения биомассы.

Известен способ получения биомассы путем выращивания дрожжей, ассимилирующих.углеводороды, например Candida, Torylopsis, Pichia на среде, содержащей в качестве источника углерода углеводородные фракции нефти в присутствии водной минеральной среды, содержащей источник азота, фосфора, калия, магния и стимулятора роста при аэрации среды.

Предлагаемый способ позволяет проводить смешанное культивирование углеводород-ассимилирующих дрожжей с углеводород-неассимилирующими дрожжами.

Это обеспечивает повышенный выход биомассы, более интенсивный рост микроорганизмов и повышенное содержание сырого протеина в биомассе.

Предлагаемый способ предусматривает выращивание дрожжей, ассимилирующих углеводороды, производить совместно с углеводороднеассимилирующими дрожжами, потребляющими метаболиты, продуцируемые первыми дрожжами.

В качестве углеводород-неассимилирующих дрожжей используют семейство Cryptococcaecae в частности виды Trichosporon pullulans, род Candida в частности вид utilis род Rhodo5 torula в частности виды rubre u minuta род

Torulopsis в частности вид psendaeria род Debaryomyces в частности вид hansenii.

Сырьем служат алифатические углеводороды с открытой цепью, имеющие от 9 до 30 ато10 мов в молекуле, и нефтяные углеводороды, богатые алифатическими углеводородами с открытой цепью.

Выращивание дрожжей ведут в следующих условиях: рН среды преимущественно равной

3,5 — 6,0, температура 25 — 40 С, концентрация углеводородов в водной питательной среде от

0,01 до 1%.

Питательная среда . представляет собой раствор, содержащий помимо нефтяных углеводородов неорганических или органических азотсодержащих соединений, фосфорсодержащие соединения, а также неорганические соли и иногда органические соли. Кроме того, для ускорения роста микроорганизмов добавляют

25,раствор, настоенный на зерне экстракт дрожжей и пептон.

357749

Таблица !

Углеводород-иеассимилируюВыход клеток, 0 гО

Содержание сырого протеина, щие дрожжи

53,5

55,5

56,1

54,9

54,7

82,3

99,5

103,2

107,7

98,3

20 Нет

C and id a util is

Torulopsis psendaesia

Deboryomyces hansenii

Trigonopsis variabiles

0,1 г

Таблица 2

Совместное выращивание

Выращивание одного вида

Углеводород-ассимилирующие дрожжи содержание протеина, % выход клеток, содержание протеина, в выход клеток, %

55,7

50,1

52,6

103,6

90,8

87,2

51,3

46,8

48,3

91,3

70,6

75,8

Candida Tropicaces

Candida parapsilosis

Torulopsis mognoliae

Rydosaccharomyces Tikumaen$1$

Torulopsis xycinus

Lygos acchoromyces sake

Pichia ш1ао

106,5

85,8

92,1

101,3

51,2

55,5

50,0

48,3

49,7

50,5

45,7

41,1

88,2

69,1

72,3

8I,6

Пример 3.

Углеводород-ассимилирующие дрожжи Candida guilliermondii и углеводород-неассимилирующие дрожжи Trichosporon eutaneum совместно культивируют в аэробных условиях в течение 48 час в культуральной среде, состав которой указан в примере 1. Получившиеся культуры двух видов смешивают в соотношении 100: О, 90: 10, 80: 20 и 70: 30 соответственно. Каждую смесь размещают в количестве

10О/о в 18 л основной культуральнай среды 4о того же состава, помещенной в 30 л ферментатора. Эту смесь подвергают культивированию при перемешивании со скоростью 100 об/мин при 33 С с аэрацией со скоростью 30 л в минуту. Углеводород, используемый в данном при- 45

Таблица 3

Выход клеток, Содержание сырого протеина, Соотношение дрожжей ои

93,5

58,9

60,3

59,8

100: 0

90; 10

80:20

70, 30

92,5

107,8

109,2

П0,6

Способ осуществляется следующим образом.

Условия выращивания следующие: рН среды 3,5 — 6,0; температура 25 — 40 С, предположительно от 27 — 35 С, концентрация углеводородов нефти в питательной среде от

0,01 до 1 /о. Во время выращивания в среду подают газ, содержащий свободный кислород.

Смешивание дрожжей, ассимилирующие углеводороды, с углеводород-неассимилирующими дрожжами проводят в начале .культивирования или в процессе ферментации, Пример 1.

