Способ получения микросклероциев

 

(») 430l54

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

Союз Советских

Социалистических. Республик (61) Зависимое от BtBT. свидетельства (22) Заявлено 13.06.72 (21) 1796565/30-15 с присоединением заявки № (32) Приоритет

Опубликовано 30.05.74. Бюллетень № 20

Дата опубликования описания 02.11.74 (5! ) Л1. Кл. С 12k 1 06

Гасударственный комитет

Совета Министров СССР аа делам изааретений и аткрытий (53) УДК 632.911.633..511(088.8) (72) Авторы изобретения

Г. С. Муромцев, А. В. Хотянович, В. И. Попов, Н. А. Веденеева и Н, В, Быкова (71) Заявитель Всесоюзный научно-исследовательский институт сельскохозяйственной микробиологии и Всесоюзный научно-исследовательский институт защиты растений (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ МИКРОСКЛЕРОЦИЕВ

Изобретение относится к технической микробиологии, в частности к способам культивирования микроорганизмов, и может быть использовано для получения микросклероциев фитопатогенных грибов.

Известен способ получения микросклероциев путем выращивания фитопатогенных грибов Verticiillium dahliae на стерилизованном овсе.

Цель изобретения — интенсификация процесса получения микросклероциев и повышение выхода целевого продукта.

Это достигается путем выращивания гриба

V. dahliae глубинно на жидкой питательной среде, в состав которой в качестве основного компонента вводят картофельную мезгу в количестве 0,5 — 5,0%, а в качестве дополнительного источника азота — 0,1 — 0,5% рыбной муки.

Пример. Исходный штамм V. dahliae, выращенный в пробирке на агаризованной среде

Чапека, переносят в колбу емкостью 750 мл, содержащую 150 мл стерильной жидкой питательной среды — кукурузная мука 1%, рыбная мука (казеин, альбумин) 0,2%, КНвРО4

0,1%, КС1 и MgSO4 7Н О по 0,05%, рН 7,5 (до стерилизации), и выращивают на качалке (180 — 220 об/мин) в течение 24 час при

24 — 26 С.

При необходимости получения инокулюма в больших количествах полученной культурой засевают бутыль емкостью 5 л, содержащую

1 л аналогичной питательной среды, и про5 должают выращивать при тех же условиях.

Полученным таким образом посевным материалом инокулируют малый ферментер емкостью 50 — 100 л. Норма засева 5 — 10%. Культивируют на среде — мезга картофельная

10 1,5% (крахмал 1% ), рыбная мука 0,1%, КН,РО4 0,1%, КС1 и MgSO4 7Н О по 0,05%— при 24 — 26 С с аэрацией воздуха 0,1—

0,5 об/мин и непрерывном перемешивании при давлении в аппарате 0,5 — 0,7 ати в течение

15 24 час.

Производственное выращивание культуры осуществляют в ферментаторах емкостью от

0,5 до 3 м", снабженных борбатером и мешалкой (250 — 300 об/мин), Коэффициент заполне20 ния аппарата 0,7, норма засева 10%. Состав питательной среды:мезга картофельная сухая

2% (крахмал 1,5 — 2%), рыбная мука (нитрат натрия) 0,3%, КН9РО4 0,1%, КС1 и EgSO

В качестве пеногасителя используют кашалотовый жир, подсолнечное масло или другой сходный пеногаситель в количестве 0,02% к объему питательной среды. Стерилизация

30 90 мин при 2 ати. Выращивание культуры

430154

Предмет изобретения

Составитель Г. Муромцев

Техред Л. Богданова Корректор М. Лейзерма

Редактор Л. Ксенофонтова

Заказ 2760/16 Изд. № 1686 Тираж 456 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

Москва, Ж-З5, Раушская наб., д. 4/5

Типография, пр. Сапунова, 2

3 производят в течение 96 †1 час. Образование микросклероциев начинается на 72-ом час роста культуры. Выращивание ведут при непрерывном перемешивании и избыточном давлении в аппарате 0,5 — 0,8 ати. Аэрация 0,5—

0,8 об/мин. Биомассу отделяют от нативной жидкости одним из известных способов и промывают водой в пятикратном объеме от количества взятой культуральной жидкости. Выход чистых микросклероциев от общей биомассы гриба составляет около 50% (по сухому весу). Сушка полученных таким образом микросклероциев осуществляется при температуре в пределах от 20 до 80 С.

Весь технологический процесс, не считая стадии подготовки инокулюма, занимает шесть-семь суток, вместо полутора-двух месяцев по известному способу.

Предлагаемый способ при значительной экономической эффективности обеспечивает получение стандартного инфекционного начала возбудителя вертициллезного вилта для создания контролируемых инфекционных фонов в селекционных учреждениях, что позволяет ускорить выведение новых вилтоустойчивых сортов хлопчатника.

1. Способ получения микросклероциев фитопатогенного гриба, возбудителя вертицил10 лезного вилта хлопчатника Verticillium dahliae, включающий выращивание его на питательной среде, содержащей источники углерода, азота и минеральные соли, отличаюшийся тем, что, с целью интенсификации

15 процесса и повышения выхода целевого продукта, гриб выращивают глубинно на жидкой питательной среде, в состав которой в качестве основного компонента вводят картофельную мезгу, а в качестве дополнительного ис20 точника азота — рыбную муку.

2. Способ по п. 1, отл и ч а ю щи и ся тем, что картофельную мезгу вводят в количестве

0 5 — 5%, а рыбную муку — 0,1 — 0 5%.