Способ обнаружения противохолерных антител в сыворотке крови

 

::гтг:! ; -:

ОП ИСАНИЕ

И ЗОБРЕТЕ Н И Я

4006I8

Союз Советских

Социалистических

Республик

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

3 виc«мne от авт. свидетельства №вЂ”

Зг!явлено ОЗ.X11;1970 (№ 1527097/31-16) с присоединением заявки ¹â€”

Приоритет—

Онубликовя!ю 01.Х.1973. Бю1лстсиь № 40.Ч.Кл. С 12k 1/00

G 01п 33/16

Государственный номитет

Совета Министров СССР по делам изаоретений и открытий а ДК 576.8.097,5:616.

932 (088.8) Дата опубликования описания 8Х.1974

Авторы изобретения

Н. И. Гивенталь и 3. В. Ермольева

Заявитель

СПОСОБ ОБНАРУЖЕНИЯ ПРОТИВОХОЛЕРНЫХ

АНТИТЕЛ В СЫВОРОТКЕ КРОВИ

Изооретение относится к медицине.

Известны ссрологические методы псследоI,nIiIIIi при;!нягностике холеры, т. е. ооняружение специфических иротивохолерных nIITIITB.I в сыворотке крови на основании реакции агглготинации.

Цель изооретсння — ускорение и упрощенне процесса обнаружения противохолериых антител в сыворотке крови.

Это достигается тем, что взвесь индикаторного штамма холерного вибриона смешивают с исследуемой сывороткой и результат учитывают при помощи фазово-контрастной микроскопии ilo ооразов !виго конгломератов.

Пример.

А. Агаровую культуру, выдержанную в Тсчсние !Π— 24 час, индикаторного штамма эмульгируют в 1%-ной пептонной воде или в физиологическо 3I растворе нова рсн ной соли, густота в:-:веси 2 — 3 лг.гугд. микробных тел в

1 лл I;o оптическому стандарту.

Ь. Готовят IcoIITpo.1üi!bié препарат, д.1я

40х, наблюдают характерную морфологию и подвижность холерного вибриона.

В. На другое предметное стекло большой петлей наносят каплю испытуемой сыворотки, !

3 3 я T 3 10 а то Й: к с 11 с т 1 е I l к;1 п.1 Io в 3 !ее с н l I l I д н к !!в торного штамма смсншвяют с кя!!лей сыворотки, пакрывяют нокровным стеклом и рассматPIII3BIOT ТаКже, КЯК Н KOIITPO II>ill>III !1РЕПЯРЯТ.

При наличии в испытуемой сыворотке специфических антител наблюдают склеивание и иммобилизацию вибрионов (время наблюде-! р ния каждого препарата от нескольких секунд до 3 — 5 .!игг) .

Оценку шгтенсивности реакции производят следующим образом: четыре крестя (++++) — к началу про-!

5 смотра препарата почти все гибрионы сг .1еены в коаlпа ктньlе конг 1омер nTI>l. В течение нескольких секунд можно наблюдать беспорядочные колеоательныс илн врагцятс !ьi!iiе двн ження отде1ьньгх конгломератов,;i зятем но

20 нуlo нснодвнж!юсть их; три креста (+ -, — +) — конгломераты о<>разуются с IlcixoTopoi11 nn !epiI;I;oi (1 — 2 «IIe), iio такие же компакт .1ые, кяк и в случае четырсхкрестовой оценки;

25 два крестя (++) — ооразовянне рь хлых н меньших но рnnìåð3 конгломератов на протяжении 2 — 4 лик после соединения сыворотки с культурой, конгломераты и отдельные особи микробов могут оставаться подвижными в

30 течение 3 — 4 т н.

400618

Предмет изобретения

Составитель С, Шенева

Текред 3. Тараненко

Корректор f. Хворова

Редактор Ю. Агапова

Заказ 76Г9 Изд. ¹ 203l Тираж 467 Подписное

ЦИИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делагя изобретений и открытий

Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Загорская типография

3 о/пн крее"г (+ ) — медленное (1-- 5 иин) образование небольших рыхлых подвижных конгломератог; часть образовавшихся конгломератов распадается на изолированные виори0lIû, другие вибрионы снова склеиваются в небольшие рыхлые конгломераты; имеется много подвижных микробов.

Г. Неразведенные сыворотки, давшие положительную реакцию (образование конгломератов) следует раститровать так, чтобы получить разведение 1:10, 1:20, 1:40, 1:80;;Для этого готовят дополнительно для каждой «положительной» сыворотки ряд из 4 пробирок; в первую пробирку ряда вносят 0,9 мл 1 %-ной пептонной воды или физиологического раствора, в остальные по 0,5 мл; в первую пробирку добавляют 0,1 лл соответствующей сыворотки и за тем переносят последовательно из одной пробирки в другую по 0,5 я.г. С каждым из полученных разведений сыворотки поступают так жс, как указано в пункте В.

Д. Как «положительную» реакцию в том или ином разведении учитывают лишь реакции, оцениваемые не ниже, чем и дга креста (++).

E. Определение титра специфических антител в сыворотке производится Но наибольшему разведению сыворотки, вызвавшему феномен склеивания вибрионов, оцениваемому не ниже чем на 2 креста. При этом следует иметь в виду, что разведение сыворотки в ряду пробирок соответствует удвоенное окончателыгос разведение сыворотки на стекле (петля разведения сыворотки плюс петля взвеси вибриона). Та5 ким образом, реакцию на стекле с неразведенной сывороткой оценивают как реакцию в разведении 1:2, с сывороткой 1:10 — как реакцию в разведении 1:20 и т. д.

10 К, Диагностическое значение имеет резкоположнтельная реакция (на 3 — 4 креста) и разведении 1:2. (одно-двухкрестовая реакция в этом разведении может носить неспецпфпческий характер). Более активные сыворотки (с

15 высокими титрами специфических антител) дают положительные реакции (не ниже, чем па два креста) в разведениях 1:20 — 1:320. Такие реакции, как правило, совпадают с высокими титрами агглютининов или вибрациоцндных

20 антител.

Способ обнаружения противохолерных анти25 тел в сыворотке крови, основанный на взаимодействии антигена с антителом, отличающийся тем, что, с целью ускорения и упрощения процесса, взвесь индикаторного штамма холерного вибриона смешивают с исследуемой сывоЗп роткой и результат учитывают при помощи фазово-контрастной микроскопии по образованшо конгломератов.