Углеводород-ассимилирующие дрожжи Candida brumptii и некоторые углеводород-неассимилирующие дрожжи, такие как Candida utilis, Torulopsis psendaesia, Deboryomyces hansenii, Trigonopsis variabiles совместно культивируют. В 500 мм колбу помещают 30 ил культуральной среды следующего состава, г:

Мочевина 5,0

Хлорид калия 2,0

Сульфат магния 2,0 г

Сульфат цинка 0,03 г

Сульфат двухвалентного железа

Пример 2.

Углеводород - неассимилирующие дрожжи

Rhodotoruba rubra и некоторые углеводородассимилирующие дрожжи, указанные в таблиЭкстракт дрожжей 1,0 г

Водопроводная вода 1,О г рН 5,0 г а также 75 /о фосфорной кислоты 2,7 ил.

Дрожжи, предварительно пророщенные, после промывания в воде добавляются так, чтобы концентрация клеток была около 1)(10 ил.

Культивирование проводят в течение 48 час при 33 С с встряхиванием. Затем определяют выход дрожжевых клеток и содержание сырого протеина в них. Результаты приведены в табл. 1. це 2, совместно культивируют, Условия те же, что в примере 1, Результаты приведены в табл. 2, мере, представляет собой Н-парафин удель. нога веса 0,792,при 4 С. Содержание Н-парафина 99,7 /о по весу и 0,025 /о по весу ароматических углеводородов. Выход дрожжевых клеток и содержание в них сырого протеина представлено в таблице 3.

357749

Таблица 4

Выход клеток, Содержание сырого протеина, Соотношение зерновых культур

54,2

59,8

60,3

100:0

70: 30

30; 70

94,9

109,6

114,3

Предмет изобретения

Составитель М. Ларина

Редактор Л. Народная Техред А, Евдонов Корректор Т. Медведева

Заказ 392/17 Изд. № 1684 Тираж 406 Подписное

ЦНИИПИ Комитета по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССР

Москва, 7К-35, Раушская наб., д. 4/6

Типография, пр. Сапунова, 2

Пример 4.

Candida rigosa u Trichosporon pullulans как зерновые культуры смешивают в соотношении

100:О, 70:30 и 30:70 соответственно и каждую смесь добавляют к основной культура Ibной среде так, как и в примере 1. Культивирование приводят непрерывно в качающемся ферментаторе, содержащем 18 л культуральной среды с перемешиванием со скоростью

1000 од|,чин при 33 С и с аэрацией со скоростью 20 л в минуту. Через 68 час определяют степень ассимиляции и содержание сырого протеина в образующихся клетках, Ðåзультаты представлены в табл. 4.

1. Способ получения биомассы путем выращивания дрожжей, ассимилирующих углеводороды, например Candida, Torylopsis, Pichia на среде, содержащей в качестве источника углерода углеводородные фракции нефти в присутствии водной минеральной среды, содержащей источник азота, фосфора, калия, магния и стимулятора роста при аэрации среды, отличающийся тем, что, с целью повышения выхода биомассы, интенсификации процесса выращивания, а также увеличения содержания протеина в биомассе, выращивание дрожжей, ассимилирующих углеводороды, производят совместно с углеводород-неассимилирующими дрожжами, потребляющими метаболиты, продуцируемые первыми дрожжами.

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что в качестве углеводород-неассимилирующих дрожжей используют семейство Cryptococcaecae в частности виды Trichosporon pullulans u

10 Truchosporon cutancum.

3. Способ по п. 1, отличающийся тем, что в качестве углеводород-неассимилирующих дрожжей используют род Candida в частности вид utilis.

15 4. Способ по п. 1, отличающийся тем, что в качестве углеводород-неассимилирующих дрожжей используют род Rhodotorula в частности вид гиЬге и minuta.

5. Способ по п. 1, отличающийся тем, что в качестве углеводород-неассимилирующих дрожжей используют род Torulopsis в частности вид psendaeria.

6. Способ по п. 1, отличающийся тем, что в качестве углеводород-неассимилирующих

25 дрожжей используют род Debaryomyces в частности вид hansenii.

7. Способ по пп. 1 — 6, отличающийся тем, что в качестве углеводородов используют алифатические углеводороды с открытой цепью, имеющие от 9 до 30 атомов в молекуле, и нефтяные углеводороды, богатые алифатическими углеводородами с открытой цепью.

8. Способ по пп. 1 — 7, отличающийся тем, что выращивание ведут при рН среды, преимущественно равном 3,5 — 6,0, и температуре, преимущественно равной 25 — 40 С, 9. Способ по пп. 1 — 8, отличающийся тем, что концентрацию углеводород в водной питательной среде поддерживают от 0,01 до 1 /о.